黄芪甲苷含量测定方法的优化及对不同产地、不同等级黄芪中黄芪甲苷含量分析

建立一种快速、准确的黄芪甲苷含量测定方法,通过测定87批不同产地及不同等级黄芪药材中黄芪甲苷含量,对不同产地黄芪甲苷含量限度采用ROC曲线分析,同时结合化学计量学对不同等级黄芪甲苷含量进行比较。采用HPLC-ELSD测定,使用Vensil MP C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(32∶68)为流动相,流速1 m L·min-1,柱温25℃,ELSD参数:气体流速2. 5 L·min-1,漂移管加热温度105℃,增益值4. 0。结果表明改进方法在样品前处理中不仅避免了耗材质量不稳定导致回收率不高问题,而且测定值高于药典方法,具有节省时间、重复性好等特点。ROC曲线分析表明山西仿野生芪特等、一等黄芪甲苷含量与甘肃移栽芪无明显差异,二等、三等、四等黄芪甲苷含量显著高于甘肃移栽芪。等级比较结果表明山西仿野生芪黄芪甲苷含量与等级呈显著负相关,而甘肃移栽芪无相关性。该研究为黄芪质量等级标准提供研究基础。     

4个主要黄芪产地黄芪质量比较

目的:比较4个主产地黄芪浸出物、总黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总皂苷及黄芪甲苷的含量差异,为种植、资源开发及合理使用提供参考依据。方法:应用浸出物测定法测定浸出物的含量;应用紫外可见分光光度法测定总黄酮、总皂苷的含量;应用高效液相色谱法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷的含量。结果:黑龙江、甘肃、内蒙古和山西黄芪的冷浸法测定水溶性浸出物的含量分别为18.52%、21.13%、24.46%和19.33%;冷浸法测定醇溶性浸出物含量分别为8.11%、9.83%、11.44%和10.26%;总黄酮的含量分别为0.356%、0.574%、0.693%和0.492%;毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.040%、0.111%、0.135%、0.021%;总皂苷的含量分别为0.171%、0.283%、0.342%、0.240%;黄芪甲苷的含量分别为0.042%、0.068%、0.079%、0.058%。结论:不同产地黄芪浸出物、总黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总皂苷、黄芪甲苷含量不同,黄芪水溶性浸出物含量内蒙古甘肃山西黑龙江;醇溶性浸出物的含量内蒙古山西甘肃黑龙江;总黄酮含量内蒙古甘肃山西黑龙江;毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量内蒙古甘肃黑龙江山西;总皂苷的含量内蒙古甘肃山西黑龙江;黄芪甲苷含量内蒙古甘肃山西黑龙江。4个产地黄芪质量有较大差异,应建立多成分的评价指标,更科学地评价黄芪质量。     

基于多指标含量测定的恒山黄芪特征成分研究

目的 采用高效液相色谱法分析恒山黄芪的化学特征。方法 建立同时测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪紫檀烷苷、黄芪异黄烷苷、黄芪异黄烷5个黄酮类化合物含量的高效液相色谱法,并结合《中华人民共和国药典》2020年版中黄芪甲苷的含量测定方法,对恒山黄芪与参照黄芪进行比较。结果 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪紫檀烷苷、黄芪异黄烷苷、黄芪异黄烷在恒山黄芪中的含量显著高于参照黄芪,而芒柄花苷、黄芪甲苷在2组黄芪中差异不明显。受试者工作特征（ROC）曲线分析表明,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪紫檀烷苷和黄芪异黄烷苷判别的可信度较高。结论 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪紫檀烷苷、黄芪异黄烷苷在恒山黄芪中含量较高,可作为其特征判别成分。     

甘肃不同产地及不同生长年限红芪和黄芪中4种异黄酮类成分的含量对比

目的:建立甘肃红芪和黄芪药材中4种异黄酮类成分含量测定的方法,比较甘肃不同产地一年生、二年生红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量。方法:以毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素为对照品,采用HPLC法,Agilent Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,在254 nm处检测。结果:毛蕊异黄酮苷在2.25~0.005 625μg(r=0.999 7),芒柄花苷在2.22~0.111μg(r=0.999 4),毛蕊异黄酮在0.112~0.001 12μg(r=0.999 9),芒柄花素在1.68~0.001 68μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系。红芪和黄芪的平均加样回收率均在95%~105%,RSD均3%(n=6)。结论:该研究建立的红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于甘肃地区红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定及其对比研究。从4种异黄酮类成分含量分析,一年生、二年生红芪质量相当,一年生黄芪优于二年生,且黄芪质量优于红芪。红芪最佳产区为武都,黄芪最佳产区为宕昌。甘肃地区红芪芒柄花素含量高于黄芪,黄芪毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷含量高于红芪。在开发和利用甘肃红芪和黄芪时,应根据二者异黄酮含量各自优势有所选择,二者不适合替代使用。     

不同商品等级黄芪质量评价研究

目的:明确黄芪商品等级药材的化学成分差异性。方法:采用高效液相色谱法测定30批不同商品等级黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量,采用硫酸苯酚法测定总多糖的含量,并运用相关分析和线性回归分析对药材等级和有效成分含量进行关联分析。结果:黄芪药材等级与生长方式和生长年限密切相关;相同等级的传统芪和栽培芪的有效成分含量存在明显差异:传统芪的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量明显高于栽培芪;传统芪黄芪甲苷含量与等级(直径)呈负相关;毛蕊异黄酮葡萄糖苷、总多糖含量与等级变化的规律性不强。结论:黄芪药材商品等级划分除应考虑外观性状外,还应综合考虑黄芪中活性成分的含量,从而科学制订更加全面合理的黄芪商品等级标准。     

甘肃红芪中黄芪甲苷存在的判定以及一年生、二年生红芪、黄芪皂苷和总黄酮含量对比

目的:判定甘肃红芪是否含有黄芪甲苷;测定甘肃不同产地二年生红芪和黄芪总黄酮总皂苷含量,对比分析一年生、二年生红芪和黄芪总黄酮总皂苷含量。方法:以黄芪甲苷为对照品,采用HPLC-MS联用法检测红芪和黄芪中黄芪甲苷的含量;以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照品,检测波长为260 nm,采用紫外分光光度法测定红芪和黄芪中总黄酮的含量;以黄芪甲苷为对照品,采用香草醛-高氯酸显色法,检测波长为540 nm,可见分光光度法测总皂苷的含量。结果:测定样品中,甘肃红芪中黄芪甲苷的质量分数为0.055 5μg·g-1,黄芪中黄芪甲苷的质量分数为37.9μg·g-1;二年生红芪总黄酮质量分数,陇西等地为0.449%,宕昌为0.370%,武都为0.394%,全省平均为0.402%;黄芪总黄酮质量分数,陇西等地为0.374%,宕昌为0.542%,武都为0.424%,全省平均为0.452%;二年生红芪总皂苷质量分数,陇西等地为3.68%,宕昌为3.89%,武都为4.24%,全省平均为3.95%,黄芪总皂苷质量分数,陇西等地为4.63%,宕昌为5.11%,武都为4.80%,全省平均为4.86%。结论:甘肃红芪中含有黄芪甲苷,红芪含有的黄芪甲苷仅为黄芪的1/682;甘肃不同产地一年生、二年生红芪总黄酮、总皂苷含量均低于黄芪。二年生红芪和黄芪中总黄酮、总皂苷含量均高于一年生。一年生、二年生红芪中总黄酮、总皂苷含量均为武都优于宕昌,一年生、二年生黄芪总黄酮、总皂苷含量均为宕昌优于武都。红芪为武都地区二年生质量最优,黄芪为宕昌地区二年生质量最优。黄芪甲苷、总皂苷、总黄酮含量差异明显,二者不适合替代使用。     

甘肃不同产地、不同月份红芪中4种异黄酮的含量特征研究

目的:研究甘肃红芪不同产地、不同月份中4种异黄酮成分的含量变化特征。方法:采集不同月份(7、8、9、10月)的红芪样品,采用HPLC测定样品中4种异黄酮成分的含量,并进行了作图、单因素方差及相关性分析。结果:不同月份3个产地红芪样品中4种异黄酮的量存在显著性差异(P0.01);3个产地的红芪样品中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷含量在7、8、9、10月份均为陇西样品宕昌样品武都样品,3个产地红芪样品中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷在10月份含量最低,9~10月呈下降趋势;芒柄花素含量9~10月呈上升趋势;武都、宕昌、陇西7、8、9、10月红芪样品的特征性成分为毛蕊异黄酮葡萄糖苷。结论:不同产地红芪中4种异黄酮的含量在不同的月份存在个性差异与相关共同特征。     

山西恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪的质量差异研究

目的比较生长于山西北部恒山及其周边地区的蒙古传统黄芪和移栽黄芪化学成分差异。方法采用~1H-NMR代谢组学技术结合HPLC-UV-ELSD联用技术分别对两种种植模式黄芪的初级代谢物和次级代谢物进行差异性比较。结果从核磁图谱中共指认出25个代谢物,其中甲醇水相中主要为氨基酸和有机酸等初级代谢物,氯仿相中主要为脂肪酸类物质;多元统计结果显示二者的初级代谢物差异不大,但8,2′-羟基-7,4′-甲氧基异黄烷只在传统黄芪中检测到。采用HPLC-UV-ELSD联用技术测定不同黄芪样本中6种黄酮和4种皂苷的量,结果显示传统黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和黄芪皂苷III量显著高于移栽黄芪,而移栽黄芪中黄芪皂苷I的量显著高于传统黄芪,传统黄芪总黄酮量显著高于移栽黄芪,总皂苷量无显著性差异。结论恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪差异性主要体现在次级代谢物上,说明不同种植方式对黄芪次级代谢物的积累影响较大,为恒山地区发展优质的传统黄芪资源奠定了基础。     

不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的定量分析

目的通过定量分析比较不同产地黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量,为黄芪药材的质量评价提供依据。方法采用HPLC法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。色谱条件:Diamonsil C18(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:260 nm;柱温:30℃;进样量:20μL。结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷的浓度在9.92μg·mL-1~248.00μg·mL-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r=0.9995);平均加样回收率为98.62%,RSD为1.89%。结论不同产地黄芪药材毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量存在明显差异,其中河北唐山产黄芪含量最高。利用HPLC法对指标性成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行定量分析,快捷准确,可广泛用于黄芪药材的质量评价。     

不同生长年限子洲黄芪休眠期的质量差异

目的：比较不同生长年限子洲黄芪休眠前期和休眠后期的有效成分含量,揭示子洲黄芪在休眠期各有效成分的变化规律,确定子洲黄芪的最适采收期。方法：采用随机取样法收集8批不同生长年限休眠前期及休眠后期的子洲黄芪,以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和水溶性浸出物质量分数为指标,结合聚类分析法分析其质量差异。结果：各指标含量测定结果显示,随生长年限的增加,各成分含量呈规律性动态变化。黄芪甲苷与毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量分数均在生长5年时达到最高值,分别为0.166%、0.079%;水溶性浸出物质量分数在生长7年时达到最高值,为21.290%。对不同生长年限休眠前期和休眠后期的各成分含量进行对比发现,休眠后期黄芪甲苷质量分数显著下降,且下降幅度逐年增大,生长7年时下降幅度最大,为54.09%;毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量分数增加,生长5年时增幅最大,为145.83%;水溶性浸出物质量分数生长7年时增幅最大,为18.40%。结论：子洲黄芪有效成分积累受生长年限及采收时间的影响,且变化趋势不一致,如以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为指标,宜在生长5年休眠后期采收;如以黄芪甲苷为指标,宜在生长5年休眠前期采收;若综合考虑黄芪甲苷及毛...     

基于指纹图谱和多指标定量的蜜炙黄芪饮片质量控制研究

目的 采用HPLC法建立蜜炙黄芪饮片指纹图谱,并测定异黄酮类成分和皂苷类成分含量,进行聚类分析与主成分分析(PCA-主成分分析),比较炙黄芪饮片中4种异黄酮成分(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素)和4种皂苷类成分(黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ)的差异.方法 采用HPLC法对15批甘肃不同产地...     

不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮类成分的比较及其聚类分析

目的比较不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮的含量并对其进行聚类分析,为该药材资源的综合开发利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法建立黄芪中4种异黄酮的含量测定方法并对不同产地黄芪根、茎、叶中异黄酮类成分进行含量测定;通过IBM SPSS 19.0和R语言Pheatmap包对不同产地黄芪进行聚类分析。结果不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮含量差异较大;基于SPSS和R语言的聚类分析均支持20批次不同产地样品被分为2类,其中甘肃和陕西样品聚为一类,山西、黑龙江和内蒙古黄芪聚为另一类。结论所建立黄芪4种异黄酮成分含量测定及聚类分析方法可为黄芪药材的真伪鉴别和质量评价提供依据,也可为黄芪各个部位的综合利用提供一定的参考。     

黄芪种植产地与生态环境及饮片规格的调查研究

目的:中药黄芪来源于蒙古黄芪及膜荚黄芪,由于黄芪野生资源的接近枯竭,目前商品黄芪以栽培品为主。方法:通过实地调查,了解黄芪的种植产地及生态环境。并且市场上黄芪饮片规格不统一,通过调查了解饮片规格,为饮片标准的制订和饮片质量的控制提供依据。结果:蒙古黄芪多为人工栽培,主要产地为山西恒山地区、甘肃陇南地区、内蒙古南部,栽培面积广,除山西黄芪多为山地直播外,其他均为平川地种植;膜荚黄芪则多为野生,主要分布于黑龙江省和内蒙古东北部,且资源近枯竭,其他地区如山东、河北等只有少量栽培。通过对黄芪饮片的市场调查,发现有5种不同规格的饮片,并且呈现一定的区域特征。结论:建议通过建立自然保护区保护黄芪野生资源,并统一黄芪饮片规格。     

基于传统煎药工艺的黄芪药材HPLC指纹图谱及化学计量学质量评价研究

目的基于传统煎药工艺建立不同产地黄芪的HPLC指纹图谱,用于黄芪药材质量的评价。方法采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)对15批不同产地的黄芪药材的HPLC指纹图谱进行相似度评价,并使用SPSS22.0软件进行聚类分析和主成分分析。结果选取了12个色谱峰作为指纹图谱共有峰,15批样品的相似度计算结果均大于0.990,说明各产地黄芪药材具有较好的一致性;通过聚类分析可将15批样品聚为4类;主成分分析采用3个主成分对黄芪药材进行综合评价,综合得分结果显示,甘肃民乐县所产批号为HQ-18001(S1)、HQ-18002(S2)和甘肃岷县所产批号为HQ-18007(S7)、HQ-18006(S6)的黄芪药材在所有样品中的综合得分位于前4名。结论建立基于传统煎药工艺的黄芪药材质量评价方法操作简单,重复性好,结果可靠,可以用于黄芪药材的质量控制和评价。     

Rapid quantitative analysis of 12 chemical constituents in wild-simulated and cultivated Astragali Radix based on UHPLC-MS

ObjectiveAstragali Radix (AR) is one of the most widely used traditional Chinese medicines (TCMs) for tonic, which can be divided into wild-simulated and cultivated AR according to its cultivation method. However, whether cultivated AR can replace wild-simulated AR has always been a concern.MethodsIn this study, a rapid, highly sensitive and specific analytical method using ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC-MS) was developed to quantitatively measure 12 chemical constituents of AR in the different cultivation methods.ResultsAR samples were analyzed with a good linear regression relationship (R², 0.9983–0.9995), precisions (relative standard deviation (RSD), 1.31%?2.36%), repeatability (RSD, 2.65%?4.92%), stability (RSD, 1.50%?4.05%), and recovery (95.13%?106.52%). Through the determination of AR samples, we found the components of flavonoids in wild-simulated AR were higher than cultivated AR, the saponins in cultivated AR were higher, the ratio of saponins/flavonoids in cultivated AR was higher than wild-simulated AR.ConclusionBased on this research, it could provide guidance for the quality control of AR.     

基于灰色关联分析方法评价甘肃产红芪质量

目的:采用灰色关联分析方法评价红芪药材的质量。方法:收集甘肃红芪药材主产区武都区、宕昌县、岷县、武山县等地的红芪样品31批,采用HPLC法测定红芪样品中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量,按2010年版《中国药典》方法测定红芪中浸出物含量,采用紫外分光光度法测定红芪多糖含量;应用灰色关联分析方法,以定义的相对关联度为测度,构建红芪质量评价模型。结果:31批红芪样品的质量评价结果与药材红芪的道地产区相符合,武都区为红芪的主产区,其中"米仓红芪"的质量最佳,武都区个别红芪样品质量稍差,武山县、岷县、陇西县、宕昌县红芪样品质量较次;其中宕昌县兴化、庞家、车拉、官亭镇的样品质量排名靠后,药材头部均存在不同程度的腐朽斑痕。结论:灰色关联分析方法及本文所建立的红芪质量评价模型可用于红芪药材的质量评价。     

中药黄芪的名实考证

目的:通过对中药黄芪的字义进行考证,以阐明黄芪名实。方法:查阅汉至明清时期的辞书及历代中草药书籍,对黄芪进行字义与名实溯源考证。结果:我国历代本草皆以黄耆为现在中药黄芪的名称,我国现代书籍皆以黄芪字形为名。芪在《说文解字》,《玉篇》,《集韵》,《广韵》,《类篇》,《字汇》中释义为芪母,芪母即指中药知母,而不是指中药黄芪。芪释义为现在中药黄芪始自明代辞书《正字通》,《康熙字典》和《汉语大词典》对芪列有中药黄芪及知母二种释义。明代李中立在其《本草原始》一书中特意指出当时黄耆的耆字书写为芪字是错误的,可见中药黄芪字形名称使用始于明代。耆在历代辞书中释义为长,耆的字义表述了现在中药黄芪的植物形态特征,因此以黄耆为其名称符合我国中草药命名习惯。结论:将古籍文献及历代中草药书籍中包含的本草学内容进行比对,阐明其词义,梳理药物的名实关系,找出中药黄芪名称变化原因,为人们在研究中草药时查阅古籍文献提供参考价值。     

当归药材安全性的灰色关联度评价

目的:建立当归药材安全性的灰色关联度模型并进行安全性评价。方法:测定不同产地当归药材中总灰分、酸不溶性灰分以及铅、镉、砷、汞、铜5种有害重金属元素含量,以定义的相对关联度为测度,采用DPS V 7.0.5统计软件构建当归药材安全性的灰色关联度评价模型。结果:各评价单元序列的相对关联度在0.380 5~0.600 0,相对关联度<0.500 0的样本共有25批,这些样本的安全性较好,主要是甘肃岷县、渭源县、漳县以及云南所产的当归样本;相对关联度排名在前25名的样本中,甘肃岷县产有9批,甘肃渭源县产有3批,甘肃漳县产有3批,云南产有4批,分别占各自产地样本总数的90.0%,50.0%,60.0%,100%;通过该模型得到的结论与当归药材的道地性内涵相一致。结论:该方法及模型可推广应用于当归药材的安全性评价。     

基于微量元素的野生与栽培红芪鉴别

目的:研究野生与栽培红芪中微量元素的差异,探讨微量元素鉴别野生与栽培红芪的可行性。方法:采用原子吸收光谱法测定微量元素含量,并进行单因素方差分析、相关性、最优尺度度量分析、聚类分析及判别分析。结果:野生与栽培红芪中Cu含量无显著性差异,Fe,Ca,K,Zn,Ni,Na,Mg,Mn,Cr,Li,Co含量均具显著性差异性;Mg,K,Fe,Ca,Cu,Ni含量野生品高于栽培品,Zn,Na,Mn,Cr,Li,Co含量栽培品高于野生品;红芪样品生长类型与Fe,Ca,K,Ni,Mg元素含量呈极显著的正相关,与Zn元素含量呈显著的负相关,与Na,Mn,Cr,Li,Co元素含量呈极显著的负相关;28批红芪样品分为野生品与栽培品两类;Fe,Li,Co与野生、栽培生长类型存在Fisher线性关系。结论:红芪野生与栽培生长类型与微量元素含量存在密切关系,微量元素鉴别野生与栽培红芪有一定可行性。     

黄芪与其混伪品的ITS序列分子鉴定研究

目的:研究黄芪与其混伪品之间的DNA分子鉴别方法.方法:采集不同产地的黄芪药材13份,替代品红芪2份,混伪品紫花苜蓿3份和蜀葵1份,所有样品进行总DNA的提取,PCR扩增,并对扩增产物进行测序得到相应的序列,同时从GenBank下载蓝花棘豆、锦鸡儿2种伪品的ITS序列.用MEGA 4计算其种间的K-2-P距离,最后利用ITS序列构建其系统发育树.结果:测得了19份样品的ITS序列全长,分别为蒙古黄芪646 ～ 650 bp,膜荚黄芪为646～650 bp;红芪为664 bp;紫花苜蓿为659 bp;蜀葵为728 bp,在GenBank中注册,获得登记号.通过以ITS序列重建系统进化树进行的聚类分析可以将黄芪与其混伪品有效的区分开.结论:ITS序列能够成功鉴定黄芪及其易混伪品,可以作为黄芪与其混伪品的分子鉴定方法.