CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.     

CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.     

CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.     

大鼠心脏移植排斥反应时细胞间粘附分子-1的表达及霉酚酸酯对其的抑制作用

目的　探讨大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间移植心组织细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达及霉酚酸酯（MMF）对移植心ICAM-1表达和排斥反应的抑制作用。方法　建立大鼠心脏腹腔移植模型,设Wistar到Wistar大鼠的同系心脏移植对照组、SD大鼠到Wistar大鼠的同种移植组和同种移植MMF治疗组。采集移植心组织标本行免疫组织化学和组织病理学检查,应用多媒体彩色图文分析系统对移植心组织ICAM-1的表达进行定量检测。结果　对照组移植心组织ICAM-1表达较弱;同种移植组在排斥反应期间移植心组织毛细血管内皮细胞ICAM-1的表达强度和数量明显增加,且伴有大量淋巴细胞浸润;MMF治疗组移植心仅微弱表达ICAM-1,同时少有淋巴细胞浸润;检测移植心组织ICAM-1的表达改变比普通组织病理学检查可以提早2～3d发现排斥反应。结论　ICAM-1的表达水平与排斥反应的发生和发展有关;MMF能显著抑制移植心ICAM-1的表达和淋巴细胞的浸润,明显延长移植物的存活。     

大鼠心脏移植排斥反应时细胞间粘附分了—1的表达及霉酚酯对其的抑制作用

目的 探讨大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间移植心组织细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达霉酚酯酯（MMF）对移植心ICAM－1表达和排斥反应的抑制作用。方法 建立大鼠心脏腹腔移植模型。设Wistar 到Wistar大鼠的同系心脏移植对照组、SD大鼠到Wistar大鼠的同种移植组和同种移植MMF治疗组。采集移植心组织标本行免疫组织化学和组织病理学检查,应用多媒体彩色图文分析系统对移植心组织ICAM－1的表达进行定量检测。结果 对照组移植心组织ICAM－1表达较弱;同种移植组在排斥反应期间移植心组织毛细血管内皮细胞ICAM－1的表达强度和数量明显增加,且伴有大量淋巴细胞浸润;MMF治疗组移植心仅微弱表达ICAM－1,同时少有淋巴细胞浸润;检测移植心组织ICAM－1的表达改变比普通组织病理学检查可以提早2－3d发现排斥反应。结论 ICAM－1的表达水平与排斥反应的发生和发展有关;MMF能显著抑制移植心ICAM－1的表达和淋巴细胞的浸润,明显延长移植物的存活。     

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

目的 探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分为3组:A组:同种异基因移植后槐耳清膏处理组(槐耳清膏组);B组:同种异基因移植财照组(移植排斥组)及C组:同系移植对照组(同系移植组).观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变.用免疫荧光检测移植心脏中CD8+T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平.结果 A组移植心脏的平均存活时间为(6.38±0.69)d,与B组(8.31±0.59)d相比明显缩短(P<0.01);心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变,CD8+T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强(P<0.05).结论 在术后早期单用槐耳清音会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应,可能机制足促进CD8+T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达.     

抗CD8单抗与抗CD40L单抗联合应用对小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响

目的 探讨干预慢性迟发性超敏反应（DTH）与CD8^＋T淋巴细胞的细胞毒等效应机制对同种小鼠心脏移植后慢性排斥反应的影响。方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型，实验组以BALB／c小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后0、2、6及14d腹腔注射抗CD8单克隆抗体（抗CD8单抗）200μg／d，术后0、2及4d腹腔注射抗CD40L单克隆抗体（抗CD40L单抗）250μg／d；同系移植对照组供、受者均为BALB／C小鼠，术后同期腹腔注射等量生理盐水；同种移植对照组以BALWc小鼠为供者，C57BL／6小鼠为受者，术后不使用上述单抗。观察各组移植心的存活时间及移植心组织病理学变化。结果同种移植对照组移植心的平均存活时间为7．3d；实验组与同系移植对照组移植心的存活时间均超过60d。同种移植对照组移植心呈典型急性排斥反应病理学改变；同系移植对照组移植心组织未见明显病理变化；实验组移植心呈现血管周围炎、间质纤维化和血管内膜增生等慢性排斥反应组织病理改变。结论 清除CD8^＋T淋巴细胞和阻断CD40／CD40L通路的处理方案虽可预防急性排斥反应，显著延长移植心的存活时间，但并不能阻止慢性排斥反应的发生。     

建立小鼠腹部心脏移植模型联合尾静脉注射的实践体会(附视频)

目的总结建立稳定的小鼠腹部心脏移植模型联合尾静脉注射的实践体会。方法实验练习包括50对供、受体为昆明小鼠的同系移植,40对供、受体为C57BL/6J小鼠的同系移植;正式实验包括10对供、受体为C57BL/6J小鼠的同系移植,30对以Balb/c小鼠为供体、C57BL/6J小鼠为受体的同种异系移植。记录手术过程中每个步骤的时间(包括供体心脏摘取和修整时间、受体血管吻合等)。术后每日观察移植心脏搏动持续时间及受体存活时间,同时记录移植小鼠的尾静脉注射所需时间。同系移植术后30 d、同种异系移植术后7 d行移植心脏病理学检查(各5只)。结果正式实验心脏移植成功率为90%。供体心脏摘取和修整时间为(13.9±0.6)min,受体冷缺血时间为(14.2±1.2)min,血管吻合时间为(34.2±3.1)min,总手术时间为(86.6±5.4)min,术后同系移植小鼠移植心脏存活时间达到100 d以上,术后30 d病理学检查显示仅有少量炎症细胞浸润。同种异系移植小鼠因发生排斥反应,存活时间为(7.2±0.5)d。术后7 d病理学检查示心肌大量炎症细胞浸润,呈急性细胞性排斥反应表现。尾静脉注射超过200次后,成功率达90%。结论本研究成功建立了稳定的小鼠腹部心脏移植模型。同时进行尾静脉注射可有效地利用预实验的小鼠。     

CXC趋化因子受体6在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 研究CXC趋化因子受体6(CXCR6)在同种异体小鼠心脏移植中的表达及CXC趋化因子配体16(CXCL16)与CXCR6相互作用对移植物存活时间的影响.方法 以野生型Balb/c小鼠(H-2d)为供者(同种移植组),或以野生型C57BL/6小鼠(H-2b)为供者(同系移植组),以野生型C57BL/6小鼠为受者分别行小鼠腹腔异位心脏移植.测定同系和同种移植组小鼠移植心脏CXCR6mRNA的表达,并测定受者脾脏CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达.另制作小鼠同种异位心脏移植模型(Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者),将其分为实验组和对照组,实验组受者移植当天至发生排斥反应时腹腔注射抗CXCL16抗体,对照组受者同期注射对照抗体.记录两组移植心脏存活时间.进行CD8+T淋巴细胞的细胞毒试验,即用Balb/c小鼠脾细胞免疫C57BL/6小鼠后,获取C57BL/6小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞,将Balb/c小鼠脾细胞与C57BL/6小鼠CD8+T淋巴细胞混合培养,分别加入抗CXCL16抗体、小鼠IgG(对照抗体)和抗CD40L抗体.结果 同种移植组移植心脏中CXCR6 mRNA的表达以及脾脏CD8+T淋巴细胞上CXCR6的表达均高于同系移植组和正常对照组.抗CXCL16抗体对CD8+T淋巴细胞的细胞毒活性无影响.与对照组相比较,实验组小鼠移植心脏存活时间并未明显延长.结论 小鼠心脏移植排斥反应中CD8+T淋巴细胞CXCR6的表达上升,阻断CXCL16/CXCR6相互作用并不能延长移植心脏的存活时间.

Abstract：

Objective To investigate the expression of CXCR6 in allograft rejection and effect of CXCL16/CXCR6 interaction on allograft survival Methods Intra-abdominal heterotopic heart transplantation was performed using wild type (WT) Balb/c mice (H-2d) (allogeneic) as donors or WT C57BL/6 mice (B6, H-2b) (syngeneic) as donors, and using WT B6 mice as recipients. The intragraft expression of CXCR6 and expression of CXCR6 in CD8+ T cells of the spleens from syngeneic and allogeneic recipients were examined. The allogeneic recipients were further divided into the experimental group (n = 5) and control group (n = 6) randomly. The experiment group and control group were injected with anti-CXCL16 mAb or control mAb respectively until rejection occurred. The cardiac allograft survival in experimental group and control group was evaluated. Results Rejected allografts showed higher expression of CXCR6 than syngeneic cardiac grafts. More importantly,expression of CXCR6 in CD8+ T cells was also up-regulated by allograft rejection. However, injection of anti-CXCL16 mAb could not inhibit cytotoxic activity of CD8+ T cells. Moreover, experimental group could not prolong the cardiac graft survival time as compared with control group. Conclusion Expression of CXCR6 in CD8+ T cells is up-regulated in allograft rejection.     

细胞间粘附分子-1的反义寡核苷酸在小鼠心脏移植中的作用

目的 探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)在小鼠心脏移植中对ICAM-1表达以及在排斥反应中的作用.方法 以BALB/c小鼠为供者,C57小鼠为受者,建立颈部异位心脏移植模型,移植后将受者随机分为3组,每组10只.分别为单纯移植组、对照寡核苷酸组(对照ODN)和ICAM-1-ASO组.各组移植后24 h开始经受者静脉分别注射双蒸水0.3 ml、对照ODN 10 mg/kg和ICAM-1-ASO 10 mg/kg,每天1次,连续5 d.移植后第8天各组随机取5只受者切取移植心,进行病理学检查;采用免疫组织化学方法对移植心组织中ICAM-1的表达进行观察;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对ICAM-1mRNA表达进行定量分析.每组中余下的小鼠继续观察直至移植心停跳,记录各组移植心的存活时间.结果 单纯移植组心脏移植后第8天可观察到明显的排斥反应,移植心心跳减慢、心律不齐、心律紊乱、搏动无力;病理学检查可见大量的淋巴细胞浸润,心肌间质水肿及大片心肌坏死;与移植前对比,内皮细胞和心肌细胞ICAM-1表达明显增强;ICAM-1mRNA表达也明显增加;移植心存活时间平均为(9.8±1.48)d.对照ODN组与单纯移植组差异无统计学意义.而ICAM-1-ASO组与单纯移植组相比,移植心ICAM-1的表达明显减弱,淋巴细胞浸润明显减少,排斥反应程度减轻;移植后第9天心律基本规整,偶有心律不齐,心跳力度较单纯移植组增强;移植心存活时间明显延长至(14.6±1.14)d.结论 ICAM-1-ASO抑制移植心组织中ICAM-1的表达和淋巴细胞的浸润,抑制移植后排斥反应的发生和发展,改善移植物的功能,延长移植物的存活时间,其作用具有序列特异性.     

Tim-3在小鼠心脏移植受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化

目的 检测激活的T_H1类淋巴细胞标记分子"T淋巴细胞免疫球蛋白域及粘蛋白域蛋白-3(Tim-3)"在受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化,探讨其与急性排斥反应的关系.方法 建立小鼠同基因和异基因心脏移植模型(简称:同基因组和异基因组);移植术后第3和第6天,分离和制备两组受者外周血、脾脏、引流淋巴结和移植心内淋巴细胞悬液,采用流式细胞仪检测Tim-3阳性细胞在CD4~+ 和CD8~+ T淋细胞中的比值.结果 两组受者术后外周血和脾脏内Tim-3~+/CD4~+以及Tim-3~+/CD8~+ 的比值比较,差异均无统计学意义(P>O.05).与同基因组比较,异基因组引流淋巴结内Tim-3~+/CD4~+ 比值轻度升高(P<0.05);但异基因组术后第6天与第3天比较,差异无统计学意义(P>0.05).与同基因组比较,移植心内Tim-3~+/CD4~+和TiM-3~+/CD8~+比值均显著升高(P<0.01);异基因组术后第6天与第3天比较.移植心TiM-3~+/CD4~+和Tim-3~+/CD8~+比值也显著升高(P<0.01).结论 小鼠异基因心脏移植受者引流淋巴结和移植心内T淋巴细胞上Tim-3的表达升高与急性排斥反应的进展动态相关.     

The cathepsin-S/protease-activated receptor-(PAR)-2 axis drives chronic allograft vasculopathy and is a molecular target for therapeutic intervention

BackgroundCathepsin S (CatS) and proteinase-activated receptor (PAR)-2 are involved in the remodelling of vascular walls and neointima formation as well as in alloantigen presentation and T-cell priming. Therefore, we hypothesized that CatS/PAR-2 inhibition/deficiency would attenuate chronic allograft vasculopathy.MethodsHeterotopic aortic murine transplantation was performed from C57BL/6J donors to C57BL/6J recipients (syngeneic control group), Balb/c to C57BL/6J without treatment (allogenic control group), Balb/c to C57BL/6J with twice daily oral CatS inhibitor (allogenic treatment group) and Balb/c to Par2−/− C57BL/6J (allogenic knockout group). The recipients were sacrificed on day 28 and the grafts were harvested for histological analysis and RT-qPCR.ResultsAfter 28 days, mice of the allogenic control group exhibited significant neointima formation and massive CD8 T-cell infiltration into the neointima while the syngeneic control group showed negligible allograft vasculopathy. The mRNA expression level of CatS in allografts was 5-fold of those in syngeneic grafts. Neointima formation and therefore intima/media-ratio were significantly decreased in the treatment and knockout group in comparison to the allogenic control group. Mice in treatment group also displayed significantly fewer CD8 T cells in the neointima compared with allogeneic controls. Additionally, treatment with the CatS inhibitor and PAR2-deficiency decreased mRNA-levels of interleukins and cytokines.ConclusionIn conclusion, our data indicate that inhibiting CatS and PAR-2 deficiency led to a marked reduction of neointima formation and associated inflammation in a murine heterotopic model for allograft vasculopathy.     

输注负载胎盘滋养层细胞抗原的受者aaDC延长小鼠移植心的存活时间

目的 探讨输注负载供者胎盘滋养层细胞抗原的受者耐受性选择性激活树突状细胞(aaDC)对小鼠移植心存活时间的影响.方法 雌性Balb/c小鼠和雄性C57BL/6小鼠合笼后,获取雌鼠胎盘滋养层细胞,并提取其抗原.体外制备Balb/c小鼠的aaDC,分别与滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原共培养,获得负载滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原的aaDC,测定培养液中白细胞介素10(IL-10)和IL-12的含量以及aaDC表面CD40、CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子的表达.取Balb/c小鼠,分别接受负载滋养层细胞抗原或者C57BL/6小鼠脾细胞抗原的aaDC输注(滋养层细胞抗原组和脾细胞抗原组),7 d后接受C57BL/6小鼠心脏异位移植,以注射生理盐水者为对照组,输注负载滋养层细胞抗原aaDC后接受昆明小鼠心脏移植者为第三供者对照组.术后记录移植心存活时间,并检测受者脾脏和移植心组织中IL-2、IL-10和γ干扰素(IFN-7)mRNA的表达.结果 负载脾细胞抗原的aaDC,CD86和MHCⅡ类分子的表达明显升高,而负载滋养层细胞抗原的aaDC,仅MHCⅡ类分子表达升高.滋养层细胞抗原aalDC的培养液中,IL-10为(122.6±15.4)ng/L,IL-12为(232.8±25.4)ng/L,空白对照aaDC的IL-10和IL-12分别为(35.4±8.5)ng/L和(267.3±12.5)ng/L,二者间IL-10的差异有统计学意义(P<0.05),而IL-12的差异无统计学意义(P>0.05).脾细胞抗原aaDC培养液中的IL-10和IL-12与空白对照aaDC相近,差异均无统计学意义(P>0.05).对照组移植心存活时间为(6.73±0.58)d,脾细胞抗原组为(12.28±0.76)d,滋养层细胞抗原组为(38.83±2.79)d,第三供者对照组为(6.68±0.62)d.滋养层细胞抗原组移植心存活时间明显长于脾细胞抗原组和对照组(P<0.01),而第三供者对照组和对照组间移植心存活时间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 预先输注负载供者胎盘滋养层细胞抗原的受者aaDC,可延长小鼠移植心的存活时间.     

白细胞介素-15在心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 探讨白细胞介素-15（IL-15）在心脏移植排斥反应中的表达及其与排斥反应的关系。方法 采用小鼠颈部心脏移植模型，随机分为2组：同基因移植组，供、受体均为C57BL／6小鼠；异基因移植组，供、受体分别为BALB／C、C57BL／6小鼠。以pactin作内参照，分别于术后第1、3、5、7天取移植心脏，用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）法观察IL-15的表达情况。结果 随着术后天数的增加，异基因移植组IL-15表达逐渐升高，第5天达高峰（与同基因移植组相比，P〈0．01）。结论 IL-15的表达与心脏移植急性排斥反应的发生发展密切相关，可作为心脏移植急性排斥反应的监测指标，对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有重要的临床意义。     

他克莫司对移植免疫反应中核因子κB活性和淋巴细胞趋化因子表达的影响

目的研究他克莫司(FK506)对移植免疫反应中细胞核因子κB(NF-κB)活性和淋巴细胞趋化因子(Lptn)表达的影响。方法应用小鼠同种心脏移植急性排斥反应模型,分为BALB/c-BALB/c同基因对照组、C57BL/6-BALB/c异基因对照组、C57BL/6-BALB/c移植+FK506处理组。RT-PCR检测移植心组织内Lptn mRNA的表达,凝胶电泳迁移率和ELISA分别检测心脏移植小鼠脾细胞NF-κB的活性和活化T细胞核因子(NFAT)c1活性。结果同基因移植组各时间点移植心内无Lptn mRNA表达;异基因移植组和FK506处理组移植后第1天和第3天均无Lptn mRNA表达,而第5天和第7天均可检测到Lptn mRNA阳性表达,但FK506组Lptn mRNA表达受抑制。治疗剂量的FK506可以明显抑制脾细胞NF-κB和NFATc1的活性,但FK506处理组心脏移植后第5、7天脾细胞NF-κB的活性仍明显高于同基因移植组。NF-κB活性与Lptn基因转录水平呈正相关关系(r=0.775,P=0.000)。结论 FK506除了通过抑制NFATc1活性途径调控部分Lptn mRNA的表达,还可通过抑制NF-κB途径参与Lptn mRNA表达的调控。     

Gene therapy in transplantation: pathological consequences of unavoidable plasmid contamination with lipopolysaccharide.

Experimental studies evaluated the responses of murine cardiac graft recipients to high and low levels of lipopolysaccharide (LPS) contaminating plasmid DNA preparations. Immediately prior to transplantation, graft recipients were transfected by injecting the quadriceps muscles with plasmids that encoded the murine interleukin (IL)-4 gene and beta-galactosidase (beta-gal) gene. Graft recipients transfected with plasmids encoding only the beta-gal gene served as negative plasmid controls. Three groups of mice were transfected with plasmids containing high levels of contaminating LPS: (a) nontransplanted C57B1/6 mice, (b) C57B1/6 cardiac isograft recipients, (c) DBA/2 (H-2d)-->C57BL/6 (H-2b) cardiac allograft recipients. Unexpectedly, graft failure within 24 h was observed in IL-4 transfected isograft and allograft recipients, but not in mice transfected with the beta-gal gene alone. However, histopathological findings, for example, vascular cell adhesion moelcule-1 (VCAM-1) expression in cardiac grafts and mononuclear lung infiltration, were remarkably similar for both treatment groups and consistent with LPS-induced pathology. LPS assays were used to evaluate four different methods of plasmid purification for degree of LPS contamination. A successful strategy for reducing levels of LPS contamination was identified and transfection experiments repeated in cardiac allograft recipients receiving LPS inoculum that were minimized and standardized (6.4 EU/mouse) for all treatment groups. Despite receiving substantially lower levels of LPS, in all treatment groups there was persistent cardiac graft endothelial cell activation manifested by VCAM-1 expression and persistent, albeit less severe, lung pathology. We found that plasmid contamination with LPS was unavoidable and that even very low levels can alter immune responses in transplant recipients confounding data interpretation. Thus, it is imperative to account for LPS contamination in experiments utilizing plasmid DNA for gene transfer, especially in experimental models of immunity and inflammation.