神经肽Y活化大鼠心肌细胞内Ca^2＋及钙调素依赖的钙调神经磷酸酶途径

目的 观察神经肽 Y （NPY）对心肌细胞内Ca^2＋及钙调素（CaM）依赖的钙调神经磷酸酶（CaN）信号传导途径的影响.方法 以NPY刺激心肌细胞.用环胞素A（CsA）特异性抑制CaN活性.应用Western印迹测细胞内CaN-α蛋白表达.采用组织化学法测CaN酶活性.用Fluo3-AM荧光标记法观察心肌细胞胞质及核内钙离子浓度变化.结果 加入100 nmol/L NPY刺激后,心肌细胞CaN酶活力较对照组明显增高（P＜0.05）,10 nmol/L NPY组和CsA 组（100 nmol/L NPY ＋ 5 μg/ml CsA） CaN酶活性与对照组相比,差异无统计学意义.100 nmol/L NPY组心肌细胞内CaN-α蛋白表达较对照组显著增高（P＜0.05）. 加入100 nmol/L NPY在10 min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量与对照组相比,差异无统计学意义.经100 nmol/L NPY刺激24 h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组（P均＜0.01）.结论 NPY可活化心肌细胞内Ca^2＋及CaM-CaN途径.NPY刺激下产生的细胞内钙增加,可能是其活化CaN途径的始动环节.     

钙信号机制在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨钙依赖的信号转导途径在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用.方法用NPY刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)的特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.应用3H-Leu掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率, 用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子, 观察不同作用时限内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果①心肌细胞3H-Leu掺入量测定:与对照组相比,NPY10nM组3H-Leu掺入量有所增高,但与对照组比无显著差异,而NPY100nM 组心肌细胞3H-Leu掺入量较对照组明显增高(p<0.05).CsA组和对照组相比无显著差异.②加入100nmol/L NPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量均无显著差异.经100nmol/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(p<0.001,p<0.001).结论 NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用.较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙Ca2+浓度增加,这可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

钙信号机制在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨钙依赖的信号转导途径在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用.方法用NPY刺激Wistar 乳鼠心肌细胞,并用Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)的特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.应用3H—Leu 掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率,用Fluo3-AM荧光标记细胞内游离钙离子,观察不同作用时限内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化.结果①心肌细胞3H-Leu掺人量测定:与对照组相比,NPY10nM组3H-Leu掺入量有所增高,但与对照组比无显著差异,而NPY100nM组心肌细胞3H—Leu掺入量较对照组明显增高(p<0.05).CsA组和对照组相比无显著差异.②加入100nmol/L NPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量均无显著差异.经100nmoL/L NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆及核内钙含量明显高于对照组(p<0.001,p<0.001).结论NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca2+/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用.较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙Ca2+浓度增加,这可能是活化CaN信号途径的始动环节.     

环胞霉素A抑制神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大效应

目的:观察Ca²⁺/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)对神经肽Y诱导心肌细胞肥大效应的影响。方法:用神经肽Y(NPY)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用环胞素A加以干预。应用氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT-PCR法测心肌细胞c-junmRNA表达。结果:(1)心肌细胞氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量测定:与对照组相比,NPY10nmol/L组氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量有所增高,但与对照组比无显著差别,而NPY100nmol/L组心肌细胞氚[³H]-Leu掺入量较对照组明显增高(P＜0.05)。CsA组和对照组相比无显著差别。(2)心肌细胞内c-junmRNA表达:NPY组心肌细胞c-junmRNA的RT-PCR产物量明显高于对照组和CsA组(P＜0.01),对照组和CsA组间无显著差别。结论:NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加、心肌细胞原癌基因(肥大早期反应基因)c-junmRNA表达,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用。     

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节

目的:观察钙调神经磷酸酶(CaN)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节.方法:建立AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,观察CaN抑制剂对AngⅡ刺激的心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入的影响,以及各种因素对心肌细胞CaN酶活性的影响.结果:10、 100、 1000 nmol·L-1的AngⅡ作用12 h分别使心肌细胞的CaN活性增加了13%、 57%(P＜0.05)、 228%(P＜0.01).AngⅡ(10 nmol·L-1)刺激心肌细胞2 h内,CaN活性与对照组无明显差异(P＜0.05);AngⅡ刺激心肌细胞12 h以上,CaN活性才明显增高(P＜0.05).Losartan(50 μmol·L-1)、H7(50 μmol·L-1)及Fura-2/AM(4 μmol·L-1)可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性;而PD98059(50 μmol·L-1)对AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性无明显影响.AngⅡ(10-7mol/L)刺激的大鼠心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入明显高于对照组(P＜0.01),而CaN特异性抑制剂-环孢素A(0.5～5 μg/mL)可以明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞[3H]-亮氨酸掺入.结论:依赖Ca2+/CaM活化的CaN可能在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;CaN的活化可能有赖于胞内Ca2+水平的持续升高,另外,CaN的活性还可能受到蛋白激酶C等信号分子的磷酸化调节.     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞内游离钙重分布研究

目的: 观察神经肽Y(NPY)对大鼠心肌细胞胞浆钙浓度和肌浆网(SR)内钙含量的影响。方法: 用100 nmol·L^-1 NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24 h, 用荧光染料Fluo-4 AM负载胞浆钙, 记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度，并用咖啡因诱导的胞浆钙瞬变幅度来反映肌浆网内总钙负荷；用荧光染料Fluo-5N AM 直接标记心肌细胞肌浆网内游离钙离子。所有钙影像均由Leica SP2激光共聚焦显微镜记录。结果: 100 nmol·L^-1 NPY刺激24 h后，心肌细胞胞浆游离钙浓度明显高于对照组（P<0.05）；心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组 (P<0.01)；咖啡因诱导下钙瞬变幅度也低于对照组。结论: 24 h NPY刺激可导致心肌细胞内游离钙出现空间分布的变化，即胞浆钙浓度增高而肌浆网内钙负荷减少。     

细胞内钙信号对锌指转录因子及胚心标志基因的调控

目的：探讨心肌细胞内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）变化对锌指转录因子及胚心标志基因的影响。 方法: 以原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及雷尼丁(RY)剌激心肌细胞跨膜钙内流及细胞内钙释放; Fura-2/AM比率荧光成像系统分析细胞内钙信号；免疫印迹(Western blotting)检测心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、活化T细胞核因子（NFAT3）、锌指转录因子（GATA4）、α-actin蛋白表达，RT-PCR 检测心肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA表达。 结果: AngⅡ及RY均可使心肌细胞内［Ca2+］i增加，与对照组相比差异显著（P<0.01）。AngⅡ、RY刺激1、3 d，心肌细胞CaN、NFAT3、GATA4、α-actin蛋白表达及β-MHC mRNA表达明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。 结论: 细胞内钙信号的变化可能通过影响CaN及ERK信号通路，增加心肌细胞胚心标志基因的表达,在心肌细胞肥大的病理过程中起重要作用。     

葛根总黄酮对离体神经肽Y诱导的心肌细胞肥大的影响

目的:观察葛根总黄酮对离体神经肽Y(NPY)诱导的心肌细胞肥大效应的影响。方法:建立体外培养的大鼠心肌细胞培养体系,实验分(1)对照组、(2)NPY组:加入终浓度为100 nmol/L的NPY、(3)NPY+葛根总黄酮4个浓度组:分别加入100 nmol/L NPY和0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L的葛根总黄酮。应用氚-亮氨酸([³H-Leu])掺入法测定心肌细胞蛋白合成率;RT-PCR法测心肌细胞C-jun mRNA表达;组织化学法测心肌钙调磷酸酶(CaN)活性。结果: NPY组心肌细胞[³H-Leu]掺入量为896±34;C-jun mRNA表达为23 132.62±1 787.28;CaN活性为35.62±4.60,与对照组(分别为[³H-Leu]752±46、C-jun mRNA 17 819.49±1 452.06、Can22.94±6.20)相比有显著差异(P＜0.01、P＜0.05)。而葛根总黄酮1-3 mg/L可使在NPY作用下的心肌细胞[³H-Leu]掺入量下降(3个剂量组分别为797±78、772±58、786±43);C-jun mRNA表达减少(分别为18 035.32±1 592.23、18 043.90±1 726.19、18 072.29±1 692.34);CaN活性降低(分别为28.34±6.40、25.69±5.90、26.37±3.50)与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。结论:NPY可诱导心肌细胞肥大;葛根总黄酮在1-3 mg/L浓度可阻断其效应,其作用可能与抑制CaN活性、阻断Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径有关。     

缺氧预处理对自发性高血压大鼠心肌细胞内钙的影响

目的:探讨缺氧预处理对后继缺氧再给氧所致心肌细胞内钙超载的影响及蛋白激酶C(PKC)和百日咳毒素(PTX)敏感的G-蛋白在缺氧预处理的作用.方法:循环灌流法分离自发性高血压大鼠(SHR)肥大心肌细胞,用Fu ra-2AM测定钙浓度.结果:[Ca2+].为1.0 mmol/L时,预处理组缺氧再给氧后其心肌细胞内游离钙浓度[Ca2+]i为(194.0±24.8) nmol/L,未预处理组为(297.5 ±24.5) nmol/L;无外钙预处理组缺氧再给氧后其心肌细胞[Ca2+]i为(162.0 ±30.7) nmol/L,未预处理组为(236.5±28.3) nmol/L,提示缺氧预处理可减少缺氧再给氧所致心肌细胞内钙释放及外钙内流.在[Ca2+].为1.0 mmol/L组,于预处理前分别预先给予PKC拮抗剂Staurosporine(10 nmol/L)及Gi-蛋白失活剂百日咳毒素(PTX,200 ng /L),可见经后继缺氧再给氧后其心肌细胞[Ca2+]i分别为(264.8±19.3)及(25 8.0±27.7) nmol/L,高于缺氧预处理组但低于未预处理组.结论:SH R肥大心肌细胞,缺氧预处理可减轻后继缺氧再给氧所致心肌细胞内钙超载;PKC及PTX敏感的G- 蛋白可能部分参与缺氧预处理的保护作用.     

牛磺酸对烧伤大鼠心肌细胞浆、线粒体及核内钙含量变化的干预作用

目的探讨大鼠烧伤后心肌细胞胞浆、线粒体、核内钙含量变化及牛磺酸的干预作用。方法大鼠30%Ⅲ度烫伤(烧伤组),伤后即刻腹腔注射2%牛磺酸液(200mg/kg体质量,牛磺酸治疗组)。两组均于伤后1、3、6、12、24、48h检测核膜Ca2 -ATP酶活性,核、胞浆、线粒体钙含量。37℃假烫伤为对照组,1h后检测上述各项为对照值。结果大鼠伤后心肌细胞核Ca2 -ATP酶活性明显下降,而核内、胞浆、线粒体钙含量均明显升高。牛磺酸治疗组核Ca2 -ATP酶活性明显高于烧伤组,胞浆、线粒体、核钙含量均明显低于烧伤组。结论大鼠烧伤后心肌细胞胞浆、线粒体、核钙含量均明显升高,牛磺酸具有较好的拮抗作用。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.