青少年特发性脊柱侧凸患者血浆matrilin-1蛋白水平及其临床意义

目的 探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者外周血中matrilin-1蛋白水平的变化及其在AIS发病机制中的作用.方法 将2006年6月至2007年3月诊治的25例AIS患者作为AIS组,25名性别、年龄相匹配的健康体检青少年作为对照组.所有入选对象符合以下标准:无骨骼疾病、代谢疾病、生长发育异常;无影响骨代谢的系统疾病及其他情况;近期未服用激素;无先天性心脏病手术史.AIS组记录末次随访或术前最大Cobb角、侧凸弯型,并分为进展型及非进展型两组.进展型侧凸(侧凸进展成为严重脊柱侧凸)定义为骨骼发育未成熟时,Cobb角＞40°或骨骼发育成熟时,Cobb角＞50°.采用PCR-RFLP基因分型方法 对所有对象进行基因分型,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AIS组与对照组外周血浆中matrilin-1蛋白浓度并比较其差异,并对不同基因型之间matrilin-1蛋白的表达进行比较.分析血浆matrilin-1蛋白浓度与脊柱侧凸进展的关系.结果 AIS组血浆matrilin-1蛋白浓度显著低于对照组(P=0.002).AIS组及对照组的基因型GG个体血浆matrilin-1蛋白浓度均低于基因型AA或AG个体,而对于相同基因型的个体AIS组血浆matrilin-1蛋白水平更低.进展型AIS患者血浆matrilin-1蛋白水平明显较非进展型AIS患者低.结论 AIS患者外周血matrilin-1蛋白水平与脊柱侧凸的进展相关.对外周血matrilin-1蛋白浓度的检测,有助于AIS的早期筛查及诊断,可作为预测脊柱侧凸进展的一个独立指标.     

Matrilin-1基因多态性对青少年特发性脊柱侧凸进展的预测价值

目的 探讨Matrilin-1基因多态性在预测青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathicscoliosis,AIS)是含进展为严重脊柱侧凸方面的价值.方法 2006年6月至2007年3月在我院就诊的AIS患者267例,男40例,女227例.104例手术治疗,163例定期门诊随访,记录患者末次随访或术前最大Cobb角、初潮年龄、侧凸弯型、身高、臂长及体重.选取Matrilin-1基因启动子区域位点rs1149048进行聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length poly-morphism,PCR-RFLP)基因分型.进展型侧凸(脊柱侧凸进展成为严重脊柱侧凸)定义为骨骼发育未成熟时Cobb角>40°或骨骼发育成熟时Cobb角>50°.AIS患者被分为进展型与非进展型两组,比较两组间的临床特征及基因型分布的差异.分析侧凸进展的危险因素.结果 267例AIS患者中162例(60.7%)为非进展型,105例(39.3%)为进展型.进展型组月经初潮年龄较晚(>13岁),且三弯及胸腰双主弯所占比例高,基因型GG的个体在进展型组比例高(55.2%).初潮年龄晚、三弯、胸腰双主弯及基因型CG为侧凸进展的危险因素.结论 Matrilin-1基因多态性可被用来预测AIS进展,结合其他相关预测因素可提高预测的准确性.     

Lenke 3型青少年特发性脊柱侧凸后路矫形术后身高增长的相关影响因素分析

目的:探讨Lenke 3型青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患儿脊柱后路矫形术后身高增长(ΔSH)的相关影响因素。方法:选取2014年1月~2016年6月于我院行脊柱后路矫形手术的女性Lenke 3型AIS患儿90例,年龄15.0±2.6岁。于站立位全脊柱正侧位X线片上测量术前、术后的主弯侧凸Cobb角1(最大侧凸Cobb角)、侧凸Cobb角2(次之侧凸Cobb角)、脊柱高度(spinal height,SH)、胸椎后凸角(thoracic kyphosis,TK)及腰椎前凸角(lumbar lordosis,LL)。应用Pearson相关分析ΔSH与其他参数之间的相关性,应用线性回归探讨ΔSH的相关影响因素。结果:ΔSH为2.9±1.0cm。Pearson相关性分析示ΔSH与术前的侧凸Cobb角1(P=0.000)、侧凸Cobb角2(P=0.000)及TK(P=0.023)均呈显著相关性,与术后的侧凸Cobb角1(P=0.000)、侧凸Cobb角2(P=0.000)、LL(P=0.025)、侧凸Cobb角1变化(P=0.000)、侧凸Cobb角2变化(P=0.000)及TK变化(P=0.032)均呈显著相关性。线性回归分析示ΔSH与侧凸Cobb角1变化(P=0.017)、侧凸Cobb角2变化(P=0.001)均呈显著线性相关(R~2=0.333);另外,ΔSH与术前侧凸Cobb角1(P=0.006)、侧凸Cobb角2(P=0.007)、术前TK(P=0.038)亦呈显著线性相关(R~2=0.595)。结论:Lenke 3型AIS患儿脊柱后路矫形术后身高增长的相关影响因素包括术前、术后的主弯侧凸Cobb角、术前TK及其术后变化值。主弯Cobb角矫正是Lenke 3型AIS术后身高增加的最主要影响因素。Lenke 3型AIS患儿的术前侧凸Cobb角及术前TK可以较好地预测患儿术后身高恢复情况。     

青少年特发性脊柱侧凸软骨终板蛋白质组学研究

目的 通过对青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者侧凸顶椎椎间盘软骨终板进行蛋白质组学鉴定,尝试寻找诱发或加重椎间盘不均衡发育的分子因素.方法 经一期前路脊柱侧凸矫形术获取6例AIS患者主弯顶椎椎间盘的软骨终板组织,提取蛋白组织,用Brad-ford法对所获取蛋白质样品进行浓度测定;通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对蛋白质总量和分子量范围进行初步鉴定;最后用鸟枪法蛋白质组鉴定技术比较凸、凹侧所含蛋白成分的异同,分析蛋白的种类和功能.结果 Bradford法测量软骨组织中获得的平均蛋白质浓度为3.02 mg/ml;SDS-PAGE显示顶椎凸侧终板软骨内所含蛋白质的种类明显多于凹侧;从凸侧软骨终板中鉴定出103种蛋白质,凹侧软骨终板内鉴定出55种蛋白质,其中凸侧特有蛋白58种,凹侧特有蛋白10种.结论 对AIS患者侧凸顶椎软骨终板蛋白质进行分类研究后表明侧凸顶椎软骨终板凸、凹两侧的特有蛋白与脊柱侧凸顶椎椎间盘的不对称发育存在一定的联系.     

散发型甲状腺髓样癌RET基因第11外显子序列分析

目的 分析散发型甲状腺髓样癌RET基因第11外显子碱基序列，明确RET基因突变与散发型甲状腺髓样癌的关系。方法 提取17例散发型甲状腺髓样癌基因组DNA，PCR扩增RET基因第11外显子，PCR产物经纯化后直接测序。结果 分析测序图发现1例病例在该基因第15165位碱基处C→A突变，导致丝氨酸^691→赖氨酸错意突变。结论 散发型甲状腺髓样癌RET基因第11外显子基因突变率较低；散发型甲状腺髓样癌致病的关键基因可能位于该基因的其他外显子或其他基因上。     

青少年特发性脊柱侧凸患者椎间盘纤维环胶原的分布及其意义

目的:研究青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者侧凸区椎间盘不同部位纤维环Ⅰ型、Ⅱ型胶原的分布,探讨胶原分布异常在AIS发生发展中的作用。方法:顶椎为腰椎的AIS患者共27例(AIS组),同时选15例同年龄段先天性脊柱侧凸(CS)患者为对照(CS组)。在脊柱侧凸前路手术时取L1/2或L2/3椎间盘。AIS组取材节段为侧凸顶椎区,CS组则为侧凸的下终椎区。采用胃蛋白酶-乙酸(0.5mol/L)体系提取胶原组织,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法及抗原抗体Western印记法进行胶原的分类和定量测定。在GelWork图像分析系统中进行泳道的对比定量分析。分别计算AIS组凹侧、凸侧和CS组纤维环中Ⅰ型、Ⅱ型胶原含量,并进行统计学分析。结果:AIS组患者纤维环中Ⅰ型、Ⅱ型胶原的含量在凹侧明显低于凸侧,有显著性差异(P<0.05),而且凹、凸侧胶原含量的差异与侧凸Cobb角有明显的相关。AIS组Ⅰ型、Ⅱ型胶原的含量比CS组也有显著下降(P<0.01)。结论:AIS椎间盘纤维环存在胶原代谢异常,AIS凹侧纤维环Ⅰ型、Ⅱ型胶原明显低于凸侧,且随Cobb角的增大差值越明显,提示椎间盘胶原代谢异常可能和AIS的发生发展有密切的联系。     

单纯尿道下裂患者Cxorf6基因突变分析

目的探讨Cxorf6基因突变与单纯性尿道下裂的相关性.方法采用聚合酶链反应(PCR)及基因测序技术,分别对70例单纯男性尿道下裂患者和40例健康正常对照的Cxorf6基因序列进行分析.结果其中1例尿道下裂患者CXorf6基因第3外显子802(T→C)致无意义突变;另1例尿道下裂患者CXorf6基因第3外显子第620位点缺失一个碱基G致移码突变;另1例尿道下裂患者CXorf6基因在第3外显子第663位插入一个碱基G致移码突变.在40例正常对照组中未发现CXorf6基因存在突变.结论 CXorf6基因突变可能也是中国人群单纯性尿道下裂患者的易感基因之一.     

先天性脊柱侧凸患者中胚层后方同源物2基因外显子突变的筛查

目的:探讨汉族人群中中胚层后方同源物2(mesoderm posterior 2,MESP2)基因外显子突变与先天性脊柱侧凸(congenital scoliosis,CS)发生的关系。方法:2010年5月～2011年3月在我院行手术治疗且有完整影像学资料的散发非综合征型CS患者60例(病例组),其中男23例、女37例,年龄5～23岁,平均13.2±3.8岁;100例健康体检者为对照组,其中男42例、女58例,年龄12～16岁,平均12.9±2.7岁。两组对象均为中国汉族人群,性别相匹配。CS患者分型:形成障碍26例,分节不良13例、混合型21例。从外周血中提取基因组DNA,根据Gene Bank中人类MESP2基因外显子(共2个外显子,exon 1和exon 2)序列设计引物将该基因的两个外显子序列全部扩增出来,然后应用DNA自动测序仪对扩增出来的目的产物进行测序,将病例组MESP2基因两个外显子测序结果与对照组该基因外显子序列、美国NCBI基因库里公布的该基因外显子序列进行比对,将对照组该基因外显子序列与美国NCBI基因库里公布的该基因外显子序列也进行比对。结果:病例组和对照组MESP2基因的exon 1和exon 2均未见突变及新的单核苷酸多态性位点。结论:中国汉族散发非综合征型CS患者MESP2基因外显子无突变,在中国汉族人群中MESP2基因外显子突变与散发非综合征型CS发病可能无关。     

青少年特发性脊柱侧凸患者椎旁肌中钙调蛋白的表达及临床意义

目的:探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者椎旁肌钙调蛋白的表达及其对肌浆网钙离子通道的影响。方法:AIS患者共30例,Cobb角40°～100°,其中Cobb角≥50°者15例(A组),Cobb角<50°者15例(B组);对照组(C组)5例患者均为非脊柱侧凸病例。于手术中取A、B组患者顶椎区两侧椎旁肌、取C组患者非病变部位两侧椎旁肌作为标本进行分子生物学分析,采用RT-PCR方法检测所有标本钙调蛋白和肌浆网钙离子通道的mRNA表达量。结果:A、B组患者椎旁肌钙调蛋白mRNA的表达比C组高(P<0.05),并且A组患者凸侧椎旁肌钙调蛋白mRNA显著高于凹侧(P<0.05),而B组患者其凹凸侧钙调蛋白mRNA没有显著性差异(P>0.05);C组椎旁肌肌浆网钙离子通道mRNA的表达比A组患者高(P<0.05),A组患者凸侧椎旁肌肌浆网钙离子通道mRNA显著低于凹侧(P<0.05),而B组患者其凹凸侧肌浆网钙离子通道mRNA没有显著性差异。结论:钙调蛋白mRNA在AIS患者椎旁肌中的表达较无脊柱侧凸者高,而且其表达随着侧凸程度的加重而增高;AIS患者椎旁肌肌浆网钙离子通道表达有异常,钙调蛋白的过度表达可能导致了钙离子通道的损伤。     

汉族人群青少年特发性脊柱侧凸家系中存在复合型杂合DOCK9基因突变

目的探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)家系中可能的致病基因突变。方法对一个汉族AIS家系的3名成员(先证者及其表型正常的父母)进行全基因组测序,筛选潜在的致病基因突变,并通过Sanger测序验证所有发现的突变。结果在AIS家系中发现DOCK9基因存在复合型杂合基因突变c.3259TC(p.F1087L)和c.2465AG(p.Y822C)。患者的父母是未出现AIS表型的突变基因携带者,父亲携带c2465AG突变,而母亲携带c.3259TC突变。结论复合型杂合DOCK9基因突变可能导致AIS的发生,其在AIS发生机制中的作用有待于进一步探索。     

Fabry病家系的α-半乳糖苷酶A基因突变研究

目的 通过检测3个Fabry病家系基因突变类型明确基因诊断,并进行家系成员的基因型检测.方法 通过PCR和直接测序的方法,对3个Fabry家系的先证者及部分家系成员外周血DNA进行α-半乳糖苷酶A编码GLA基因7个外显子及其相邻内含子的DNA序列检测.结果 （1）先证者1的GLA基因7号外显子内1142位点发生碱基缺失（1142delG）,1142位碱基G的缺失导致蛋白质翻译在390位氨基酸提前终止,该突变国内外均未见报道;（2）先证者2的GLA基因6号外显子内902位点存在1个错义突变,碱基G被A取代,导致其编码的第301位氨基酸由精氨酸变为谷氨酰胺（902G＞A,R301Q）;（3）先证者3的GLA基因3号外显子内484位点存在1个错义突变,碱基T被C取代,导致其编码的第142位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸（484T＞C,C142R）.在3个家系的部分成员中进行基因检测,检出GLA突变基因携带者共6例,其中男性半合子1例,女性杂合子5例,突变类型均与相应先证者符合.100条正常X染色体对照中均未发现上述位点异常.结论 本研究在3个Fabry病家系中检出3种GLA基因突变,其中1142delG为新发现的突变,并在3个家系的部分家系成员中检出男性半合子1例,女性杂合子5例.     

A novel SOD1 mutation in amyotrophic lateral sclerosis with a distinct clinical phenotype

Familial amyotrophic lateral sclerosis (FALS) accounts for about 5% of cases of the neurodegenerative disorder ALS. At least 100 Cu/Zn superoxide dismutase (SOD1) genetic mutations have been associated with FALS. We identified a FALS family in China with an atypical clinical phenotype. To investigate the SOD1 gene mutations in this family, five exons of the SOD1 gene from each living patient were amplified by PCR and screened by SSCP and direct DNA sequencing. SSCP analysis demonstrated a mutation in exon 2 of SOD1, and DNA sequencing demonstrated the presence of an insertion mutation in exon 2 that has not been reported previously. The mutant SOD1 gene encodes a truncated protein of 35 amino acid residues compared to the normal SOD1 protein of 153 amino acids. In conclusion, The SOD1 exon 2 mutation is likely to be the etiological factor of ALS in this family.     

Mutations in exons 5, 7 and 8 of the human voltage‐dependent anion channel type 3 (VDAC3) gene in sperm with low motility

Voltage‐dependent anion channels (VDACs1‐3) are pore‐forming proteins located in the outer mitochondrial membrane of various tissues and in human sperm flagella. VDACs are involved in metabolite fluxes between mitochondria and other cell compartments and play a role in the motility of mammalian spermatozoa. VDAC3‐deficient male mice lacking exons 5–8 were reported to be healthy but infertile ( Sampson et al., 2001 ). We analysed mutations in these exons of the human VDAC3 (hVDAC3) gene in spermatozoa of 32 asthenozoospermic patients. Previously, we reported on nucleotide substitution mutations in exon 6 ( Asmarinah et al., 2005 ); now, we continue with the examination of exons 5, 7 and 8. Amplification of the exon fragments of the hVDAC3 gene was carried out by polymerase chain reaction (PCR) using specific primers for each exon followed by sequencing. We found various types of mutations in the examined exons of the hVDAC3 gene, such as deletion and nucleotide substitution in spermatozoa from seven of the 30 asthenozoospermic sperm samples (and unconfirmed insertions in two other ones) but none in spermatozoa from normozoospermic controls. Our preliminary data, although of small numbers investigated, suggest that genetic mutations in the hVDAC3 gene could be an explanation for the aetiology of infertility in these asthenozoospermic patients.     

Epidemiological survey of idiopathic scoliosis and sequence alignment analysis of multiple candidate genes

Purpose

To investigate the effects of genetic factors on idiopathic scoliosis (IS) and genetic modes through genetic epidemiological survey on IS in Chongqing City, China, and to determine whether SH3GL1, GADD45B, and FGF22 in the chromosome 19p13.3 are the pathogenic genes of IS through genetic sequence analysis.

Methods

214 nuclear families were investigated to analyse the age incidence, familial aggregation, and heritability. SH3GL1, GADD45B, and FGF22 were chosen as candidate genes for mutation screening in 56 IS patients of 214 families. The sequence alignment analysis was performed to determine mutations and predict the protein structure.

Results

The average age of onset of 10.8 years suggests that IS is a early onset disease. Incidences of IS in first-, second-, third-degree relatives and the overall incidence in families (5.68%) were also significantly higher than that of the general population (1.04%). The U test indicated a significant difference, suggesting that IS has a familial aggregation. The heritability of first-degree relatives (77.68 ±10.39%), second-degree relatives (69.89 ±3.14%), and third-degree relatives (62.14 ±11.92%) illustrated that genetic factors play an important role in IS pathogenesis. The incidence of first-degree relatives (10.01%), second-degree relatives (2.55%) and third-degree relatives (1.76%) illustrated that IS is not in simple accord with monogenic Mendel’s law but manifests as traits of multifactorial hereditary diseases. Sequence alignment of exons of SH3GL1, GADD45B, and FGF22 showed 17 base mutations, of which 16 mutations do not induce open reading frame (ORF) shift or amino acid changes whereas one mutation (C→T)occurred in SH3GL1 results in formation of the termination codon, which induces variation of protein reading frame. Prediction analysis of protein sequence showed that the SH3GL1 mutant encoded a truncated protein, thus affecting the protein structure.

Conclusion

IS is a multifactorial genetic disease and SH3GL1 may be one of the pathogenic genes for IS.     

褪黑素受体1A基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸相关性研究

目的研究褪黑素受体1A基因（MTNR1A）多态性与青少年特发性脊柱侧凸（AIS）发生发展的关系。方法共纳入226例AIS患者及277例正常对照者。记录AIS患者组最大Cobb角。采用PCR-RFLP的方法对MTNR1A基因启动子区域多态性位点rs2119882进行基因分型。结果AIS患者组MTNR1A基因多态性位点rs2119882的基因型及等位基因分布与正常对照组比较没有明显差异。在AIS组内,多态性位点rs2119882不同基因型所对应的最大Cobb角没有明显差异。结论MTNR1A基因rs2119882位点多态性与AIS的发生发展都没有关系。     

四例脂蛋白肾病患者载脂蛋白E基因突变筛查

目的 通过对4例脂蛋白肾病患者及家系成员载脂蛋白E(apoE)基因的分析， 研究脂蛋白肾病的发病机制。 方法 调查患者家系情况，对其中2例患者的家系成员进行尿常规筛查及血肌酐、血脂和血清脂蛋白的检测。PCR法扩增4例患者apoE基因的外显子， DNA测序， 发现突变后，寻找限制性内切酶酶切位点。使用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法筛查正常对照及其家系成员。 结果 4例脂蛋白肾病患者中有2例携带杂合的apoE基因缺失突变 (142-144-0)，2例患者携带杂合的apoE点突变 (Arg25Cys)，2种突变均可见于尿液检查正常的亲属，并均表现为apoE升高。 结论 4例脂蛋白肾病的患者中发现两种apoE基因的突变，apoE Arg25Cys和apoE(142-144-0)。结合既往的研究结果，apoE(142-144-0)同时见于5例(本研究2例，前期研究3例)患者，为中国脂蛋白肾病患者常见的致病性基因突变。患者家系成员中的携带者可以不表现出肾脏病。     

钙调蛋白1基因多态性和青少年特发性脊柱侧凸不同亚型的关系

目的 探讨钙调蛋白1基因rs12885713(-16C>T)、rs5871等位基因多态性和特发性脊柱侧凸及其不同临床亚型的关联性.方法 2005年10月至2007年4月,北京协和医院接受手术治疗的青少年特发性脊柱侧凸患者100例(Cobb角>30.),对照组100例.QIAamp DNA微型血液试剂盒外周静脉血提取DNA.设计钙调蛋白1基因~12885713、rs587l所在序列引物,完成PCR扩增反应;ABl3730测序仪分析SNP位点基因型.结果 所有患者按照PUMC分型、主弯顶点位置以及Cobb角分组.结果 显示:(1)rs12885713位点等位基因多态性分布情况在PUMC Ⅱ型患者和对照组之间差异有统计学意义(P=O.034);(2)rsl2885713等位基因多态件分布情况在腰弯患者和对照组之间差异有统计学意义(P=-0.009);(3)rs5871位点等位基因多念性分布情况在胸弯患者和对照组之间差异有统计学意义(P=0.035).结论 钙调蛋白1基冈不同SNP位点等位基因多态性可能和特发性脊柱侧凸小同临床亚型相关联:(1)rsl2885713位点等位基因多态性可能和PUMCⅡ型特发性脊柱侧凸相关联;(2)腰弯侧凸可能和rsl2885713化点等位基凶多念性关联;(3)胸弯侧凸可能和rs5871位点等位基凶多态性关联.     

青少年特发性脊柱侧凸生长激素基因多态性研究

目的 研究生长激素(GH)基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)发生发展的关系.方法 本研究包括265例AIS患者及193名正常对照.在AIS患者组,记录其最大Cobb角.采用PCR-RFLP的方法 对GH基因启动子区域多态性位点rs2854184进行基因分型.结果 在AIS患者组,GH基因rs2854184多态性位点的3个基因型AA、AT、TT分别占38.3%,50.3%,11.4%,正常对照组分别占39.6%,50.2%,10.10k,2组比较差异无统计学意义.同样,在MS患者组rs2854184多态性位点的2个等位基因A、T分别占63.5%,36.5%,正常对照组分别占64.7%,35.3%,2组比较差异无统计学意义.另外在AIS组内,多态性位点rs2854184不同基因型所对应最大Cobb角分别是从33.8°±10.0°,AT 36.4°±15.0°,TT34.5°±9.1°,3者比较差异无统计学意义.结论 GH基因rs2854184位点多态性与AIS的发生发展没有明显关系.