重症肌无力患者汉密尔顿抑郁量表评分分析

目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression rating scale,HDRS)评分情况及其影响因素分析。方法横断面研究2013-07—2015-03作者医院就诊的188例MG患者的临床资料和HDRS评分情况,并根据HDRS评分将其分为抑郁组和非抑郁组,分析两组MG患者的临床特点及其与HDRS评分间的关系。结果所纳入MG患者男女比例为1.02∶1,眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)和全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)的比例为1.2∶1,以OMG起病和以GMG起病患者的比例为6.2∶1,病程中位数为2年,四分位数间距为1.8年,平均量化重症肌无力评分(quantitative myasthenia gravis,QMG)为(6.7±2.3)分,平均HDRS评分为(8.7±3.4)分,并发抑郁者65例,未并发抑郁者123例。影响HDRS评分和抑郁发生的相关因素包括性别(P0.01)、MG类型(P0.01)、QMG得分(P0.01)和美国重症肌无力协会(myasthenia gravis foundation of America,MGFA)分型(P0.01)、有无甲状腺功能亢进(P0.05)。结论影响MG患者HDRS评分和抑郁发生的相关因素包括性别、MG类型、QMG评分和MGFA分型、有无甲状腺功能亢进,充分认识其抑郁发生情况有利于更好地治疗MG。     

Th22细胞及相关因子在重症肌无力患者外周血中的表达

目的研究重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血辅助性T细胞22(T helper 22cells,Th22)和白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)的表达以及两者间的相关性。方法收集25例MG患者和24例健康对照者,其中眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者14例,全身型重症肌无力(general myasthenia gravis,GMG)患者11例。采用流式细胞仪检测MG患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th22细胞的比例,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆IL-22的表达。比较各组间Th22细胞比例和IL-22表达水平差异,以及Th22细胞比例和IL-22表达间的相关性。结果 MG患者PBMC中Th22细胞比例、血浆IL-22表达水平均显著低于健康对照组[(0.60±0.07)%比(0.92±0.09)%,P0.01;(18.65±1.38)pg/mL比(24.54±1.85)pg/mL,P0.05];OMG与GMG患者间Th22细胞比例、IL-22表达水平均无统计学差异(均P0.05);MG患者PBMC中Th22细胞比例与IL-22表达水平间呈中度正相关(r=0.59,P0.01)。结论 MG患者体内Th22细胞比例及血浆IL-22表达水平减低可能导致免疫功能紊乱进而影响MG的发病。     

重症肌无力患者胸腺组织核胞浆转运蛋白α-5的表达研究

目的 探讨核胞浆转运蛋白α-5(karyopherin alpha-5,KPNA 5)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺组织中的表达情况.方法 分别利用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)和免疫组化染色方法,检测MG组20例患者与对照组10名受试者胸腺组织中KPNA 5 mRNA和蛋白分子的表达.结果 MG组和对照组胸腺组织中,KPNA 5 mRNA的表达水平分别为(0.71±0.08)和(0.57±0.02),两者之问的差异有统计学意义(P＜0.05);KPNA 5蛋白阳性细胞均数分别为(8.99±0.49)和(5.88±0.69),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 KPNA 5分子在MG胸腺组织中表达增高,可能参与了MG的发生,是MG相关基因.     

重症肌无力伴胸腺瘤患者胸腺组织蛋白4.1R mRNA的表达研究

目的探讨蛋白4.1R在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)伴胸腺瘤患者胸腺组织中的表达情况。方法运用半定量RT-PCR方法检测7例胸腺瘤MG与7例正常对照组胸腺组织中蛋白4.1R的表达。结果胸腺瘤MG组胸腺组织中蛋白4.1R mRNA的相对表达水平为0.84±0.46,与对照组0.43±3.69相比明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论蛋白4.1R在胸腺瘤MG患者胸腺组织中mRNA水平表达异常,可能干扰胸腺细胞的信号传导,从而影响胸腺细胞的增殖和活化,参与了MG的发生。     

重症肌无力患者临床特征与褪黑素水平及受体表达相关性研究

目的研究重症肌无力(myasthenia gravis, MG)患者褪黑素水平及其受体的表达并探讨其临床意义。方法收集MG患者和健康对照各15名,采用定量MG评分系统(quantitative MG scoring system,QMGs)对MG病情的严重程度进行评估;酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测MG患者及健康对照血清褪黑素水平;流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测外周CD4~+辅助T细胞褪黑素核受体RORα的表达;蛋白质印迹(Western blot,WB)对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)褪黑素膜受体MT1及核受体RORα进行半定量检测;比较分析MG患者及健康对照褪黑素水平及其受体表达的差异;并将其与QMGs评分进行相关性分析。结果 MG患者血清褪黑素水平[(381.2±79. 34)pg/mL vs.(403. 8±43. 07)pg/mL;t=0. 34,P0. 05]以及外周CD4~+辅助T细胞褪黑素核受体RORα的表达[(0. 68±0. 45)%vs.(0. 92±0. 57)%;t=1. 25,P0. 05]与健康对照相比无显著差异。WB结果显示MG患者PBMCs中褪黑素膜受体MT1的表达较健康对照显著下降[(0.35±0. 16)%vs.(0.55±0.21)%;t=1.25,P0. 05];患者和健康对照PBMCs中RORa表达[(0. 57±0. 23)%vs.(0. 4 5±0. 15)%;t=1. 38,P0. 05]比较无显著差异。相关性分析结果显示:MG患者血清褪黑素水平(r=0.43,P0.05)、CD4~+辅助T细胞RORα表达(r=0. 30,P0. 05)、PBMCs中褪黑素膜表面受体MT1(r=-0. 23,P0. 05)及核受体RORα(r=0. 17,P0.05)表达与QMGs评分无相关性。结论 MG患者褪黑素水平无明显改变,然而褪黑素膜受体MT1表达减少,提示褪黑素通过MT1发挥调节功能在MG患者中可能存在缺陷。     

FcγRⅡB在重症肌无力中的表达及其与抗AChR抗体的关系

目的探讨免疫球蛋白IgG的Fc段受体ⅡB(FcγRⅡB)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)发病中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术和流式细胞术,检测26名血清乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性MG患者和26名正常对照组外周血B淋巴细胞中FcγRⅡBmRNA和FcγRⅡB蛋白的表达水平,ELISA检测血清AChR抗体水平,分析三者之间的关系。结果 MG组外周血B细胞中FcγRⅡBmRNA的表达明显低于正常对照组(P0.01),但在眼肌型患者和全身型患者的表达无统计学差异(P0.05)。MG患者外周血B细胞上FcγRⅡB的表达低于对照组(P0.05)。IgG型AChR抗体水平与B细胞中FcγRⅡB1mRNA和FcγRⅡB2mRNA表达水平呈负相关(P0.01),与FcγRⅡB的表达亦为负相关(P0.05)。结论 MG中B细胞上FcγRⅡB在转录和蛋白水平表达均降低,负调控作用减弱,造成B细胞过度活化,产生大量抗AChR自身抗体,可能是MG发病的一个重要环节。     

重症肌无力患者外周血单核细胞凋亡调控基因表达的研究

目的 探讨重症肌无力（MG）患者外周血单核细胞（PBMC）凋亡调控基因Fas、Bcl-2mRNA表达及意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）半定量方法检测44例MG患者（MG组）和30名健康对照者（NC组）PBMC Fas、Bcl-2mRNA的相对含量。结果 （1）MG组Fas mRNA表达水平与NC组相比差异无统计学意义;Bcl-2mRNA表达明显高于NC组（P〈0．05）。（2）中型、重型及极重型MG患者Bcl-2mRNA相对含量明显高于轻型MG患者（P〈0．05～0．01）;Bcl-2mRNA相对含量与MG患者病情评分呈正相关（r=0．767,P〈0．01）。结论 MG患者PBMCFas表达可能与MG发病无关;Bcl-2mRNA高表达可能参与MG患者PBMC凋亡调控机制,其表达水平可以作为观察MG患者病情的指标.     

重性抑郁障碍患者外周血单个核细胞中微小RNA-132治疗前后的表达水平研究

目的:探讨重性抑郁障碍(MDD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miR)-132表达水平在抗抑郁治疗前后的改变。方法:给予32例MDD患者(MDD组)8周的抗抑郁药治疗;以治疗后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)评分的减分率≥50%为有效;治疗前后采用实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)对MDD组患者PBMC中miR-132表达进行定量分析;并与30名健康对照者(对照组)比较。结果:基线期MDD组PBMC中miR-132相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P=0.226);治疗后MDD组PBMC中miR-132相对表达量较基线明显上调(t=-2.356,P=0.025);且有效患者miR-132表达水平较基线明显升高(t=-2.804,P=0.01),无效患者治疗前后PBMC中miR-132表达水平比较差异无统计学意义(z=-0.943,P=0.438)。结论:MDD患者PBMC中miR-132表达水平的变化可能与抗抑郁药的疗效有关。     

重症肌无力患者外周血AIRE、Tfh细胞和Tfr细胞与病情严重性相关分析

目的探讨自身免疫性调节因子(AIRE)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞与重症肌无力(MG)患者病情严重程度的相关性。方法收集2015-12—2016-4第四军医大学唐都医院收治的MG患者22例,根据临床表现分为全身型MG(GMG)和眼肌型MG(OMG);同期选取健康体检中心查体者10名作为健康对照。收集MG患者详细临床资料,包括美国MG协会(MGFA)分型及定量MG(QMG)评分。通过流式细胞术分析AIRE阳性细胞比例及Tfh/Tfr比值。结果 (1)AIRE表达在各组间比较差异具有统计学意义(P0.01)。GMG组和OMG组AIRE表达均较对照组降低(P0.01,P0.05),而GMG组与OMG组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Tfh/Tfr比值在各组间比较差异具有统计学意义(P0.01)。GMG组和OMG组Tfh/Tfr比值均高于对照组(P0.01,P0.05),且GMG组高于OMG组(P0.05)。(3)MG患者AIRE表达与MGFA分型及QMG评分呈负相关(r=-0.517,P0.05;r=-0.616,P0.01),Tfh/Tfr比值与MGFA分型和QMG评分呈正相关(r=0.761,r=0.581,均P0.01)。结论 AIRE、Tfh/Tfr比值与MG的病情严重程度有一定的相关性,并可能参与了MG的发病。     

重症肌无力胸腺切除术后181例远期疗效分析

目前,胸腺切除术在临床已广泛应用于重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的治疗.我们分析了1991-2006年于我院行胸腺手术的181例MG患者的疗效和影响疗效的相关因素.     

MG患者外周血Th17细胞与AChR抗体产生的关系研究

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血中Th17细胞及相关细胞因子白细胞介素17(IL-17)在MG发病中的作用。方法收集40例MG患者和10名健康人(对照组)外周血标本,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞比例,反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测PBMCs中维甲酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA水平,ELISA检测血清中IL-17水平,放射免疫沉淀法检测血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度;分离PBMCs中CD4~+T细胞和CD19~+B细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)进行共培养,培养系统中加入人IL-17和(或)IL-21中和抗体,放射免疫测定法检测培养液中AChR-Ab滴度。采用MG评分(quantitative MG scoring system,QMGs)对MG的严重程度进行评估,并对MG患者的Th17细胞比例、RORγt mRNA和IL-17水平与病情QMGs的相关性,以及MG患者抗AChR-Ab滴度与PBMCs中Th17细胞比例的相关性进行分析。结果 MG患者PBMCs中Th17细胞比例[1.11%(0.90%,1.34%)]高于健康对照组Th17细胞比例[0.26%(0.08%,0.36%)](z=5.494,P0.001),且与疾病严重程度呈正相关(r=0.4394,P=0.0046);血清中IL-17水平和PBMCs中RORγt mRNA相对表达[分别71.46(53.91,104.76)pg/mL、2.63(1.94,3.12)]均较健康对照组[分别18.82(12.73,29.80)pg/mL、1.13(0.98,1.28)]显著增高(均P0.001);MG患者血清中抗AChR-Ab滴度[2.34(1.19,3.60)nmol/L]较健康对照组[-0.08(-0.24,-0.03)nmol/L]显著增高(z=4.662,P0.001),且与Th17细胞比例呈正相关(r=0.7066,P=0.0001)。MG患者外周血T、B细胞与SEB共培养后抗AChR-Ab水平高于未加入SEB时及健康对照(均P0.01);加入抗人IL-21或IL-17中和抗体后,两者AChR-Ab滴度与未加入抗体时AChR-Ab滴度比较均降低(均P0.05),且均仍高于MG患者未加入SEB时及健康对照(P0.01);在培养上清中同时加入抗人IL-21和IL-17中和抗体时AChR-Ab滴度明显低于加入单种抗体时,而与未加入SEB时及健康对照差异无统计学意义(均P0.05)。结论 MG患者外周血中Th17细胞可能通过IL-17促进AChR-Ab产生,参与疾病的病理过程。     

重症肌无力外周血调节性T细胞线粒体自噬异常的研究

目的探讨线粒体自噬对重症肌无力(myasthenia Gravis,MG)患者外周血调节性T细胞(CD4~+CD25~+regulatory T cell,Treg)功能的影响及关系。方法选择首次确诊、尚未接受治疗的15例MG患者,以15名健康人作为对照,分别采集外周血,以磁珠分选法获得Treg细胞,经流式细胞仪鉴定纯度后,分别通过透射电镜检测Treg细胞线粒体自噬情况、Western Blot法检测微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达水平、JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(以红色荧光细胞数/绿色荧光细胞数比值表示)变化、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)检测Treg对正常CD4~+T细胞增殖抑制能力(荧光强度越强,增殖抑制能力越强)。结果与对照组比较,MG组电镜下线粒体自噬明显减少[(25.60±7.81)个、(19.20±5.49)个,t=-2.596,P0.05],且变形线粒体较多;MG组LC3-Ⅱ表达明显减少(0.450±0.137、0.334±0.124,t=-2.413,P0.05);MG组Treg细胞线粒体膜电位下降(2.153±0.537,1.726±0.494,t=2.126,P0.05);MG组CFSE检测平均荧光强度减弱(34.82±10.64、26.49±5.94,t=2.646,P0.05)。结论 MG患者有Treg细胞的线粒体自噬功能降低,这可能与其增殖抑制功能降低相关。     

重症肌无力胸腺单个核细胞白细胞介素-2、白细胞介素-10及其mRNA水平的变化

目的　研究重症肌无力 ( myasthenia gravis,MG)患者胸腺是否存在辅助性 T细胞 ( Th)亚群的免疫活性紊乱。方法　利用亲和层析法自人腓肠肌纯化获得乙酰胆碱受体 ( ACh R)并进行了鉴定 ,然后用其作为特异性抗原 ,经体外培养刺激 5例 MG患者胸腺和外周血单个核细胞 ,酶联免疫吸附分析 ( ELISA)法检测上清液中白细胞介素 -2 ( IL-2 )、白细胞介素 -1 0 ( IL-1 0 )水平 ,狭缝印迹杂交法检测 MG胸腺及外周血 IL-1 0 m RNA的表达。结果　MG胸腺和外周血经 ACh R刺激后 ,其上清液 IL-2水平略高于对照组 ( P>0 .0 5 ) ,经 ELISA法和狭缝印迹杂交法发现 MG外周血 IL-1 0及其 m RNA表达水平均略高于对照组 ( P>0 .0 5 ) ,胸腺则明显高于对照组( P<0 .0 5 )。结论　 MG发病过程中 IL-1 0的异常增高可能发生于转录或转录以上水平 ,其异常表达的机制有待于进一步研究。     

脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及其与病人临床预后的关系

目的 探讨脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及临床意义。方法 选取2016年3月1日至2019年3月1日收治的脑胶质瘤42例,另选20例同期健康查体者为对照,用RT-PCR法检测血浆miR-9-3p水平。42例脑胶质瘤术后随访24～60个月,记录生存情况;以血浆miR-9-3p平均值为准,分为低表达和高表达。结果 脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p水平明显降低（P<0.05）,多因素Cox分析显示,血浆miR-9-3P低表达是脑胶质瘤病人不良生存预后的独立危险因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,miR-9-3p低表达脑胶质瘤病人中位总生存期较高表达病人明显缩短（P<0.05）。结论 人脑胶质瘤血浆miR-9-3p表达下调,与病人不良生存预后密切相关。     

Spinophilin的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系

目的 探讨垂体腺瘤（PA）组织Spinophilin（SPN）的表达及其与腺瘤侵袭性的关系。方法 选取2018年8月至2021年6月手术切除并经术后病理确诊的PA组织98例和瘤旁组织64例，用免疫组化染色检测SPN蛋白表达水平，应用PCR检查PA组织SPN mRNA表达水平。根据Knosp分类法评估肿瘤侵袭性。结果 98例中，侵袭性46例，非侵袭性52例。PA组织SPN阳性表达率（21.43%，21/98）明显低于瘤旁组织（71.87%，46/64；P<0.05）。侵袭性PA组织SPN阳性表达率（13.04%，6/46）明显低于非侵袭性PA组织（28.85%，15/52；P<0.05）。PA组织SPN mRNA相对表达量（1.21±0.37）明显低于瘤旁组织（2.89±0.75；P<0.05）。SPN阴性表达（OR=2.876；95%CI 1.003~5.121；P<0.001）是PA侵袭性的独立危险因素。ROC曲线分析显示，SPN mRNA预测PA侵袭性的AUC为0.830（95%CI 0.813~0.916；P<0.001），诊断临界值为0.84，灵敏度和特异度分别为95.23%和83.12%。结论 侵袭性PA组织SPN呈低表达，检测SPN表达水平对PA侵袭性有一定评估作用。     

急性脑梗死患者miR-210的表达及意义

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清中缺氧激活因子微小RNA-210(miR-210)的表达情况及临床意义。方法选取2013-01—2015-01在我院治疗的ACI患者122例(ACI组),同时选择同期健康体检人群80例为对照组,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清miR-210表达水平。结果 ACI组miR-210表达量为(1.24±0.07)2~(-△△Ct),明显低于对照组的(2.02±0.11)2~(-△△Ct),差异有统计学意义(P0.05);男女ACI患者血清miR-210表达比较差异无统计学意义(P0.05);≤60岁和60岁ACI患者血清miR-210表达比较差异无统计学意义(P0.05);重度ACI患者血清miR-210表达为(1.10±0.08)2~(-△△Ct),明显低于轻度和中度患者,差异有统计学意义(P0.05);中度ACI患者血清miR-210表达为(1.29±0.10)2~(-△△Ct),低于轻度患者,差异有统计学意义(P0.05);miR-210对ACI的ROC曲线下面积为0.961,95%CI为0.926~0.996,截断值为(1.378)2~(-△△Ct),时,灵敏度为91.30%,特异度为97.54%。结论急性脑梗死患者血清中miR-210表达减弱,且与急性脑梗死严重程度有关,可作为急性脑梗死的诊断依据。     

垂体腺瘤组织miR-26b-5p表达与术后复发的关系

目的 探讨微小核糖核酸-26b-5p（miR-26b-5p）与垂体腺瘤术后复发的关系。方法 收集2018年1月~2020年1月手术切除的124例垂体腺瘤组织，采用qRT-PCR检测miR-26b-5p相对表达水平。术后随访2年，利用多因素logistic回归模型分析垂体腺瘤术后复发的危险因素，绘制ROC曲线分析miR-26b-5p评估垂体腺瘤术后复发的效果。结果 124例中，术后复发34例，复发率为27.42%（34/124）。复发垂体腺瘤miR-26b-5p相对表达量（1.25±0.43）明显低于非复发垂体腺瘤[（1.87±0.49）；P<0.001]。多因素logistic回归分析显示，miR-26b-5p低表达是术后复发的独立危险因素（OR=1.232；95% CI 1.058~3.524；P<0.001）。ROC曲线分析显示，miR-26b-5p表达水平评估垂体腺瘤术后复发的曲线下面积为0.841（95% CI 0.767~0.915；P<0.001），最佳截断值为1.518，敏感度为84.80%，特异度为81.00%。结论 复发垂体腺瘤的miR-26b-5p表达水平明显下降，miR-26b-5p表达变化与术后复发密切相关，对评估垂体腺瘤术后复发有一定的价值。