Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白（Yes?associated protein, YAP）通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Real?time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β?catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平减少,c?Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加,c?Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggre?can基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。     

益气化瘀方减轻HIF-1α条件性基因敲除小鼠膝关节软骨退变的研究

目的:观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)条件性基因敲除(HIF-1αcKO)小鼠膝关节软骨退变情况,以及中药复方益气化瘀方对减缓HIF-1αcKO小鼠椎间盘软骨退变的作用。方法:①将杂交繁殖获得同窝的HIF-1α+/+小鼠和HIF-1α-/-小鼠,分为HIF-1α+/+小鼠4月龄组、HIF-1α-/-小鼠4月龄组,HIF-1α+/+小鼠6月龄组、HIF-1α-/-小鼠6月龄组,每组3只。在4、6月龄依次处死相应的小鼠,取膝关节软骨,分别进行Mankin评分、藏红固绿、HE及免疫组化相关指标染色及分析,研究软骨组织的改变情况。②将2月龄HIF-1α-/-小鼠随机分为生理盐水组和益气化瘀方组,以生理盐水组小鼠作为正常对照,每组6只,共12只。灌胃给药2个月后,取各组小鼠的膝关节,分别进行Mankin评分、HE染色和藏红固绿染色,ColⅡ、ColX、VEGF、MMP-13和Sox9免疫组化染色及分析。结果:①HIF-1α-/-小鼠4月龄组膝关节软骨组织出现破损和骨化,细胞分布不均匀,软骨细胞减少。HIF-1α-/-小鼠6月龄组膝关节软骨损伤更加严重。HIF-1α-/-小鼠4月龄组椎间盘软骨中Ⅱ型胶原(ColⅡ)和Sox9表达降低,X型胶原(ColX)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、VEGF蛋白表达增加。HIF-1α-/-小鼠6月龄组ColⅡ蛋白与Sox9表达进一步降低,ColX、MMP13、VEGF蛋白表达进一步上升。②与生理盐水组比较,益气化瘀方干预后膝关节软骨部位的骨化和缺损减轻,软骨细胞分布较均匀,细胞总数增加。免疫组化染色显示,益气化瘀方组ColⅡ和Sox9蛋白的表达升高,ColX、VEGF、MMP-13蛋白表达减少。结论:HIF-1α基因敲除小鼠出现了膝关节软骨退变,并且这种退变随着小鼠增龄而加重;益气化瘀方可以减轻HIF-1α基因敲除小鼠的膝关节软骨退变。     

Indian Hedgehog信号通路在软骨细胞成熟及转分化过程中的调控作用

目的 探究Indian Hedgehog（IHH）信号通路对软骨内成骨过程中软骨细胞成熟以及转分化的影响。方法 取10日龄野生型小鼠的胫骨组织,采用原位杂交和免疫组织化学染色检测生长板区域IHH信号通路相关分子Ihh、Ptch1和Gli1的表达水平。构建肥大软骨细胞特异性Ihh基因敲除小鼠（Col10a1^Cre/+; Ihh^null/C）,并采用影像学检查和阿利新蓝染色评估该小鼠的骨骼发育状况。构建肥大软骨细胞IHH信号通路持续激活小鼠（Col10a1^Cre/+; R26Smo^M2/M2和 Col10a1^Cre/+; Ptch1^LacZ/C）,采用HE染色、原位杂交和TUNEL染色分别对受精15.5天胎鼠胫骨组织形态结构、Ihh（肥大软骨细胞分子标志物）和Col1a1（成骨细胞分子标志物）以及肥大软骨细胞凋亡水平进行检测;另外应用HE染色对10日龄小鼠的胫骨组织进行组织学分析。结果 肥大软骨细胞合成分泌IHH,但不表达Ptch1和Gli1。抑制肥大软骨细胞合成IHH蛋白会导致出生后小鼠出现侏儒症;X线检查结果显示小鼠出现严重的骨骼发育不良,包括胸廓狭小、球形头骨以及椎骨发育异常等表现。持续启动IHH信号通路时,胚胎早期软骨细胞成熟分化过程虽未见异常,但是出生后小鼠的骨小梁、骨内膜以及皮质骨等结构均出现一定的异常表现。结论 IHH信号通路虽然不参与肥大软骨细胞的终末分化过程,但在软骨细胞转分化的过程中起到了重要的调控作用。     

低氧环境对小鼠未成熟关节透明软骨细胞培养的影响

目的研究低氧和低氧模拟化合物氯化钴对小鼠未成熟关节透明软骨细胞氧感应基因和细胞表型的影响。方法经酶消化分离出小鼠未成熟关节透明软骨细胞，分别在21％氧、2％氧和150μmol/L氯化钴条件下培养一定时间。通过倒置显微镜、透射电镜和扫描电镜观察细胞形态学变化。应用定量PCR和Western Blot检测葡萄糖转运体-1（GLUT-1）、葡萄糖转运体-3（GLUT-3）、磷酸果糖激酶-1（PGK-1）和低氧诱导因子-1α（HIF—1α）的表达。应用定量PCR观察软骨细胞表型改变。应用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测低氧及氯化钴对软骨细胞活性的影响。用葡萄糖检测试剂盒测葡萄糖摄取量。结果不同培养条件下软骨细胞形态无明显差异。2％氧和氯化钴可增加GLUT-1、GLUT-3及PGK-1mRNA表达。2％氧和氯化钴可促进GLUT-1、GLUT-3和HIF—1α蛋白表达。低氧和氯化钴促进细胞活性，增加葡萄糖摄取并促进细胞外基质合成。结论软骨细胞能通过调节氧感应基因适应低氧环境，HIF—1α可能起关键作用。低氧能在一定程度上增加软骨细胞活性和细胞外基质合成。模拟体内氧环境培养细胞能更好地了解软骨细胞特性。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的实验研究

目的 研究Yes相关蛋白（YAP）通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9表达的机制。 方法 用siRNA分别沉默YAP基因和LATS1基因来调控YAP的活性,通过Real-time PCR 检测软骨特异性基因和Wnt/β-catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β-catenin的蛋白水平以及SOX9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测SOX9的表达和GSK3β的磷酸化水平。 结果 沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平减少,c-Myc和Nanog基因表达减少,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默LATS1基因后,磷酸化GSK3β和活化β-catenin的蛋白水平增加,c-Myc和Nanog基因表达增加,SOX9、COL2和Aggrecan基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的SOX9表达上调。 结论 YAP通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞SOX9的表达。     

siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对胰腺癌细胞TLR4表达的影响

目的 观察体外乏氧培养条件下胰腺癌细胞系Panc-1中HIF-1α和TLR4的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对胰腺癌细胞TLR4的调控作用.方法 低氧箱培养和CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫荧光法和流式细胞法分别检测缺氧状态下HIF-1α和TLR4在mRNA和蛋白水平的表达.采用化学合成小干扰RNA( siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)用siRNA转染Panc-1细胞.观察转染后HIF-1α沉默效果.结果 低氧条件下,Panc-1细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而TLR4 mRNA和蛋白的表达均显著升高.siRNA转染Panc-1后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时TLR4基因的表达上调也受到明显抑制.结论 缺氧促使胰腺癌Panc-1细胞TLR4在蛋白水平表达升高,TLR4信号通路可能和HIF-1α信号通路存在相互联系,并且共同促进了胰腺癌的恶性进展.     

缺氧诱导因子1α介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导肾间质纤维化中的作用

目的 探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）介导的信号通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导肾间质纤维化（RIF）中的作用。 方法 体外培养肾小管上皮细胞,以不同浓度（10-9~10-6 mol/L）的AngⅡ分别处理24 h、48 h时,用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测肾小管上皮细胞中HIF-1α、脯氨酸羟化酶2（PHD2）及基质金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）mRNA和蛋白的表达变化情况。 结果 随AngⅡ刺激浓度的增加,HIF-1α mRNA的表达水平也增加,呈浓度依赖性。当AngⅡ浓度在10-7 mol/L,并且干预时间为24 h时,HIF-1α mRNA的表达水平增加了166%。实时荧光定量PCR和Western印迹分析显示,相对于空白对照组,在AngⅡ干预的肾小管上皮细胞中HIF-1α、TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平均升高 （P < 0.05）,而PHD2的mRNA和蛋白表达水平均下降（P < 0.05）。 结论 AngⅡ可能通过下调PHD2的表达而减少肾小管上皮细胞中HIF-1α的降解,从而上调HIF-1α及TIMP-1的表达,参与RIF。     

槲皮素调控关节炎软骨细胞胆固醇代谢的机制研究

探讨槲皮素对关节炎软骨细胞胆固醇代谢的影响及作用机制。方法 体外分离培养小鼠软骨细胞,分为对照组、模型组、低浓度组、高浓度组。CCK-8检测槲皮素对软骨细胞增殖的影响;胆固醇检测试剂盒检测细胞内总胆固醇（TC）水平;qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Col2a1、Il-6的表达水平;Western blot检测软骨细胞中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3和MMP13的蛋白表达水平。结果 ①CCK-8结果显示浓度在10 μmol/L以下的槲皮素对软骨细胞没有毒性,而高浓度（25、50、100 μmol/L）的槲皮素会抑制软骨细胞增殖。②细胞内总胆固醇水平测定结果显示,使用槲皮素处理后的关节炎软骨细胞内总胆固醇水平较模型组低（P <0.05）。③qRT-PCR结果显示,槲皮素组中软骨细胞的Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Il-6的表达水平较模型组降低,Col2a1的表达水平较模型组升高（P <0.05）。④Western blot结果显示药物干预组中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3、 MMP13的蛋白表达水平均比模型组降低（P <0.05）。结论 槲皮素可以通过CH25H/CYP7B1/RORα 信号通路调控关节炎软骨细胞中的胆固醇代谢,减轻关节炎软骨细胞中的炎症和细胞外基质降解。     

肝动脉断流促进癌旁正常肝细胞上皮-间质转化

目的 观察肝动脉断流对癌旁正常肝细胞生物学特性的影响.方法 肝动脉结扎(HAL)阻断裸鼠肝脏原位移植瘤(高转移性MHCC97H肝癌细胞)血供(nHAL=10,n假手术=10).免疫组织化学(SP)法分别检测移植瘤内或癌旁缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Pimonidazole及上皮-间质转化(EMT)标记分子如E-cadherin和N-cadherin分子表达;体外用CoCl2模拟缺氧环境,免疫荧光和Western blot检测缺氧处理后L-02肝细胞内上述分子的表达变化.结果 HAL增加肝癌组织和癌旁肝组织内HIF-1α表达和Pimonidazole阳性细胞数(HAL组:9±3比假手术组:4±2,P＜0.05),减少癌旁肝细胞内E-cadherin水平,增加其N-cadherin蛋白表达.100 μmol/L CoCl2有效模拟体外缺氧环境,增加L-02肝细胞内HIF-1α表达,上调N-cadherin同时降低E-cadherin表达.结论 HAL 增加肝癌及癌旁组织缺氧,诱导癌旁正常肝细胞发生EMT.     

XBP1在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧环境下抗凋亡作用实验研究

目的探讨在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧情况下,X盒结合蛋白1(XBP1)在骨肉瘤细胞中表达量的变化、其对细胞凋亡的影响及与低氧诱导因子(HIF)-1α信号转导通路的关系。方法通过氯化钴诱导骨肉瘤MNNG、MG-63细胞达到模拟缺氧状态,通过实时聚合酶链式反应(PCR)检测不同时间、不同氯化钴浓度下HIF-1α和XBP1的表达情况;采用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞凋亡率;采用siRNA干扰技术,下调XBP1。实验将骨肉瘤细胞分为干扰组(经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)和空白对照组(未经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)。结果 XBP1表达具有氯化钴浓度和时间依赖性:一定范围内,随着氯化钴浓度增高和时间延长,XBP1表达升高;敲除XBP1后,干扰组骨肉瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05);PCR检测HIF-1α及下游靶基因mRNA表达无明显变化(P0.05)。结论 XBP1在氯化钴诱导缺氧的骨肉瘤细胞中表达明显增高,其对骨肉瘤细胞在缺氧环境下抗凋亡有明显作用,其抗凋亡作用与HIF-1α信号转导通路无直接关联,具体机制有待进一步研究。     

初级纤毛在调控软骨细胞自噬中的作用研究

目的 探究初级纤毛和自噬在软骨细胞中的表达关系,以及调控初级纤毛表达对软骨细胞自噬的影响。方法 首先通过免疫荧光染色检测软骨细胞中自噬小体和初级纤毛的表达水平及二者在软骨细胞分裂周期中的定位表达关系;通过使用无血清培养基诱导初级纤毛表达,水合氯醛破坏纤毛结构后,统计分析初级纤毛发生率、长度和自噬的表达,Western blot法检测初级纤毛和自噬相关蛋白IFT88、Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达情况。结果 软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的共表达,初级纤毛的表达率为（62.16±11.74）%,长度为（2.342±0.392） μm,单个细胞内自噬的相对表达量为26.38±5.31;在软骨细胞分裂周期中,自噬小体的数量、大小和分布会随着初级纤毛的解聚和重构发生变化;无血清培养基可诱导初级纤毛表达率上调,促进纤毛延长,同时会上调软骨细胞自噬水平及IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ的表达,而水合氯醛破坏纤毛结构后,初级纤毛表达率和长度下调,细胞自噬表达下调,同时抑制IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结论 在软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的定位表达关联性,调控初级纤毛的表达会影响软骨细胞的自噬水平。     

软骨细胞体外培养负性相关因素研究进展

软骨细胞体外培养受到众多复杂因素的影响.白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),可通过核因子-κB等信号途径干扰软骨细胞的正常代谢,两者具有协同作用;IL-6、IL-17、IL-18经相应途径上调炎症和软骨破坏相关基因,基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡失调是引起软骨退变的重要原因;含钙结晶体能通过两个独立的途径引起关节组织退变;过度的应力刺激、低氧、高渗溶液可不同程度地影响软骨细胞生长;各种因素引起的内质网过度紧张可导致软骨细胞调亡,软骨外植和切碎过程能引起IL-1表达升高.     

小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死

目的 探讨沉默缺氧诱导因子1α （HIF-1α）对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、凋亡和坏死的影响。 方法 利用氯化钴模拟缺氧状态,并应用小分子RNA干扰（siRNA）技术沉默HIF-1α基因表达。将细胞分成5组,分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组。用MTT试验检测细胞的生长抑制率;用TUNEL法、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（aspase）-3蛋白定量法检测细胞的凋亡率;检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力来测定细胞的坏死情况;用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF-1α、HIF-2α、葡萄糖转运蛋白1（Glut-1）、血管内皮生长因子（VEGF） mRNA和蛋白表达水平。 结果 （1）siRNA的细胞转染效率为95%～100%。在常氧条件下,终浓度100 nmol/L 的HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率为70%;在缺氧条件下,HIF-1α siRNA沉默HIF-1α基因的效率达到97%。（2）HIF-1α siRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组（P < 0.05）;细胞凋亡率在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）;HIF-1α siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对照组（P < 0.05）。（3）HIF-1α siRNA组细胞的HIF-1α、Glut-1、VEGF mRNA和蛋白表达量显著低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组（P < 0.05）;而HIF-2α mRNA和蛋白表达在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF-1α siRNA组4组间的差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut-1和VEGF表达,加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。     

COX-2与HIF-1α在肝癌中的表达与相关性

目的研究肝癌中环氧合酶-2(COX-2)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的相关性,探讨选择性COX-2抑制剂抑癌作用的可能机理。方法通过免疫组化染色检测53例肝癌标本中COX-2和HIF-1α的表达;利用不同浓度的选择性COX-2抑制剂美洛昔康对在正常和氯化钴模拟缺氧条件下培养的肝癌SMMC-7721细胞进行处理,Western blot法分别检测各组HIF-1α的表达情况。结果53例标本中COX-2表达强阳性率为41.5%(22/53),表达弱阳性率为20.8%(11/53),表达阴性率为37.7%(20/53);HIF-1α表达强阳性率为34.0%(18/53),表达弱阳性率为34.0%(18/53),表达阴性率为32.1%(17/53)。COX-2和HIF-1α的表达呈正相关(r=0.44,P<0.01)。常氧条件下HIF-1α表达相对值为0.185±0.057,经美洛昔康处理后HIF-1α不表达。缺氧刺激下HIF-1α表达相对值升高至1.011±0.131,而加入美洛昔康后明显降低(P<0.05),且随着美洛昔康浓度的增加,降低越明显(P<0.05)。结论美洛昔康不仅能够抑制常氧条件下HIF-1α的表达,而且呈浓度依赖性地抑制缺氧条件下HIF-1α表达的上调,选择性COX-2抑制剂的抑癌作用机理可能部分是由HIF-1α介导的。     

微环境诱导肝细胞癌多药耐药的形成及机制

目的探讨微环境在肝癌多药耐药（MDR）表型形成中的作用，并初探其作用机制，为逆转肝癌耐药提供有效的新的分子靶点。方法模拟肝癌体内生长的局部微环境，使HepG2细胞分别在缺氧、低糖的微环境下生长或稳定整合HBX基因。应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术和Westernblot技术分别检测这些局部微环境因素作用下的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、肺耐药相关蛋白基因（LRP）、多药耐药相关蛋白基因（MRP1）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的mRNA和蛋白水平的表达。同时运用免疫细胞化学技术检测肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白的表达。以及检测转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞中上述相关多药耐药基因的表达。结果在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合了HBX基因的HepG2细胞均不同程度地高表达多药耐药相关基因和HIF-1α；在肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白高表达；稳定转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞显著高表达多药耐药相关基因。结论肝癌生长的微环境可通过核转录因子HIF-1α调控多药耐药相关基因的表达。从而诱导肝癌多药耐药表型的形成；HIF-1α有望成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

CoCl2模拟缺氧环境下肝癌细胞生物钟基因表达的变化

目的：观察氯化钴（CoCl2）模拟缺氧环境下肝癌细胞生物钟基因表达的变化。 方法：以不同浓度（0,50,100,200 μmol/L）的CoCl2处理肝癌细胞系Huh7细胞24 h后,用Western blot检测细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的蛋白表达,real-time PCR检测细胞中生物钟基因CLOCK、BMAL1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、CKIε的mRNA表达。 结果：Western blot结果显示,未处理Huh7细胞（0 μmol/L CoCl2）无HIF-1α表达,而各浓度的CoCl2处理后,Huh7细胞出现明显的HIF-1α的蛋白表达,且表达水平随CoCl2浓度增加而升高。real-time PCR结果显示,CoCl2处理后的Huh7细胞中Bmal1、Per1、Cry2的mRNA水平明显上调,而CLOCK、Cry1、Per2、Per3、CKIε的mRNA水平明显下调,且均呈CoCl2浓度依赖性（均P<0.05）。 结论：缺氧微环境可能是引起肝癌细胞生物钟基因表达异常的原因之一。

     

膝眼穴针灸对大鼠膝关节软骨细胞表型以及PGC-1α信号通路的影响

目的研究膝眼穴针灸疗法对膝关节软骨细胞表型改变及其参与线粒体生成氧自由基(ROS)的过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)信号通路变化的影响。方法通过免疫组化技术检测膝眼穴针灸后大鼠膝关节软骨细胞表型的主要特征分子指标(col 1、col 2、aggrecan)以及PGC-1α、线粒体转录因子A(TFAM)、解耦联蛋白2(UCP 2)和NADPH氧化酶1/4(NOX 1/4)因子的表达变化。进一步检测向大鼠膝关节腔内注射ZN005L(PGC-1α激活剂)激活PGC-1α表达后大鼠软骨细胞表型特征分子指标的表达变化,以及软骨细胞内ROS生成量的改变。结果对大鼠进行膝眼穴针灸后,PGC-1α表达增加;UCP 2以及软骨细胞表型主要指标aggrecan表达下降。激活PGC-1α表达后,软骨细胞内ROS的生成量降低,并且软骨细胞表型丢失现象被抑制。结论膝眼穴针灸疗法不能改善大鼠膝关节软骨细胞的功能,相反会促进软骨细胞表型特征分子的丢失,并损害软骨细胞功能。     

缺氧及沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因表达的影响

目的 观察缺氧及应用小干扰RNA (siRNA)沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对胰腺癌细胞株BxPC-3中RUNX3基因表达的影响.方法 构建人RUNX3基因真核表达载体质粒pEGFP-RUNX3,CoC12化学模拟肿瘤缺氧环境,检测缺氧以及siRNA沉默HIF-1α对BxPC-3细胞中RUNX3基因在mRNA和蛋白水平的影响.结果 缺氧能使BxPC-3细胞中RUNX3基因的表达较常氧时显著升高[表达为(9.13±1.55),P＜0.05],siRNA转染BxPC-3细胞后能显著下调HIF-1α蛋白表达(抑制率90％),并导致RUNX3基因的表达也受到明显抑制.结论 缺氧促使BxPC-3细胞中HIF-1α在蛋白水平表达升高,缺氧时HIF-1α能上调RUNX3基因的表达水平.     

以ITS为主要成分的无血清培养基对软骨细胞增殖和表型的影响

目的观察以ITS为主要成分的无血清培养基对软骨细胞增殖和表型的影响。方法培养猪耳软骨细胞,分为无血清组和含血清组,无血清组应用包含胰岛素铁硒传递蛋白（ITS）、地塞米松及维生素C为主要成分的无血清培养基：含血清组应用包含10％血清的常规培养基。观察平面和三维培养状态下无血清培养基对软骨细胞增殖、基质分泌和软骨表型维持的作用。结果平面培养条件下．无血清组的细胞增殖率出现下调．细胞表型不能维持。在三维培养情况下无血清组可以保持软骨细胞存活和软骨细胞的表型,Ⅱ型胶原和蛋白多糖组织学染色结果与含血清组无明显差异,软骨特异基因ColⅡ、Aggrecan的表达与含血清组无明显差异,并能够形成较好的软骨样组织。结论以ITS、地塞米松及维生素C为主要成分的无血清培养基．在三维培养条件下能基本保持软骨细胞的存活和表型．可用于软骨细胞的体外三维培养．