京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响

【目的】研究京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响,并探讨其机制。【方法】培养SD大鼠前列腺成纤维细胞,取对数生长期的细胞随机分成4组：对照组、京尼平苷10mg/L、20mg/L和40mg/L组。不同浓度的京尼平苷孵育大鼠前列腺成纤维细胞48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白的含量。【结果】与对照组比较,京尼平苷20mg/L和40mg/L可显著抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,促进其凋亡（P〈0.01）,同时减少TGF-β1的分泌和胶原的合成（P〈0.05或P〈0.01）。【结论】京尼平苷可抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖,可能与其减少TGF-β1的分泌和胶原的合成、促进前列腺成纤维细胞的凋亡有关。     

肾上腺髓质素对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对幼年大鼠心肌成纤维细胞(FBC)增殖的影响,并探讨其可能的作用受体.方法:用差速贴壁分离法获得心肌成纤维细胞为材料,用免疫组化的方法鉴定细胞,并绘制生长曲线.用MTT比色法测定细胞增殖.结果:①ADM对基础状态下的FBC增殖无明显抑制作用,但能呈浓度依赖性地抑制Ang Ⅱ刺激的FBC增殖.②CGKP8-37和ADM22-52均能部分拮抗ADM对Ang Ⅱ的抑制作用,而二者合用几乎能完全拮抗.CGRP8-37对ADM的拮抗作用强于ADM22-52.结论:①M具有浓度(10-8M～10-5M)依赖性地抑制Ang Ⅱ介导的FBC增殖的作用.②心肌成纤维细胞上可能同时存在CGRP受体和ADM特异性受体,但其作用可能更多通过CGRP受体.     

氯化胆碱对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的 探讨氯化胆碱对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响.方法 体外培养新生Wistar大鼠心肌成纤维细胞,分为对照组、Iso组和Iso+氯化胆碱组.各组药物分别作用48 h.应用MTF实验方法检测心肌成纤维细胞增殖,羟脯氨酸试剂盒检测胶原合成.结果 10-4 mol/L Iso明显促进CFs增殖(P＜0.05),1 mmol/L氯化胆碱明显抑制10-4 mol/L Iso诱导的成纤维细胞增殖(P＜0.05)与胶原合成(P＜0.05).结论 氯化胆碱抑制异丙肾上腺素诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成.     

广枣总黄酮对体外培养大鼠心脏成纤维细胞周期影响

目的：研究广枣总黄酮（totalflavonesoffructuschorspondiatis,TFFC）对血管紧张素Ⅱ（angiontensin,AngII）诱导大鼠心脏成纤维细胞（cardiacfibroblasts,CFs）细胞周期的影响,并进一步探讨其与一氧化氮（nitricoxide,NO）-一氧化氮合酶（nitricoxidesynthase,NOS）系统的关系.方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系：采用流式细胞仪（flowcytometry,FCM）分析技术检测细胞周期;采用化学比色法测定CFs培养上清乳酸脱氢酶（1actatedehydrogenase,LDH）水平;采用硝酸还原酶法测细胞培养液中NO水平;化学比色法测细胞上清液中NOS水平。结果：25、50、100mg／L的TFFC作用72h后,CFs的G0／G1期细胞百分率较AnglI组显著增高（P〈0．01,P〈0．05）,S期细胞百分率,G2／M期细胞百分率和增殖指数（proliferationindex,PI）则显著低于对照组（P〈0．01,P〈0．05）,且随着作用浓度的增加,TFFC对细胞周期的影响逐渐增强。100mg／L的TFFC干预72h后,CFs培养上清NO浓度为（23．23±0．70）μmol／L,与AngII组（20．20±0．83）μmol／L相比,差异非常显著（P〈0．01）;培养上清NOS活性为（20．43±0．53）U／L,和AngⅡ组（20．90±0．85）U／L相比,亦有非常显著性差异（P〈0．01）oNO浓度和NOS活性呈显著正相关（r=0．964,P〈0．01）o结论：TFFC能够抑制AngⅡ诱导大鼠CFs的细胞周期增殖,其效应可能与上调No—NOS系统活性有关。     

胱抑素C对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨胱抑素C（CysC）高表达对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖能力的影响。方法 取出生1～3d的Sperague-Dawley（SD）清洁级大鼠10只,体质量10～15g,差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞;采用Gateway技术构建重组CysC腺病毒高效表达载体(Ad-CysC)并体外转染大鼠CFs;将对数生长期的大鼠CFs随机分成正常细胞组（PBS组）,携有绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒组（Ad-GFP组）及CysC腺病毒高表达组(Ad-CysC组)。采用蛋白免疫印迹技术（WB）检测CysC蛋白在CFs中的表达情况,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测CysC高表达对CFs增殖能力的影响。结果 经DNA测序及WB结果分析,CysC腺病毒高效表达载体构建成功,转染CFs 24h后（MOI=200）,Ad CysC的转染效率高达90%以上;用重组CysC腺病毒转染CFs后, CysC蛋白在24h即有明显的表达上调（P<0.05）;与PBS组及Ad-GFP组相比,转染Ad-CysC的CFs在72h的 BrdU摄取率显著提高（P<0.05）。结论 大鼠CysC腺病毒高效表达能够促进CFs增殖,可能加速心肌纤维化进程。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖（CF）和胶原合成的影响,并探讨其是否通过cAMP/PKA通路进行介导抗纤维化作用。方法：①细胞分离培养与鉴定：用酶消化法分离细胞,差速贴壁法纯化获得心室肌成纤维细胞为材料,用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。②检测方法：WST-1比色法测定细胞增殖情况,放射免疫法测定Ⅲ型胶原前胶原末端肽（PCⅢ）的含量。结果：①与空白组比较,Ang-（1-7）组呈浓度依耐性抑制基础状态下CF和PCⅢ分泌（P〈0.05）;②在TGF-β1诱导状态下,与TGF-β1组比较,Ang-（1-7）＋TGF-β1组呈浓度依耐性抑制FBC增殖和PCⅢ分泌（P〈0.05）;③与Ang-（1-7）比较,Ang-（1-7）＋H-89组基础状态下抑制CF增殖和PCⅢ分泌能力减弱（P〈0.05）;④在TGF-β1诱导状态下,H-89（PKA抑制剂）能阻断Ang-（1-7）对CF的增殖和胶原合成的抑制作用。结论：1.Ang-（1-7）对基础状态下或TGF-β1诱导下CF增殖和胶原合成均具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。②Ang-（1-7）是通过PKA介导抑制TGF-β1诱导CF增殖及胶原合成。     

二苯乙烯苷对TGF-β1诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷,TSG)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并研究其相关机制。用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立TGF-β1诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测CFB增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)法检测药物对细胞毒性作用;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞仪测定细胞周期;Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、p-ERK、ERK、p-P38、P38、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果表明,终浓度为0.1~100 μmol/L的TSG无明显细胞毒性作用;在一定浓度范围内,TSG可明显抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,抑制细胞由G₀/G₁期向S期的转变,抑制TGF-β1诱导的CFB核内PCNA的蛋白表达,降低α-SMA、COLⅠ和COL Ⅲ的过度表达,并抑制TGF-β1诱导的Smad3、ERK和P38的磷酸化。因此推测一定浓度的TSG能抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,其机制可能与干预Smad3、ERK和P38信号通路有关。     

靶向沉默SIRT1对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探究沉默信息调节因子1(SIRT1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响作用.方法 应用转化生长因子-β1处理乳鼠原代心肌成纤维细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SIRT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、α-SMA的蛋白表达水平;MTT法检测心肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向乳鼠原代心肌成纤维细胞中转染siRNA-SIRT1.结果 转染siRNA-SIRT1的心肌成纤维细胞,SIRT1蛋白和mRNA 表达下降,同时α-SMA蛋白和mRNA表达下降;转染siRNA-SIRT1明显抑制心肌成纤维细胞的增殖活性.结论 siRNA-SIRT1对心肌成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,SIRT1可能成为心脏结构重构防治的新靶点,其调控剂的应用将为心肌纤维化的防治提供新的思路和方案.     

普伐他汀对大鼠心肌成纤维细胞增殖和前胶原基因表达的影响

目的:探讨普伐他汀(Pray)对培养的Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖及前胶原基因表达的影响.方法:取1～3日龄Wistar大鼠心室,以酶消化法分离培养大鼠CF.分组①空白对照组:不加干预药物;②不同浓度Prav组:Prav10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L;③血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)组:Ang Ⅱ 10-6mol/L;④Ang Ⅱ+Prav组:各组在加入Ang Ⅱ 10-6mol/L基础上再分别加入Pray10-6nol/F、10-5mol/L、10-4mol/L.MTT法测定细胞增殖,KT-PCR方法测定Ⅰ型前胶原基因(P Ⅰ Cp)的含量.结果:①AngⅡ和Prav浓度组两个因素之间没有交互作用(P=0.144),Prav各浓度组明显抑制CF的增殖(F=6.547,P<0.001),Prav10-4mol/L组抑制作用最明显.②AngⅡ能刺激P Ⅰ CP mRNA的表达,Prav各浓度组可明显抑制AngⅡ刺激下P Ⅰ CP mRNA的表达(F=1926.758,P<0.001),其作用具有浓度依赖性.结论:Prav呈浓度依赖性地抑制基础状态和AngⅡ介导的CF增殖和Ⅰ型前胶原的合成.     

野菊花总黄酮对大鼠肺纤维化的干预作用

目的 研究野菊花总黄酮(TFC)对大鼠肺纤维化(PF)的预防作用.方法 30只Wistar大鼠,随机均分为假手术对照组、模型组、TFC(168、336 mg/kg)组、强的松组.除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸平阳霉素诱导PF模型.次日TFC两组和强的松组分别给予TFC 168、336 mg/kg及强的...     

化学合成 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的：探究 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法应用 LipofectamineTM 2000 Reagent 向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染 microRNA-21 in-hibitors 24、48 h 后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测 microRNA-21、I 型胶原前胶原 A1(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;Western blot 法检测 Col1A1和α-SMA 的表达水平;MTT 法检测 microRNA-21 inhibitors对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。结果转染 microR-NA-21 inhibitors 的心肌成纤维细胞中,microRNA-21表达下调,Col1A1和α-SMA 的表达下降;转染 microRNA-21 inhibi-tors 的心肌成纤维细胞增殖活性明显减弱。结论 microR-NA-21 inhibitors 可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,提示microRNA-21是心肌成纤维细胞活化增殖的潜在靶向分子,有利于为干预和预防心肌纤维化的发生发展提供新思路。     

辛伐他汀对鼠心脏成纤维细胞DNA合成的影响

目的探讨辛伐他汀(Sim)对新生SD大鼠心脏成纤维细胞(CFs)DNA合成的影响及甲羟戊酸(MVA)的干预效应。方法采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定DNA合成,观察不同浓度Sim及MVA分别作用不同时间对CFsDNA合成功能的影响。结果 (1)CFs的3H-TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低,其中10-6和10-5mol／L Sim组的3H-TdR掺入率分别为(1175±202．66)、(771±164．86)cpm／2000细胞, 显著低于对照组的(1608±204．32)cpm／2000细胞(均P<0．01);(2)10-5mol／L Sim作用CFs 6、12、18、24、30、36、42、48 h, 随着Sim作用时间的延长,CFs的3H-TdR掺入率呈递减趋势,与时间呈明显的负相关(r=-919,P<0．01);(3)CFs的3H-TdR 掺入率随着MVA干预浓度的增加呈进行性上升,其中10-4、10-3 mol／L MVA 10-5 mol／LSim组3H-TdR掺入率分别为 (1612±308．57)、(1995±353．83)cpm／2000细胞,显著高于对照10-5mol/L Sim组的(771±164．86)cpm／2000细胞(P<0．01); (4)10-3 mol／L MVA分别作用CFs 6-48 h,CFs的3H-TdR掺入率随着MVA作用时间的延长而逐渐增加,呈明显的正相关(r=0．968,P<0．01)。结论 Sim呈浓度-时间依赖方式抑制CFs DNA的合成且可被MVA拮抗,提示Sim可抑制CFs 增殖,延缓心肌纤维化,其作用可能通过MVA途径实现。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

过表达LncRNA GAS5对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的 应用长链非编码RNA GAS5 (LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响.方法 提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1 (TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性对照组和空白对照组,应用LncRNA GAS5基因的过表达质粒 (pEGFP-C1-GAS5)通过脂质体瞬时转染细胞,48 h后收获细胞.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测GAS5、Ⅰ型胶原前胶原(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot分析Col1A1和α-SMA蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖活力.结果 TGF-β1刺激心肌成纤维细胞后,qRT-PCR结果显示 LncRNA GAS5的表达量较正常组下降(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,转染了pEGFP-C1-GAS5的实验组,qRT-PCR结果显示实验组的GAS5表达均明显升高(P<0.05),同时α-SMA和Col1A1 mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot结果显示转染pEGFP-C1-GAS5的实验组α-SMA和Col1A1蛋白表达量均明显降低(P<0.05);MTT法检测结果表明在实验组心肌成纤维细胞的增殖活力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 过表达LncRNA GAS5可显著降低心肌成纤维细胞的增殖活力,提示GAS5有抑制心肌成纤维细胞的活化增殖的作用,为以后进一步研究提供依据.     

Inhibitory Mechanism of Inteferon-gamma on Human Fibroblasts from Tenon＇s Capsule

The inhibitory mechanism of interferon-gamma (IFN-γ) on the fibroblasts from Tenon‘s capsule was studied. By using immunohistochemical SP method and pathological image system, the inhibitory effects of IFN-γ on the expression of transforming growth factor beta receptor I in the in vitro cultured fibroblasts from Tenon‘s capsule were quantitatively analyzed. The results showed that IFN-γ could reduce the expression of transforming growth factor beta receptor I in the fibroblasts with the following dose-effect relationship: Y= 1937.5—134.2 Igx (r=- 0. 971, P＜0.01).It was concluded that IFN-γ could inhibit the expression of transforming growth factor beta receptor I in the fibroblasts from Tenon‘s capsule. The modulation of the transforming growth factor beta receptor I expression by IFN-γ, may be beneficial to the alleviation of the hyperplasia of scar after trabeculectomy.     

荞麦花叶总黄酮对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的保护作用及其机制

目的：探讨荞麦花叶总黄酮（TFBFL）对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用,阐明其作用机制。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）加高脂饲料的方法建立2型糖尿病大鼠模型。造模成功的12只大鼠随机分为模型（DM）组（n=6）和TFBFL治疗组（n=6）,同时设正常对照组（n=8）,正常对照组和DM组大鼠给予10 mL·kg^-1·d^-1纯净水灌胃;TFBFL治疗组大鼠给予200 mL·kg^-1·d^-1 TFBFL灌胃。各组大鼠每天给药1次,连续8周。检测各组大鼠体质量（BW）、心脏质量指数（HWI）、血糖水平（FBG）及心功能指标[心率（HR）、左室收缩压（LVSP）、左心室舒张期末压（LVEDP）和左室内压最大上升和下降速率（±dp/dt_max）]。电镜下观察各组大鼠心肌细胞超微结构,Masson染色观察各组大鼠心肌组织中的胶原水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,DM组大鼠HWI、FBG和LVEDP明显升高（P < 0.05或P < 0.01）,而BW、LVSP、HR和±dp/dt_max则明显降低（P < 0.05或P < 0.01）;与DM组比较,TFBFL组大鼠FBG和LVEDP水平明显降低（P < 0.01）,而LVSP、HR和±dp/dt_max明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。TFBFL组大鼠BW和HWI与DM组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。电镜下观察和Masson染色检测,与DM组比较,TFBFL组大鼠心肌组织形态明显改善,胶原水平降低。Western blotting检测,与正常对照组比较,DM组大鼠心肌组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）;与DM组比较,TFBFL组大鼠心肌组织中TGF-β1蛋白表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：TFBFL对2型糖尿病大鼠心肌纤维化具有保护作用,其机制与抑制心肌组织中TGF-β1表达有关联。     

Transplantation of 5-azacytidine treated cardiac fibroblasts improves cardiac function of infarct hearts in rats

Background Cellular cardiomyoplasty by transplantation of various cell types has been investigated as potential treatments for the improvement of cardiac function after myocardial injury. A major barrier for the clinical application of cell transplantation is obtaining sufficiently large quantities of suitable cells. AIIogeneic cellular cardiomyoplasty may provide an alternative source of abundant, transplantable, myogenic cells by in vitro manipulation of cardiac fibroblasts using chemicals including 5-azacytidine. This study evaluated cardiomyogenic differentiation of cardiac fibroblasts, their survival in myocardial scar tissue, and the effect of the implanted cells on heart function. Methods Primary cardiac fibroblasts from neonatal rats were treated with 5-azacytidine （10 pmol/L） or control. Treatment of 5-azacytidine caused myogenic differentiation of cultured cardiac fibroblasts, as defined by elongation and fusion into multinucleated myotubes with sarcomeric structures as identified by electron microscopy, and positive immunostaining for cardiac specific proteins, troponin I and 13-myosin heavy chain （13-MHC） and the gap junction protein connexin 43. The myogenic cells （1.0x106） were transplanted into the infarcted myocardium 2 weeks after coronary artery occlusion. Results By 1 month after transplantation, the converted fibroblasts gave rise to a cluster of cardiac-like muscle cells that in the hearts occupied a large part of the scar with positive immunostaining for the myogenic proteins troponin I and 13-MHC. Engrafted cells also expressed the gap junction protein connexin 43 in a disorganized manner. There was no positive staining in the control hearts treated with injections of culture medium. Heart function was evaluated at 6 weeks after myocardial injury with echocardiographic and hemodynamic measurements. Improvement in cardiac function was seen in the hearts transplanted with the 5-azacytidine-treated cardiac fibroblasts which was absent in the hearts treated with control. Conclusion The 5-azacytidine has a unique capacity to induce myogenesis in cardiac fibroblasts in vitro and transplantation of cardiac-like muscle cells into ventricular scar tissue improves myocardial function.     

BMP-7防治实验性肝纤维化的研究

目的观察骨形态发生蛋白-7（bone morphogenefic protein-7,BMP-7）对实验性肝纤维化的影响。方法运用猪血清腹腔注射法．诱导免疫性大鼠肝纤维化模型。实验动物分为5组：肝纤维化模型组、早期治疗组、后期治疗组、预防组、对照组。预防组从实验开始、早期治疗组从实验第2周、晚期治疗组从实验第4周腹腔注射外源性BMP一7．每周3次：对照组注射等剂量生理盐水。采用免疫组化和Western印迹法检测BMP-7对实验性肝纤维化大鼠肝组织中转移生长因子β1（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）表达的影响。结果实验性肝纤维化大鼠的早期治疗组、后期治疗组和预防组的肝纤维化级别与模型组之间的差异均有统计学意义（P〈0．05）;预防组和治疗组中BMP-7可以抑制纤维化肝组织中TGF-β1的表达,治疗组中的TGF-β1的表达较模型组中明显减少（P〈0．05）。结论BMP-7有效预防和治疗实验性肝纤维化,其机制可能与抑制纤维化肝组织中的TGF-β1的表达有关。