六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果　HL 6 0、U937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、U937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、U937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在U937细胞则无显著改变。结论　HMBA能诱导HL 6 0、U937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、U937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。     

六亚甲基二乙酰胺诱导HL-60细胞分化及其分子机制的研究

本研究探讨六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对髓系白血病HL-60细胞分化的作用及其分子机制。应用MTT比色法观察不同浓度HMBA在不同时间点对细胞增殖的抑制作用，采用Wright—Giemsa染色观察细胞形态学变化，运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b的表达，并进行细胞周期分析，半定量RT—PCR分析c-myc、mad1、p21、p27、hTERT、HDAC1基因mRNA的表达。结果表明：HL-60细胞经不同浓度（0．5、1、2mmol/L）HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制，并随时间延长、剂量增大抑制作用明显增强。HL-60细胞经2mmol／L HMBA处理后，细胞形态学上趋于分化成熟，细胞停滞于G0／G1期；CD11b表达显著增高；c-myc、hTERT mRNA表达显著下调，mad1、p21、p27mRNA表达显著上调，而HDAC1 mRNA表达无明显变化。结论：HMBA能诱导HL-60细胞分化，其分子机制可能是通过调节c-myc／mad1开关引起p21、p27上调，并且下调hTERT mRNA表达，与HDAC1活性抑制无关。     

六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响

六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisecetamide,HMBA)是一种极性诱导分化剂，已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)，但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL—60白血病细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响，以探讨其药理机制。用流式细胞术检测HMBA对HL—60细胞细胞周期分布和细胞周期蛋白D、E及p27表达的影响。用RT—PCR研究HMBA对细胞周期负性调控分子CKI p15，p16，p27基因mRNA表达的影响。结果表明，HMBA主要使HL—60细胞阻滞于G0/G1期，经HMBA处理后HL-60细胞胞浆内细胞周期蛋白E蛋白表达显降低，而细胞周期蛋白D和p27蛋白表达则显增高；未经HMBA处理的HL-60细胞p15，p16 mRNA均无表达；3mmol／L HMBA处理24小时后p15 mRNA出现弱阳性条带，48小时和72小时后出现强阳性条带，p16 mRNA则在48小时后出现弱阳性条带，72小时后出现强阳性条带；p27 mRNA在未经处理和处理后24，48和72小时后均出现强阳性条带，阳性程度无明显差异。结论：HMBA的药理机制之一可能是通过下调细胞周期蛋白E，上调p27蛋白的表达，同时使得p15，p16基因mRNA重获表达。阻滞HL—60细胞周期于G1期，从而发挥其抗增殖作用。     

CAG方案对HL-60细胞及耐药株作用机理的研究

目的研究小剂量阿糖胞苷和阿克拉霉素联合G-CSF（CAG方案）对HL-60细胞及其耐药株HL-60／A的作用机理。方法以白血病细胞株HL-60及其耐药株HL-60／A为实验模型，模拟临床给药方式，体外加入Ara-C、ACR、G-CSF三药，作用24、48小时后收集细胞，分别进行细胞计数，细胞形态观察，MTr法检测不同药物对两种细胞株的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记Anncxin V，细胞分化抗原CD11h以及进行细胞周期分析。结果经CAG作用48h后，两种细胞株数量明显减少，形态显示凋亡小体增多；早期凋亡标记Annexin V明显增高，CD11b表达轻度升高，与CA组比较，结果有显著差异（P〈0．05）。细胞周期分析显示，CAG作用24h后，与CA组比较，S期细胞比例增高（P〈0．05）；48h后比例下降，结果未见明显差异（P〉0．05）。HL-60细胞与HL-60／A细胞比较，两种白血病细胞株经CAG作用48h后，在细胞数量、细胞形态、凋亡细胞比例、CD11b表达及S期细胞比例的改变方面未见明显差异。结论CAG方案对白血病细胞株HL-60、HL-60／A的作用机制主要是通过GCSF促使白血病细胞进入细胞周期S期，增加小剂量Ara-C、ACR对自血病细胞的细胞毒性，以诱导细胞凋亡为主，轻度诱导分化。     

脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能，消除AML1-ETO的转录抑制，诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用。方法 应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达，Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡。结果 ①PB明显抑制Kasumi—1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为2．3mmol/L；②经PB作用后细胞阻滞于G0／G1期，伴有S期细胞减少；③PB可诱导Kasumi—1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加，并呈剂量和时间依赖性；④PB诱导Kasumi-1细胞凋亡，呈时间剂量依赖性，PB3mmol/L培养2d早期凋亡细胞增加，培养3d晚期凋亡细胞增加，培养5d出现明显DNA梯形条带；⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi—1细胞生长，使细胞阻滞于G0／Gl期；诱导细胞部分分化和凋亡。     

维生素K2对NB4细胞生长、凋亡、周期阻滞及分化的诱导作用

目的研究维生素K2(VK2)对NB4细胞生长、凋亡、周期阻滞及分化的诱导作用。方法通过四唑盐比色法、形态学观察、流式细胞仪检测细胞早期凋亡率、细胞周期分析、NBT还原法和流式检测CD14、CD11b阳性率研究维生素K2对NB4细胞的影响。结果NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制;VK2作用NB4细胞72h后,细胞形态呈现凋亡特征,细胞早期凋亡率随浓度升高而升高,与对照组比较及两两比较P<0.01;各药加组G0/G1期细胞均较空白对照组升高,各加药组与空白对照组比较P<0.01,但各加药组之间两两比较无统计学意义;各加药组NBT阳性率、CD14、CD11b表达均较空白对照组无统计学意义。结论VK2对NB4细胞有生长抑制作用,且具有时间及剂量依赖性;VK2可诱导NB4细胞凋亡,且呈剂量依赖性;VK2可诱导NB4细胞周期受阻于G0/G1期,但细胞周期阻滞作用无量效关系;VK2无单独诱导NB4细胞分化作用。     

热休克蛋白90抑制剂诱导Kasumi-1细胞凋亡和分化的机制探讨

目的探讨热休克蛋白90（HSP 90）抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素（17AAG）诱导白血病细胞生长抑制、分化和凋亡作用.方法应用MTT比色法观察17AAG对白血病细胞系Kasumi-1细胞的生长抑制作用,用流式细胞术分析细胞周期和分化抗原的表达,用Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测干细胞因子受体（KIT）蛋白水平,RT-PCR测定c-kit mRNA水平.结果17AAG明显抑制Kasumi-l细胞的生长,半数抑制浓度（IC50）为0.62 μmol/L;17AAG诱导Kasumi-1细胞凋亡呈时间、剂量依赖性,17AAG处理24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加,早期凋亡细胞减少.17AAG可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CD11b及CD15表达增加,并呈剂量和时间依赖性.经17AAG作用后细胞阻滞于G0/G1期,伴有S期细胞减少.Western blot检测发现17AAG可降低KIT水平,处理2 h开始减少,处理20 h后KIT基本消失,但c-kit mRNA水平并未受影响.结论HSP 90抑制剂17AAG通过降解KIT蛋白抑制Kasumi-1细胞生长,使细胞阻滞于G0/G1期,诱导其发生凋亡及部分分化.     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相对人白血病细胞K562增殖及分化的影响

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制和诱导分化作用及其相关作用机制。方法:不同浓度DPSS(0、25、50、100和200μg/ml)分别作用于细胞24、48和72 h后，采用MTT法检测K562细胞增殖情况；应用流式细胞术检测不同浓度DPSS对K562细胞凋亡、周期阻滞的影响；应用瑞氏-吉姆萨染色观察DPSS作用后K562细胞形态学的变化并应用流式细胞术验证分化相关抗原CD33、CD11b的表达。结果:与对照组比较，加药组各浓度DPSS均对K562细胞的增殖有明显抑制作用，并且存在时间剂量依赖性(r=-0.96);细胞周期分析结果表明，随着DPSS浓度升高，G₂/M期细胞增多(r=0.88),细胞被阻滞在G₂/M期；流式细胞术结果显示，当200μg/ml DPSS作用48 hK562细胞凋亡率最高；瑞氏-吉姆萨染色结果显示，DPSS作用后K562细胞出现胞体增大，包浆量增多，核浆比减小，核染色质粗糙等分化表现；细胞分化抗原检测发现，DPSS作用后CD33、CD11b呈阳性表达。结论:DPSS可以...     

原花青素诱导HL-60细胞分化及其机制的研究

本研究旨在探讨原花青素(proanthocyanidin,PAC)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的可能机制。用PAC 20 mg/L处理HL-60细胞24 h,CCK-8法检测细胞生长状况,分析PAC对HL-60细胞的增殖影响;应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞周期变化和测定细胞分化抗原CD14、CD11b表达;Western blot检测P21、Cyclin D1和CDK4表达变化。结果表明,PAC 20 mg/L作用HL-60细胞24 h,细胞抑制率明显增高(73.2±1.5)%(P<0.01),髓系细胞分化抗原CD14表达明显增高(P<0.01),CD11b表达稍增高,细胞周期中G0/G1期细胞百分率明显增高(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01);PAC 20 mg/L与HL-60细胞共培养4 h,部分细胞向成熟阶段细胞分化;PAC 20 mg/L处理HL-60细胞12、24和48 h,P21蛋白表达增加,Cyclin D1和CDK4蛋白表达降低。结论:PAC能抑制HL-60细胞增殖并诱导其分化,细胞周期阻滞于G0/G1,其机制可能与P21蛋白表达上调和Cyclin D1及CDK4蛋白表达下调有关。     

周期蛋白A在白血病细胞中表达意义的临床与实验研究

不断增殖是肿瘤的基本特征。一些基本的细胞周期调控分子参与了肿瘤的形成。细胞周期蛋白A(cyclinA)是在Gl／S期表达的细胞周期蛋白(cyclin)，其异常高表达参与了肿瘤的形成。为了探讨cyclin A异常高表达与白血病细胞恶性增殖的关系，采用流式细胞仪胞浆内间接免疫荧光／DNA双染色法半定量分析了急性白血病患、门诊接受骨髓穿刺的患、健康献血这三种不同来源的外周血或骨髓标本细胞，以及白血病细胞系(HL—60)cycl?nA表达水平。为了进一步研究cyclinA在白血病细胞增殖中的作用，用在体内、体外均有抗肿瘤作用的六亚甲基二乙酰胺(HMBA)在体外抑制白血病细胞系HL—60增殖，并诱导其分化。增殖抑制效应采用四唑盐还原试验和细胞周期分析来检测。细胞表面分化抗原CD33、CDllb改变来检测分化。结果发现，两组来自白血病标本的细胞S期cyclin A(即急性白血病患外周血或骨髓幼稚细胞和白血病细胞系)表达阳性率要远远高于另两组(门诊骨髓穿刺的患骨髓细胞和健康献血员外周血细胞)；在HMBA抗肿瘤细胞系HL—60增殖实验中发现随药物剂量的加大，增殖抑制和分化程度呈剂量依赖性；同时，胞内cyclinA蛋白表达水平被明显下调了，也呈剂量依赖性。结论：白血病细胞S期cyclin A异常高表达，HMBA能下调S期cyclin A表达水平，且随着胞内S期cyclinA表达下调，细胞增殖被抑制和分化程度亦不断加深，两均呈剂量依赖性，这证明了下调cyclinA表达是HMBA技白血病细胞系增殖的主要机理，同时提示cyclinA的异常高表达参与了白血病恶性增殖的环节。     

小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

目的 研究小剂量亚硒酸钠（2－5μmol/L）与全反式维甲酸（ATRA）联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法 采用膜联蛋白V（Annexin-V)荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸（PS）外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞术检测粒系分化细胞表达特异抗原CD11b表达，NBT还原实验检测细胞分化。结果 阴性对照组细胞PS外翻率为1．2％，5μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞48h后PS外翻率为0.8%,0.1μmol/L ATRA诱导48h后PS外翻率为2．0％，与对照组相比，差异均无显著性,而两者联合作用NB4细胞24，36，48h后的PS外翻率分别达到18.3%,25.9%,50.0%,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量（2μmol/L）亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用0．1μmol/L的ATRA钠没有诱导NB4细胞分化的能力，但其与0．1μmol/L的ATRA联合使用单独使用0．1μmol/L的ARTA相比，CD11b表达阳性细胞率进一步增加，NBT还原能力也进一步增强。结论 小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。     

二乙酰己二胺治疗高危型骨髓增生异常综合征的研究

本研究探讨癌细胞诱导分化剂二乙酰己二胺(CAHB)对高危型骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效,查明其在体外对HL-60细胞的作用及可能机制.高危型MDS患者8例,给予CAHB治疗2个疗程,用药前后计数骨髓原幼粒细胞和单核细胞的比例.在体外试验中用MTT法检测CAHB对HL-60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术(FCM)检测CAHB时HL-60细胞表面CD11b和CD14分化抗原表达的影响,Annexin V/PI双染色法检测CAHB诱导HL-60细胞凋亡的作用,FCM检测CAHB对HL-60细胞周期分布的影响.结果表明,8例患者用CAHB治疗后.骨髓的原幼粒细胞和单核细胞比例有不同程度的下降,造血系统毒副反应主要是血小板减少.MTT检测发现,HL-60细胞经1、2、3、4 mmol/L CAHB作用72小时后,HL-60细胞的增殖受到抑制,并且该作用随药物浓度的增加而增强.HL-60细胞分别经1、2、3、4 mmol/L CAHB作用72小时后,CDIlb的阳性表达率为(22.39±3.97)%、(33.12±4.46)%、(49.25±5.27)%和(78.05±5.66)%,与空白对照组的(5.89±2.94)%比较,差异有统计学意义(p＜0.01).而CD14的表达在各组细胞中均为阴性,这表明CAHB可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系分化,并且该作用随药物浓度的增加而增强.HL-60细胞经1、2、3、4 mmol/L CAHB作用72小时后,其凋亡率(Annexin /PI-)仅较空白对照组略有增加.此结果提示在1-4 mmol/L浓度下,CAHB诱导HL-60细胞凋亡的作用很微弱.HL-60细胞经1、2、3、4 mmol/L CAHB作用72小时后,随药物浓度的增加,G0/G1期细胞的比例逐渐增加,而S期和G2/M期细胞的比例相应地逐渐减少,这表明CAHB能阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并且该作用随药物浓度的增加而增强.结论CAHB对MDS有减少原幼粒细胞和单核细胞的作用,该治疗作用可能主要是通过诱导分化实现的,在治疗浓度时无诱导凋亡的作用,细胞周期的阻滞作用可能是CAHB诱导分化的基础.用药后血小板减少的副作用可能与CAHB的抑制造血相关.     

1,25-二羟基维生素D_3诱导HL-60细胞分化并下调nm23基因的表达

目的　观察 1,2 5 二羟基维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 D3 ]对白血病细胞株HL 6 0的诱导分化作用并探讨其机制。方法　通过MTT试验、细胞形态观察、表面标志分析和硝基四氮唑蓝 (NBT)还原反应 ,观察 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后HL 6 0细胞增殖的改变和分化情况 ;通过流式细胞仪和RT PCR检测细胞周期和nm2 3基因表达的变化。结果　HL 6 0细胞经 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后增殖受抑制、向成熟单核细胞系分化、细胞被阻滞在G1 期、nm2 3基因的表达下调。结论　 1,2 5 (OH) 2 D3 对HL 6 0细胞株具有诱导分化作用 ,其作用机制可能与下调nm2 3基因的表达有关。     

四嗪二甲酰胺对人白血病细胞系SHI-1细胞体外作用的研究

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞系 SHI-1细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并初步探讨其作用机制。方法将不同浓度 ZGDHu-1与 SHI-1细胞在体外共培养,用细胞计数、锥虫蓝染色、MTT 法、5′-溴-2′脱氧尿苷(Brdu)-ELISA 法观察 ZGDHu-1对 SHI-1细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA 含量测定及细胞周期分析、膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(Annexin Ⅴ/P1)双标记和 Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡。通过 NBT 试验、细胞表面抗原 CD11b、CD14、CD64检测和细胞形态学观察分化情况。用流式细胞术检测 ZGDHu-1诱导 SHI-1细胞分化和凋亡过程中 P38MAPK 和 STAT3磷酸化表达的变化。结果 ZGDHu-1能抑制 SHI-1细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系,48和72h/C_(50)值分别为250ng/ml,85 ng/ml。ZGDHu-1作用于 SHI-1细胞后大部分细胞阻滞于 G_2/M 期,200ng/ml ZGDHu-1作用48h,SH-1细胞 G_2/M 期比例为(48.4±2.1)%;出现典型的细胞凋亡形态改变,DNA 片断化,检出亚 G_1峰,AnnexinⅤ/PI 和 Hoechst 33258荧光染色显示凋亡细胞的特征性改变。SHI-1细胞经2～50ng/ml ZGDHu-1作用3 d 后,细胞发生部分分化,NBT 阳性率增加,细胞表面 CD11b、CD14、CD64表达上调。ZGDHu-1作用 SHI-1细胞后磷酸化P38MAPK 表达增强,而磷酸化 STAT3表达降低。结论 ZGDHu-1能抑制 SHI-1细胞增殖和细胞活力.诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与 P38MAPK 的活化增强和 STAT3的活化抑制有关。     

伊马替尼体外诱导Kasumi-1细胞增殖、分化与凋亡作用

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼诱导携带c-k it突变的细胞增殖、分化与凋亡的作用。方法应用MTT比色法观察伊马替尼对Kasum i-1细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期、c-k it抗原和髓系分化抗原CD11b、CD13和CD15的表达,AnnexinⅤ标记和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡,应用W estern b lot方法分析Kasum i-1细胞c-k it蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果伊马替尼呈时间和剂量依赖性抑制Kasum i-1细胞生长,72 h半数抑制浓度(IC50)为4.45μmol/L;伊马替尼5.00μmol/L使Kasum i-1细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;髓系分化抗原CD11b、CD13和CD15表达增加;作用24 h,早期凋亡细胞比例由9.04%升至86.84%(P<0.05),培养第5天出现明显DNA梯形条带;作用72 h,Kasum i-1细胞中c-k it蛋白酪氨酸磷酸化水平下降。结论酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼能够抑制携带c-k it突变的细胞的生长,诱导细胞分化和凋亡。