γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因调控的初步研究

目的研究抗氧化基因——大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）基因的功能区及其调控表达。方法克隆1．76kb大鼠γ-GCS基因的重链亚单位——GCLC基因的上游调控序列，并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC—Luc（GCLC／pGL-3）。利用嵌顿缺失方法构建GCLC基因的缺失体，并将其表达载体转染大鼠肺泡上皮细胞，在细胞中分析该基因的调控区域。通过该方法初步发现GCLC基因的上游调控序列的-745～-705bp属负性调控区域。利用EMSA和supershift证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E—box元件能与转录因子USF1／USF2特异性的结合。将USF的真核表达载体和逆转录病毒表达载体分别导入肺泡上皮细胞，观察GCLC基因的转录活性和GCLC蛋白的表达情况。结果GCLC基因的-403～-111bp和-705～-613bp区段属正调控区域；-745～-705bp属负调控区域。EMS和supershifl证实上游刺激因子（USF）能与该负调控区域的E—box元件结合抑制GCLC基因的转录和表达。结论发现GCLC基因其中2个正调控区域（-403～-111bp与-705～-613bp）和1个负调控区域（-745～-705bp），其中负调控区域-745～-705bp上的E—box元件通过与USF结合介导GCLC基因的负性表达调控。     

γ—谷氨酰半胱氨酸合成酶基因及其调控

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ GCS)基因由γ GCS HS基因和γ GCS LS基因组成 ,γ GCS HS基因的 5′ 端序列包括很多调控γ GCS HS基因表达的抗氧化剂反应元件。不同的细胞在不同的刺激物下 ,γ GCS两亚单位基因有着不同的表达调控方式     

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)与肿瘤耐药

谷胱甘肽 (glutathione,GSH)及其相关酶类对化疗药物的解毒作用是恶性肿瘤化疗耐药形成的主要原因之一。γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)是 GSH体内生物合成的限速酶 ,大量的体外及临床实验已证实γ- GCS与多种肿瘤细胞的耐药有关 ,抑制γ- GCS活性可降低细胞内 GSH水平 ,同时使肿瘤细胞耐药得到不同程度的逆转。本文综述了γ- GCS的生物学特性、基因表达的调控及在肿瘤耐药形成中的的作用。     

人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析

目的：探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）基因上游调控序列E-box元件的功能。方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列，PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变。扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体，DNA测序鉴定后，亚克隆入野生型GCLC-Luc荧光素酶报道载体。将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A549和人支气管上皮细胞16HBE，检测转染后细胞荧光素酶活性值。结果:测序结果证实，成功将E-box1 CACGGG突变为AGCGGG；E-box2 CACGTG突变为CACGGA。GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc（突变E-box1）、GCLC-mEbox2-Luc（突变E-box2）、GCLC-mEbox12-Luc（突变E-box1和E-box2）转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为（5 197 852±132 206）U、（5 455 692±127 431）U、（5 315 722±244 197）U、（5 174 303±183 179）U，转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为（141 157±18 907）U、（126 454±23 724）U、（137 315±22 179）U、（132 441±28 970）U。经过统计学分析，各组荧光酶活性没有显著差别，均P>0.05。结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠中磷酸化蛋白激酶B与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达研究

目的通过观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）与磷酸化蛋白激酶B（p-PKB）的表达,研究p-PKB和γ-GCS在COPD中可能的参与机制。方法28只健康雄性Wistar大鼠随机分为COPD组和对照组。采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖（LPS）法制作COPD大鼠模型。检测肺组织中1-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组化和Western印迹分析肺组织中γ-GCS与p-PKB蛋白水平。结果γ-GCS活性在COPD组大鼠中明显高于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0．05）。原位杂交显示COPD组大鼠支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCS mRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。COPD组大鼠γ-GCS与p-PKB免疫组化可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆有较强蛋白阳性信号;图像定量分析显示COPD组γ-GCS与p-PKB蛋白表达高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot显示,γ—GCS与p-PKB在COPD组蛋白表达高于对照组,且差异有统计学意义（P〈0．05）。SPSS10．0直线相关分析得出p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD大鼠肺组织1．GCS蛋白和mRNA表达增高,p-PKB蛋白也有相应高表达,提示p-PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中起作用,且PKB可能参与了γ-GCS的信号转导。     

磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中磷脂酰肌醇-3激酶（H3K）、蛋白激酶B（PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和γ-GCS的关系。方法将手术切馀的肺癌患者肺组织标本（16例）分为COPD组和对照组,每组8例,检测肺组织中γ—GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCSmRNA的表达,免疫组化分析肺组织中H3K、PKB与γ-GCS的蛋白水平。结果COPD组中1．GCS活性明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交显示COPD组支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCSmRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组化在COPD组可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达,图像定量分析显示COPD组H3K、PKB与γ—GCS蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。直线相关分析得出H3K、P-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD患者肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号传导通路。     

腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究

目的： 研究腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）表达的机制。方法: 构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞，将GCLC基因5’-上游调控序列不同长度的缺失体-萤火虫荧光素酶报道系统转染后分析转录活性的变化；检测AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因调控序列的结合活性。结果: GCLC基因5’-上游调控序列报道系统检测结果显示大部分（9/11）缺失体的转录活性抑制，AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因的结合活性增强，而对应的功能元件的转录活性降低。结论: 腺病毒E1A蛋白通过抑制GCLC基因 5’-上游调控序列的转录活性，扩大大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化/抗氧化失衡,其机制可能涉及E1A对辅助转录因子的抑制。     

大鼠GCLC基因两个相邻E-box元件功能分析

目的 研究GCLC基因上游两个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录抑制机制.方法 利用PCR定点缺失法构建单缺失E-box元件(-804～-799)以及双缺失E-box元件(-804～-799、-729～-724)含GCLC上游启动子序列的报告基因载体.将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠支气管上皮细胞(RTE)、大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响.结果 成功构建出定点缺失E-box元件的GCLC-Luc.在大鼠支气管上皮细胞和大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),转染GCLC-delhE-box-Luc组与GCLC-DdelE-box-Luc组荧光素酶值较转染GCLC-Luc组均明显升高(P均＜0.01),均与转染GCLC-delE-box-Luc组荧光素酶值水平大致相同.E-box元件(-804～-799,CACATG )在GCLC基因的基础状态下的转录表达中起抑制作用.结论 两个E-box元件可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控.     

阻断MEK1上调支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的探讨MEK1信号通路与支气管上皮细胞(16-HBE)谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的关系。方法应用MEK1抑制剂PD9805950μmol/L分别孵育16-HBE 2、8、16及24h。用Western印迹方法和荧光定量PCR检测细胞γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达。用显色方法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。用Western印迹方法检测细胞c-jun的水平。结果经PD98059孵育4、8、16及24h后,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达和细胞内GSH的含量较对照组均增加。各时间段c-jun表达较各对照组减少。结论在支气管上皮细胞中MEK1抑制剂PD98059对16-HBE的γ-GCS和GSH有明显的上调作用。阻断激活蛋白-1(AP-1)途径不能减少γ-GCS和GSH的合成。     

阻断MEK1上调支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的 探讨MEK1信号通路与支气管上皮细胞(16-HBE)谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的关系.方法 应用MEK1抑制剂PD98059 50μmol/L分别孵育16-HBE 2、8、16及24 h.用Western印迹方法和荧光定量PCR检测细胞γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达.用显色方法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量.用Western印迹方法检测细胞c-jun的水平.结果 经PD98059孵育4、8、16及24 h后,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达和细胞内GSH的含量较对照组均增加.各时间段c-jun表达较各对照组减少.结论 在支气管上皮细胞中MEK1抑制剂PD98059对16-HBE的γ-GCS和GSH有明显的上调作用.阻断激活蛋白-1(AP-1)途径不能减少γ-GCS和GSH的合成.     

PPARγ影响γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表达在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的： 探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性及表达的影响,及在COPD发病中的作用。方法：用每天熏香烟和2次气管内滴入脂多糖（LPS）法制作大鼠COPD模型,同时利用PPARγ激活剂罗格列酮(RGZ)对其进行干预,测定3组大鼠肺功能和病理变化结果;并检测3组大鼠肺内ROS含量和γ-GCS活性;应用免疫组化、免疫印迹(Western blotting)、原位杂交和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PPARγ、γ-GCS mRNA及蛋白在3组大鼠肺组织中的表达情况。结果：RGZ干预组大鼠肺功能指标（FEV0.3、FEV0.3/FVC%与PEF）均较COPD组明显好转;光镜下COPD组肺组织病理变化符合COPD的特征性改变,RGZ干预组肺组织病理变化较COPD组显著减轻;RGZ干预组ROS含量较COPD组显著减少,而γ-GCS活性较COPD组升高;PPARγ、γ-GCS mRNA及其蛋白质表达在COPD组均较对照组明显增高（均P<0.01）,而在RGZ干预组均较COPD组增高（均P<0.0５）;直线相关分析显示PPARγ蛋白与γ-GCS活性呈正相关(r=０.634,P<0.01),与ROS含量无明显相关性(r=0.214, P>0.05);PPARγ蛋白与γ-GCS蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.553、r=0.442, 均P<0.01）。结论：RGZ活化PPARγ可减轻COPD氧化/抗氧化失衡程度,对COPD的防治起重要作用;另外,PPARγ可能通过减少肺内ROS的产生,增强γ-GCS活性及其基因表达而在COPD中起重要的抗氧化保护作用。     

香烟烟雾提取物经aPKC√ζ-NRF2上调大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

目的 观察香烟烟雾提取物（CSE）是否通过不典型蛋白激酶Cι/ζ (aPKCι/ζ) -红系衍生的核因子相关因子2（NRF2）信号通路调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）。方法 用Western blot法检测γ-GCS、NRF2和p-aPKCι/ζ蛋白,免疫细胞化学法观察γ-GCS蛋白表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测γ-GCS mRNA,免疫荧光法检测NRF2蛋白。结果 NRF2蛋白在CSE 3h组主要表达在胞核,其胞核蛋白高表达。p-aPKCι/ζ蛋白在CSE 3h组显著高于对照组（P＜0.05）。γ-GCS蛋白及其mRNA在CSE 3h组较对照组显著增强（P＜0.05）。预先加入aPKCι/ζ抑制剂RO813220,NRF2胞质蛋白表达增强,p-aPKCι/ζ蛋白、γ-GCS蛋白及其mRNA均明显低于CSE 3h组（均P <0.05）。相关性分析显示NRF2与γ-GCS、p-aPKCι/ζ呈正相关,p-aPKCι/ζ与NRF2、γ-GCS呈正相关（P＜0.05）。结论 CSE可能通过aPKCι/ζ-NRF2调节γ-GCS表达。     

Nrf2在支气管哮喘豚鼠炎症细胞中调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的：探讨核因子相关因子-2(Nrf2)调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)在支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中的表达。方法：38只健康雄性豚鼠随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）和地塞米松治疗组（C组），卵蛋白致敏法复制哮喘模型，检测3组豚鼠肺组织匀浆中丙二醛（MDA）浓度，收集BALF，行细胞计数和分类。离心，细胞涂片行免疫细胞化学和原位杂交，检测Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白和mRNA。结果：（1）B组嗜酸性粒细胞数（EOS）比例高于A组和C组；（2）肺组织中MDA浓度B组高于A组和C组；（3）γ-GCS原位杂交A组A值高于B组和C组；Nrf2、Bach1原位杂交A值3组差异无显著；（4）γ-GCS 免疫细胞化学B组A值低于A组；Nrf2细胞核内阳性率 B组低于A组和C组；Bach1细胞核内阳性率B组高于A组和C组；（5）γ-GCS mRNA表达（A值）与Nrf2核内阳性率呈正相关，与Bach1核内阳性率呈负相关；B组BALF 中γ-GCS mRNA表达（A值）与EOS比例呈负相关。结论：支气管哮喘豚鼠体内存在氧化/抗氧化失衡，炎症反应使γ-GCS在豚鼠支气管哮喘炎症细胞中的表达降低，地塞米松可以通过调节Nrf2/Bach1核转位而增加γ-GCS表达。     

血清γ-谷氨酰转移酶3种检测方法的比较

本研究应用合成底物,并用甘氨酰甘氨酸(双甘肽)作为第2底物和激动剂,对110例正常和病理血清GGT的活性用3种方法进行了检测,通过比较其灵敏度、重复性、颜色复合物的稳定性以及测定速度、简易性等,结果表明:α-萘胺-双甘肽法具有准确、灵敏、简单、重复性好等优点,适合科研和临床一般实验室应用。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ—GCS表达的影响

目的:探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β1(TGF-β1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法:Wistar大鼠30只,随机抽取20只被动吸烟4周后,10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组,另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性,采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β1和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果:吸烟组大鼠气道阻力增高,肺顺应性降低,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高(P<0.05),红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组,但高于对照组(P<0.05)。吸烟组TGF-β1与γ-GCS表达呈正相关(P<0.05),而红霉素治疗组无明显相关性。结论:红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达降低,提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

β萘黄酮对大鼠谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因表达的影响

目的 通过了解外界刺激因子β萘黄酮(β-NF)对大鼠谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因转录的影响,研究大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因转录的调节机制.方法 利用大鼠GCLC基因调控序列驱动的GCLC-PGL3-enhancer-Luciferase报道载体(GCLC-Luc)转染大鼠支气管上皮细胞(RTE)和肝癌细胞(H4ⅡE),分DMSO空白对照组和不同浓度的各刺激因子组,比较各组荧光素酶值的差异以筛选影响GCLC基因转录调控的刺激因子,并比较筛选到的刺激因子β-NF对GCLC-Luc在RTE和H4ⅡE细胞内表达影响的异同.2种转染后的细胞均分为β-NF实验组(10μmol/L)和DMSO空白对照组,以荧光定量PCR检测各组的细胞内源性γ-GCS转录水平变化.分别将构建的r系列缺失报道载体、GCLC-Luc和激活蛋白1(AP-1)、NF-κB定点突变报道载体转染2种细胞,分β-NF实验组(10 μmol/L)与DMSO空白对照组,比较各组荧光素酶值的变化,分析β-NF作用的调节位点和转录调控作用相关元件.结果 1、10、100μmol/L的β-NF均强烈抑制RTE中GCLC基因表达,荧光素酶值显著低于DMSO空白对照组(16 135±1456、2752±218、1579±294比25 971±1662,均P＜0.01).在H4ⅡE中,1、10、100 μmol/L的β-NF则促进其表达,荧光素酶值显著高于DMSO空白对照组(5686±441、13 601±746、13978±164比3645±367,均P＜0.01).荧光定量PCR显示10 μmol/L的β-NF作用下,RTE内源性γ-GCS的mRNA表达水平是DMSO空白对照组的0.73倍,在H4ⅡE细胞中则是1.98倍.GCLC-Luc、r系列缺失报道载体转染2种细胞后,RTE中各载体β-NF实验组荧光素酶值均低于DMSO空白对照组(P＜0.01),而H4ⅡE中则高于DMSO空白对照组(P＜0.05).β-NF作用的调节位点定位于转录起始位点上游-390～+2 bp范围内.用针对该区域的AP-1、NF-κB定点突变报道载体转染细胞后,转染GCLC-Luc载体的β-NF实验组RTE荧光素酶值较DMSO空白对照组下降(91.50±0.32)%,与之相比,转染AP-1、NF-κB定点突变报道载体的细胞下降幅度并没有减少(P＞0.05).在H4ⅡE,β-NF作用下转染GCLC-Luc载体的细胞荧光素酶值上升幅度则高于转染AP-1定点突变报道载体的细胞[(3.81±0.19)倍比(2.08±0.19)倍,P＜0.05],而与转染NF-κB定点突变报道载体的细胞荧光素酶值上升幅度[(4.1±1.01)倍]相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在大鼠RTE和H4ⅡE,β-NF影响GCLC基因的表达具有细胞特异性.在大鼠H4ⅡE,β-NF通过激活抗氧化应答元件(ARE)类似的AP-1调控GCLC基因表达.     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

Nrf2在支气管哮喘豚鼠炎症细胞中调控谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的:探讨核因子相关因子-2(Nri2)调控.谷氨酰半胱氨酸合成酶(在支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中的表达.方法:38只健康雄性豚鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)和地塞米松治疗组(C组),卵蛋白致敏法复制哮喘模型,检测3组豚鼠肺组织匀浆中丙二醛(MDA)浓度,收集BALF,行细胞计数和分类.离心,细胞涂片行免疫细胞化学和原位杂交,检测Nrl2、Bachl、蛋白和mRNA.结果:(1)B组嗜酸性粒细胞数(EOS)比例高于A组和C组;(2)肺组织中MDA浓度B组高于A组和C组;(3)原位杂交A组A值高于B组和c组;Nrt2、Bachl原位杂交A值3组差异无显著;(4)免疫细胞化学B组A值低于A组;Nrf2细胞核内阳性率B组低于A组和c组;Bachl细胞核内阳性率B组高于A组和c组;(5)CSmRNA表达(A值)与Nri2核内阳性率呈正相关,与Bachl核内阳性率呈负相关;B组BALF中表达(A值)与EOS比例呈负相关.结论:支气管哮喘豚鼠体内存在氧化/抗氧化失衡,炎症反应使在豚鼠支气管哮喘炎症细胞中的表达降低,地塞米松可以通过调节NrF2／Bachl核转位而增加表达.     

谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位基因甲基化而非多态性与慢性阻塞性肺疾病相关

目的 探讨谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)基因多态性和甲基化与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感的相关性.方法 收集166例COPD患者为COPD组,同期与上述COPD患者相似的非COPD人群166例为对照组.使用基因测序法检测两组人群GCLC基因启动子区域的单核苷酸多态性(SNP),分析各SNP位点的单倍体型与COPD发病的关系.使用甲基化DNA免疫共沉淀芯片(MeDIP-chip)检测两组人群GCLC启动子区域甲基化水平,进行两组人群GCLC mRNA表达水平和血谷胱甘肽(GSH)浓度的比较.结果 通过直接测序法在GCLC启动子区域鉴定出12个SNP,其中4个SNP,即-2137MT、-129C/T、+27591C/G和+37764MG在COPD组和对照组人群中的发生率超过10％.-129C/T与-2137MT、+27591C/G、+37764MG均处于连锁不平衡.COPD组和对照组人群上述4个SNP的等位基因频率和基因型频率差异均无统计学意义(均P＞0.05).MeDIP-chip检测显示COPD组GCLC启动子区域甲基化水平明显高于对照组(P＜0.001).COPD组肺组织标本GCLC mRNA表达水平明显低于对照组(3.71±0.48比5.16±0.39,P＜0.05),血谷胱甘肽(GSH)水平也低于对照组[109.72±32.38)mg/L比(179.87±46.23) mg/L,P＜0.05].结论 中国人群GCLC启动子区域甲基化而非GCLC基因多态性与COPD相关.