4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制。方法将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用4h组,观察4-HNE作用4h后的细胞凋亡情况。Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况。结果细胞经30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变。对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45。30μmol/L和50μmol/L4-HNE组与对照组及10μmol/L4-HNE组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol/L、50μmol/L4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P<0.01)。结论30、50μmol/L4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡。     

红霉素对支气管上皮细胞转录因子c-Jun和核因子-κB表达的影响

探讨红霉素对4-羟基壬烯醛(4-HNE)引起的支气管上皮细胞(16-HBE)核转录因子c-Jun及NF-κB的影响。将人支气管上皮细胞分为4-HNE组(10μmol/L 4-HNE)红霉素+4-HNE组、对照组,在4-HNE刺激细胞2、4、8及12h后,检测c-Jun及NF-κB的变化。结果表明,4-HNE和对照组比较,c-Jun、NF-κB自2h后各时间段两组差异有统计学意义,P均<0.05。红霉素+4-HNE组在4-HNE刺激2h后,c-Jun及NF-κB的表达较4-HNE组,差异有统计学意义,P均<0.01。4-HNE促进支气管上皮细胞c-Jun及NF-κB的表达。红霉素可抑制4-HNE诱导的c-Jun及NF-κB的表达。     

Alpha-熊果苷激活凋亡信号通路对人急性T细胞白血病细胞TIB-152异常增殖的调节作用

目的:本文旨在探究alpha-熊果苷对人急性T细胞白血病细胞TIB-152增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:TIB-152细胞分为4组:TIB-152 (对照组); alpha-熊果苷(10、20、50μmol/L)组。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术分析细胞凋亡。蛋白印迹检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax),Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9表达。结果:低浓度(50μmol/L)的alpha-熊果苷对TIB-152没有明显的细胞毒性,高浓度(50μmol/L)的alpha-熊果苷会对TIB-152产生细胞毒性。50μmol/L的alpha-熊果苷组细胞增殖倍数明显低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,50μmol/L的alpha-熊果苷组细胞凋亡率显著升高(P0. 01)。而且,50μmol/L的alpha-熊果苷组Bax/Bcl-2比值显著高于对照组(P0. 01)。同时,50μmol/L的alpha-熊果苷组Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9表达也显著高于对照组(P0. 01)。结论:Alpha-熊果苷可激活凋亡信号通路抑制人急性T细胞白血病细胞TIB-152细胞增殖,促进细胞凋亡。     

硫化氢抑制丙酮醛诱导的人皮肤角质形成细胞损伤

目的 观察硫化氢(H2S)对丙酮醛(MGO)诱导的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)损伤的影响.方法 HaCaT细胞分为MGO组、对照组和MGO+NSHD(H2S供体)组.MGO组用200、400、600 μmol/LMGO处理HaCaT细胞48 h造成细胞损伤;对照组给予等体积培养基;MGO+NSHD组应用400 μmol/LMGO处理,48 h前用50、100、200μmol/LNSHD预处理1h.通过CCK-8检测各组细胞活性.HaCaT细胞经100 μmol/LNSHD预处理1h,用20 μmol/L的H2S荧光探针WSP-1染色结合荧光照相术检测NSHD预处理1h组和对照组培养基和细胞内的H2S含量.将HaCaT细胞分为MGO组、MGO+NSHD组、NSHD组和对照组.MGO组仅用400 μmol/L MGO处理48 h;MGO+NSHD组在400 μmol/L MGO处理48 h前用100 μmol/L NSHD预处理1 h;NSHD组的细胞仅用100 μmol/L NSHD处理1h;对照组则给予等体积培养基.Hoechst 33258核染色结合荧光照相术检测细胞凋亡.Rh123染色结合荧光照相术检测线粒体膜电位(MMP).结果 HaCaT细胞经200、400和600 μmol/L MGO处理48 h,细胞活性依次为0.325±0.023、0.224±0.009和0.095±0.102,均低于对照组0.415±0.031(F=37.866,P＜0.05),其中400 μmol/LMGO组细胞活性约为对照组的1/2,选用此浓度的MGO作为有效损伤浓度.100 μmol/L NSHD处理1h可使培养基和细胞内的H2S含量较对照组均增加.在400μmol/L MGO处理48 h前,分别用50、100和200 μnol/L NSHD预处理1h,细胞活性依次为0.235±0.028、0.314±0.017、0.346±0.020,均高于单独400μmol/L MGO处理组0.224±0.009(F=61.209,P＜0.05).400 μmol/L MGO处理48 h后细胞凋亡率高于对照组和NSHD组[(32.6±3.5)％比(5.1±1.2)％、(3.4±0.8)％,均P＜0.05],MMP低于对照组和NSHD组(28.5±2.9比46.1±3.8、48.6±4.3,均P＜0.05).MGO+ NSHD组细胞凋亡率(18.3±2.6)％,低于MGO组但高于对照组和NSHD组(均P＜0.05),MMP为38.9±3.2,高于MGO组但低于对照组和NSHD组(均P＜0.05).结论 NSHD能通过释放H2S拮抗MGO诱导的皮肤细胞损伤.     

BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡及其作用机制

目的研究BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响及其可能的机制。方法以0、2、4、6、8、10μmol/L BMS-345541处理MG63细胞24、48 h后,用CCK-8法检测细胞存活率。用0、2、4、8μmol/L药物作用细胞24 h后,以PI染色法观察细胞凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡。以同样浓度作用细胞48 h,Western-blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果 (4-10)μmol/L的BMS-345541均可抑制MG63细胞的增殖,其抑制效应呈剂量-时间依赖性,48 h最低存活率只有(0.412±0.024)(P0.05)。PI染色荧光显微镜观察结果发现:随药物浓度增高,相同视野下正常细胞数逐渐降低,凋亡细胞数逐渐增高。流式细胞仪分析:0、2、4、8μmol/L的作用BMS-345541 24 h后,凋亡率分别为(5.2±0.78)%、(5.82±0.82)%、(8.86±1.71)%、(11.01±2.69)%,与对照组相比,8μmol/L组差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示MG 63细胞中的cleaved caspase-3蛋白表达量上调,与对照组相比,2、4、8μmol/L组差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BMS-345541可抑制MG63细胞增殖,并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与cleaved caspase-3表达上调有关。     

RORα对人胃癌细胞株AGS凋亡的影响

目的 探寻维甲酸相关孤儿受体（RORα）对于人胃癌细胞AGS的凋亡的影响。方法 根据处理浓度不同将以1 μmol/L的SR001处理的AGS设为1 μmol/L浓度组,将以0.1 μmol/L的SR001处理的AGS设为0.1 μmol/L浓度组,另设溶媒组及对照组,分别给予等量的溶媒、等量喜树碱（50 μmol/L）处理。采用MTT检测化疗药物5-FU介导的细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中磷酸化RORα（p-RORα）的表达及cleaved caspase-3的蛋白的含量并比较。结果 用RORα激动剂处理可显著增加5-FU介导的AGS细胞凋亡率,差异有统计学意义（P＜0.05）;RORα激动剂处理48h后,人胃癌细胞中磷酸化RORα的表达增高,cleaved caspase-3的蛋白含量增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 RORα可以提高人胃癌细胞AGS5-中FU介导的细胞凋亡,具有作为化疗药物的增敏剂的潜质。     

叠氮胸苷对胶质母细胞瘤细胞系TJ905细胞p33ING1b表达和细胞衰老及凋亡的影响

目的 观察叠氮胸苷对恶性胶质瘤细胞系TJ905细胞p33ING1b表达的影响及该影响与细胞凋亡和衰老的关系.方法 将体外培养的TJ905细胞系分为对照组,50、100及200 μmol/L叠氮胸苷组,在后三组的培养液中分别给予相应终浓度的叠氮胸苷并继续传代培养;各组取第1、3、6代细胞以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测p33ING1bmRNA表达水平及衰老细胞;取第3、6代细胞以TUNEL法和单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞.结果 从用药后第1代起叠氮胸苷即呈时间和剂量依赖性地诱导TJ905细胞p33ING1b mRNA表达和细胞衰老;200 μmol/L叠氮胸苷组第6代TJ905细胞的p33ING1b RT-PCR扩增条带相对灰度(1.44±0.23)显著高于同组第1代(0.95±0.13)、第3代(1.35±0.23)及同代50μmol/L组(0.85±0.24)和100 μmol/L组(1.23±0.34),其衰老相关β-半乳糖苷酶标记指数(45.62±6.74)亦显著高于同组第1代(7.82±2.40)、第3代(26.27±7.17)及同代50 μmol/L组(27.37±6.41)和100 μmol/L组(35.49±5.12),上述差异均有统计学意义(P＜0.01);而叠氮胸苷促凋亡作用出现在稍晚的第6代.结论 叠氮胸苷可上调TJ905细胞p33ING1b的表达水平,这可能是叠氮胸苷诱导TJ905细胞衰老和凋亡的重要分子机制.     

阻断MEK1上调支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的 探讨MEK1信号通路与支气管上皮细胞(16-HBE)谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的关系.方法 应用MEK1抑制剂PD98059 50μmol/L分别孵育16-HBE 2、8、16及24 h.用Western印迹方法和荧光定量PCR检测细胞γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达.用显色方法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量.用Western印迹方法检测细胞c-jun的水平.结果 经PD98059孵育4、8、16及24 h后,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达和细胞内GSH的含量较对照组均增加.各时间段c-jun表达较各对照组减少.结论 在支气管上皮细胞中MEK1抑制剂PD98059对16-HBE的γ-GCS和GSH有明显的上调作用.阻断激活蛋白-1(AP-1)途径不能减少γ-GCS和GSH的合成.     

氯化钴诱导缺氧对血管周细胞血管生成素-1表达影响的研究

目的检测缺氧环境下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-1(Ang-1)表达变化,探讨氯化钴诱导缺氧对血管周细胞Ang-1表达的影响。 方法体外培养人脑血管周细胞,予不同浓度氯化钴诱导缺氧环境,分为对照组和试验组。对照组使用不含氯化钴的血管周细胞培养基培养;试验组使用血管周细胞培养基溶解六水合氯化钴稀释至终浓度分别为50 μmol/L(50 μmol/L氯化钴组)、100 μmol/L(100 μmol/L氯化钴组)、200 μmol/L(200 μmol/L氯化钴组)、300 μmol/L(300 μmol/L氯化钴组)、400 μmol/L(400 μmol/L氯化钴组)。通过蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1α、Ang-1 mRNA合成以及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测VEGF、Ang-1蛋白分泌。对数据行单因素方差分析、Dunnett-t检验及t检验。 结果对照组和各试验组(50、100、200、300、400 μmol/L氯化钴组)HIF-1α蛋白表达组间差异有统计学意义(F＝215.7,P<0.05);HIF-1α蛋白表达随氯化钴浓度先升高后降低,在200 μmol/L处相对灰度达到峰值8.6140±0.3445,200 μmol/L氯化钴组相对灰度值与对照组,50、100、300、400 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝38.28、22.18、10.16、5.60、25.47,P值均小于0.05)。对照组与试验组HIF-1α mRNA表达组间比较,差异有统计学意义(F＝195.5,P<0.05);HIF-1α mRNA表达呈氯化钴浓度依赖性降低,400 μmol/L氯化钴组HIF-1α mRNA表达达到最低值5.107×10^－3±8.138×10^－5,与对照组,50、100、200 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝21.40、17.75、14.96、5.36,P值均小于0.05)。对照组与试验组VEGF蛋白表达组间比较,差异有统计学意义(F＝93.34,P<0.05);VEGF蛋白表达随氯化钴浓度先升高后降低,在200 μmol/L处VEGF蛋白表达达到峰值(901.000±6.798) pg/mL,200 μmol/L氯化钴组与对照组,50、100、300、400 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝27.70、10.56、4.65、10.49、17.97,P值均小于0.05)。对照组与试验组Ang-1蛋白表达组间比较,差异有统计学意义(F＝279.3,P<0.05);Ang-1蛋白分泌随氯化钴浓度升高先增加,在100 μmol/L处达到峰值(4 364.0±117.3) ng/mL,随后蛋白分泌随氯化钴浓度升高逐渐减少,100 μmol/L氯化钴组与对照组,50、200、300、400 μmol/L氯化钴组组间比较,差异均有统计学意义(t＝8.57、4.33、17.03、19.48、23.30,P值均小于0.05)。对照组与试验组Ang-1 mRNA表达组间比较,差异有统计学意义(F＝172.0,P<0.05);Ang-1 mRNA表达随氯化钴浓度升高先增加,在100 μmol/L处达到峰值6.732×10^－4±7.140×10^－6,随后mRNA表达随氯化钴浓度升高逐渐减少,100 μmol/L氯化钴组与对照组,200、300、400 μmol/L氯化钴组组间比较,差异均有统计学意义(t＝10.05、20.21、110.20、34.25,P值均小于0.05)。 结论轻度缺氧环境下,血管周细胞Ang-1表达随缺氧程度加剧而受到促进;重度缺氧环境下,血管周细胞Ang-1表达随缺氧程度加剧而受到抑制。     

红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为PD的体外模型.实验分对照组、 500 μmoL/L MPP+诱导组、红景天苷(10、 50、 100 μmol/L)3个浓度预处理组.用MTT法测定细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段.结果:10、 50、 100 μmoL/L红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.与MPP+组(50.2±1.8)%相比, 10、 50、 100 μmoL/L红景天苷预处理细胞活力分别上升为(65.1±1.0)%、 (69.5±2.3)%、 (80.9±2.0)%(P<0.05).流式细胞术检测提示正常组、 MPP+组、红景天苷预处理组(10、 50、 100 μmoL/L)凋亡百分率分别为0.9%、 34.5%、 26.9%、 20.1%、 14.2%.经红景天苷预处理后, 与MPP+组相比较细胞断裂的DNA片段明显减少.结论:红景天苷对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用.