大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的：探讨中药成分大黄素(Emodin，EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7／Adr的耐药逆转作用。方法：药物敏感试验采用四唑氮盐(MTT)比色法，P糖蛋白以Western-blot法检测。结果：EMD在0～20μmol／L浓度时作用14天后对MCF-7／Adr未见明显毒性作用；EMD在10μmol／L浓度时，其耐药逆转倍数为1．7倍。EMD在20μmol／L浓度时，处理MCF-7／Adr2、4、6和11天后，检测P糖蛋白发现自第4天起P糖蛋白表达下降，至第11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论：EMD具有逆转MCF-7／Adr多药耐药性的作用，可明显下调P糖蛋白的表达，且逆转作用持久。     

PHⅡ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外杀伤活性和逆转耐药作用

背景与目的:多药耐药(multidrug resistance,MDR)是恶性乳腺癌化疗失败的主要原因,而ABC转运蛋白家族的P-glycoprotein(P-gp)高表达是MDR的主要机制之一.因此研制能抑制P-gp表达及其功能的新型抗癌药是目前研究的热点.本研究旨在研究PH Ⅱ-7对人乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR体外抗瘤活性及逆转耐药的作用.方法:采用MTT法检测PHⅡ-7、多柔比星(adriamycin,ADR)及二者联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7和耐药细胞株MCF-7/ADR的IC50值;采用流式细胞仪测定PH Ⅱ-7对MCF-7及MCF-7/ADR细胞凋亡的诱导作用;采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR方法检测PHⅡ-7对多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)表达水平的影响;通过流式细胞仪观察PHⅡ-7处理前后,MCF-7/ADR细胞内Rhodamine123浓度的改变,分析PHⅡ-7对p-gp外排功能的影响.结果:PH Ⅱ-7对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,IC50值分别为(6.07±0.85)和(5.51±1.22)μmol/L;低浓度PHⅡ-7与ADR联合应用能增强其细胞毒作用,二者具有协同作用.PHⅡ-7可诱导MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;在诱导凋亡过程中,PHⅡ-7可降低MCF-7/ADR细胞内mdrl基因的表达,抑制p-gp外排功能.结论:PHⅡ-7可诱导MCF-7/ADR凋亡,并具有对MCF-7相同的体外杀伤活性.PHⅡ-7可通过抑制P-gp的表达和功能逆转MCF-7/ADR耐药性.     

乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究

目的：观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7／ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象．探讨其与MCF-7／ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法：分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物（Strept avidin biotin complex，SABC）免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7／ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素（E—cadherin）和间质性标记基因N-钙粘素（N—cadherin）表达的改变情况。结果：亲本细胞MCF-7中E—cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性，Twist和N—cadherin表达阴性；多药耐药株MCF-7／ADR中E—cadherin mRNA和蛋白表达缺失，而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N—cadherin表达阳性。结论：在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7／ADR中．其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。     

红霉素逆转乳腺癌多药耐药的临床研究

目的：研究红霉素逆转乳腺癌多药耐药（MDR）的临床疗效，方法：采用免疫组化SP法检测乳腺癌P－糖蛋白（P-gp)表达，将P-gp表达阳性者随机分两组：红霉素加化疗组（试验组）28例，单纯化疗组（对照组）14例，采用CAF方案化疗，结果：试验组CR＋PR 19例（67．9％），对照组4例（28．6％），两组比较差异有显著性（P＜0．05），结论：红霉素对逆转乳腺癌MDR具有一定的作用。     

逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响

目的探讨逆转胶囊在乳腺癌多药耐药中的应用。方法应用流式细胞技术。测定逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响。结果阿霉素单用对P—gp表达无明显影响,其余各处理组与对照组（正常鼠血清组）比较P-gp的荧光表达率均有所下降;逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;阿霉素与10％含药鼠血清合用,对人乳腺癌耐药MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的抑制效果良好,P—gp荧光表达率的下降幅度大,与异博定＋阿霉素＋10％正常鼠血清组无明显差异。结论逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;并有耐药逆转作用。     

siRNA逆转乳腺癌细胞系MCF-7/ADR耐药

背景与目的：肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多约耐药基因1(multidrug resistance 1、mdr1)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein．P-gP)过度表达是重要的耐药机制。本研充拟探讨siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADR mdr1基因表达的可行性。方法：选择耐阿毒素人乳腺癌细胞系MCF-7／ADR技其敏感细胞系MCF-7作为研究对象,将预先设计的siRNA包装入质粒载体,然后转化质粒刮大肠杆菌中,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF-7／ADR细胞中,潮霉素筛选,流式细胞仪检测P-gP的表达率,实时定量PCR俭测,mdr1基因的表达率,并对转染后的细胞作阿霉素耐药实验。结果：流式细胞仪榆测结果显示,MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后,P-gP的表达率由99．8％下降到12．3％：实时相对定量PCR检测结果显示．MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由25．22增加到30．64．阿霉素耐药实验显示,转染siRNA的MCF-7／ADR细胞IC50为0．51μmol／L,而术转染组的IC50为17．88μmol／L。结论：siRNA能引发人乳腺癌多耐药细胞系MCF-7／ADR内mdr1基因沉默,从而为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。     

氟西汀逆转MCF-7/ADR多药耐药性的量效关系研究

目的:通过99mTc-MIBI动态显像技术检测氟西汀在裸鼠体内逆转乳腺癌细胞多药耐药性的剂量效应关系,以及氟西汀对正常器官放射性分布的影响。方法:将乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR种植到BALB/cA-nu裸鼠体内,移植瘤长至直径1.0~1.5cm时,随机分为4组:空白对照组,氟西汀0.25组,氟西汀0.5组和氟西汀1.0组,氟西汀组分别腹腔注射0.25、0.5和1.0mg/kg氟西汀,空白对照组腹腔注射同体积的生理盐水,每天1次,共5天。第6天行99mTc-MIBI显像,注射99mTc-MIBI后立即每2分钟采1帧,采集30分钟,随后在60分钟再一次静态显像后立即处死裸鼠,测定器官放射性计数,计算99mTc-MIBI的生物学分布。结果:氟西汀0.25、0.5、1.0组99mTc-MIBI半衰期差别有显著意义(P<0.01),各实验组与空白对照组比较差别有显著意义(P<0.001),移植瘤中MIBI的聚集随着氟西汀的剂量增加而增加,但是氟西汀没有影响其他组织如心、肺、肝等放射性分布。结论:氟西汀对耐药性乳腺癌移植瘤中的P-gp功能逆转作用随剂量增加作用增强,且并不影响99mTc-MIBI在正常组织器官中的放射性分布。     

屈洛昔芬逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF7／ADR多药耐药性的研究

目的：研究屈洛昔芬（DRO）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响。方法：应用MTT，半定量RT－PCR和免疫细胞化学染色，研究DRO对MCF7／ADR药物敏感性，耐药相关基因MDR1，谷胱甘肽S转移酶Pi(GST-π），拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。流式细胞技术观察细胞内药物积累。结果：在20，10和5μmol/L浓度时DRO对MCF7／ADR耐药性的逆转倍数分别为16，8和3倍，逆转强度与同类化合物三苯氧胺相当。DRO处理后，MDR1和GSTπ基因表达水平明显降低。DRO使ADR在细胞内的积累分别增加到2.5(20μmol/L),2.0(10μmol/L)和1.5(5μmol/L)倍。结论：DRO具有较强的逆转MCF7／ADR耐药性的作用，其逆转机制是多途径的。     

乳腺癌多药耐药DEDD作用及机制研究

目的 死亡效应结构域DNA结合蛋白(death effector domain DNA-binging protein,DEDD)可抑制乳腺癌的生长和转移,但在乳腺癌多药耐药中的作用尚不明确.本研究将探讨DEDD在人乳腺癌多药耐药中的作用及机制.方法 通过转染DEDD-shRNA建立稳定敲低DEDD表达的MCF-7人乳腺癌细胞株,MTS实验检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7 WT(Wild type,野生型)、MCF-7 control shRNA和MCF-7 DEDD-shRNA细胞活力的影响,Annexin-V和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染后流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白质印迹法检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在药物干预后的蛋白表达水平.结果 多柔比星干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=89.49,P＜0.001)、不同时间(F=50.81,P＜0.001)组间比较差异有统计学意义.多柔比星干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50分别为(0.97±0.15)和(0.62±0.09) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(0.46±0.05)和(0.26±0.03) μmol/L和MCF-7 control shRNA细胞(0.39±0.05)和(0.25±0.03)μmol/L,P＜0.001.紫杉醇干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=15.94,P＜0.001)、不同时间组间(F=129.70,P＜0.001)比较差异有统计学意义.紫杉醇干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50为(16.74±2.26)和(9.88±1.47) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(13.39±1.44)和(7.69±0.92) μmol/L(P=0.001)和MCF-7 control shRNA细胞(12.58±1.15)和(7.17±1.12) μmol/L(P＜0.001).多柔比星干预后24 h后流式细胞凋亡结果显示,不同处理(F=131.46,P＜0.001)、不同浓度组间(F=160.95,P＜0.001)比较差异有统计学意义.正常培养状态下,MCF-7 control shRNA细胞和MCF-7 DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(14.32±1.47)％和(11.58±1.63)％,而给予0.5μmol/L和1 μmol/L多柔比星作用24 h后,M[CF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(21.62±1.97)％和(24.39±2.36)％,明显低于MCF-7 control shRNA细的(36.26±1.87)％和(38.23±1.46)％,P＜0.001.同样,紫杉醇干预后24 h,不同处理(F=124.81,P＜0.001)、不同浓度组问(F=172.56,P＜0.001)细胞凋亡率比较差异有统计学意义.给予9.37和18.74 μmol/L紫杉醇作用24 h后,MCF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(30.26±1.63)％和(32.18±2.16)％,明显低于MCF-7 control shRNA组的(53.84±2.17)％和(58.27±2.16)％,P＜0.001.多柔比星作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=14.67,P＜0.001)、不同时间(F=6.39,P=0.006)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予0.5 μmol/L多柔比星作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.87±0.04、1.06±0.02和5.25±0.18.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.多柔比星作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为1.06±0.01、0.97±0.04和2.98±0.13.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平出现回落,但仍显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.同样,紫杉醇作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=7.26,P=0.004)、不同时间(F=8.32,P=0.002)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予9.37 μmol/L紫杉醇作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.81±0.05、2.25±0.10和1.78±0.14.其中MCF-7 control shRNA组细胞BCRP表达水平高于MCF-7 WT (P＜0.001)和MCF-7 DEDD-shRNA (P=0.002)组.而紫杉醇作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.73±0.04、1.73±0.05和3.12±0.12,MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平继续增高,且显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.结论 敲低DEDD表达可增强乳腺癌细胞的抗肿瘤药耐药性,BCRP的表达增加可能是低表达DEDD乳腺癌细胞多药耐药的机制之一.     

凋亡素诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株凋亡的研究

目的:研究凋亡素对人成骨肉瘤细胞0S-732多药耐药株R-OS-732的作用.方法:凋亡素基因VP3经酶切后克隆入质粒pIRES1,获得重组质粒pIRVP3,通过脂质体法pIRVP3转染R-0S-732细胞,RT-PCR检测凋亡素在细胞中的表达;光镜及电镜下观察瘤细胞;提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳;流式细胞仪检测凋亡率.结果:凋亡素基因已在转录水平表达;光镜及电镜下两组细胞形态变化明显;电泳见转染组DNA呈梯状条带,对照组为单一条带;转染组凋亡率明显高于空白对照组(P＜0.01).结论:凋亡素可有效诱导R-OS-732细胞凋亡.     

阿蒂莫耶番荔枝内酯诱导MCF—7／ADR细胞凋亡的研究

目的：探讨阿蒂莫耶番荔枝内酯对有多药抗药性的阿霉素的人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７／ＡＤＲ凋亡的诱导作用，揭示其抗癌机制。方法；用ＭＴＴ法观察药物对细胞的生长抑制作用，ＴＵＮＥＬ法，流式细胞仪及光镜，电镜等技术研究癌细胞凋亡。结果；药物对癌细胞有明显生长抑制作用，ＩＣ５０Ｏ １０．５ｍｇ／Ｌ；光１镜，电镜可见染色质浓缩，聚集核膜下，核碎裂等改变；流式细胞仪检测到凋亡峰；１０ｍｇ／Ｌ药物作用４８小时，ＴＵＮ     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

电化学治疗对具多药耐药表型的人乳腺癌细胞MCF-7adr的作用

目的：研究电化学治疗（ＥＣＴ）对具多药耐药表型的人乳腺癌细胞ＭＣＦ－７＾ａｄｒ的作用。方法：以敏感型人乳腺细胞ＭＣＦ－７为对照,采用细胞计数法观察ＥＣＴ对乳腺癌耐药细胞株ＭＣＦ－７＾ａｄｒ的抑制效应,以ＡｎｎｅｘｉｎＶ标记法观察ＥＣＴ的诱导ＭＣＦ－７＾ａｄｒ细胞凋亡的作用。结果：ＥＣＴ对耐药细胞ＭＣＦ－７＾ａｄｒ的诱导凋亡及抑制效应接近于其对敏感细胞ＭＣＦ－７的作用,无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。     

miR-204对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨miR-204在人乳腺癌组织及MCF-7细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 提取癌症和肿瘤基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库中浸润性乳腺癌的miR-204相关数据进行汇总,转染miR-204过表达病毒,筛选稳定转染细胞株并通过RT-qPCR检测转染率,MTT法检测过表达miR-204后乳腺癌MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果 miR-204在浸润性乳腺癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P＜0.001）,且与淋巴结转移和远处转移相关（P＜0.05）。过表达miR-204能够抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力（P＜0.05）;miR-204上调后,细胞凋亡率达到（34.7±1.9）%,细胞凋亡能力明显增强（P＜0.001）。结论 miR-204可抑制乳腺癌细胞增殖并介导细胞凋亡。     

Toremifene诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的研究

目的研究Toremifene体外诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR凋亡和凋亡相关基因Fas、FasL、p53和Caspase-3表达的关系.方法以不同浓度Toremifene(0.24μg/ml、2.4μg/ml、24μg/ml)诱导MCF-7/ADR细胞凋亡;以MTT法观察不同处理浓度的Toremifene对MCF-7/ADR细胞DNA合成活性的影响;以免疫组化检测Fas、FasL、p53和Caspase-3蛋白表达.结果不同浓度Toremifene处理的MCF-7/ADR细胞出现DNA合成活性下降,抑制强度与浓度有关(P＜0.05);Fas、FasL、p53和Caspase-3蛋白呈上调表达.结论Toremifene能诱导细胞凋亡;增加Fas、FasL、p53和Caspase-3基因表达;并且与启动Caspase-3凋亡信号和p53直接介导的凋亡有关.     

毛蕊异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞作用的体外研究

目的:观察毛蕊异黄酮在体外对雌激素受体阳性细胞人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制。方法:用不同浓度毛蕊异黄酮作用MCF-7细胞,并设未处理阴性对照组及17-雌二醇(17-estradiol,E2)阳性对照组。MTT法测定细胞增殖抑制的情况,FCM检测细胞凋亡率影响,并通过RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定细胞中Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白水平变化。结果:低浓度的毛蕊异黄酮(2、4和8μmol/L)促进MCF-7细胞增殖,而高浓度毛蕊异黄酮(16和32μmol/L)抑制MCF-7细胞增殖,并且呈剂量依赖性。同时,低浓度的毛蕊异黄酮能减少MCF-7细胞凋亡率(P<0.05),并且显著降低Bax表达水平,增加Bcl-2表达水平(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮在低浓度时能促进MCF-7细胞增殖,减少细胞凋亡,其机制可能与毛蕊异黄酮的雌激素作用有关。     

VEGF EXPRESSION IS INHIBITED BY APIGENIN IN HUMAN BREAST CANCER CELLS

Objective： To study the effects of apigenin on vascular endothelial growth factor （VEGF） in human breast cancer cells （MDA-MB-231. Methods： MTT assay was used to detect the cell proliferation inhibitory effect of apigenin on MDA-MB-231 cell. ELISA was used to determine the protein level of VEGF secreted by MDA-MB-231 cells. RT-PCR was used to detect mRNA levels of VEGF in MDA-MB-231 cells. The protein levels of HIF-1α, p-AKT, p-ERK1/2, and p53 were detected by Western Blotting. Results： Apigenin did not inhibit the cell viability of MDA-MB-231 cell. Apigenin reduced the secretion and mRNA levels of VEGF in MDA-MB-231 cells. Additionally, apigenin decreased the expressions of HIF-1α, p-AKT and p-ERK1/2, but induced the expression of p53. Conclusion： Apigenin can inhibit VEGF expression in human breast cancer cells, and this may be achieved through decreasing HIF-1α.     

腺苷酸活化蛋白激酶增强乳腺癌对多柔比星化疗敏感性的机制

背景与目的：腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)在调控细胞代谢和能量平衡方面起着重要作用,并与细胞增殖、生存和多种信号通路密切相关。近年来发现AMPK参与肿瘤的抑制和耐药。该研究旨在探讨AMPK对多柔比星抑制乳腺癌作用的影响及其机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝(meth-ylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测多柔比星作用后对MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞增殖的影响;Hoechst染色法观察各组细胞凋亡形态;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞凋亡率;荧光酶标仪检测3组细胞多柔比星累积量;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各组细胞中耐药蛋白及凋亡相关蛋白的表达。结果：多柔比星对MCF-7/adr细胞增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(36.8±2.1)和(28.8±1.3)μg/mL。过表达AMPKα可增加多柔比星对MCF-7/adr细胞的生长抑制作用,呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(16.0±0.7)和(4.2±0.2)μg/mL。荧光形态分析发现多柔比星联合AMPKα能诱导MCF-7/adr细胞凋亡。1.0μg/mL多柔比星作用48 h后,MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞的凋亡率分别为(12.0±1.4)%、(12.7±1.6)%和(32.0±4.2)%,MCF-7/adr细胞中AMPKα过表达明显提高MCF-7/adr细胞对多柔比星的敏感性。荧光酶标仪检测显示,过表达AMPKα能明显提高细胞内多柔比星的累积量,具有浓度依赖性。Western blot实验结果显示,与MCF-7/adr和MCF-7/adr-vector细胞比较,MCF-7/adr-AMPKα细胞中Bax、细胞色素c(Cyto c)的释放、caspase-3和多聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶降解产物(cleaved PARP)蛋白表达明显增加,而细胞外排泵P-糖蛋白(P-gp)和Bcl-2蛋白表达降低。结论：AMPKα可通过抑制耐药细胞外排泵以及调控凋亡相关蛋白的表达,从而增强乳腺癌耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性。     

三苯氧胺诱导人乳腺癌MCF-7细胞株耐药及自噬的关系研究

背景与目的:三苯氧胺(tamoxifen)作为第一代选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulator,SERM)被广泛地应用于激素敏感型乳腺癌的内分泌一线治疗。三苯氧胺耐药的发生严重限制了临床治疗,是乳腺癌患者用药面临的重大难题,明确其耐药机制对乳腺癌的治疗有重要临床意义。本研究通过体外诱导人乳腺癌细胞MCF-7三苯氧胺耐药,探讨细胞产生三苯氧胺耐药时自噬水平的变化与MAPK家族蛋白细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)蛋白表达量及磷酸化水平的变化。方法:浓度递增筛选法诱导MCF-7细胞耐药,透射电镜观察MCF-7细胞与耐药细胞内的自噬泡数量,CCK8法检测细胞增殖状态,应用Western blot检测LC3Ⅱ、ERK1/2、Phospho-ERK1/2蛋白的表达情况。结果:诱导的三苯氧胺耐药细胞株TR5达到5μmol/L的耐药浓度。TR5细胞内的自噬泡数量与LC3Ⅱ表达量明显高于MCF-7细胞。ERK蛋白在两种细胞中的表达量差异无统计学意义,但其在TR5中的磷酸化水平比MCF-7细胞高。结论:...