miR-503 靶向ERCC1 抑制食管鳞状细胞癌放疗抵抗作用的机制

[摘要] 目的:探讨miR-503 通过调控人切除修复交叉互补基因1（ERCC1）介导食管鳞状细胞癌（ESCC）放疗抵抗作用的分子机制。方法：采用qPCR法检测在放疗抵抗的ESCC肿瘤组织及KYSE140、KYSE140R细胞中miR-503 的表达水平。将miR-503模拟物、miR-503 抑制物或si-ERCC1 转染至KYSE140 和KYSE140R细胞中,经射线照射后,克隆形成实验和CCK-8 实验检测KYSE140R细胞的增殖活力,流式细胞仪检测KYSE140R细胞的凋亡情况,WB实验检测ERCC1 蛋白表达水平的变化。双荧光素酶报告基因验证miR-503 与ERCC1 的靶向关系。结果：miR-503 在ESCC放疗抵抗组织和细胞中均低表达（均P<0.01）。过表达miR-503 可显著抑制KYSE140R细胞增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实ERCC1 是miR-503 的靶基因,且miR-503 负调控ERCC1 的表达。过表达miR-503 显著下调KYSE140、KYSE140R 细胞中ERCC1 表达水平（均P<0.01）,并显著抑制细胞增殖活力（均P<0.01）、显著提高细胞凋亡率（均P<0.01）;敲降ERCC1 有类似作用,而同时敲降ERCC1 和miR-503 则逆转以上影响。结论：过表达miR-503 通过靶向ERCC1 调控KYSE140R细胞对放疗的敏感性。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

miR-125a-5p通过靶向APAF1 增强非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性

目的：探讨miR-125a-5p 在诱导非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞吉非替尼（gefitinib，Gef）耐药中的作用及其机制。方法：选用人NSCLC 耐药细胞株A549/GR 和NSCLC细胞株A549，将miR-125a-5p mimic、miR-125a-5p inhibitor、pcDNA3.1-APAF1、空载体pcDNA3.1 转染至A549/GR细胞。用qPCR检测细胞中miR-125a-5p 的表达水平，用MTT法、Transwell 小室法和流式细胞术检测Gef 对细胞增殖、迁移和凋亡的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p 与细胞凋亡蛋白酶活化因子1（apoptotic peptidase activating factor 1，APAF1）的靶向关系，用Western blotting检测A549/GR细胞中APAF1蛋白水平，用比色法测定细胞中caspase-3 及caspase-9 表达水平。结果：A549/GR 细胞中miR-125a-5p 表达水平显著高于A549 细胞（P<0.01）。敲降miR-125a-5p 显著增强Gef 对A549/GR细胞增殖、迁移的抑制作用（均P<0.05），并促进细胞凋亡（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-125a-5p 靶向APAF1，并负调控其表达。进一步实验显示，miR-125a-5p 通过靶向下调APAF1 缓解Gef 对A549/G 细胞增殖、迁移的抑制作用及凋亡的促进作用（均P<0.05），减弱Gef引起的凋亡相关蛋白caspase-3及caspase-9表达的上调（均P<0.05）。结论：miR-125a-5p 促进NSCLC细胞Gef 耐药，其机制是通过靶向APAF1 而促进细胞的增殖、迁移并抑制凋亡。     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

miR-760 在宫颈鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞恶性 生物学行为的作用

[摘要] 目的: 探讨微小RNA（miR）-760 在人宫颈鳞状细胞癌（CSCC）组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、EMT影响的分子机制。方法: 选用2015 年4 月至2018 年8 月山东省聊城市妇幼保健院妇科手术切除、经病理确诊的80 例CSCC组织及相应的癌旁组织标本和40 例子宫肌瘤切除术获取的正常宫颈组织标本,应用qPCR检测CSCC组织、癌旁组织和正常宫颈组织、人CSCC细胞系SiHa、HCC94 和人宫颈鳞状上皮永生化细胞株H8 中miR-760 的表达水平,分析miR-760 表达与CSCC患者临床病理特征的相关性。用脂质体转染法,将miR-760 mimics 和NC-mimics 质粒分别转染至SiHa 细胞,用qPCR检测SiHa 细胞中miR-760 的表达,用CCK-8 实验和流式细胞术分别检测SiHa 细胞增殖能力和凋亡水平,用Transwell 实验检测SiHa 细胞的侵袭和迁移能力,WB检测SiHa 细胞EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的表达变化。用生物学信息法预测FOXA1 与miR-760 的靶向关系,用双荧光素酶报告基因验证miR-760 对FOXA1的直接靶向调控作用。结果：CSCC组织中miR-760 表达明显低于癌旁组织及正常宫颈组织（均P<0.01）,miR-760 表达与患者淋巴结转移和临床分期密切相关（均P<0.01）。SiHa、HCC94 细胞中miR-760 的表达明显低于H8 细胞（均P<0.01）。通过转染miR-760 mimics 上调miR-760 表达,能够显著抑制SiHa 细胞的增殖能力和侵袭、迁移能力（均P<0.01）、促进其凋亡（P<0.01）,并上调Ecadherin的表达（P<0.01）、下调vimentin 和N-cadherin 的表达（均P<0.01）。FOXA1 是miR-760 的直接靶基因（P<0.01）,上调miR-760 表达显著抑制SiHa 细胞中FOXA1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。结论：在CSCC组织和细胞中miR-760 低表达,其通过靶向作用FOXA1 基因调控SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移并促进凋亡,同时影响癌细胞的EMT进程。     

食管鳞状细胞癌YES-2细胞顺铂耐药致其恶性生物学行为及PD-L1表达的变化

目的：探讨食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）YES-2 细胞顺铂（cis-dichlorodiammine platinum,CDDP）耐药后（YES-2/CDDP-R）细胞恶性生物学行为的变化和程序性死亡受体-配体1（programmed cell death-ligand 1 ,PD-L1）表达的变化。方法：用CDDP 由低质量浓度到高质量浓度（0.25~2.0 μg/ml）间断冲击（间隔15~25 d）的方法处理YES-2 细胞,建立CDDP耐药细胞株YES-2/CDDP-R。倒置显微镜下观察YES-2/CDDP-R 细胞的形态学变化,MTT法检测细胞对CDDP敏感性的变化,划痕愈合实验检测耐药前后细胞迁移能力的变化,qPCR和Western blotting 检测耐药前后细胞中PD-L1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：经过CDDP梯度给药9 个月后成功建立YES-2/CDDP-R 细胞。显微镜下见YES-2/CDDP-R 细胞的形态大小不一、胞内空泡及黑色颗粒明显增多且出现巨大细胞。与YES-2 细胞比较,YES-2/CDDP-R细胞的IC50值显著升高,表明其对CDDP的敏感程度降低（P<0.05）;YES-2/CDDP-R 细胞的增殖和迁移能力显著增强（P<0.05 或P<0.01）,PD-L1 mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P<0.01）。结论：成功建立的CDDP耐药细胞株YES-2/CDDP-R 对CDDP的敏感程度降低,其增殖和迁移能力增强。YES-2/CDDP-R 细胞中PD-L1 表达水平升高,提示CDDP耐药可能通过上调YES-2细胞PD-L1表达水平促进免疫逃逸。     

lncRNA PVT1 在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对顺铂化疗敏感性的影响及机制

[摘要] 目的: 探讨长链非编码RNA（lncRNA）浆细胞瘤转化迁移基因1（plasmacytoma variant translocation 1, PVT1）对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）顺铂（cisplatin,DDP）化疗敏感性的调控作用及其机制。方法: 收集2006 年4 月至2011 年3 月新乡医学院第一附属医院112 例接受手术切除、经病理确诊CRC患者的癌及癌旁组织标本,从中分别选择各30 例顺铂敏感、顺铂耐药癌及癌旁组织;人CRC细胞系HT29、SW480、HCT116、RKO和LoVo 与正常结肠上皮细胞株NCM460,构建顺铂耐药LoVo/DDP及RKO/DDP细胞。用脂质体2000 分别将siPVT1 和siNC、LV-PVT1 和LV-NC 转染或感染LoVo 和RKO细胞或者LoVo/DDP及RKO/DDP细胞。qPCR检测CRC组织及细胞中lncRNA PVT1 的表达水平。CCK-8 法、流式细胞术、WB实验分别检测敲降PVT1或过表达PVT1 对CRC细胞的增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达影响。构建无胸腺裸鼠CRC皮下移植动物模型,观察对移植瘤体细胞生长及顺铂耐药的影响。结果: PVT1 mRNA在CRC组织及细胞中lncRNA PVT1 高表达,其表达水平与顺铂耐药呈正相关。敲除PVT1 后,显著降低顺铂耐药的CRC细胞的增殖能力并促进其凋亡（P<0.05 或P<0.01）、降低耐药相关分子MDR1 和MRP1 及抗凋亡相关分子Bcl-2 的表达而增加了促凋亡相关分子Bax 和活化的caspase-3 的表达。过表达PVT1 后,则促进细胞增殖并减少其凋亡（P<0.05 或P<0.01）。体内实验表明,在CRC细胞中过表达PVT1 促进顺铂耐药的形成（P<0.05）。结论: 敲降lncRNA PVT1 表达可显著抑制CRC耐药细胞株的增殖并促进其凋亡,过表达PVT1 可明显促进CRC细胞和动物移植瘤体的生长。PVT1 通过抑制MDR1 和MRP1 的表达,调控内源性凋亡通路,进而增强CRC细胞对顺铂的敏感性。     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

miR-424 通过靶向调控HMGA1 对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响

[摘要] 目的：探讨miR-424/高迁移率蛋白A1 基因（nigh mobility protein A1,HMGA1）分子轴对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响及其分子机制。方法：收集2014 年4 月至2017 年4 月无锡市第四人民医院肿瘤放疗科经手术切除的50 例乳腺癌患者的癌组织标本,用qPCR和Western blotting 检测miR-424 和HMGA1 mRNA与蛋白在乳腺癌放疗敏感患者和放疗抵抗患者癌组织中的表达水平。用不同辐射强度（0、2、4、6 和8 Gy）的60Co γ - 射线处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-468 后,观察细胞miR-424 和HMGA1 的表达变化。向MDA-MB-468 细胞中转染miR-424 mimic/inhibitor 和pcDNA-HMGA1,采用平板克隆形成实验、MTT法、Transwell 小室法和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测miR-424 对辐射处理后乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。用双荧光素酶报告基因验证miR-424 与HMGA1 的靶向关系。结果：与放疗抵抗的乳腺癌患者比较,miR-424 在放疗敏感的乳腺癌患者癌组织中高表达（P<0.01）,HMGA1 低表达（P<0.01）。与0、2 和4 Gy 处理组细胞比较,6 和8 Gy 的γ-射线处理后乳腺癌MDA-MB-468 细胞凋亡率和miR-424 的表达水平显著升高（均P<0.01）;细胞的侵袭能力和HMGA1 的表达水平显著降低（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-424 靶向作用HMGA1 并下调其表达水平。miR-424 通过靶向下调HMGA1 显著抑制MDA-MB-468 细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01）,进而上调MDA-MB-468 细胞对放疗的敏感性。结论：miR-424/HMGA1 分子轴可调控乳腺癌放疗敏感性,过表达miR-424 可增强乳腺癌MDA-MB-468 细胞对γ-射线放疗的敏感性。     

miR-144和lncRNADNAJC3-AS1在乳腺癌组织中的表达及其在在乳腺癌 细胞MCF-7化疗耐药中的作用

目的：探讨miR-144及长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA）DNAJC3-AS1在乳腺癌（breat cancer, BC）组 织中的表达及其对BC MCF-7细胞化疗耐药的影响。方法：选取2012年1月至2016年12月于三二〇一医院肿瘤内科收治的 196例BC患者的肿瘤组织及其配对癌旁组织，采用qPCR法检测DNAJC3-AS1、DNAJC3及miR-144在BC组织中的相对表达量， 分析其对患者生存期的影响；荧光素酶报告基因实验验证DNAJC3-AS1与miR-144的靶向结合关系； 将DNAJC3-AS1过表达质 粒及miR-144 mimics转染MCF-7细胞，采用qPCR验证转染效果。CCK-8实验检测过表达DNAJC3-AS1及过表达miR-144对 MCF-7细胞增殖及顺铂敏感性的影响。结果：DNAJC3-AS1及其宿主基因DNAJC3在BC组织中均呈高表达（均P<0.01），且两 者表达水平呈正相关（r=0.451， P<0.01），并且高表达DNAJC3-AS1和DNAJC3的患者生存期较短（均P<0.01）；miR-144在BC组 织中呈低表达（P<0.01），且与DNAJC3-AS1呈负相关（r=–0.524， P<0.01)。转染后细胞中DNAJC3-AS1过表达平均倍数为13.47 倍（P<0.01），miR-144过表达平均倍数为20.27倍（P<0.01）；生物信息学分析和荧光素酶报告实验证实DNAJC3-AS1能够与miR-144 靶向结合。成功构建过表达DNAJC3-AS1和miR-14的MCF-7细胞，与对照组相比，DNAJC3-AS1过表达组细胞增殖能力显著增 强（P<0.01）、对顺铂的敏感性显著降低 （P<0.01），而 miR-144 过表达组细胞对顺铂的敏感性显著增加 （P<0.01）。结论：miR-144和 lncRNADNAJC3-AS1在BC组织中均高表达，miR-144可通过靶向DNAJC3-AS1从而提高BC MCF-7细胞对顺铂的敏感性。     

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制.方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平.利用脂质体转染技术分别将miR-361-5...     

miR-223-3p 通过靶向RAC1 调控肝细胞癌SMMC-7721 细胞的增殖和凋亡

目的：探讨miR-223-3p 通过调控Ras 相关C3 肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，RAC1）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选用2016 年8 月至2018 年8 月吉林市中心医院手术切除的30 例HCC 组织及其癌旁组织标本和人HCC 细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2 及人正常肝细胞QSG-7701，用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor 和siRAC1转染至SMMC-7721 细胞，通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测SMMC-7721 细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p 与RAC1 的靶向关系，Western blotting 检测细胞中RAC1 蛋白的表达水平。结果：miR-223-3p 在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.01），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关（P<0.05 或P<0.01）；miR-223-3p 在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701 细胞（均P<0.01），以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1 是miR-223-3p 靶基因，miR-223-3p 靶向负调控RAC1 的表达。转染miR-223-3p mimics 显著抑制SMMC-7721 细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05 或P<0.01），并促进细胞凋亡（P<0.01）；转染miR-223-3p inhibtor 则逆转miR-223-3p mimics 对细胞的抑制作用。结论：过表达miR-223-3p 抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡，其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。     

上调结肠癌间充质干细胞中miR-93-5p表达抑制结肠癌细胞增殖及促进凋亡的机制探讨

目的:观察miR-93-5p上调的结肠癌间充质干细胞（colon cancer mesenchymal stem cell,CCMSC）对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:以贴壁细胞培养法抽提癌组织CCMSC,从正常结肠组织抽提结肠间充质干细胞（colon mesenchymal stem cell,CMSC）,观察miR-93-5p及PD-L1的表达差异;以拟似剂上调CCMSC中miR-93-5p表达,CCK8法及流式细胞术检测CCMSC诱导的SW480细胞增殖及凋亡变化。结果:miR-93-5p在结肠癌细胞株中表达低于正常结肠上皮细胞（P＜0.001）,PD-L1 mRNA和PD-L1蛋白在结肠癌细胞株中表达高于正常结肠上皮细胞（P＜0.001,P＜0.001）;miR-93-5p在CCMSC组中表达明显低于CMSC（P＜0.001）;与SW480细胞比较,给予CCMSC干预后SW480细胞存活率上升（P＜0.001）,凋亡率下降（P＜0.05）,与SW480细胞或CCMSC/SW480细胞比较,给予转染miR-93-5p mimics CCMSC干预的SW480细胞存活率下降（P＜0.01,P＜0.001）,凋亡率上升（P＜0.05,P＜0.01）。结论:上调CCMSC中miR-93-5p通过靶向调控PD-L1抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡。     

lncRNA GTSE1-AS1在前列腺癌组织中的表达及其对LNCaP细胞增殖与侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GTSE1-AS1在前列腺癌组织中的表达及其影响LNCaP细胞增殖和侵袭的机制.方法:收集2017年11月至2018年12月郑州大学附属洛阳中心医院泌尿外科手术切除的68例前列腺癌患者的癌和癌旁组织标本,以及前列腺癌细胞系LNCaP、PC...     

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-141-3p 通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt 通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年4 月至2017 年10 月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28 例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用qPCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p 的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141 及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测卵巢癌A2780 细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测miR-141-3p 对PTEN-PI3K/Akt 信号通路的调控作用。结果：miR-141-3p 在卵巢癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p 靶向作用于PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。与对照组相比,敲降miR-141-3p 后A2780 细胞的增殖受到显著抑制（48 h 时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05）、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数（45.14±7.88）vs（215.32±16.04）个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[ （9.29±0.65）% vs（1.85±0.26）%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780 细胞中p-Akt 的表达（均P<0.01）、抑制细胞增殖和侵袭能力（均P<0.01）而明显促进细胞凋亡（均P<0.01）,在过表达PTEN的同时过表达miR-141-3p 或添加IGF-1 后可逆转上述的变化。结论：miR-141-3p 能够促进A2780 细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。     

miR-17-5p 通过下调BRMS1L表达调控鼻咽癌CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的：探讨miR-17-5p 通过调控乳腺癌转移抑制基因1 相似基因（breast cancer metastasis suppressor 1 like,BRMS1-like 或BRMS1L）表达调控鼻咽癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法：收集2014 年1 月至2017 年12 月间平煤神马医疗集团总医院收治的40 例鼻咽癌患者切除的鼻咽癌组织及其相应的癌旁组织标本,以及鼻咽癌细胞系CNE 2、HONE 1、C666-1 和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69,采用qPCR 检测miR-17-5p 在癌组织和癌细胞系中的表达水平。通过StarBase 数据库预测BRMS1L 与miR-17-5p 的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。WB检测转染miR-17-5p 模拟物和抑制物对CNE2 细胞中BRMS1L表达的影响;CCK-8、Transwell 和流式细胞术检测miR-17-5p/BRMS1L分子轴对CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：miR-17-5p 在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中呈高表达（P<0.05 或P<0.01）,下调miR-17-5p 显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移但促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。miR-17-5p 靶向作用于BRMS1L并下调其表达水平。过表达BRMS1L可显著抑制CNE2 细胞增殖、侵袭、迁移而促进细胞凋亡（均P<0.01）;而同时过表达miR-17-5p 和BRMS1L 可逆转上述作用（均P<0.01）。结论：miR-17-5p通过靶向下调BRMS1L的表达,进而促进CNE2 细胞增殖、侵袭和迁移而抑制细胞凋亡。     

miR-129-5p通过HMGB1 调控乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇的敏感性

目的：探讨miR-129-5p 通过调控高迁移率族蛋白B1 基因（high mobility group box 1,HMGB1）影响乳腺癌MCF-7 细胞对紫杉醇（paclitaxel,PTX）的敏感性。方法：采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics、HMGB1 小干扰RNA（si-HMGB1）分别转染入MCF-7 细胞,用PTX刺激培养细胞后,用实时荧光定量PCR检测转染后MCF-7 细胞miR-129-5p 和HMGB1 mRNA的表达,Western blotting 检测转染后MCF-7 细胞HMGB1 蛋白的表达,CCK-8 增殖实验检测转染后PTX对MCF-7 细胞增殖的影响,流式细胞术检测转染后对PTX诱导MCF-7 细胞凋亡的影响。结果：转染miR-129-5p mimics 后,MCF-7 细胞中miR-129-5p 的表达水平明显高于阴性对照组细胞（P<0.01）;过表达miR-129-5p 后可明显增强PTX抑制MCF-7 细胞的增殖和诱导细胞凋亡的能力（均P<0.05）,并显著抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。转染si-HMGB1 后,显著降低MCF-7 细胞HMGB1 mRNA 和蛋白的表达（均P<0.05）;干扰HMGB1 表达进一步促进PTX抑制MCF-7 细胞的增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.05）。结论：miR-129-5p 通过下调HMGB1 的表达增强乳腺癌MCF-7 细胞对PTX的敏感性。     

过表达miR-145-5p 通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10 细胞的恶性生物学行为

目的：探究miR-145-5p 对食管鳞状细胞癌TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等恶性生物学行为的分子机制。方法：qPCR法检测miR-145-5p 在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p 与胰岛素样生长因子1 受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）的靶向调控关系，Western blotting 检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达，CCK-8 法和Transwell 检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果：miR-145-5p 在3 株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10 细胞中表达最低（P<0.01 或P<0.05）。过表达miR-145-5p 可显著抑制TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程（P<0.01 或P<0.05）。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p 靶向下调IGF1R表达（P<0.01）。回复实验进一步证实，与单独过表达IGF1R相比，同时过表达miR-145-5p 和IGF1R能显著缓解IGF1R 对TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT 进程的促进作用（P<0.01 或P<0.05）。结论：过表达miR-145-5p 通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。     

环状RNA＿000926通过靶向miR-411-5p调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的：探讨环状RNA＿000926(circ＿000926)对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:收集2019年5月至2020年9月河北医科大学第一医院手术切除的30例宫颈癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人宫颈癌细胞HeLa、SiHa和正常宫颈细胞Ect1/E6E7,用qPCR法检测组织和细胞中circ＿000926和miR-411-5p的表达水平。将circ＿000926过表达质粒及空白质粒、circ＿000926小干扰RNA及阴性对照寡核苷酸、miR-411-5p mimic和阴性对照质粒分别转染HeLa和SiHa细胞,分为pc-circ＿000926组、pc-NC组、si-circ＿000926组、si-NC组、miR-411-5p mimic组和miR-NC组。通过CCK-8法检测转染细胞的增殖活力,TUNEL法检测细胞的凋亡水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证circ＿000926与miR-411-5p之间的靶向关系,WB法检测细胞中Ki67、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结果:与癌旁组织和Ect1/E6E7细胞相比,宫颈癌组织和He La...