提高脑组织冰冻切片质量的几点体会

目的:探讨减少脑组织冰冻切片脱片和增加脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果准确性的方法,为脑组织冰冻切片的广泛使用进一步奠定实验基础。方法:在保证实验真实性和科学性的前提下,将现有的脑组织冰冻切片技术结合在脑组织冰冻切片过程中所遇到的问题,以明胶硫酸铬钾处理载玻片,预冷的NS和4%多聚甲醛灌注固定组织,液氮速冻脑组织进行冰冻切片。结果:明胶硫酸铬钾处理载玻片的方法减少了冰冻切片脱片,预冷的NS和4%多聚甲醛提高了脑组织灌流固定效果,液氮速冻脑组织减少了冰晶产生。结论:此方法使脑组织冰冻切片脱片情况下降,冰晶产生减少,提高了脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果的准确性,该方法值得在临床和科研实验室中积极推广使用。     

牙和骨切片的粘片剂防脱片效果及应用方法探讨

牙和骨切片HE尤其是免疫组织化学染色需多次更换试剂、改变温度、反复水洗,经常造成切片易皱褶、卷曲、与载玻片分离（脱片）。目前尚无理想的防止牙和骨切片染色脱片的方法,亦未见防止牙和骨切片染色脱片的报道。以下是我们探讨牙和骨切片的氨醛酸乙基硅（APES）、多聚-L-赖氨酸（PLLS）两种粘片剂的防脱片效果和应用方法。     

γ-GT酶组织化学染色中低熔点石蜡切片代替冰冻切片的方法

酶组织化学染色的效果取决于标本组织中酶的含量和活性 ,标本组织的处理及制片过程对于酶的保存十分重要。常规石蜡切片因组织浸蜡温度高 ,易使酶变性 ,因此酶组织化学染色通常选用冰冻切片。寻找一种较理想的切片方法 ,是研究人员的迫切愿望和要求 ,我们在谷氨酰转肽酶 (γ -ＧＴ)染色中 ,摸索采用低熔点石蜡切片代替冰冻切片 ,取得了良好的效果 ,现介绍如下 :1　材料与方法正常兔肾新鲜标本 ,①冰冻切片 :取 1ｃｍ× 0 5ｃｍ×0 2ｃｍ组织 ,立即放入 - 2 0℃恒冷冰冻切片机 ,冷冻 10ｍｉｎ ,切片厚 8μｍ ,放 4℃冰箱备用 ;②低熔点石蜡…     

用免疫组化ABC法的漂片法做好脑片实验的体会

ABC法是将亲和素作为桥，把生物素化的抗体与生物素结合的酶连接起来。首先，以Ⅰ抗与组织切片共孵育，使特异性Ⅰ抗与组织中的相应抗原结合，之后加上生物素标记的Ⅱ抗，Ⅱ抗与Ⅰ抗通过抗原一抗体反应结合，最后加人ABC复合物，Ⅱ抗上的生物素则与ABC复合物中的亲和素上空下的位点结合。用ABC法中的漂片法做脊髓冰冻切片的染色比较容易做出结果，但如果是用此法做大鼠脑的冰冻切片染色则较难做出结果，特别是做出漂亮的脑片更难。作在用ABC漂片法做脑组织冰冻切片的免疫组织化学实验的过程中，通过改变常规的操作步骤环节，使做出的脑片质量大为提高。以下实验技术介绍的是将免疫组化ABC法的漂片法用于脑组织冰冻切片中的几点体会。     

ATP酶组织化学滴染法染色技术

目的改进经典的ATP酶组织化学染色法,以用于肌纤维分型研究和肌肉疾病病理诊断。方法肌肉组织行异戊烷-液氮冷冻,冰冻切片,组织化学染色采用ATP酶微量滴染技术。结果本改良的ATP酶组织化学滴染法能清楚地显示肌纤维的类型和分布,有助于肌肉疾病的诊断。结论该方法染色结果稳定,效果良好,明显减少了人力和试剂成本,可使ATP酶组织化学染色技术得到更广泛的应用。     

术中印片快速病理检查常用染色方法的应用比较

手术中快速病理诊断对临床手术方案的制定起重要的指导作用.细胞印片技术具有简单、快速的优点,可辅助甚至部分代替冷冻切片诊断,起到提高准确率和加快诊断速度的作用,目前已经被许多医院视为常规的术中诊断技术与冰冻切片同时进行.细胞印片染色最常用的染色方法包括HE染色、瑞-姬姆萨染色、甲苯胺蓝染色法等.染色方法的不同直接影响细胞印片的质量,并影响其在诊断中的应用价值.本文结合实际工作经验,对以上3种术中印片染色方法进行比较,并评价各种染色方法的优缺点.     

石蜡切片过氧化酶预染色

病理组织切片的过氧化酶染色,需用新鲜冰冻切片才能成功。我们在无冰冻切片设备的条件下,对骨髓液凝块标本,在石蜡包埋前,采用过氧化酶预染色,获得较理想的效果,现介绍如下。     

同时显示大鼠中枢神经系统神经元和神经纤维的全程连续切片方法

目的　探索一种简便易行并能同时显示大鼠中枢神经系统 (CNS)神经元和神经纤维的全程连续切片方法。　方法　经过灌流固定的CNS组织低温冰箱速冻后连续冰冻切片和改良的苏木精染色方法。　结果　大鼠全程CNS连续切片各断面上神经元呈蓝黑色 ,神经纤维呈蓝色 ,背景淡黄色。　结论　运用低温速冻、连续冰冻切片、改良的苏木精染色方法可制作同时显示CNS神经元和神经纤维的全程连续切片。     

介绍一种冰冻切片快速染色法

介绍一种冰冻切片快速染色法毕学杰，薛春梅冰冻切片在保证制片质量的前提下，所用时间越短，对临床越有利。我们配制了一种快速冰冻染色液，使染色时间在５ｍｉｎ内即可完成，染色效果和原来慢速染色法相同，现介绍如下。１材料和方法１．１染液配制所用试剂有１０％福尔...     

肾穿刺石蜡切片厚度对肾小球系膜区及基膜PASM染色的影响

<正>肾穿刺活检组织病理诊断中，过碘酸六胺银染色(periodic acid-silver metheramine,PASM)是重要的检查方法，主要用于显示肾小球系膜区范围和基膜增厚以及“钉突”、“梯状”等病理变化，是肾小球疾病鉴别的重要手段之一^[1]。PASM染色质量对诊断有一定程度的影响。切片过厚肾小球结构重叠，难以分辨，半薄切片制片时不仅切片难度增加，且切片过薄高温孵育容易掉片。本实验经过多年研究找到一种最佳PASM染色的切片厚度，现报道如下。     

组织化学染色技术在超薄生物塑化标本中的应用

目的 探讨组织化学染色技术是否可以应用于塑化标本并验证染色塑化标本是否具有自发荧光。 方法 选取1个手掌标本经超薄生物塑化技术做成组织块,进行连续切片,切片数量56张,并按切片顺序进行染色处理：原始切片,苏木素-伊红染色,凡尔霍夫- 酸性品红染色,亚甲蓝-天青Ⅱ号染色,在扫描仪、光学显微镜和激光扫描共焦显微镜下观察染色效果和组织结构特点并进行比较。 结果 3种染色技术都可应用于塑化切片染色。苏木素-伊红染色显示肌肉、结缔组织呈红色或紫红色,骨质呈紫蓝色或蓝色。凡尔霍夫-酸性品红染色显示弹力纤维呈黑色,胶原呈红色,其他组织为黄色或棕黄色。亚甲蓝-天青Ⅱ号染色显示肌腱呈紫红色,骨质呈粉红色,软骨呈紫罗兰,其他组织呈紫色。但细胞内结构的染色效果并不理想。在激光扫描共焦显微镜下,胶原纤维、弹力纤维和肌肉纤维具有自发荧光,结构清晰可辨。结论 常用的组织化学染色技术适合于超薄塑化切片染色,染色切片的各种组织结构比未染色的观察效果好。染色后,塑化切片中具有自发荧光的结构在激光扫描共焦显微镜下亦可清晰显影。     

Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.     

脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法

在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.     

免疫金—银染色和S—P染色结果分析

免疫金－银染色和Ｓ－Ｐ染色结果分析李莲花林建树免疫金－银染色（ＩＧＳＳ）和链菌素亲生物蛋白－过氧化酶连结法（Ｓ－Ｐ）系近年来发展起来的两种新的免疫组化方法，两者均可用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片等，文献报道其敏感性优于ＰＡＰ和ＡＢＣ等其它免疫组化方...     

HE染色切片褪色后免疫组织化学染色抗原修复方法

经甲醛固定的组织,由于各种交联键的形成,引起蛋白质的空间结构的改变,最终导致部分或全部的抗原决定簇被封闭,从而影响免疫组织化学检测的敏感性。因此,进行免疫组织化学检测时,绝大多数抗体需要进行抗原修复,以达到最理想的检测效果。为了防止脱片,用于免疫组织化学检测的组织切片几乎都是硅化玻片捞贴的,而普通玻片（即未经APES胶或多聚赖氨酸处理的玻片）捞贴的并已做HE染色的组织切片能否用于免疫组织化学检测？其处理方法与硅化玻片捞贴的组织切片是否一致？我们在这方面做了些尝试,现总结如下。     

一种改良的琥珀酸脱氢酶的制作方法

<正> 在组织化学方法中,琥珀酸脱氢酶(SDH)的制作方法通常采用冰冻切片片染法。近年来由于教学与科研的需要,我们对此法进行了一些改良和探讨,采用整块染色后用国产916塑料包埋剂包埋,在普通轮转式机切成2～3微米厚度的切片。其操作方法简单方便,实验可靠。具体方法介绍如下:     

球旁细胞光学显微镜下4种染色法结果观察

目的 探讨显示小鼠球旁细胞的适宜染色方法,更好地为教学和科研服务。 方法 取 20 只小鼠肾组织做石蜡切片,随机分为 4 组,分别用HE染色、高碘酸-Schiff 氏反应染色、改良结晶紫染色和免疫组织化学染色。 结果 HE染色和高碘酸-Schiff 氏反应染色不能显示肾球旁细胞;改良结晶紫染色和免疫组织化学均能较好地显示肾球旁细胞（胞质内有特征性的被染色的分泌颗粒）。 结论 改良结晶紫染色和免疫组织化学染色对球旁细胞有较好的染色效果,但改良的结晶紫染色更为简便、经济、稳定。     

Infinity HE高清恒染系统在病理常规染色中的应用

在日常病理工作中,为保证HE染色的质量,一般染片1500~1800张需更换染液。由于苏木精氧化持续等因素的存在,每张切片进行染色时试剂所处的状态不一致,也无法做到每张切片着色均一。在相对固定的染色程序中寻找稳定性较高的染液,保证在一定染片数量范围内每张切片着色均一,成为病理工作者致力解决的问题之一。本文就In-finity高清恒染系统在常规病理染色的稳定性进行评价。     

特殊染色与免疫组化染色显示幽门螺杆菌的效果对比

幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)广泛存在于人类尤其是亚洲人的胃液中,是许多慢性胃病发生发展中的一个重要致病因子.在多种幽门螺杆菌检测方法中,胃黏膜活检组织切片经特殊染色和免疫组织化学染色被认为是最准确可靠的方法[1].目前多数医院应用特殊染色显示幽门螺杆菌,染色方法多种,有的方法较繁琐(如Warthin-Starry银染色),而应用免疫组化染色显示幽门螺杆菌国内报道甚少.结合我科近年来HP检测的实践,我们对Giemsa染色、中性红染色以及免疫组织化学染色显示幽门螺杆菌进行比较,旨在探讨各种染色方法的特点、染色效果以及幽门螺杆菌染色方法的选择.     

四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。