肺炎链球菌小片段自溶素蛋白LytA′的体外抗菌活性探讨

目的 构建肺炎链球菌（ATCC49619）小片段自溶素基因lytA′的原核表达载体,通过大肠埃希菌表达系统进行原核表达获得一种新型肺炎链球菌小片段自溶素重组蛋白LytA′,初步探讨该蛋白的体外抗菌活性,并与青霉素G同时进行比较。方法 设计lytA基因的特异性引物,并通过PCR方法从肺炎链球菌（ATCC49619）中扩增lytA基因,并将其插入原核表达载体PGM-T中,构建PGM-T/lytA重组质粒,使用限制性核酸内切酶BamHⅠ和HindⅢ消化PGM-T / lytA获得小片段自溶素基因lytA′。再构建表达质粒pET-32a（+）/lytA′ 并转化到感受态细胞大肠埃希菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达目的 蛋白,使用透析袋等电点洗脱技术纯化回收目的 蛋白LytA′;采用微量肉汤稀释法分别测定LytA′和青霉素G对肺炎链球菌（ATCC49619）的最小抑菌浓度（MIC）,并将其作用于青霉素G敏感菌株肺炎链球菌（ATCC49619）,初步探讨小片段自溶素蛋白LytA′的体外抗菌活性。结果 成功构建重组质粒PGM-T / lytA和pET-32a（+）/lytA′。小片段自溶素重组蛋白表达良好,并显示出预期的抗菌活性。与生长对照组相比,LytA′和青霉素G在3 h时显示出明显的抗菌活性（t=14.243 0,P<0.011 0;t=7.400 0,P<0.022 0）,抑菌效应持续至7 h （t=20.838 0,P<0.008 0;t=17.889 0,P<0.017 0）,抑菌效应逐渐增强。此外,在7 h时,LytA′ 的抑菌活性明显强于青霉素G（t=6.764 0,P<0.027 0）。结论 小片段自溶素重组蛋白LytA′对青霉素G敏感肺炎链球菌显示出一定的体外抑菌活性,且持续时间久,有成为抗肺炎链球菌感染治疗药物的可能性。     

抗金黄色葡萄球菌工程多肽体内外抗菌活性研究

目的评价我室制备的抗金黄色葡萄球菌工程多肽(Ph—SA)对耐甲氧西林／苯唑西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体内外抗菌活性。方法采用琼脂二倍稀释法测定Ph-SA对69株临床分离病原菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);采用腹腔感染后经尾静脉注射药物方法测定Ph—SA及对照药物对小鼠的体内保护作用。结果体外抗菌试验结果显示Ph-SA对金黄色葡萄球菌呈现强抗菌作用,对金黄色葡萄球菌的甲氧西林／苯唑西林耐药株和敏感株的MIC50分别为8mg／L和0．5mg／L,按相对分子质量差异换算,强于万古霉素12倍和48倍;体内抗菌试验结果显示：Ph—SA对MRSA菌株ATCC BAA-42抗菌效力极强,按相对分子质量差异换算,至少强于万古霉素59倍。结论Ph-SA对耐甲氧西林／苯唑西林金黄色葡萄球菌体内外均呈现极强的抗菌活性,具有潜在的临床应用价值。     

茶多酚对变形链球菌的体外抗菌活性研究

目的研究茶多酚对变形链球菌的抗菌活性.方法采用琼脂稀释法测定茶多酚对34株变形链球菌临床分离株的最小抑菌浓度(MIC).结果茶多酚对变形链球菌的MICR为500～4000mg/L,MIC50为1000mg/L,MIC90为2000mg/L.1×106CFU/ml与1×108CFU/ml菌液浓度对MIC值略有影响.结论茶多酚对变形链球菌具有明显的抗菌活性.     

抗变异链球菌多肽的设计、筛选及抗菌效果评价

目的构建抗变异链球菌的低毒、高活性、快速的新型抗菌肽,并探讨其在防治龋病方面的潜能。方法根据两亲性正电性α-螺旋结构抗菌肽的设计理念,对乳酸杆菌拮抗变异链球菌的代谢产物reuterin 6和/或gassericinA进行活性改造,分别通过细菌敏感性实验、细胞毒性实验和杀菌-时效实验来评估衍生肽的抗菌效果和生物相容性,再进一步检测目标抗菌肽抗变异链球菌的速率、抗多种口腔致病菌的活性和发展耐药菌株的能力。结果构建了6条AT-1衍生肽,并从中筛选出了低毒、高活性、快速的新型抗菌肽AT-7;具有高疏水性、不完美两亲性的AT-7抑制变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和黏性放线菌等口腔致病菌的最小抑菌浓度是3.3 μmol/L,在5 min内即可抑制88.7%的变异链球菌,以及连续诱导10代的处理仍不能产生耐AT-7的变异链球菌。结论疏水性和不完美两亲性都是决定抗菌肽的抗菌效果的重要因素;抗菌肽AT-7具有转化为口腔临床用药的潜力。     

重组融合蛋白Ph-PA对绿脓杆菌体内体外抗菌活性的初步研究

目的制备和纯化抗绿脓杆菌工程多肽Ph-PA,并检测其对绿脓杆菌的体内外抗菌活性。方法经离子交换柱纯化收集Ph-PA后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验并与现有抗生素对比,检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示Ph-PA对绿脓杆菌有较强的抗菌作用,且表现出相对的靶向特异性,对绿脓杆菌ATCC 27853的最小抑菌浓度（MIC）为4μg／mL。按照相同相对分子质量进行标化后比较,Ph-PA的抗菌活性至少是哌拉西林的2200倍,头孢他啶的220倍。结论Ph-PA在体外及体内对绿脓杆菌都表现出较强的抗菌活性,为治疗绿脓杆菌感染提供了新的思路,具有临床应用潜力。     

肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物耐药机制的探讨

目的：探讨肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的耐药机制。方法：搜集2012年8月-2013年8月我院临床分离的肺炎链球菌39株,采用Etest法和K-B法检测其对大环内酯类抗菌药物的耐药性。结果：在本研究的39株肺炎链球菌中,有2株肺炎链球菌对左氧氟沙星产生耐药,耐药率为5.13%;有38株肺炎链球菌对红霉素产生耐药,耐药率为97.44%;有1株肺炎链球菌对苯唑西林产生耐药,耐药率为2.56%;有1株肺炎链球菌对头孢唑林产生耐药,耐药率为2.56%;有1株肺炎链球菌对氨苄西林产生耐药,耐药率为2.56%;有25株肺炎链球菌对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶产生耐药,耐药率为64.10%;有12株肺炎链球菌对四环素产生耐药,耐药率为30.77%。本组39株肺炎链球菌均未对替考拉宁、青霉素和万古霉素产生耐药。与对其他抗菌药物的耐药率相比,本组肺炎链球菌对四环素、红霉素和磺胺甲恶唑/甲氧苄啶的耐药率较高,差异显著,有统计学意义（P<0.05）。结论：肺炎链球菌对红霉素等抗菌药物的耐药性较强,其发生耐药的机制主要是mef基因介导外排泵和erm基因介导靶修饰产生的共同作用。     

葡萄籽原花青素对变形链球菌的体外抗菌活性研究

目的?研究葡萄籽原花青素（Grape seed procyanidins,GSPC）对变形链球菌的体外抗菌活性,探讨其防龋潜能。方法?采用微量肉汤法测定最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）、最低抑制生物膜浓度（MBIC）;采用结晶紫半定量法测定生物膜生成量;硫酸-蒽酮法测定产糖量,pH计测定产酸量。结果?葡萄籽原花青素的MIC值12.5?mg/mL;MBC值和MBIC值均为50?mg/mL;GSPC（≥12.5?mg/mL）降低变形链球菌生物膜的生成量,8倍MIC浓度（100?mg/mL）时抑制率达76%;GSPC在低于MIC浓度时仍具有抑制变形链球菌产糖、产酸能力。结论?葡萄籽原花青素具有对变形链球菌的体外抗菌活性,并能抑制变形链球菌的生物膜和致龋毒力因子。      

PspA免疫小鼠抗肺炎链球菌侵袭性感染研究

目的:获取原核表达的肺炎链球菌PspA重组蛋白并研究其作为疫苗的价值. 方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将编码PspA抗原表位在内的部分序列克隆到原核表达载体PET-32(a)内,酶切及测序鉴定重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,将获得的重组蛋白用Western Blot鉴定,镍柱纯化并透析除盐. 用重组蛋白免疫动物,观察PspA抗体对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用. 结果:DNA序列与GenBank中的数据相符,所表达纯化的蛋白经Western Blot证实为PspA,其抗体在肺炎链球菌感染中对小鼠有保护作用. 结论:重组PspA刺激产生的抗体能够有效抵抗肺炎链球菌TIGR4侵袭性感染,该重组蛋白可作为肺炎链球菌多肽联合疫苗的组成部分之一.     

抗菌药物管理初期广州地区儿童肺炎链球菌及流感嗜血杆菌耐药性变迁

目的：为了解广州地区抗菌药物管理初期近10年下呼吸道住院病人分离的肺炎链球菌及流感嗜血杆菌耐药性的变迁。方法将3个不同时期[2003年6月—2004年12月(第1期)、2006年2月—2007年2月(第2期)、2011年1月—2012年6月(第3期)],下呼吸道感染病人痰标本进行细菌培养,用Etest检测及K-B法纸片对其中分离出的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌进行常用抗菌药物的耐药性情况检测,分析比较3个时期的检测结果。结果3个时期肺炎链球菌培养结果分别为第1期172株,第2期79株,第3期391株;耐药性变化趋势中,青霉素、头孢呋辛、红霉素、克林霉素耐药性呈现上升趋势,且3个时期耐药性差异有统计学意义(均为P<0.001)。3个时期流感嗜血杆菌培养结果分别为第1期484株,第2期140株,第3期524株;耐药性变化趋势中,氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛、阿奇霉素耐药性呈现上升趋势,且3个时期耐药差异有统计学意义(均为P<0.001);四环素、头孢曲松耐药性呈现下降趋势,且3个时期耐药差异有统计学意义(均为P<0.001)。结论近10年中,肺炎链球菌对儿科常用抗菌药物包括青霉素、头孢呋辛、红霉素、克林霉素的耐药情况仍在上升趋势中。流感嗜血杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛、阿奇霉素的耐药情况也是逐年加重;对头孢曲松的耐药性呈下降趋势。     

梅丁消炎颗粒体外抗菌作用的研究

目的观察梅丁消炎颗粒的体外抗菌作用。方法采用琼脂扩散法、连续稀释法分别测定梅丁消炎颗粒的抑菌圈和最低杀菌浓度（MBC）。结果梅丁消炎颗粒对乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌等均有明显的体外抗菌作用。结论梅丁消炎颗粒对受试菌均有不同程度的抗菌作用,且抗菌谱较广,为临床治疗扁桃体炎、咽喉炎等提供了保证。     

9种抗菌药物对大肠埃希菌抗菌活性研究

目的:比较研究9种抗菌药物对临床分离的78株大肠埃希菌的体外抗菌活性。方法:采用琼脂平板二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。结果:4种氟喹诺酮类抗菌药物对78株大肠埃希菌(包括ESBLs)抗菌活性较低,MIC_(90)16～128mg/L,耐药率为38.5％～60.3％;5种β-内酰类抗菌药物对78株大肠埃希菌MIC_(90)32～>128mg/L.耐药率为17.9％～59.0％,尤其是对产ESBLs大肠埃希菌除头孢美唑外均显示了很高的耐药性。结论:大肠埃希菌(包括ESBLs)对氟喹诺酮类抗菌药物敏感性较低,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰类抗菌药物有较高的耐药性,合理使用抗菌药物在临床应引起高度重视。     

重组人血小板型PLA2体外抗菌活性研究

目的观察重组人血小板型磷脂酶A2（PLA2）的体外抗菌活性。方法将不同浓度的重组PLA2与9种细菌在37％共同孵育2h,然后倾注琼脂板,次日记录每一琼脂板上的菌落生成数（CFU）,计算出PLA2杀菌率和PLA2的最低杀菌浓度（MBC）。结果重组人血小板型PLA2对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌等革兰氏阳性（G^＋）菌有较强杀菌作用,作用2h后PLA2的MBC范围为0．015～0．240μg／ml。对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌等革兰氏阴性（G^-）菌则需要较高浓度的血小板型PLA2,作用2h后的MBC为30～90μg／ml。结论血小板型PLA2对G^＋菌有较强的杀菌作用,对G^＋菌的杀菌作用较弱。     

国产注射用枸橼酸阿奇霉素体内外抗菌作用研究

目的:评价国产注射用枸橼酸阿奇霉素的体内、外抗菌活性并与进口阿奇霉素进行比较.方法:体外实验采用琼脂二倍稀释法测定两种阿奇霉素对临床分离的220株致病菌的最低抑菌浓度(MIC);体内实验采用金葡菌、肺炎链球菌及大肠杆菌感染小鼠建立动物模型,阿奇霉素皮下注射给药对感染动物进行治疗,评价对感染小鼠的保护作用.结果:体外实验结果表明国产品与进口品对需氧革兰氏阳性球菌,革兰氏阴性杆菌以及厌氧菌的体外抗菌谱,MIC50,MIC90基本一致;体内实验结果显示国产阿奇霉素对细菌感染的小鼠EDso分别为1.9、0.71、14.6mg/kg,进口阿奇霉素分别为2.4、0.55、15.3mg/kg,国产注射用枸橼酸阿奇霉素的体内疗效与进口样品基本相同.结论:国产注射用枸橼酸阿奇霉素和进口阿奇霉素具有相同的抗菌谱和抗菌活性.     

消毒愈肌液对糖尿病足抗菌活性研究简

目的：观察消毒愈肌液对糖尿病足抗菌活性。方法：将糖尿病足患者60例,做创面分泌物的细菌培养与分离,消毒愈肌液、哌拉西林、左氧氟沙星、氟康唑、生理盐水分别做体外抑菌试验。结果：消毒愈肌液对革兰阴性菌均有高度敏感,部分优于哌拉西林;消毒愈肌液对革兰阳性菌均有高度敏感,部分优于左氧氟沙星;消毒愈肌液对真菌均有高度敏感,优于氟康唑。结论：消毒愈肌液对糖尿病足溃疡有明显的抑菌作用。     

家蝇免疫血淋巴的抑菌作用及其免疫活性的研究

目的研究家蝇幼虫免疫血淋巴抑菌作用及其机制并探讨其免疫调节功能。方法分未经诱导、针刺诱导、蘸菌液诱导三组提取家蝇幼虫免疫血淋巴,分别针对多个标准菌株做抑菌实验,并设立空白对照和药物对照,观察抑菌效果。淋巴细胞转化实验研究家蝇血淋巴的免疫调节作用。结果三种处理方法所提取的家蝇幼虫血淋巴对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、肺炎克氏菌、铜绿假单胞菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等革兰氏阳性菌、阴性菌及单细胞真菌白色念珠菌均有强的抑菌作用,其中带菌诱导的血淋巴抑菌效果较好,并且抑菌活力具有一定的热稳定性。血淋巴对人淋巴细胞的激活作用明显,淋巴细胞的转化率与对照组比较差异有显著性。结论本研究进一步验证了家蝇血淋巴的抑菌活性和免疫功能,为家蝇血淋巴的抗菌机制及免疫调节作用的深入研究和应用提供资料。     

苦豆子总碱的体外抗菌活性研究

目的：了解苦豆子总碱的体外抗菌活性,方法：以琼脂稀释法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆了总碱的体外最低抑菌浓度（ＭＩＣ）及最低杀菌浓度（ＭＢＣ）等。结果：苦豆子总碱体外对１０余种２０６株试验菌均有抑菌作用,其ＭＩＣ是１０～４０ｍｇ／ｍｌ,大于３～５ＭＩＣ的浓度对上述试验菌有杀菌作用。苦豆子总碱在碱性环境下抑菌作用较强,细菌接种量可影响其ＭＩＣ,血清含量对ＭＩＣ无明显影响。结论：苦豆子总碱有广谱抗菌     

盐酸头孢他美酯体外抗菌作用

目的：评价国产头孢他美酯对临床常见致病菌的体外抗菌活性。方法：采用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）和采用肉汤二倍稀释平板活菌计数法测定最低杀菌浓度（MBC），并对其影响因素进行测定，同时与对照药头孢克洛进行对比。结果：盐酸头孢他美酯对化脓性链球菌、肺炎链球菌等革兰氏阳性菌，及对大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、奇变形杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等革兰氏阴性菌均有较强的抗菌活性，其MIC50及MIC90的结果明显优于头孢克洛；对金黄色葡萄球菌、粪链球菌、绿脓杆菌的作用较差。结论：国产头孢他美酯对临床常见致病菌有良好的体外抗菌作用，其抗菌活性几乎不受培养基PH值及血清蛋白结合率的影响。