热疗联合顺铂对喉癌Hep-2细胞的影响研究*

目的 探讨热疗联合顺铂对喉癌Hep-2细胞的影响，了解热疗与顺铂的治疗方法是否有交互作用。方法 将传代的Hep-2细胞分为对照组、热疗组、顺铂组及热疗联合顺铂组。对照组置于37℃培养箱，热疗组 置于43℃培养箱，顺铂组置于37℃培养箱并加入顺铂，热疗联合顺铂组置于43℃培养箱并加入顺铂。采用MTT法、Wound-healing划痕实验和Transwell侵袭实验检测热疗联合顺铂对Hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭力影响。结果 4组细胞在波长490?nm处光密度（OD）值分别为（1.24±0.13）、（0.99±0.11）、（0.75±0.07）及（0.31±0.07），析因分析显示，不同温度热疗在波长490?nm处的OD值有差异（P?<0.05），不同浓度顺铂在波长490?nm处的OD值有差异（P?<0.05），热疗与顺铂对在波长490?nm处的OD值存在交互作用（P?<0.05）。4组细胞未愈合区百分比分别为（31.83±1.62）%、（40.47±1.52）%、（53.13±2.61）%及（79.83±0.95）%，析因分析显示，不同温度热疗对未愈合区百分比有差异（P?<0.05），不同浓度顺铂未愈合区百分比有差异（P?<0.05），热疗与顺铂对未愈合区百分比的影响存在交互作用（P?<0.05）。4组细胞穿过Transwell小室膜的细胞数目分别为（27.8±1.64）、（21.8±1.48）、（11.2±1.48）及（1.8±0.84）个，析因分析显示，不同温度热疗的穿膜细胞数有差异（P?<0.05），不同浓度顺铂的穿膜细胞数有差异（P?<0.05），热疗与顺铂对穿膜细胞数的影响存在交互作用（P?<0.05）。结论 热疗能够增强喉癌Hep-2细胞对顺铂的敏感性，热疗与顺铂联合有协同抗肿瘤作用。     

黄酒多酚对同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

目的 验证黄酒多酚（YWPC）是否具有抑制同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的作用以及其产生作用的信号通路。方法 采用组织贴块法培育SD大鼠胸主动脉VSMCs,取第4～7代细胞用于实验。细胞分为5组,分别为对照组,Hcy组（500 μmol/L Hcy）,YWPC 1 mg/L组（500 μmol/L Hcy+1 mg/L YWPC）,YWPC 10 mg/L组（500 μmol/L Hcy+10 mg/L YWPC）,YWPC 100 mg/L组（500 μmol/L Hcy+100 mg/L YWPC）。采用MTT法检测VSMCs增殖情况;细胞划痕实验和Transwell法检测VSMCs迁移和侵袭情况;Western blotting法检测p-AKT/AKT表达情况。为验证YWPC是否经Pi3K/AKT通路发挥抑制VSMCs的增殖和迁移,分别加入LY-294002和胰岛素生长因子1（IGF-1）用来抑制和激活Pi3K/AKT通路,细胞被分为Hcy组,YWPC组,LY-294002＋Hcy组,LY-294002＋YWPC组;Hcy组,YWPC组,IGF-1＋Hcy组,IGF-1＋YWPC组,再分别采用上述方法检测VSMCs增殖、迁移和侵袭情况。结果 培养大鼠胸主动脉VSMCs,2周左右细胞融合可以传代,经SM-actin细胞免疫荧光鉴定及DAPI核染,确定细胞纯度在99%以上。24、48 h时,5组OD值比较,差异有统计学意义（F=52.575,P=0.016;F=83.756,P=0.014）;其中Hcy组OD值高于对照组和YWPC组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。24、48、72、96 h时,5组VSMCs迁移面积比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中Hcy组VSMCs迁移面积多于对照组（P＜0.05）;YWPC组VSMCs迁移面积低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。48 h时,5组迁移细胞数比较,差异有统计学意义（F=79.354,P=0.001）;其中Hcy组穿透Transwell膜细胞数高于对照组（P＜0.05）;YWPC组穿透Transwell膜细胞数低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。5组p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=56.723,P=0.002）;其中Hcy组p-AKT/AKT高于对照组（P＜0.05）;YWPC组p-AKT/AKT低于Hcy组,且与YWPC呈剂量依赖性（P＜0.05）。加入LY-294002:24 h时,各组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异有统计学意义（F=46.875,P=0.004;F=67.723,P=0.002）;其中LY-294002+Hcy组OD值、VSMCs迁移面积低于Hcy组（P＜0.05）;LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时,各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=52.904,P=0.003;F=87.904,P=0.001）;其中LY-294002+Hcy组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT低于Hcy组（P＜0.05）;LY-294002+Hcy组与LY-294002+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。加入IGF-1:24 h时,各组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异有统计学意义（F=48.052,P=0.007;F=63.085,P=0.002）;其中IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积高于YWPC组（P＜0.05）;IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组OD值、VSMCs迁移面积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。48 h时,各组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异有统计学意义（F=55.941,P=0.008;F=65.011,P=0.005）;其中IGF-1＋YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT高于YWPC组（P＜0.05）;IGF-1+Hcy组与IGF-1+YWPC组VSMCs穿透Transwell膜细胞数、p-AKT/AKT比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 YWPC通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。     

钙离子在顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞自噬反应中的作用

目的：采用钙释放抑制剂联合化疗药物作用于宫颈癌HeLa细胞,探讨钙离子（Ca²⁺）在肿瘤细胞自噬反应中的作用,为辅助肿瘤治疗和药物研发提供依据。方法：选择处于对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞,随机分为对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂联合2-APB组（联合组）。MTT法检测HeLa细胞生存率,钙离子荧光探针法检测HeLa细胞胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平,共聚焦显微镜检测HeLa细胞中自噬相关蛋白LC3和P62的共定位情况。结果：MTT法检测,与对照组比较,顺铂组和联合组HeLa细胞生存率明显降低（P<0.05）;与顺铂组比较,联合组HeLa细胞生存率明显升高（P<0.05）。钙离子荧光探针法检测,与顺铂组比较,联合组细胞株胞浆和线粒体中游离Ca²⁺水平及LC3和P62蛋白共定位荧光强度明显降低。结论：化疗药物可诱导肿瘤细胞发生自噬,联合钙释放抑制剂给药可以降低肿瘤细胞自噬水平,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

顺铂诱导宫颈癌细胞上皮间质转化的研究

目的研究短时间应用顺铂是否会引起宫颈癌细胞株HCE1发生上皮间质转化(EMT),明确Twist1是否为调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子。方法采用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和免疫组织化学法分别从细胞形态、生长曲线和标志性蛋白E-cadherin、vimentin的表达情况。以HCE1细胞株为对照组,加顺铂组(终浓度0.1mg/L)为实验组,观察加入顺铂24、48、72、96h后,宫颈癌细胞株HCE1是否发生EMT及其时间点。采用Transwell小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力,免疫组织化学方法检测P糖蛋白(P-gp)蛋白表达证实EMT发生。半定量RT-PCR方法比较EMT前、后Twist1表达。结果低剂量顺铂处理HCE1 72h后,HCE1细胞形态发生EMT的改变;上皮细胞标志性蛋白细胞黏附分子(E-cadherin)表达减少、间质细胞标志性蛋白Vimentin表达增强,P-gp蛋白表达增强;对照组HCE1平均穿膜细胞数为(39.000 0±2.828 4)个,EMT组HCE1平均穿膜细胞数为(100.166 7±3.868 7)个;RT-PCR法测得Twist1/内参OD比值在对照组0.200 2±0.000 9,EMT组0.615 6±0.005 1,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量顺铂早期即可诱导HCE1发生EMT,发生EMT的HCE1细胞体外侵袭能力和耐药性增强,Twist1是调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子。     

氯通道ClC-2反义寡核苷酸对顺铂作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响

目的：探讨氯通道ClC-2 反义寡核苷酸(AON)抑制ClC-2基因表达对顺铂(DDP)作用下神经胶质瘤U251细胞侵袭力的影响,为ClC-2成为神经胶质瘤综合治疗的新基因靶点提供理论依据。方法：U251细胞按处理方法不同分为对照组（转染无义寡核苷酸）、AON组（转染ClC-2反义寡核苷酸）、DDP组（无义寡核苷酸与顺铂联用）和AON +DDP组（ClC-2反义寡核苷酸与顺铂联用）。应用RT-PCR检测相关基因ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达;Transwell 小室侵袭实验检测各组细胞侵袭力;Transwell 小室迁移实验检测各组细胞迁移率。结果：与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组ClC-2、cyclin D1 、MMP-2、MMP-9 mRNA表达率降低（P＜0.05）;Transwell 小室侵袭实验中对照组、AON组、DDP组和AON +DDP组侵袭细胞数分别为81.00±4.58、42.01±4.36、48.33±2.52和12.67±5.13;与对照组比较,AON组、DDP组和AON +DDP组穿透细胞数明显降低（P＜0.05）。Transwell 小室迁移实验中AON 组、DDP组、AON +DDP组细胞迁移率（%）分别为72.40±2.20、51.48±1.29、37.87±1.50,与对照组比较均明显降低（P＜0.05）。结论：①转染ClC-2反义寡核苷酸能有效抑制ClC-2 mRNA表达;②抑制ClC-2 mRNA能降低U251细胞的迁移力和侵袭力;③ClC-2 mRNA表达降低可促进顺铂对U251细胞迁移力和侵袭力的抑制作用。     

高迁移率族蛋白N2抗裸鼠宫颈癌移植瘤的作用研究

目的 研究高迁移率族蛋白N2（high mobility group chromosomal protein N2,HMGN2）对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型,随机分为阴性对照组、HMGN2蛋白组、顺铂组和联合用药组,分别予生理盐水、HMGN2蛋白、顺铂、HMGN2蛋白加顺铂隔日腹腔注射。观察肿瘤的生长情况,经过4次给药后处死裸鼠,取出瘤块,测量其体积计算抑瘤率,并行苏木精-伊红（HE）染色观察形态学变化。结果 成功建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型。第4次给药后,HMGN2蛋白组、顺铂组、联合用药组肿瘤体积平均值分别为（0.14±0.07） cm₃、（0.11±0.06） cm₃ 、（0.11±0.07） cm₃,与阴性对照组〔（0.38±0.12） cm₃〕相比差异有统计学意义（P <0.05）;3组肿瘤体积平均值的差异无统计学意义（P >0.05）。 HMGN2蛋白组、顺铂组、联合用药组肿瘤抑制率分别为0.62±0.18、0.71±0.17、0.70±0.18,差异无统计学意义（P >0.05)。肿瘤经肉眼观察可见阴性对照组瘤块较大,HE染色可见HMGN2蛋白组、顺铂组和联合用药组细胞坏死较阴性对照组明显。结论 HMGN2 蛋白可以明显抑制宫颈癌裸鼠移植瘤的生长。     

PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

目的 探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法 选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞,实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞,空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液,对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选,建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果 应用G418筛选14 d,稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出,建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光,基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为（1.00±0.04）,空载组为（0.83±0.03）,对照组为（0.85±0.04）,3组吸光度比值比较,差异有统计学意义（F=398.7,P＜0.05）;其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕后18 h,对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为（39.34±5.34）%、（40.56±7.54）%和（83.72±7.12）%,3组细胞迁移率比较,差异有统计学意义（F=431.8,P＜0.05）;其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各组细胞培养48 h后,对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为（23.33±3.63）、（22.00±8.14）、（45.67±7.14）,3组迁移细胞数比较,差异有统计学意义（F=248.5,P＜0.05）;其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞,并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。     

深部热疗联合顺铂增敏同步放疗治疗中晚期宫颈癌的临床研究

目的：观察深部热疗联合顺铂增敏同步放疗治疗中晚期宫颈癌的疗效及安全性。方法：138例Ⅲ期宫颈癌患者,按就诊顺序随机均分为深部热疗联合顺铂增敏同步放疗组（试验组）和顺铂增敏同步放疗组（对照组）。两组患者均进行根治性放疗;放疗第1 d开始行顺铂化疗,顺铂40 mg/m2,每周1次,共5~6周期。试验组：放化疗方法同对照组,于化疗及腔内放疗当日行盆腹腔深部热疗,每周2次,每次热疗60min,共6周。结果：两组的近期疗效、肿瘤局部控制情况、3年无瘤生存率及局控率间差异有统计学意义（P〈0.05）,但两组3年生存率间差异无统计学意义（P〉0.05）;两组毒副反应比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：深部热疗联合顺铂增敏同步放疗可以提高患者近期疗效及3年无瘤生存率、3年局部控制率,且无严重的并发症,是中晚期宫颈癌治疗中的一种安全有效的模式,具有临床推广价值。     

过表达CHL1基因对乳腺癌细胞瘤细胞活力、侵袭能力和凋亡的影响及其作用机制

目的：探讨过表达细胞黏附样分子（close homologue of L1,CHL1）基因对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法：细胞实验分为正常组（细胞常规培养,不进行外界干预）、对照组（细胞转染pcDNA3.1-CHL1-mimic-NC后,常规培养）、实验组（细胞转染pcDNA3.1-CHL1-mimic后,常规培养）;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。Western blot检测各组细胞中CHL1、分化抗原44(CD44)表达的水平。结果：单因素方差分析显示,正常组、对照组和实验组细胞凋亡率、侵袭细胞个数及CHL1、CD44表达水平的差异均具有统计意义（F=2698.000,P=0.000;F=655.973,P=0.000;F=914.107,P=0.000;F=3653.000,P=0.000）。流式细胞结果显示实验组细胞的凋亡率明显高于对照组（P=0.000）;Transwell小室显示实验组细胞的细胞侵袭个数明显少于对照组（P=0.000）;Western blot检测显示实验组细胞中CHL1的表达明显高于正常...     

胡桃醌联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的促凋亡作用及其机制

目的：探讨胡桃醌与顺铂联合应用对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的机制,阐明其对相关信号转导通路的作用。方法：选取处于对数生长期的HeLa细胞,将其分为对照组、胡桃醌组、顺铂组和胡桃醌＋顺铂组（联合用药组）。采用MTT法观察不同时间点HeLa细胞的增殖抑制率;Hoechst 33258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡形态;Westernblotting法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3及PI3K/AKt通路中AKt和pAKt表达水平。结果：MTT法,各用药组HeLa细胞增殖于24、48和72h均可被抑制,与对照组比较,胡桃醌组及顺铂组对细胞的抑制较明显,而联合用药组抑制更加显著;与单用药组比较,联合用药组对细胞的抑制更显著。Hoechst 33258染色,胡桃醌组和顺铂组在处理细胞12 h后,出现明显的凋亡细胞形态,联合用药组该现象更明显。Western blotting检测,与对照组比较,12 h后胡桃醌组和顺铂组HeLa细胞中Bcl-2和pAKt蛋白表达水平明显降低,而Bax、Cleave-caspase-3和AKt蛋白表达水平明显升高,联合用药组上述变化更加明显。结论：胡桃醌和顺铂联合应用可通过抑制PI3K/AKt通路,进而促进HeLa细胞凋亡。     

MicroRNA-137通过Wnt信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用研究

目的 探究microRNA-137（miR-137）通过Wnt信号通路对人宫颈癌细胞HeLa的增殖与凋亡,以及对裸鼠移植瘤的作用。方法 将人宫颈癌细胞HeLa分别转染miR-137-mimic质粒（miR-137组）和空载质粒（NC组）,另设空白组只加入等量转染试剂不做其他处理。待细胞稳定转染后,采用CCK-8法检测细胞活性。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Wnt、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）、分泌型蛋白Dickkopf-1（DKK1）、miR-137 mRNA相对表达量;采用Western blotting检测Wnt、MMP-7、DKK1蛋白的相对表达量。将稳定转染的细胞接种于裸鼠背部,观察裸鼠移植瘤的生长情况,绘制生长曲线并计算抑瘤率。结果 空白组、NC组、miR-137组12 h、24 h、48 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）;②3组的OD值有差异（P <0.05）,miR-137组OD值较空白组和NC组低,相对细胞活性较低;③3组OD值的变化趋势有差异（P <0.05）。miR-137组细胞凋亡率高于空白组和NC组（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt和MMP-7 mRNA相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1和miR-137 mRNA相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。miR-137组细胞Wnt、MMP-7蛋白相对表达量较空白组和NC组降低（P <0.05）;miR-137组细胞DKK1蛋白相对表达量较空白组和NC组升高（P <0.05）。NC组裸鼠移植瘤的抑瘤率与miR-137组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,miR-137组裸鼠移植瘤的抑瘤率增加。空白组、NC组、miR-137组裸鼠不同时间点的肿瘤体积比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的肿瘤体积有差异（P <0.05）;②3组的肿瘤体积有差异（P <0.05）,miR-137组与空白组和NC组相比,肿瘤生长缓慢,相对抑瘤效果较好;③3组肿瘤体积的变化趋势有差异（P <0.05）。结论 在人宫颈癌细胞中过表达miR-137可以促进癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖,该作用可能与Wnt及其上下游MMP-7/DKK1信号通路有关。     

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p（miR-26b-5p）对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组（空载质粒转染）,SNHG6敲减组（si-SNHG6慢病毒载体转染）、miR-26b-5p抑制组（空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染）及共转染组（si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染）。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）;与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达下调（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调（P <0.05）,miR-26b-5p mRNA表达上调（P <0.05）。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点OD值有差异（F =52.481,P =0.000）。②4组OD值有差异（F =50.336,P =0.000）,与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低（P <0.05）。③4组OD值变化趋势有差异（F =20.109,P =0.000）。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）,miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加（P <0.05）;与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少（P <0.05）。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。     

宫颈脱落细胞microRNA-508-3p、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值研究

目的 探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p（miR-508-3p）、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法 选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-PCR、免疫组织化学、Western blotting检测各组细胞miR-508-3p、ROCK1的表达,荧光素酶报告实验验证宫颈病变脱落细胞miR-508-3p与ROCK1的相关性,观察宫颈癌脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达与宫颈癌患者临床资料的关系,通过受试者工作特征（ROC）曲线评估宫颈病变脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达对宫颈病变的诊断价值。结果 与正常组比较,宫颈癌组和宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p降低（P <0.05）,ROCK1 mRNA、ROCK1 mRNA阳性率、ROCK1蛋白相对表达量升高（P <0.05）;与宫颈上皮内瘤变组比较,宫颈癌组miR-508-3p降低,ROCK1 mRNA、ROCK1 mRNA阳性率、ROCK1蛋白相对表达量升高（P <0.05）。宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p与ROCK1 mRNA呈负相关（r =-0.6678和-0.5234,均P =0.000）,ROCK1是miR-508-3p的直接靶基因。miR-508-3p、ROCK1水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移有关（P <0.05）,与年龄、绝经情况、肿瘤直径及病理类型无关（P >0.05）。在诊断宫颈癌和宫颈上皮内瘤变时,miR-508-3p的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.946（95% CI：0.899,0.993）和0.851（95% CI：0.782,0.921）,敏感性为87.1%（95% CI：0.776,1.654）和84.3%（95% CI：0.746,1.589）,特异性为100.0%（95% CI：1.000,2.000）和79.6%（95% CI：0.702,1.497）;ROCK1的AUC分别为0.949（95% CI：0.892,1.000）和0.905（95% CI：0.852,0.958）,敏感性为89.6%（95% CI：0.810,1.706）和77.8（95% CI：0.667,1.445）,特异性为100.0%（95% CI：1.000,2.000）和88.6%（95% CI：0.812,1.698）。随访1年后,48例宫颈癌患者中生存42例,死亡6例。生存组miR-508-3p高于死亡组（P <0.05）,ROCK1 mRNA相对表达量低于死亡组（P <0.05）。结论 宫颈脱落细胞miR-508-3p、ROCK1在宫颈癌患者中表达异常,其中miR-508-3p下调,ROCK1上调,两者呈靶向负调控关系,并与宫颈癌患者FIGO分期及淋巴结转移密切相关,具有一定的宫颈癌诊断价值,可作为早期宫颈癌筛查的潜在生物学指标。     

MicroRNA-218、microRNA-193b在宫颈癌组织中的表达及与化疗耐药性的关系

目的 探讨microRNA-218(miR-218)、microRNA-193b(miR-193b)在宫颈癌组织中的表达及其与化疗耐药性的关系。方法 选取2018年1月—2023年1月成都医学院第一附属医院收治的101例行手术治疗的宫颈癌患者。患者均行紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂药物敏感性试验，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-218、miR-193b表达情况。比较癌组织、癌旁组织中miR-218、miR-193b表达情况，统计化疗药物耐药情况，分析宫颈癌组织中miR-218、miR-193b的表达与化疗耐药性的关系。结果 癌组织中miR-218相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）,miR-193b相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）。宫颈癌患者行体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂的耐药率分别为38.61%、46.53%、48.51%、26.73%和40.59%。宫颈鳞癌与宫颈腺癌患者对体外化疗药物紫杉醇、顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、卡铂耐药率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。耐药患者癌组织中miR-218相对表达量...     

银杏叶提取物通过JAK2/STAT3信号通路调控食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的研究

目的 探讨银杏叶提取物对食管癌细胞EC9706增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及机制。方法 食管癌细胞EC9706分为对照组（不做任何处理）、不同浓度银杏叶提取物组（100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物）、银杏叶提取物+白细胞介素-6(IL-6)组（20 ng/ml IL-6和400 mg/L银杏叶提取物）。采用CCK-8法检测各组细胞的光密度（OD）值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭;Western blotting检测细胞增殖核抗原Ki-67、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白相对表达量。结果 对照组,100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L银杏叶提取物组,银杏叶提取物+IL-6组细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与对照组相比,不同浓度银杏叶提取物组EC9706细胞OD值均降低（P ...     

白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响

目的 探究白桦脂醇对宫颈癌小鼠自然杀伤(NK)细胞杀伤力及淋巴细胞增殖活性的影响.方法 通过皮下注射人宫颈癌HeLa细胞复制宫颈癌小鼠模型.将45只模型小鼠随机分为模型组、白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组,每组15只.另取15只未做处理的小鼠作为对照组.白桦脂醇组和白桦脂醇+SB203580组白桦脂醇灌胃干预(...     

TINCR靶向microR-544a/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）组织分化诱导非蛋白编码RNA（TINCR）靶向microRNA-544a（miR-544a）/FBXW7对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 体外培养人乳腺癌MCF7细胞株,设置空白对照组（不转入任何载体）、TINCR NC组（pcDNA3.1空载体）和TINCR上调组（pcDNA3.1-TINCR表达载体）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量;CCK-8法检测MCF7细胞增殖情况;流式细胞术检测MCF7细胞凋亡情况;Transwell法检测MCF7细胞侵袭情况;Western blotting检测MCF7细胞FBXW7、增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白相对表达量。取TINCR上调组MCF7细胞,分为miR-544a NC组（转染miR-544a NC）和miR-544a上调组（转染miR-544a mimic）,验证转染效率。结果 空白对照组、TINCR NC组MCF7细胞lncRNA TINCR、miR-544a相对表达量、OD值、细胞凋亡率、穿膜细胞数及FBXW7、PCNA、Bax、MMP-2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）。与空白对照组、TINCR NC组比较,TINCR上调组MCF7细胞lncRNA TINCR相对表达量、细胞凋亡率及FBXW7、Bax蛋白相对表达量升高（P <0.05）,miR-544a相对表达量、OD值、穿膜细胞数及PCNA、MMP-2蛋白相对表达量降低（P <0.05）。TINCR上调组与miR-544a NC组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a、FBXW7蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）。与TINCR上调组和miR-544a NC组比较,miR-544a上调组MCF7细胞OD值、侵袭细胞数及miR-544a相对表达量升高（P <0.05）,FBXW7蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 lncRNA TINCR可能通过靶向miR-544a/FBXW7,抑制人乳腺癌细胞增殖、侵袭,并促进其凋亡。     

RNF2在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环指蛋白2（RNF2）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞生物学行为的影响。方法 采用免疫组织化学法检测RNF2在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达，并利用过表达的慢病毒转染HCT116细胞构建过表达RNF2的HCT116细胞系，通过CCK-8法、划痕实验、Transwell实验检测过表达RNF2对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。结果 结直肠癌组织中RNF2阳性表达率高于癌旁正常组织（P <0.05）；不同年龄、组织学类型、分化程度、Dukes分期、淋巴结转移的结直肠癌患者的RNF2表达阳性率比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116组、HCT116-control组、HCT116-RNF2组HCT116细胞增殖、迁移能力及侵袭能力比较，差异有统计学意义（P <0.05）；HCT116-RNF2组细胞增殖速度、迁移能力及侵袭能力均高于HCT116-control组和HCT116组（P <0.05）。结论 RNF2在结直肠癌中呈高表达，且过表达RNF2可促进结直肠癌细胞迁移、增殖、侵袭能力，可为结直肠癌治疗提供新的治疗靶点。     

MicroRNA-31-3p靶向调控Sema4C表达对宫颈癌顺铂耐药性的作用及其机制研究

目的 探讨人宫颈癌细胞microRNA-31-3p(miR-31-3p)的表达及其靶向调控Sema4C表达对顺铂耐药性的作用机制研究。方法 取对数生长期Hela细胞,分别转染miR-31-3p mimics (miR-31-3p mimics组)、空白质粒（对照组）,以及在转染miR-31-3p mimics的基础上过表达Sema4C (miR-31-3p mimics+Sema4C组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-31-3p的表达,Western blotting检测转染mimics后Hela细胞Sema4C蛋白的表达,CCK-8法检测不同浓度顺铂作用下Hela细胞的耐药性变化。结果 miR-31-3p在宫颈癌细胞Hela中低表达（P <0.05）。miR-31-3p mimics组、miR-31-3p mimics+Sema4C组miR-31-3p相对表达量高于对照组（P <0.05）,且miR-31-3p mimics组与miR-31-3p mimics+Sema4C组miR-31-3p相对表达量比较,差异无统计学意义（P>0.05...     

卡瑞利珠单抗+白蛋白紫杉醇+奈达铂/顺铂治疗老年晚期食管癌的临床疗效观察

目的 探讨卡瑞利珠单抗+白蛋白紫杉醇+奈达铂/顺铂治疗老年晚期食管癌的疗效和安全性。方法 回顾性分析2018年10月—2020年8月安徽省立医院62例行一线化疗的晚期食管癌患者的临床资料。依据治疗方案的不同分为A组（30例）和B组（32例）。A组患者接受卡瑞利珠单抗（200 mg d1）+白蛋白紫杉醇（0.1 g d1、d5）+奈达铂（70 mg/m² d2）/顺铂方案（30 mg d1～d4）；B组患者接受白蛋白紫杉醇+奈达铂/顺铂方案。比较两组近期疗效、肿瘤标志物［癌胚抗原（CEA）、鳞状细胞癌抗原（SCC）］水平、毒副反应事件发生率及预后生存情况。结果 A组客观缓解率高于B组（P <0.05）；两组治疗前后CEA、SCC差值比较，差异有统计学意义（P <0.05），A组治疗前后CEA、SCC的差值高于B组；两组治疗期间腹泻、胃肠道反应、骨髓抑制、肝肾功能损伤总发生率比较，差异无统计学意义（P >0.05）；A组存活率高于B组（P <0.05）。结论 老年晚期食管癌患者采用卡瑞利珠单抗+白蛋白紫杉醇+奈达铂/顺铂治疗可提高临床疗效，降低肿瘤标志物水平，提高患者近期生存率，且安全性良好。