重症肌无力患者外周血单个核细胞CD40配体的表达

ＣＤ4 0配体 (ＣＤ4 0Ｌ)与ＣＤ4 0交联结合是Ｔ细胞激活必需的共刺激信号 ,为探讨ＣＤ4 0Ｌ ＣＤ4 0共刺激信号通路在ＭＧ发病中的作用 ,我们分析ＭＧ患者外周血ＣＤ4 0Ｌ的表达。研究对象 :ＭＧ组 :18例 ,9例作血清ＡＣｈＲａｂ测定 ,阳性5例 ,阴性 4例 ;6例正用免疫抑制剂 ,1例施行了胸腺切除术(胸腺增生 )。对照组 :健康志愿者和献血员 16名。方法 :(1)取ＭＧ患者和对照者外周血 ,用Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度法分离ＰＢＭＣ ,并调制成 1× 10 6/ｍｌ的细胞悬液 ;每毫升细胞悬液加入 5ｎｇ/ｍｌＰＭＡ +5 0 0ｎｇ/ｍｌｉｏｎｏｍｙｃｉｎ共同…     

重症肌无力患者外周血单个核细胞中microRNA-23b表达的初步探究

目的探讨microRNA-23b与MG发病的相关性。方法 31例MG患者,31例健康人,取其外周血分离外周血单个核细胞(PBMCs),提取RNA并逆转录,实时定量PCR检测microRNA-23b的表达,以小分子RNAU6为内参,计算标准化后的2-ΔCt值表示microRNA-23b相对表达量。结果 MG患者PBMCs中microRNA-23b的表达水平高于健康对照组(P=0.0266),但其在MG不同临床特征亚组中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。MicroRNA-23b表达水平与肌无力严重程度之间的相关性无统计学意义(r=-0.0308,P=0.8695)。结论 MG患者PBMCs中microRNA-23b异常高表达,但与性别、发病年龄、类型、胸腺状态、甲状腺功能及肌无力严重程度无关。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体α同型与激素疗效的关系

目的观察重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体α同型(hGRα)含量或核转位率与激素疗效的关系。方法收集MG患者51例、其他神经免疫性疾病(ONID)患者16例及健康对照者11名,分别提取外周血单个核细胞(PBMC)细胞核和细胞质蛋白质,采用生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)定量测定经体外地塞米松(DEX)作用前、后PBMC细胞质和细胞核内hGRα含量,并计算hGRα核转位率。应用临床相对记分法评价激素疗效。结果未经DEX处理时MG和ONID组PBMC细胞质hGRα含量均低于健康对照组(P<0.05),经DEX处理后MG组其hGRα含量明显低于健康对照组(P<0.01)。MG患者的性别、年龄、伴发胸腺疾病情况和hGRα含量以及hGRα核转位率间均无明显相关(P>0.05)。Osserman分型Ⅳ型MG患者hGRα核转位率低于其他分型者(P<0.05)。病程≥2年的MG患者hGRα核转位率明显低于病程≤6个月和病程6个月~2年的MG患者(均P<0.01)。MG患者PBMC的细胞核内hGRα含量和hGRα核转位率与激素治疗2周(n=51,r=0.913,r=0.907,P<0.05)和4周(n=47,r=0.929,r=0.911,P<0.05)的临床相对评分间均呈正相关。结论经DEX作用后PBMC细胞核内hGRα含量和激素诱导的hGRα核转位率与MG患者对激素的敏感性间呈正相关,两者可作为预测激素疗效的实验室指标。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞凋亡调控基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血单个核细胞(PBMC)凋亡调控基因Bcl-2mRNA表达水平与MG的关系。方法应用RT-PCR半定量方法检测45例MG患者(MG组)和30名健康对照组(NC组)PBMCBcl-2mRNA表达的相对含量,对MG患者病情按许贤豪绝对及相对评分法进行量化,激素治疗4周后测定Bcl-2mRNA表达水平。结果(1)MG患者PBMCBcl-2mRNA表达相对含量[(0.513±0.038)%]明显高于NC组[(0.371±0.045)%](P<0.05)。(2)病情以许贤豪绝对及相对标准评分为:轻、中、重及极重组,其PBMCBcl-2mRNA的相对含量分别为(0.466±0.047)%、(0.557±0.029)%、(0.561±0.052)%和(0.637±0.041)%,后3者明显高于轻度组患者(均P<0.05);Bcl-2mRNA的相对含量与其MG患者病情绝对评分呈明显正相关(r=0.767),且具有统计学意义(P<0.01)。(3)激素治疗后各组Bcl-2mRNA表达相对含量分别为(0.256±0.033)%、(0.475±0.045)%、(0.487±0.027)%和(0.481±0.051)%,与治疗前比较均明显降低(P<0.01);治疗后各组病情评分分别为4.29±1.70、20.12±10.79、27.29±11.50和32.20±16.80,均明显下降(P<0.01)。结论肾上腺皮质激素治疗后,MG患者随病情好转,伴PBMC的Bcl-2mRNA升高,提示:检测PBMC的Bcl-2mRNA有可能作为反映MG患者病情及免疫疗效的参数。     

重症肌无力患者外周血Bcl-2基因mRNA与蛋白的表达及其意义

重症肌无力（myasthenia grasis，MG）是一种重点累及神经-肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体（AChR）的自身免疫性疾病。近年来有研究表明，细胞凋亡缺陷与MG的发生、发展有着密切的关系，我们采用逆转录-PCR（RT-PCR）检测Bcl-2 mRNA在MG患者外周血单个核细胞（PBMC）的表达，流式细胞仪测定T、B淋巴细胞Bcl-2蛋白表达，旨在探讨其与MG发病的关系。     

新发病重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体水平与糖皮质激素疗效的研究

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)糖皮质激素受体(GR)水平对预测糖皮质激素(GC)治疗(但未经其他免疫治疗)新发病重症肌无力(新发病MG)患者疗效的价值。方法收集100例新发病MG患者,用3H-地塞米松放射配体法测定PBMC中的GR数量,用ELISA法检测血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)水平。肌无力严重程度和临床疗效判定采用临床绝对和相对记分法。结果(1)100例新发病MG患者,免疫治疗前PBMC GR数量[(3633±1711.2)位点/细胞]明显低于健康对照组[(5563±1232.6)位点/细胞],其血清AChR-Ab水平[(3.79±0.74)nmol/L]明显高于健康对照组(<2.996 nmol/L)(均P<0.01)。(2)20例新发病MG患者仅经GC治疗,治疗至少1个月后其PBMC GR水平和血清AChR-Ab水平均下调,分别为(1928.97±1025.47)位点/细胞和(3.05±0.78)nmol/L。(3)治疗前GR数量与临床相对评分呈正相关(r=0.41,P<0.05),GR数量下调与AChR-Ab下调呈正相关(r=0.478,P<0.05)。结论(1)新发病MG患者PBMC GR数量低于正常。(2)可用MG患者治疗前PBMC GR数量预测GC疗效,且治疗前PBMC GR数量高者疗效好。     

重症肌无力患者胸腺细胞及外周血淋巴细胞Fas表达研究

目的 探讨重症肌无力(MG)的发病机制。方法 采用流式细胞术(FCM)分别检测MG患者胸腺细胞、外周血淋巴细胞(PBL)及地塞米松培养胸腺细胞的Fas表达。结果 MG患者PBL CD4、CD8细胞Fas表达率(分别为49％，34％；39％，34％)与对照组(分别为58％，25％；49％,24％)相比差异无显著性；MG患者胸腺细胞Fas表达率(11．20％，6．13％)较对照组(6．15％，1．84％)明显增高；地塞米松培养组Fas表达率MG组、正常人组分别为11．54％、8．62％和7．08％、3．13％，与空白对照组(MG组、正常人组分别为11．36％、6．87％和7．22％、2．86％)相比差异无显著性。结论 MG患者PBI，CD4、CD8细胞Fas表达率无明显增高，可能与自身反应淋巴细胞Fas和PBL FasL结合，发生程序化死亡有关。MG患者胸腺细胞Fas表达增高，可能参与MG发病初制。     

血浆及外周血单个核细胞微小RNA在精神分裂症诊断中的研究

目的:探索血浆及外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA (miRNA)在精神分裂症(SZ)诊断中的价值。方法:根据文献报道筛选出与SZ相关的7种miRNA (has-miR-449a,has-miR-34a-5p,has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p,has-miR-548d-5p和has-miR-572);提取35例初诊的SZ患者(患者组)及15名健康体检者(对照组)的抗凝全血的血浆及PBMC中的RNA,采用实时逆转录聚合酶链式扩增反应技术测定血浆及PBMC中这7种miRNA水平,计算其相对表达量。结果:患者组血浆及PBMC中4种miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量较对照组明显增加(P均0.05);患者组7种miRNA的相对表达量血浆明显高于PBMC(P均0.05);多变量ROC曲线显示,患者组血浆miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-548d-5p)ROC曲线下面积为98%,灵敏度为90.9%,特异度为95.4%;PBMC miRNA(has-miR-652-3p,has-miR-564,has-miR-432-5p以及has-miR-548d-5p)ROC曲线下面积为86%;灵敏度为88.2%,特异度为78.3%。结论:SZ患者血浆及PBMC中的miRNA(miR-652-3p,miR-564,miR-432-5p和miR-548d-5p)相对表达量明显增高;血浆miRNA更有潜力成为SZ的分子诊断标志物。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞白细胞介素6活性变化

探讨白细胞介素 6(IL -6)在重症肌无力 (MG)发病机理中的作用及其临床意义。　　方法　采用3H -TdR掺入法检测 40例正常对照及 42例MG患者外周血单个核细胞IL -6分泌活性。　　结果　MG患者组IL -6活性显著高于正常对照组 ,且IL -6活性变化与乙酰胆碱受体抗体产生以及与MG临床类型、病情、预后密切相关。　　结论　IL -6在MG发病机理中起着重要作用 ,检测IL -6活性对区分MG临床类型、判断病情、推测预后、指导治疗有重要的参考价值。     

重症肌无力患者血乙酰胆碱酯酶活性测定及其临床意义

检测６３例重症肌无力患者和５０例正常健康人血浆乙酰胆碱酶（Ｐ－ＡｃｈＥ）活性、红细胞乙酰胆碱酯酶（Ｅ－ＡｃｈＥ）活性。结果，患者组的Ｐ－ＡｃｈＥ平均活性和Ｅ－ＡｃｈＥ平均活性皆显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）。提示重症肌无力的发病机制除了自身免疫因素外，还有乙酰胆碱酯酶活性改变的因素。     

负性协同刺激分子PD-1在重症肌无力患者外周血中的表达

目的 观察重症肌无力(MG)患者外周血中负性协同刺激分子programmed death-1( PD-1)的表达情况,并探讨其与MG发病的关系。方法 采用免疫荧光标记、流式细胞仪检测45例MG患者和33名健康对照者外周血单个核细胞中PD-1及其配体PD-L1的表达,用ELISA法检测各组血浆中可溶性PD-1的水平。结果 (1)MG患者表达PD-1的CD4+T淋巴细胞比例增加,CD14+PD-L1+的单核细胞比例增加,但在不同性别及眼肌型与全身型间差异无统计学意义;在胸腺异常MG患者中CD4+PD-1+T细胞增加,CD14+ PD-L1+的单核细胞比例减少;早发型MG患者（年龄＜40岁）CD4+PD-1+T淋巴细胞比例明显低于晚发型（年龄≥40岁）。(2)MG患者血浆中sPD-1浓度为(6.92 +0.72) ng/ml,明显高于健康对照组的(3.28±0.42) ng/ml,但在性别、MG眼肌型与全身型不同类型间和有无胸腺异常各组间差异无统计学意义,且sPD-1与发病年龄呈负相关(r=-0.526,P=0.000)。结论 PD-1及PD-L1途径参与了MG的发病,异常升高的sPD-1可能干扰了正常的细胞膜上PD-1与PD-L1的结合,从而促使疾病进展。     

重症肌无力患者外周血T淋巴细胞亚群凋亡的研究

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群凋亡在重症肌无力(MG)免疫发病机制中的作用及临床意义。方法采用流式细胞术结合免疫荧光抗体法测定了45例MG患者和40例正常对照组外周血CD4~ T淋巴细胞、CD8~ T淋巴细胞百分数及其凋亡状况,并对24例MG患者在应用糖皮质激素治疗后外周血T淋巴细胞亚群凋亡状况进行了观察。结果MG患者组外周血CD8~ T淋巴细胞百分率较正常对照组明显降低,CD4~ /CD8~ 比值较正常对照组明显升高：MG患者组外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度较正常对照组明显降低；MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度与MG类型、预后密切相关：应用糖皮质激素治疗后MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡程度明显增强。结论MG患者存在T淋巴细胞亚群的分布异常及CD4~ T淋巴细胞凋亡功能障碍,其凋亡程度可能与MG类型、预后密切相关,糖皮质激素对MG患者外周血CD4~ T淋巴细胞凋亡缺陷具有纠正作用。     

重症肌无力患者雷公藤多甙治疗前后周围血自然杀伤细胞含量变化的研究

目的探讨自然杀伤（ＮＫ）细胞在重症肌无力（ＭＧ）发病中的作用及雷公藤多甙（ＴⅡ）对ＭＧ的细胞免疫调节机制。方法将５２例ＭＧ患者随机分为ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组,观察此二组治疗前后及正常对照组周围血ＮＫ细胞含量及血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平的变化。结果ＴⅡ治疗组及非ＴⅡ治疗组治疗前周围血ＮＫ细胞含量较正常对照组明显减少,血清ｓＩＬ－２Ｒ水平较正常对照组明显升高,且周围血ＮＫ细胞含量与血清ｓＩＬ－２Ｒ水平呈负相关;ＴⅡ治疗组治疗后周围血ＮＫ细胞含量较治疗前明显增加,血清ｓＩＬ－２Ｒ水平较治疗前明显降低,而非ＴⅡ治疗组治疗前后周围血ＮＫ细胞含量及血清ｓＩＬ－２Ｒ水平则无显著变化。结论ＮＫ细胞在ＭＧ发病中起着重要作用,ＴⅡ治疗ＭＧ的机理可能是通过抑制ｓＩＬ－２Ｒ产生、增加ＮＫ细胞含量而发挥。     

重症肌无力患者外周血microRNA-146a、炎症细胞因子的表达水平变化及其相关性分析

目的 探讨重症肌无力患者外周血microRNA-146a、炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平变化及相关性分析。 方法 选取2015年7月-2018年11月本院收治的重症肌无力患者58例作为试验组（MG组）,另选取同期体检健康者30例作为对照组;采集空腹外周静脉血,分离单个核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR技术检测2组外周血单个核细胞总microRNA-146a的相对表达水平;采用ELISA技术检测2组外周炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平;比较2组microRNA-146a、炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平,分析重症肌无力患者microRNA-146a、症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）表达水平与重症肌无力定量评分（QMGS）的相关性以及microRNA-146与三种炎症细胞因子表达水平的相关性。 结果 MG患者外周血microRNA-146a、IL-6、CRP、TNF-α高表达(P<0.05);MG患者外周血microRNA-146a、IL-6、CRP、TNF-α表达水平与QMGS评分呈正相关(r=0.795,0.642,0.365,0.743,P均<0.05);MG患者microRNA-146a表达水平与IL-6、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.700,0.870,P<0.05),与CRP表达水平无相关性(r=0.235,P>0.05)。 结论 MG患者外周血存在microRNA-146a的高表达,且可能通过调控IL-6、TNF-α的表达来参与MG发病。     

重症肌无力患者血清sIL－2R水平检测及其临床意义

本文对４２例重症肌无力（ＭＧ）患者及４０例正常对照者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平进行了检测，并对１４例ＭＧ患者在应用糖皮质激素（ＧＣ）治疗后ｓＩＬ－２Ｒ水平变化进行了观察。结果：全身型及眼肌型ＭＧ患者皆显著高于正常对照组，而全身型患者明显高于眼肌型患者，病情重者明显高于病情轻者，预后好者显著低于预后差者，ＧＣ治疗后其ｓＩＬ－２Ｒ水平显著降低。提示ＭＧ患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平变化与ＭＧ临床表现密切相关，ＧＣ对ＭＧ患者ｓＩＬ－２Ｒ的产生有重要影响     

乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力外周血单个核细胞miRNA表达谱

目的本研究对比乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力患者(AchR-MG)和正常对照组外周血单个核细胞miRNA,预测对AchR-MG发病可能产生影响的通路,为进一步探讨发病机制打下基础。方法采用病例对照研究方法,基于高通量测序,筛选了AchR-MG特异性表达的miRNA。利用TargetScan、miRanda进行靶基因交叉预测,利用基因条目(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行富集分析。结果共筛选出差异性miRNA 28种,其中上调17种,下调11种。差异最显著的前5个为:mmu-miR-3968、miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p。miR-4785预测到METTL22、TMEM38A、ZNF324、ITGB4、CDC34等395种靶基因。最终识别了319条GO term(P 0.01),获得了119个的风险通路(P0.05)。结论 AchR-MG特异性表达miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p等28种miRNA。以Wnt信号通路为代表的多种通路可能参与AchR-MG的发病。     

重症肌无力病人乙酰胆碱受体抗体的测定及临床意义

用ＥＬＩＳＡ（固相酶联免疫吸附）法测定１７２例ＭＧ病人血清乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ），结果显著高于健康献血员组和非ＭＧ病人组。不同性别、病程及临床类型与ＡｃｈＲａｂ无相关性，但４１～５０岁组的显著高于其他年龄组。６７例类固醇激素治疗组、２２例大剂量两种球蛋白治疗组、１２例胸腺切除术组及３例ＭＧ危象病人２４次血浆交换疗法（ＰＥ）组，治疗后伴随肌无力症状的好转，ＡｃｈＲａｂ均显著低于治疗前。结果表明：ＡｃｈＲａｂ测定为ＭＧ诊断提供了可靠的实验依据，为类固醇激素、大剂量丙种球蛋白、胸腺切除术和ＰＥ等治疗ＭＧ提供理论依据和疗效评定的实验指标，进一步证实了ＭＧ免疫学发病机理。