罗汉果脱毒苗的快速繁殖研究

目的筛选适宜的罗汉果脱毒苗茎段增殖培养基,研究培养温度与光照对茎段增殖培养的影响。方法采用正交试验设计和完全随机实验设计筛选罗汉果脱毒苗茎段增殖培养基。正交L9(34)实验以在M S BA 0.1 m g/L NAA 0.1 m g/L上培养30 d的罗汉果脱毒苗单芽姊妹系的单节茎段为外植体,以培养基中BA,NAA,IBA及蔗糖为试验因子,各因子设3个水平,以在不同处理得到的增殖系数为测定指标;在此基础上进一步研究了培养基中BA和蔗糖质量浓度对增殖效果的影响;采用完全随机实验设计研究温度,光照对茎段增殖培养生成试管苗的影响。结果通过对正交实验结果的极差分析及方差分析表明,在4个因子中,对罗汉果茎段增殖系数影响最大的是BA,其次是蔗糖的NAA,IBA的影响最小;BA,NAA,IBA及蔗糖对增殖系数的影响都达到极显著。根据新复极差检验的结果,当前研究得到的罗汉果离体茎段的最佳增殖培养基为M S BA 0.5 m g/L NAA 0.01 m g/L IBA 0.1 m g/L 蔗糖40 g/L,罗汉果茎段在此培养基上培养30 d后增殖系数为13.13;不同浓度BA与蔗糖对茎段培养的研究结果表明,BA在1.0 m g/L增殖系数最大。考虑为保持试管苗的遗传稳定性,BA为0.5 m g/L为宜。增殖培养基中的蔗糖适宜质量浓度为4.0%;罗汉果茎段培养适宜条件为培养温度25℃,培养光强1 000~3 000lx。结论增殖培养基的成功筛选及培养温度与光强的选择,有助于实现罗汉果脱毒苗的工厂化生产。     

滇龙胆丛芽高效诱导与植株再生体系的建立

目的以滇龙胆Gentiana rigescens带叶茎尖、带芽茎段、叶片、根为外植体,建立滇龙胆高效、稳定的丛芽诱导体系,筛选出适宜的植株再生途径。方法以MS为基本培养基,在单因素实验的基础上,通过L16(45)正交及完全组合实验研究不同外植体和不同植物激素种类及其质量浓度对愈伤组织诱导、丛芽发生及植株再生的影响。结果带芽茎段为间接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L中培养10 d、节上腋芽开始萌发后,基部可诱导出再分化能力极强的愈伤组织,得愈率为97.73%;15 d后愈伤组织开始分化出绿色丛芽,分化率100%;30 d后不定芽分化系数达18.65,增殖系数可达63.58。带叶茎尖为直接器官发生最佳材料,其在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5mg/L中培养30 d后,增殖系数亦可达44.36。2种材料培养获得的试管苗茎细瘦弱,不利于生根培养,试管苗在MS+6-BA1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+KT 0.05 mg/L+PP333 10 mg/L中培养60 d后可获得健壮度大为改善的复壮苗。复壮苗生根则在1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 2.0 mg/L中进行,45 d后可获得生长健壮的再生植株,生根率100%。再生苗移栽成活率达95%以上。结论建立的滇龙胆无性快速繁殖体系,为保护滇龙胆野生资源、优质种苗繁育提供了有效途径,也为其遗传转化研究奠定了实验基础。     

曲茎石斛组织培养研究

目的:提供药用石斛可脱瓶移栽的粗壮试管苗,以提高移栽的成活率。方法:采用种子苗与茎段外植体苗不同培养基的双向培养,并对二者的生长特点进行比较。结果:外植体苗繁殖快,粗壮,但需原植株量大,种子苗生长周期长,细弱,但培养基数高。结论:二者结合培养对快速繁殖,提高成活率有利。     

毛冬青组培苗壮苗生根与炼苗移栽技术研究

目的：以前期诱导培养的毛冬青无菌组培苗为试材,进行壮苗生根和炼苗移栽的试验研究。方法：对不同植物生长调节剂浓度配比进行选择,用正交设计法筛选出最适宜的壮苗生根培养基;对开盖时间、水培时间、保留有效叶片数及不同基质进行考察,以筛选出最佳的炼苗移栽条件。结果：适宜的壮苗培养基为MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,适宜的生根培养基为1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1;开盖炼苗和水培练苗最适宜时间为8 d,保留叶片10片以上成活率最高,最佳的炼苗移栽基质为蛭石,成活率达87.50%。结论：6-BA和NAA对壮苗有显著影响,NAA效果强于6-BA,NAA对根的诱导有显著意义;移栽成活的关键是适当地进行炼苗,蛭石良好的保水透气性和保肥能力更适于毛冬青的移栽。     

广藿香组织培养与植株再生研究

以广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth的根尖、叶片、带节茎段及茎段为材料进行培养,结果表明：叶片及带节茎段较易诱导愈伤组织,诱导率均为87．0％以上,适宜的培养基为MT BA0．5mg／L NAA0．2mg／L。愈伤组织的分化与增殖,以MT BA0．5～1．0mg／L为好。在MT基本培养基中,组培苗就能形成根。     

金钗石斛试管苗炼苗技术研究

模拟金钗石斛野生生长环境,设置不同基质、不同季节及试管苗的大小等对成活率和生长影响实验。结果表明:树皮块 碎树皮屑的基质组合,炼苗成活率最高,且长势好;在西双版纳地区,最佳炼苗季节为春季和仲秋至冬初;在最佳炼苗时期,苗的大小对成活率影响不大。     

炼苗过程中不同光照强度对白及内源激素的影响

目的:研究不同光照强度对白及无菌苗炼苗移栽过程中内源激素的影响,阐明光照影响白及炼苗成活的可能机制,为白及资源保护和栽培提供理论依据.方法:设置3种光照强度(3 000,6 000,12 000 lx)进行炼苗移栽实验,研究光照强度对内源激素IAA,ABA,GA3含量的影响.结果:移栽炼苗期内源IAA含量明显下降,以中光照强度处理下降最多;内源ABA在短期内迅速升高,以中光照强度处理升高最快,第10天时为320.8 ng·g-1比无菌苗高380.2％;内源GA3含量明显下降,以高光照强度处理升高最快,第10天时为473.6ng·g-1,比无菌苗低52.2％.结论:中等光照强度能够在短时间内迅速改变内源激素含量,尤其是显著提高ABA的含量.     

山茱萸组织培养技术的研究

目的:研究山茱萸茎段组织培养技术,为山茱萸优良株系的快繁建立最佳条件。方法:选择山茱萸优良母株的茎段为外植体,分别在不同的培养基中培养,形成大量丛芽,再诱导单株苗生根成为完整植株。结果与结论:茎段在WPM+6-BA2.0mg·L^-1+ZT0.1mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1培养基上,能形成大量丛芽;在WPM+6-BA1.0mg·L^-1+ZT0.1mg·L^-1+GA30.5mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1中继代培养,可获大量壮苗;切取单株苗在1/2 MS+6-BA0.1mg·L^-1+IBA1.0 mg·L^-1培养基中能生根,移栽并成活。     

山麦冬组织培养技术的研究

目的:研究山麦冬的组织培养技术.方法:选择野生山麦冬带部分根的嫩茎段为外植体,分别在含不同激素的培养基中培养,形成大量丛生芽,再诱导生根成完整植株.结果:带部分根的嫩茎经几次继代培养后,可快速有效地得到大量完整的无菌苗.     

怀菊组织培养与快速繁殖

目的 建立怀菊的组织培养与快速繁殖体系.方法 以茎段、叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素6-BA和NAA,研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响,选择分化率高的快速繁殖培养条件.结果 怀菊茎段、叶盘最适分化培养基分别为MS+6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1和MS+6-BA 1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1;小苗的最佳生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg·L-1,生根率达100%.结论 以怀菊茎段、叶片为外植体均建立了高效的组织培养和快繁体系.     

玄参田小地老虎的为害及防治研究

目的:通过对玄参田小地老虎Agrotis ypsilon的为害调查及药剂防治研究,为综合防治提供依据.方法:田间调查和药剂防治试验.结果:玄参田的小地老虎发生及危害程度与前茬作物有关,以前茬为烟草和玉米的受害严重,平均受害率分别达到12.43%,15.68%.药剂防治试验结果表明10%高效氯氰菊酯乳油2 000倍液,40%毒死蜱乳油1 500倍液防治效果较好,防效分别是92.53%,91.69%.结论:在玄参苗期喷施10%高效氯氰菊酯乳油或40%毒死蜱乳油能有效防治小地老虎的为害.     

玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析

分别从武隆产区玄参根、主茎、侧枝、叶片和重庆市区栽培玄参侧枝中分离内生真菌,根据形态学特征和26Sr DNA D1/D2测序结果对其进行鉴定,并进行了种群多样性分析,对优势属炭疽菌属内生真菌构建了系统发育树。试验结果显示:真菌种群多样性指数,武隆玄参叶片主茎=侧枝根,重庆玄参侧枝武隆玄参侧枝。共计分离得到内生真菌58株,绝大部分是各种植物病原菌,其优势属为刺盘孢属Colletotrichum,其中绝大多数是C.gloeosporioides和C.boninense。叶片和子芽可能是内生菌侵染的主要途径;内生菌和病原菌可能相互转化,受环境、基因型等多种因素影响。     

玄参子芽分级标准研究

对全国玄参主产区子芽的长、粗和重3个形态指标进行检测,使用SPSS统计软件,通过聚类分析制定玄参子芽的质量分级标准。田间试验观测不同等级子芽玄参的植株生长情况及产量。田间试验表明,Ⅰ级玄参长势最好,产量最高,Ⅲ级玄参长势最差,产量最低。玄参药材中主要活性成分含量测定结果表明不同等级的子芽对药材的内在品质无明显影响。为保证高产及减少成本,玄参生产用子芽应控制在Ⅱ级以上。此方法制定的质量分级标准科学、可行,可作为玄参子芽的质量控制标准,为玄参规范化栽培提供依据。     

玄参中环烯醚萜类化合物的研究进展

环烯醚萜类化合物是玄参主要活性成分之一,根据化学结构将其分为环烯醚萜苷和非苷环烯醚萜两大类。并以环烯醚萜苷类化合物的生物合成过程为基础,推测脱羧环烯醚萜苷途径为玄参中环烯醚萜苷类主要生物合成途径。相关研究表明,哈巴苷、哈巴俄苷和桃叶珊瑚苷等成分在抗脑缺血、降血糖、保护心肌细胞等方面发挥重要作用,但仍有大部分环烯醚萜类成分的药理作用并不明晰。通过对玄参中环烯醚萜类化学成分的种类、生物合成技术以及药理作用的相关文献进行综述,为玄参环烯醚萜类化合物的开发应用提供参考。     

基于高通量测序的玄参根部转录组学研究及萜类化合物合成相关基因的挖掘

该研究应用新一代测序技术Illumina HiSeq~(TM)4000在转录水平上对药用植物玄参根部进行测序,结合生物信息学方法开展基因功能注释和SSR位点搜索。通过测序,共获得65 602 036条原始序列。利用生物信息学软件拼接和组装序列,获得73 983条unigene,平均长度823 bp。序列同源性比较表明,56 389条unigene与其他物种具有不同程度的同源性。通过Swiss-Prot,GO,KEGG,COG比对注释,发现520条编码玄参次生代谢途径关键酶基因和191个相关转录因子。利用MISA软件在所有unigenes中共搜索到11 659个SSR位点,重复类型以二核苷酸为主。该研究所获得的参与次生代谢的关键基因可为研究玄参药用成分的生物合成和调控机制奠定基础,获得的大量SSR位点为后续研究玄参种质鉴定及遗传多样性研究提供参考。     

中心复合设计-效应面法优化玄参的炮制工艺

目的:优选玄参的炮制工艺条件。方法:采用中心复合设计-效应面法,以浸泡时间、蒸制时间、干燥温度为考察因素,哈帕苷、哈帕俄苷、肉桂酸变化率的总评归一值(OD)为指标,进行中心复合设计试验,并用多元线性回归及二项式拟合建立指标与因素间的数学模型,预测玄参的最佳炮制工艺。结果:最佳工艺为浸泡19 min,蒸制1.2 h,干燥温度49℃。预测值与实测值偏差均<2.65%。结论:采用中心复合设计-效应面法优化的玄参炮制工艺稳定可行,结果可靠,为玄参的质量标准研究提供实验依据。     

不同产地玄参内生真菌种群结构的比较分析

目的研究不同产地玄参内生真菌的种群结构差异。方法通过形态和分子手段相结合的方式对来自浙江磐安、陕西安康、湖北武穴、湖南邵东、四川达州和安徽亳州共6个产地的玄参进行内生真菌的分离、鉴定及种群结构分析。结果共分离得到3 052株内生真菌划分为153个形态型,经分子系统学分析,共划分为84个分类单元,分属于25个属,其中间座壳属、镰刀菌属、黑孢属、链格孢属、茎点霉属、棒孢属、附球菌属、枝孢属为6个产地内生真菌共有属,各产地的优势属不同。相似性分析表明,不同产地玄参内生真菌的组成结构上存在差异。Shannon-wiener多样性指数及Simpson指数分析表明浙江磐安产地玄参内生真菌多样性较高,四川达州产地的多样性稍低。结论系统研究玄参内生真菌的多样性与群落结构,阐明内生真菌在植物组织中的分布规律,可为玄参内生真菌的开发利用提供基础资料和科学依据。     

建立并利用一测多评法优化玄参饮片润透工艺的研究

目的：建立以一测多评法测定玄参中哈巴苷、肉桂酸、哈巴俄苷含量的方法,利用并验证一测多评法优化玄参饮片润透炮制最佳工艺的可行性和技术适应性。方法：采用一测多评法,以肉桂酸为内标物质,用外标法测定其含量,在一定线性范围内,建立肉桂酸与哈巴苷、哈巴俄苷的相对校正因子,并用该校正因子进行哈巴苷、哈巴俄苷的含量计算,实现一测多评。以加水量、浸润时间、干燥温度为考察因素,采用一测多评法结合外标法测定哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸含量,比较两种方法测定的结果,并以哈巴苷、哈巴俄苷炮制前后变化率为指标,优化玄参饮片润透工艺。结果：建立的相对校正因子分别为f_{肉桂酸/哈巴苷}=0.060 7（RSD=0.097%）、f_{肉桂酸/哈巴苷}=0.304（RSD=0.682%）,且差异性较小;玄参最佳润透工艺为加水量为药材0.6倍,浸润时间20h,干燥温度50℃。结论：建立的一测多评法方法可行,结果可靠;优化了玄参最佳润透工艺,为玄参的润透工艺研究提供了实验依据。     

基于HPLC指纹图谱和多成分定量的玄参质量评价研究

目的 建立玄参Scrophularia ningpoensis的HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法。方法 采用HPLC法建立浙江、湖北、四川、安徽等9个省份116批玄参指纹图谱,进行相似度评价,结合聚类分析（hierarchical cluster analysis,HCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）对玄参进行化学模式识别分析。同时对8个活性成分（桃叶珊瑚苷、哈巴苷、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸、类叶升麻苷、安格洛苷C、哈巴俄苷）进行含量测定,分析其与生境因子的相关性。结果 建立了116批玄参的指纹图谱,相似度为0.746～0.997,共标定34个共有峰。聚类分析将116批玄参分为4类,OPLS-DA分析能有效地将3个传统道地产区玄参与非道地产区玄参进行区分（Q2>0.5）。不同产地玄参中化学成分含量存在差异,与海拔、经纬度存在相关性。结论 建立的玄参HPLC指纹图谱及多成分含量分析方法稳定、可靠,结合化学识别模式可为玄参药材的产地判别及质量评价提供参考...     

应用SCoT标记分析玄参种质资源的遗传多样性

目的:研究玄参种质资源的遗传多样性及亲缘关系。方法:应用目标起始密码子多态性(SCoT)技术对来源于全国各地的48份玄参种质进行遗传多态性分析。遗传距离采用TREECONW软件计算,UPGMA方法构建亲缘关系树状图。结果:28条引物共检测到279个位点,其中214个为多态位点,占76.7%。遗传距离变化范围在0.150 7～0.493 3。聚类结果显示栽培玄参亲缘关系较为复杂:有的种质具明显的地理相关性;有的种质聚类混杂,与地理分布无明显相关性;也有来源于同一地区的种质仅部分聚在一起,呈现出一定的地域性分布规律。结论:栽培玄参的遗传多样性水平较高,为优良品种的培育提供了丰富的遗传基础。