p38 MAPK通路在内脏脂肪素诱导HUVEC细胞分泌TNF-α的作用及定心方含药血清的影响

目的：观察相对分子质量为38 kD有丝分裂原活化蛋白质激酶（p38 MAPK）信号通路在内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用以及定心方（Dingxin Recipe,DXR）的干预影响。方法：制备DXR含药血清;用不同质量浓度（0,50,100,200 μg·L^-1）及时间点（0,6,12,24,48 h）的visfatin和终浓度5%的DXR含药血清干预HUVEC,采用四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养上清液中TNF-α含量,Western blotting方法检测细胞p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果：与正常对照组相比,100 μg·L^-1的visfatin作用24 h能显著抑制细胞增殖,升高细胞上清液中TNF-α含量,增强p-p38 MAPK蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。DXR能降低HUVEC培养上清液中TNF-α含量,减弱细胞p-p38 MAPK表达,与visfatin组相比差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：定心方通过调控p38 MAPK通路保护visfatin诱导的HUVEC损伤。     

防己黄芪汤对脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 防己黄芪汤对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力的作用。方法 VEGF（20 μg·L^-1）体外诱导HUVECs，加入不同质量浓度防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）作用后，分别采用噻唑蓝（MTT）比色法、划痕修复实验、转移小室（transwell）迁移、黏附、侵袭及管腔形成实验检测防己黄芪汤对VEGF诱导的HUVECs功能的影响。提取HUVECs中的蛋白，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化Janus激酶1（p-JAK1）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，VEGF（20 μg·L^-1）能显著增加HUVECs细胞的增殖、划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力（P<0.01）；与VEGF组比较，防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）作用24 h对VEGF诱导的HUVECs增殖活性没有明显影响，作用24 h内能明显降低VEGF诱导升高的HUVECs划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力（P<0.05）。与空白组比较，VEGF能显著诱导p-JAK1在HUVECs中的异常升高（P<0.01），防己黄芪汤（0.25，0.5，1 g·L^-1）能明显降低p-JAK1的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 防己黄芪汤能够降低VEGF诱导的HUVECs划痕修复，transwell迁移、黏附、侵袭及管腔形成的能力，而其机制可能与JAK1相关。     

丹参多酚酸盐对早期糖尿病肾病患者炎症细胞因子及肾血管内皮功能的影响

目的： 探讨早期糖尿病肾病（DN）患者炎症细胞因子、肾血管内皮功能的变化及丹参多酚酸盐干预治疗作用。方法： 选择早期DN患者64例,分为常规治疗组、丹参多酚酸盐治疗组,健康对照组30例,检测DN患者治疗前后及健康受检者外周血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、血清可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）、血内皮素-1（ET-1）水平,同时利用超声检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能（FMD）。结果： 早期DN[JP2]患者组hs-CRP,TNF-α,IL-6,ICAM-1及ET-1均高于对照组（P<0.05）;早期DN患者FMD较对照组降低（P<0.05）;丹参多酚酸盐组治疗后外周血hs-CRP,sICAM-1,ET-1,TNF-α,IL-6[hs-CRP（9.24±2.16）mg·L^-1, sICAM-1（257.72±16.32） μg·L^-1, ET-1（103.78±12.21） ng·L^-1,TNF-α（14.62±7.23） ng·L^-1,IL-6（16.12±5.68） ng·L^-1]较常规治疗组[（14.58±3.32）mg·L^-1, （567.43±16.24） μg·L^-1, （258.5±9.78） ng·L^-1, （36.72±6.23）ng·L^-1, （34.62±7.01）ng·L^-1]下降更明显,FMD升高更明显[（10.12±3.27）% vs （7.17±0.32）%],且差异有统计学意义（P<0.05）。结论： 丹参多酚酸盐能有效的降低早期DN患者炎症反应,并改善肾血管内皮功能。     

黄连素通过ERK1/2通路降低内脏脂肪素诱导HUVEC分泌TNF-α和IL-6的研究

目的： 观察细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）通路在内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）中的作用及黄连素（berberine,Ber）的干预作用。 方法： 体外培养HUVEC,用visfatin不同质量浓度（0,50,100,200 μg·L^-1）、不同时间（0,6,12,24,48 h）作用HUVEC,MTT法测HUVEC增殖,ELISA法测HUVEC上清液中TNF-α及IL-6含量;Western blotting法测HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达;并用50 μmol·L^-1 Ber及ERK1/2通路特异性抑制剂PD98059 20 μmol·L^-1干预HUVEC,检测Ber的干预作用。 结果： 与对照组相比,100 μg·L^-1 visfatin能显著抑制HUVEC增殖,升高HUVEC上清液中TNF-α及IL-6含量并能上调p-ERK1/2蛋白表达;与visfatin组比,Ber及PD98059均能显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制,减少visfatin诱导HUVEC上清液中TNF-α及IL-6的含量并能下调HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达。 结论： Ber可通过抑制炎症因子TNF-α及IL-6的分泌,减轻visfatin诱导的HUVEC损伤,其机制可能与抑制ERK1/2通路的激活有关。     

丹皮酚对脂多糖诱导损伤的与平滑肌细胞共培养的大鼠血管内皮细胞黏附功能的影响

目的：观察脂多糖（LPS）诱导的与平滑肌细胞（SMC）共培养的内皮细胞（VEC）与大鼠单核细胞黏附功能的改变及丹皮酚（paeonal,Pae）的干预作用。方法：组织块预消化贴壁法原代培养大鼠血管内皮细胞和大鼠血管平滑肌细胞;采用Transwell小室建立VEC-SMC共培养模型;采用LPS诱导VEC的损伤;MTT法和LDH法检测VEC活力;ELISA法检测VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平;免疫细胞化学法检测ICAM-1表达水平;孟加拉玫瑰红染色法检测VEC与单核细胞的黏附功能。结果：LPS诱导VEC损伤的质量浓度为100 μg·L^-1,时间为7 h;Pae（15,30,60 μmol·L^-1）对以上细胞模型作用24 h可有效抑制LPS诱导的VEC损伤,显著提高LPS导致的VEC存活率的下降;降低损伤VEC分泌IL-1β和TNF-α的水平,同时减少ICAM-1的表达;从而抑制LPS诱导的VEC与单核细胞的黏附。结论：Pae通过抑制IL-1β和TNF-α表达而保护VEC免受LPS的损伤,可以通过降低ICAM-1的表达水平达到抑制VEC与单核细胞的黏附的作用。     

脉络宁注射液对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的NF-κB/TF通路的影响

目的： 研究脉络宁注射液对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的核转录因子-κB（NF-κB）/组织因子（tissue factor,TF）通路的干预作用。 方法： HUVECs在5%CO₂ 37 ℃条件培养于含10%胎牛血清、0.5%双抗和10 μg·L^-1碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的DMEM低糖培养基中,5 mg·L^-1 LPS诱导HUVECs 24 h后形成的炎症细胞模型,采用MTT法观察脉络宁注射液对炎症细胞模型活性的影响,从而确定脉络宁治疗组的低、中、高剂量;采用ELISA法检测白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的活性;采用Western blotting检测NF-κB和TF的含量。 结果： 与模型对照组比较,脉络宁治疗组的作用增加显著（P<0.05或P<0.01）,但在12 mg·L^-1后有趋于平稳或下降,则确定脉络宁低、中、高剂量组分别是4,8,12 mg·L^-1;脉络宁各剂量组的IL-6和TNF-α的含量都有显著降低（P<0.01）和显著降低炎症细胞模型的NF-κB和TF的蛋白表达（P<0.01）。 结论： 脉络宁注射液的抗炎作用与其拮抗NF-κB/TF活化有一定的关系。     

辣椒碱通过下调SIRT1表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,并初步探讨其分子生物学机制。方法：设立辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）组以及空白组,采用穿透小室（Transwell）迁移和侵袭实验分别检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）和DNA聚合酶δ催化亚基p125的编码基因POLD1（POLD1） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125（p125）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后,穿膜细胞数明显减少,迁移率和侵袭率显著降低,且呈浓度依赖效应（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著下调乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1,POLD1 mRNA表达水平（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著降低乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125的蛋白表达水平（P<0.01）。结论：辣椒碱能显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与下调细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平以及POLD1 mRNA和p125的蛋白表达水平有关。     

通络生骨胶囊对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的保护作用

目的 观察通络生骨胶囊（TLSGC）对糖皮质激素致血管内皮细胞功能损伤的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路初步探索其作用机制。方法 取正常SD大鼠胸主动脉环,用甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 g·L^-1）和（或）血管内皮细胞生长因子（VEGF,20 μg·L^-1）体外干预,加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）连续作用5 d,观察血管环芽出的微生血管数目、长度和面积;此外,以甲泼尼龙琥珀酸钠（MPS,0.04 μg·L^-1）加入由VEGF（20 μg·L^-1）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,再加入TLSGC（12.5,25,50 μg·L^-1）,然后分别采用transwell迁移,transwell侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的迁移、侵袭及管腔形成能力,并以硝酸还原酶法检测细胞上清中一氧化氮（NO）含量,干粉法检测细胞上清中内皮素-1（ET-1）含量,蛋白免疫印迹法检测细胞中血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）,ERK,磷酸化（p）-ERK,MEK和p-MEK蛋白表达量。结果 与正常组比较,MPS能明显抑制由VEGF诱导的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,降低NO并升高ET-1含量,MPS还能明显减少由VEGF诱导的VEGFR2,p-MEK和p-ERK在HUVEC中的蛋白含量（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,TLSGC能剂量依赖地改善由MPS降低的大鼠胸主动脉环微血管数目、长度和面积以及HUVEC细胞迁移、侵袭和管腔形成能力,提高HUVEC中的NO,VEGFR2,p-MEK和p-ERK蛋白含量并降低ET-1含量（P<0.05,P<0.01）。结论 TLSGC对糖皮质激素所致血管内皮细胞血管生成和分泌功能的损伤具有保护作用,其机制可能与活化MEK/ERK信号通路有关。     

槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响

目的：构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法：将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-6 2×10⁵个细胞。细菌脂多糖（LPS,1 mg·L^-1）干预生长良好的IEC-6细胞12 h,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测3种生物碱不同浓度对炎症细胞增殖的影响;ELISA法检测给药后细胞上清中IL-6,TNF-α的变化;免疫印迹法检测细胞内IL-6及TNF-α蛋白表达水平。结果：与正常组比较,模型组细胞上清中IL-6,TNF-α水平显著升高,LPS （1 mg·L^-1）干预12 h后,IL-6,TNF-α含量分别为（1 899.68±45.80）,（148.67±5.93） ng·L^-1。苦豆碱、槐定碱和苦参碱均可有效减弱LPS诱导的结肠上皮细胞损伤。当生物碱浓度为100 μmol·L^-1时,槐定碱、苦参碱和苦豆碱均可提高LPS损伤细胞的活性,细胞存活率分别从80.47%提高为91.96%,92.40%,97.23%。此外,这3种生物碱可降低IL-6和TNF-α的含量及其在细胞内的表达。结论：槐定碱、苦参碱和苦豆碱3种生物碱均可通过降低IL-6和TNF-α活性发挥抗炎作用。其中,苦豆碱的抗炎作用最佳。     

槲皮素对大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌的干预作用

该研究采用LPS 100 μg·L^-1联合ATP 5 mmol·L^-1建立大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌模型,考察槲皮素对心脏成纤维细胞炎症因子TNF-α,IL-6及IL-1β分泌的抑制作用,并进一步采用Western blot考察槲皮素对p-NF-κB p65（S276）及p-Akt（S473）蛋白表达的影响,探讨槲皮素抑制心脏成纤维细胞炎症分泌的作用机制。研究结果发现：①槲皮素51.74~827.81 μmol·L^-1对大鼠心脏成纤维细胞活力无明显影响;②槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用36 h所致的TNF-α,IL-1β的水平升高（P<0.01或P<0.05）;槲皮素82.78,41.39 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用36 h所致的IL-6的水平升高（P<0.05）,而槲皮素20.70 μmol·L^-1未见明显影响;③槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用15 min所致的NF-κB p65（S276）激活,以20.70 μmol·L^-1最明显;槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用240 min所致的p-Akt（473）表达增加（P<0.05）。因此,该研究认为槲皮素可通过抑制NF-κB p65（S276）和Akt（473）的激活而减少心脏成纤维细胞TNF-α,IL-6及IL-1β炎症因子的分泌。     

ε-葡萄素抑制bFGF诱导血管新生作用分析

目的： 葡萄素（viniferin）是一类寡聚茋类物质,存在于葡萄等植物中,本文探讨ε-葡萄素（ε-viniferin）对血管新生是否具有抑制作用。 方法： MTT比色法测定ECV304细胞密度5×10⁴/mL条件下ε-viniferin浓度分别为0,10,20,30,40,50 μmol·L^-1时24 h和48 h的增殖抑制率;体外模型以0.5,1,5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的含药血清组和空白血清组培养碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导的人脐静脉内皮细胞系ECV304,用细胞划痕法和重建基底膜法测定药物对细胞迁移作用和内皮细胞拟管腔形成的影响;体内模型,用含5,10 mol·L^-1 ε-葡萄素的基质胶,Matrigel plug 法测定药物对bFGF诱导体内新生血管的影响;通过酶联反应法（ELISA法）检测5,10,20 mol·L^-1药物处理24 h的黑色素瘤细胞系（B16F10）培养上清液中血管内皮生长因子（VEGF）和bFGF浓度。 结果： 20 μmol·L^-1以上的ε-葡萄素能有效抑制ECV304细胞的增殖,0.5~10 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制bFGF诱导的ECV304细胞迁移,在1~10 μmol·L^-1ε-葡萄素的作用下均可抑制bFGF诱导的ECV304细胞管腔形成,5~10 μmol·L^-1ε-葡萄素在体内Matrigel Plus模型也表现出抑制血管新生的活性。5~20 μmol·L^-1的ε-葡萄素能抑制黑色素瘤细胞B16F10细胞分泌bFGF和VEGF,其抑制能力强于紫檀茋。 结论： ε-葡萄素可以抑制血管的新生。     

甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒（Annexin V-FITC/PI）检测细胞凋亡情况;荧光探针法（DCFA-DA）检测细胞内活性氧（ROS）水平,荧光探针（JC-1）法检测细胞线粒体膜电位（MMP）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）的表达及内质网应激相关蛋白（CHOP）,转录激活因子4（ATF4）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）,磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）,真核翻译起始因子2α（eIF2α）,磷酸化真核翻译起始因子2α（p-eIF2α）表达。结果 与空白组比较,随着甘草查尔酮A浓度增大,从甘草查尔酮A 5 μmol·L^-1开始,细胞存活率明显降低（P<0.05）,其半数抑制浓度（IC₅₀）为19.05 μmol·L^-1;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）组细胞凋亡明显升高（P<0.05）,甘草查尔酮A 40 μmol·L^-1时细胞凋亡率达30.2%（P<0.05）;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax表达明显升高（P<0.05）,且呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）明显升高细胞内ROS水平（P<0.05）,降低线粒体MMP水平（P<0.05）,导致线粒体功能障碍,呈浓度依赖性;甘草查尔酮A（10,20,40 μmol·L^-1）诱导内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP,ATF4表达明显增多,磷酸化（p）-PERK,p-eIF2α表达明显升高（P<0.05）,呈浓度依赖性。结论 甘草查尔酮A可能通过增加细胞内ROS水平,降低MMP引起线粒体功能障碍和内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

京尼平苷对光老化HaCaT细胞的保护作用及机制

目的：研究京尼平苷对光老化HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,调整其密度为1×10⁶个/mL接种于6孔板、5×10⁴个/mL接种于96孔板,用总剂量64 mJ·cm^-2（照射强度0.61 mW·cm^-2×照射时间105 s）的紫外线B（UVB）照射细胞建立光老化模型,以5×10^-5,5×10^-6,5×10^-7mol·L^-1的京尼平苷处理光老化细胞24 h,分别检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量,RT-PCR法检测细胞中P38、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）mRNA的表达量,酶联免疫法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量。结果：UVB照射HaCaT细胞后,SOD活性、GSH-Px活性明显降低,MDA含量、p38 mRNA表达量、TNF-α和IL-6 mRNA及蛋白的表达量明显升高（P<0.01）;5×10^-5,5×10^-6mol·L^-1京尼平苷处理细胞后,SOD活性升高为（34.72±2.03）,（38.96±3.56） U·mg^-1;GSH-Px活性升高为（28.11±2.76）,（40.02±3.63）U·mg^-1;MDA含量下降为（4.82±0.42）,（4.60±0.41）nmol·mg^-1,p38 mRNA的相对含量下降为（0.97±0.09）,（0.94±0.09）;TNF-α mRNA的相对含量下降为0.57±0.05,0.53±0.05;IL-6 mRNA的相对含量下降为0.65±0.06,0.64±0.06;TNF-α蛋白的表达量降低为（34.05±2.43）,（25.55±1.84） ng·L^-1,IL-6蛋白的表达量降低为（28.51±1.95）,（19.32±1.55） ng·L^-1,与模型对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论：京尼平苷能抵抗UVB对HaCaT细胞的损伤,其机制可能与抑制氧化损伤,调控p38信号通路,调节TNF-α和IL-6的表达有关。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对病毒性心肌炎小鼠血清TNF-α,IL-6的影响

目的：探讨抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂（K-CoxB-JN）对病毒性心肌炎小鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的影响及其机制。方法：用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,随机分为5组：K-CoxB-JN复方新制剂低、中、高剂量组（0.2,0.4,0.8 g·kg^-1）,利巴韦林组（0.075 g·kg^-1）,模型组,并设正常组,鼠腹腔接种病毒2 h后开始灌胃,连续灌胃14 d。观察小鼠一般状态、记录死亡数,计算小鼠生存率;取血测定血清TNF-α,IL-6水平;取心脏,计算心脏指数,HE染色,计算病理积分。结果：与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α,IL-6水平、心脏指数、心脏病理积分均升高（P<0.05）,生存率降低（P<0.05）;与模型组比较,K-CoxB-JN各组小鼠心脏指数,TNF-α,IL-6水平、心脏病理积分均降低（P<0.05）,生存率升高（P<0.05）。结论：调节TNF-α,IL-6水平可能是K-CoxB-JN治疗病毒性心肌炎作用机制之一。     

桂枝茯苓丸抑制大鼠子宫内膜异位症血管生成的作用及机制

目的：探讨桂枝茯苓丸抑制大鼠子宫内膜异位症血管生成的作用及机制。方法：采用自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,分为模型对照组（阴性对照）、桂枝茯苓丸低、高剂量组（4.13,8.26 g·kg^-1）、孕三烯酮组（阳性对照,0.23 g·kg^-1）。另设假手术对照组。连续给药28 d后处死大鼠,免疫组化法检测异位内膜中的增殖细胞核抗原（PCNA）和血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）的表达,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测腹腔液中血管内皮生长因子（VEGF）的水平,RT-qPCR检测异位内膜中VEGF和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达。结果：桂枝茯苓丸显著抑制异位内膜中PCNA,CD31的表达,降低腹腔液中VEGF的水平（P<0.05）以及异位病灶中VEGF、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的mRNA表达水平（P<0.01）。结论：桂枝茯苓丸显著抑制大鼠子宫内膜异位症的血管生成作用,其作用机制与抑制VEGF和HIF-1α的表达有关。     

补肾活血汤对慢性心力衰竭患者免疫炎症反应的影响

目的: 观察补肾活血汤对慢性心力衰竭患者(CHF)临床疗效及对免疫炎症反应的影响。方法: 将60例患者按 随机数字表法分为两组,对照组30例用西医常规治疗,治疗组30例在对照组治疗基础上加服补肾活血汤,每日1剂,疗程14 d。观察两组临床症状积分、左室舒张末内径(LVED),左室射血分数(LVEF),血浆脑钠肽(BNP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6),长正五聚蛋白3(PTX-3)水平的变化。结果: 治疗组临床症状积分改善的总有效率(90%)优于对照组(80%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后 [BNP(1 058.72±575.62) ng·L^-1,IL-6(6.88±0.91) ng·L^-1,TNF-α(251.54±52.72) ng·L^-1,PTX-3(3.16±0.60) μg·L^-1]均较对照组[(1 542.26±732.18) ng·L^-1,(9.63±1.25) ng·L^-1,(283.24±48.58) ng·L^-1,(3.40±0.56) μg·L^-1]明显改善(P<0.05),两组患者LVED,LVEF均较治疗前好转,但差异无统计学意义。结论: 补肾活血汤可以显著改善CHF患者心功能,降低TNF-α,IL-6,BNP,PTX-3水平,抑制免疫炎症反应,改善预后。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

甘草黄酮亚组分及甘草黄酮C对TNF-α致肠上皮屏障损伤的保护作用研究

目的 从甘草黄酮中筛选活性亚组分及黄酮单体,考察其对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法 以硅胶柱色谱法制备甘草黄酮亚组分;体外培养肠上皮细胞IEC-6并以TNF-α诱导炎症反应,分别以甘草黄酮亚组分（20 μg·mL^–1）提前干预,CCK-8法检测正常细胞存活率,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测炎症细胞白细胞介素-6（IL-6）分泌水平,获得活性亚组分;高效液相色谱法（HPLC）确认活性亚组分的主要成分,进而以TNF-α诱导的Caco-2单层细胞肠道屏障损伤模型分别考察活性亚组分GCH15（5、10、20 μg·mL^–1）和甘草黄酮C（LicoC,5、10、20 μmol·mL^–1）对肠道屏障的保护作用,ELISA检测IL-6和IL-8分泌水平,电阻仪检测单层细胞跨上皮电阻（TEER）,以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐（FD-40）相对通过水平评估细胞旁通透性,免疫印迹法（Western blot）检测闭合小环蛋白-1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达。结果 制备得到甘草黄酮亚组分GCH1~GCH20;GCH2、GCH4、GCH8、GCH15和GCH19 20 μg·mL^–1均可显著抑制IL-6分泌（P<0.05）,且以GCH15的细胞毒性最小;通过HPLC确认了GCH15的主要成分是LicoC;以TNF-α刺激Caco-2细胞,可明显促进IL-6和IL-8分泌（P<0.01）,降低TEER值（P<0.01）,提高FD-40相对通过水平（P<0.01）,下调ZO-1和Occludin表达（P<0.01）,促进MLCK表达（P<0.01）。以GCH15和LicoC提前干预则可抑制IL-6和IL-8分泌（P<0.01）,增加Caco-2单层细胞TEER值（P<0.01）,降低FD-40相对通过水平（P<0.01）,并呈一定的剂量相关性,说明两者可以逆转TNF-α引起的炎症反应及细胞屏障功能紊乱。Western blot结果表明,GCH15 20 μg·mL^–1和LicoC 20 μmol·mL^–1均能促进ZO-1和Occludin表达（P<0.05,P<0.01）,抑制MLCK表达（P<0.01）。结论 GCH15和LicoC均可明显缓解TNF-α引起的Caco-2细胞炎症反应及屏障功能紊乱,两者对屏障功能的调节作用可能是通过调控MLCK通路,进而促进紧密连接蛋白表达实现的。     

氧化苦参碱对非小细胞肺癌细胞抗肿瘤作用及机制

目的 研究氧化苦参碱（OM）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验检测OM在不同浓度（0,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0,32.0和64.0 mmol·L^-1）对NSCLC A549和H1299细胞增殖的影响;通过transwell小室法和划痕愈合实验观察不同浓度的OM（8.0,16.0,32.0 mmol·L^-1）对A549和H1299细胞侵袭与迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度OM（8.0,16.0,32.0 mmol·L^-1）对Notch信号通路相关蛋白的表达水平的影响。结果 OM可有效抑制NSCLC A549和H1299的细胞活力（P<0.05,P<0.01）,且呈浓度依赖性;此外,OM可抑制A549和H1299细胞的迁移与侵袭（P<0.01）,也呈一定的浓度依赖性。高浓度（32.0 mmol·L^-1）OM可以明显抑制Notch信号通路中Notch 1细胞内结构域（NICD）,转录复合蛋白［肿瘤坏死因子-α转化酶（TACE）和无毛重组结合蛋白抑制子（RBPSUH）］及其下游蛋白Hes家族发状分裂相关增强子1（Hes1）的蛋白表达水平。结论 OM可抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且可抑制Notch信号通路相关分子的表达。     

逍遥散对雷公藤致大鼠肝损伤的预防作用及机制探讨

目的: 研究逍遥散对雷公藤水煎剂致大鼠急性肝损伤的预防作用及其作用机制。 方法: 60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甘利欣（0.06 g·kg^-1）对照组、逍遥散低、中、高剂量组（生药量3.38,6.75,13.50 g·kg^-1）。除正常组外,分别以相应剂量药物连续ig 4 d,再以雷公藤水煎剂（生药量3.75 g·kg^-1）ig 4 d造模。处死大鼠,计算肝指数,检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）的活力,做肝脏病理学检查,并测定肝匀浆上清白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。 结果: 与正常组比较,模型组大鼠的肝指数及血清ALT,AST的活力明显升高 （P<0.01）,肝组织病理改变明显（P<0.05）,肝匀浆上清IL-1β,TNF-α的含量明显升高（P<0.05）;与模型组比较,逍遥散各组和甘利欣组大鼠的肝指数、血清ALT和AST的活力、肝组织病理损伤程度及肝匀浆上清IL-1β,TNF-α的含量均明显降低（P < 0.05或P<0.01）。 结论: 雷公藤所致大鼠急性肝损伤与其引起炎症因子IL-1β,TNF-α释放增加进而形成炎性损伤有关,逍遥散可通过抑制IL-1β,TNF-α的释放而对雷公藤致大鼠急性肝损伤起到预防作用。