开口箭提取物细胞毒活性研究

目的通过体外细胞培养技术,探讨开口箭提取物的细胞毒活性,为进行深层次研究提供依据。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法。结果开口箭甲醇提取物、总皂苷、30%总皂苷和70%总皂苷对HL-60和Caski细胞的抑制作用显著,与阴性对照相比(P<0.05),对HL-60细胞的抑制率达到60.12%,72.25%,89.09%,95.17%,其IC50为65.57,45.07,35.40,22.89μg/ml。对Caski细胞的抑制率达到63.94%,71.48%,62.49%,73.43%,其IC50为108.42,84.53,41.02,47.19μg/ml。结论开口箭提取物对HL-60和Caski细胞具有明显的抑制作用。     

紫草素对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的影响

目的研究紫草素诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的作用机制。方法 MTT比色法检测紫草素对HL-60细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因水平,分析白血病HL-60细胞凋亡作用与bcl-2表达水平关系。结果紫草素在1～8μg/mL浓度范围内能抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和浓度的依赖性。2μg/mL紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,凋亡呈时间依赖性。在2μg/mL紫草素作用下,HL-60细胞bcl-2表达明显下调。结论紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与下调bcl-2表达有关。     

楮实子生物碱的细胞毒作用研究

目的:对楮实子总生物碱抗肿瘤细胞的活性进行探讨。方法:分别用MTT及集落形成法考察楮实子中提得的总生物碱对Hela、BEL-7402、A375、SMM1990、Saos-2细胞株的细胞毒作用。结果:当药物浓度在10μg/L以下,抑制作用不明显。随着药物浓度的升至50μg/L时,药物对肿瘤细胞生长的抑制作用较明显,MTT法测得抑制率在20%以上,集落形成法测得抑制率在30%以上。而当药物浓度达到100μg/L时,楮实子总生物碱显示出较为显著的肿瘤细胞抑制作用,两种方法的细胞生长抑制率分别在50%和60%以上。结论:楮实子中总生物碱有较强的细胞毒作用。     

溴代白杨素衍生物合成及其抗癌活性

目的研究溴取代白杨素衍生物的体外抗癌活性。方法合成溴取代的白杨素衍生物,并通过MTT法检测其对人急性粒细胞性白血病(HL-60)细胞、人结肠癌(HT-29)细胞和人胃癌(SGC-7901)细胞增殖抑制作用。结果合成了6个溴取代白杨素衍生物。结论溴取代白杨素衍生物具有良好的抗癌活性(IC50=0.85~11.60μmol/L)。     

黄癸素对肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的:研究黄癸素对体外培养肿瘤细胞的抑制作用,探讨其对肿瘤细胞的促凋亡作用。方法:台盼蓝排染法检测黄癸素、盐酸小檗碱对HL-60和K562细胞生长的抑制作用,MTT法检测黄癸素、鱼腥草素对贴壁生长的肿瘤细胞株的影响,计算IC50;Hoechst 33258染色观察形态改变、比色法检测caspase活性,用于分析细胞凋亡。结果:黄癸素对14株肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用,对HL-60、K562、SGC-7901、B16、SW480、MGC80-3、U2OS、SW1116细胞(按IC50由低至高顺序)具有显著抑制,IC50为6.88~16.52μg/ml,其中对HL-60、K562的IC50与盐酸小檗碱相近;对AGS、TE-11、HepG2细胞的IC50分别为23.47、27.82和28.50μg/ml;而SMMC-7721、SW1990和PANC-1细胞对黄癸素的敏感性相对较低,IC50分别为51.10、41.34和77.37μg/ml。以核固缩为特征的凋亡细胞增加,caspase-3、caspase-8活性增强,显示黄癸素对K562细胞具有促凋亡作用。结论:黄癸素具有显著的抑制肿瘤细胞活性,其作用谱较广,可促进K562细胞凋亡。     

基于Keap1/Nrf2通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响

目的基于Kelch样ECH相关蛋白1/核因子E2相关因子2(Kelch-likeECH-associated protein-1/nuclearfactor E2-related factor 2,Keap1/Nrf2)通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响。方法体外培养人BUC细胞BIU-87,CCK-8法检测不同质量浓度(10、20、40、80、160μg/mL)顺铂和不同浓度(2、4、8、16、32μmol/L)紫草素+顺铂(40μg/mL)对BIU-87细胞增殖的影响。细胞转染实验,设置对照组、顺铂组(40μg/mL)、紫草素组(40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和NC组(转染negative control-Nrf2+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和Nrf2组(转染hsa-Nrf2mimic+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测转染后BIU-87细胞中Nrf2 mRNA表达情况;CCK-8法检测各组BIU-87细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组BIU-87细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测BIU-87细胞中Keap1、Nrf2、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)?、LC3II蛋白表达情况。结果与对照组相比,10、20、40、80、160μg/mL顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05);2、4、8、16、32μmol/L紫草素联合顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05)。细胞转染实验中,与对照组相比,顺铂组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著升高,细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低(P0.05);与顺铂组相比,紫草素组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1和LC3?蛋白表达水平显著升高,Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著降低(P0.05);紫草素组、NC组以上指标差异不具有统计学意义(P0.05);与NC组相比,Nrf2组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低,Nrf2蛋白和mR NA及LC3II蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论紫草素可能通过抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬反应,增强BUC细胞BIU-87对顺铂的敏感性。     

桑根白皮素调控人结肠癌HCT116细胞周期阻滞及其抑制细胞增殖的体外研究

目的观察中药提取物桑根白皮素对结肠癌HCT116细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响,探讨其相关机制。方法体外以不同浓度桑根白皮素作用于HCT116细胞72 h,CCK-8法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率和IC50,取25.4μmol/L和50.8μmol/L桑根白皮素作用于HCT116细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞增殖,镜下观测细胞形态并摄图;25.4μmol/L桑根白皮素作用于细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光显微镜下TUNEL法原位检测细胞凋亡;Western blot检测药物干预后β-catenin通路蛋白和细胞周期蛋白的表达变化。结果桑根白皮素对HCT116细胞增殖的抑制作用呈浓度/时间依赖性,72 h IC50为25.4μmol/L;桑根白皮素阻滞HCT116细胞周期于G0/G1期和G2/M期,对细胞凋亡无明显诱导作用;桑根白皮素显著降低β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc及细胞周期调控蛋白cyclin D1、cyclin B1的表达。结论桑根白皮素可阻滞HCT116细胞周期,抑制细胞增殖,其机制可能是通过下调β-catenin通路活性,并抑制细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin B1表达实现的。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

丹参酮Ⅱa通过AMPK/mTOR通路调节自噬促进急性白血病细胞凋亡作用机制研究

目的观察丹参酮Ⅱa对HL-60的凋亡与自噬以及相关因子水平的影响,探讨丹参酮Ⅱa抗急性髓系白血病的分子机制。方法使用不同浓度的丹参酮Ⅱa处理HL-60细胞24、48 h后用CCK-8法检测增殖抑制率,吉姆萨染色观察细胞形态,Western blotting检测Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、PARP-1、p-AMPK、pmTOR、LC3B水平变化,联用自噬抑制剂巴弗洛霉素A1以CCK-8测细胞存活率。结果以0、1、2、4、8、16、32、64、128μmol/L丹参酮Ⅱa处理HL-60细胞24、48 h后HL-60增殖被抑制,其作用随浓度增加和时间延长而加强,24、48 h的IC₅₀分别为32.87、18.4μmol/L;吉姆萨染色镜下观察见,随着药物浓度增加HL-60凋亡增加;Western blotting显示Caspase-3减少、Cleaved-Caspase-3增加,PARP-1切割增加,凋亡增强;p-AMPK增加、pmTOR减少、LC3B增加,显示AMPK/mTOR自噬通路激活,联用巴弗洛霉素A1后丹参酮Ⅱa增殖抑制作用减弱。结论丹参酮Ⅱa通过诱导HL-60凋亡和自噬发挥抗白血病作用,AMPK/mTOR可能是介导这一效应的重要信号通路。     

8-硝基白杨素对HL-60细胞凋亡与PTEN-Akt途径的影响

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系(HL-60)细胞增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制是否与PTEN-Akt信号传导途径相关.方法 体外培养HL-60细胞.MTT比色法检测增殖活性;流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡程度;Western Blot分析HL-60细胞PTEN、P-Akt蛋白表达的影响.结果 NOChR显著抑制HL-60细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50值为1.34 μmol/L;NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡作用,且呈浓度和时间依赖性.NOChR以浓度和时间依赖方式上调HL-60细胞PTEN蛋白表达和抑制P-Akt蛋白表达,其作用可被PPARγ特异性阻断剂GW9662(10 μmol/L)预孵育拮抗.结论 NOChR诱导HL-60细胞凋亡作用与其活化PPARγ,上调PTEN蛋白表达,抑制抑制Akt磷酸化相关.     

祖卡木颗粒剂的除杂工艺研究

目的优选出祖卡木颗粒剂的除杂工艺。方法以总黄酮、总蒽醌、甘草酸的保留率及固形物减少率为考察指标比较不同除杂工艺—超滤法、吸附澄清法、高速离心法、醇沉法及自然沉降法的效果。结果采用高速离心法进行除杂,有效成分保留最多。结论在对比的几种除杂方法中,采用高速离心法有效成分保留最多,而且操作简单,省时。     

肝病调理三法简析

肝病调理三法,即:调理脾胃法、调肾法、调肝法。指出:解除情志致病因素,使之心情舒畅,精神愉快,气机调畅、气血和平,则有利于肝病的康复。     

薯蓣皂苷元的制备方法研究进展

目前薯蓣皂苷元的制备方法主要有酸水解法、微生物法、酶解法以及一些其他方法.传统的酸水解方法由于酸用量大,酸降解有机质副产物多,使污水排放量大,环境污染严重,限制了薯蓣皂苷元的产业化发展;而利用微生物、酶等生物水解法,具有反应条件温和、环境友好等特点,连同诱导子激发植物组织细胞培养等相关技术,受到研究人员的广泛关注,已成为薯蓣皂苷元产业化制备的新的发展方向.     

六味地黄生物制剂中多糖脱蛋白方法对比

目的:对六味地黄生物制剂粗多糖中蛋白质的去除方法进行比较研究,探讨不同方法对多糖的提取率及纯度的影响.方法:利用Sevage法、TCA-正丁醇沉淀法、鞣酸沉淀法对六味地黄生物制剂脱蛋白,通过蛋白清除率和多糖保存率比较3种方法的优劣.结果:TCA-正丁醇法脱蛋白时效果最好,最佳条件为TCA-正丁醇试剂的体积比1∶2,TCA-正丁醇试剂的配比1∶5,振摇时间30 min,静置时间1.0h,多糖脱蛋白效率最高,多糖保存率最大.结论:TCA-正丁醇法是目前六味地黄生物制剂脱蛋白效果最好的工艺.     

三步疗法治疗带状疱疹72例

采用皮肤针、艾灸、针刺三步疗法治疗带状疱疹,大大缩短了病程,疗效显著。     

水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法

目的:建立水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法。方法:以氨基酸分析仪测定结果为参照,采用双缩脲法、2010年版《中国药典》二部附录收载的Lorry法、2010年版《中国药典》三部附录收载的Lorry法、茚三酮法等4种常用蛋白含量测定方法对3批样品进行总肽的含量测定。结果:2010年版《中国药典》三部收载的Lorry法测定的总肽含量不仅准确度高而且重复性,稳定性均好。结论:确定2010年版《中国药典》三部收载的Lorry法作为水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法。     

浅论针刺补泻

针刺补泻是针灸治病的基本法则,其原则是＂虚则补之,实则泻之＂,常用手法包括提插补泻、捻转补泻、徐疾补泻、开阖补泻、迎随补泻、呼吸补泻、平补平泻、烧山火和透天凉等。针刺补泻的机理不是直接补人体之不足,或泻人体之有余,而是通过不同的针刺方法,间接的经过经络的调整作用,产生补虚泻实的效果,从而达到防病治病的目的。     

金银花减压提取工艺研究

目的:筛选金银花减压提取工艺条件。方法:以绿原酸的转移率为考察指标,采用正交试验法对加水量、真空度、时间、pH因素进行优选研究,并与温浸法、常压煎煮法进行比较。结果:金银花减压提取的最优工艺为加水量20倍(pH 5.0),真空度-0.070 mPa(温度75℃),提取2次,每次1 h。减压提取法优于温浸法和常压煎煮法。结论:该工艺稳定可行,对同性质的药材提取有一定的借鉴意义。     

清肝、泻肝、养肝、温肝法治疗肝硬化

肝硬化是一种常见的慢性进行性肝脏疾病,本病早在2000多年前,中医即有记载和叙述,中医根据肝硬化各阶段、各类型证候表现不同,根据临床表现,一般可分为代偿期的肝积和失代偿期的臌胀。对肝病的治疗,历代医学家在《黄帝内经》的基础上各有发挥,给后世肝病临床留下宝贵经验,现以清王旭高的治肝三十法的论述中归纳成治肝八法,现以其中四法,即清肝法、泻肝法、养肝法、温肝法的治疗方法上,探讨及分析其在肝硬化治疗上的运用,以便于临床掌握使用。     

推拿治疗胸椎后关节紊乱30例

运用松筋、整复和理筋等推拿手法治疗胸椎后关节紊乱30例。结果:治愈25例(83.3%),显效4例(13.3%),好转1例(占3.3%)。