Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠的治疗效果研究

目的探讨Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠的治疗效果。方法 18只雄性10月龄AD转基因鼠,随机分为3组,分别以Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G、空腺病毒载体及Aβ1-42免疫,ELISA法检测血清抗Aβ抗体滴度及亚型,Morris水迷宫检测转基因鼠的学习记忆能力,免疫组化法检测转基因鼠脑内Aβ沉积;ELISA法检测转基因鼠脑组织匀浆和血清中可溶性Aβ42水平。结果 Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组和Aβ1-42组抗体水平随着免疫次数逐渐增加,第7次免疫后Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组和Aβ1-42组血清中抗Aβ抗体水平分别为(67.42±13.68)μg/ml和(94.41±14.01)μg/ml,而空载体组一直在基线水平。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组Ig G1/Ig G2a比值明显高于Aβ1-42组(P0.05)。在Morris水迷宫实验中Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组的逃避潜伏期明显小于空载体组(P0.01);Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组在靶象限的停留时间明显长于空载体组(P0.01);Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组穿越平台所在位置的次数明显多于空载体组(P0.05)。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组脑组织Aβ沉积所占面积百分比与空载体组比较明显减少(P0.01)。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组脑组织匀浆和血清中可溶性Aβ42水平明显高于空载体组(P0.01)。结论 Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠,主要引起Th2型免疫应答,可以改善AD转基因鼠学习和记忆能力,促进转基因鼠脑内Aβ清除,可以减少由细胞免疫应答引起的炎症反应。Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗是AD免疫治疗的安全有效的候选疫苗。     

Aβ_(20-29)短肽阻断ApoE/Aβ结合并减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性的效应作用

目的:探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)20-29(Aβ_(20-29))短肽在阻断载脂蛋白E(ApoE)4与Aβ_(1-42)相结合并减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性中的效应作用。方法:应用硫磺素-T(Th-T)荧光分析和透射电镜方法,观察Aβ_(20-29)短肽阻断ApoE与Aβ_(1-42)相结合及其防止Aβ_(1-42)纤维化的效应作用;应用培养的PC12细胞,观察Aβ_(20-29)短肽对ApoE4+Aβ_(1-42)神经毒性的效应作用。结果:荧光分析和透射电镜观察显示:Aβ_(20-29)短肽不能形成纤维性Aβ,ApoE4对Aβ_(1-42)纤维化具有显著促进作用,Aβ_(20-29)短肽能够显著减少ApoE4对Aβ_(1-42)纤维化的促进作用,且呈剂量依赖关系。应用培养的PC12细胞及MTT法测定细胞活性,表明Aβ_(20-29)短肽对PC12细胞无神经毒性作用,其能够显著减少ApoE4+Aβ_(1-42)的神经毒性作用。结论:Aβ_(20-29)短肽在体外能够有效抑制ApoE4与Aβ_(1-42)相结合,并显著减少Aβ_(1-42)纤维化及其神经毒性作用,提示Aβ_(20-29)短肽有可能成...     

Aβ3-10s基因疫苗免疫AD小鼠诱导Th2型免疫反应的研究

目的探讨新型AD疫苗AdCpG-(Aβ3-10)10诱导转基因小鼠产生的免疫反应类型。方法将人工合成的Aβ3-10的基因片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1+,以CpG为基因佐剂,使用E1/E3缺陷的腺病毒载体pAxCAwtit作为基因载体,获得基因重组缺陷腺病毒AdCpG-(Aβ3-10)10。以3月龄的转基因小鼠18只为研究对象,实验分为3组,每组各6只小鼠:免疫含有目的基因的AdCpG-(Aβ3-10)10组、不含目的基因的AdCpG组及Aβ1-42全肽链组。各组均经鼻粘膜分别免疫AdCpG-(Aβ3-10)10、不含目的基因的AdCpG及Aβ1-42全肽链,每组均免疫8次,每3个月1次。用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体含量及抗体分型,用MTT方法观察脾细胞增值反应;用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10及γ-干扰素等细胞因子含量。结果小鼠经过6次免疫后,AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组抗Aβ42 IgG抗体浓度分别为21.17±1.59ng/ml、23.93±1.66ng/ml,较AdCpG组(1.08±0.16)明显升高(P<0.05),但AdCpG-(Aβ3-10)10组的IgG1/IgG2a(12.94±3.79)较Aβ1-42组的IgG1/IgG2a(6.13±2.21)明显增高(P<0.01);AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组的脾细胞在体外培养,经Con A刺激后细胞增殖明显,OD值分别为0.37±0.059,0.3237±0.048与AdCpG(0.1692±0.072)比较有明显差异(P<0.05)。经AdCpG-(Aβ3-10)10免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-4和IL-10含量分别为342.34±45.68μg/ml、329.46±112.99μg/ml,经Aβ1-42免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-2、INF-γ、IL-4和IL-10含量分别为284.81±22.55μg/ml、361.96±26.47μg/ml、223.19±22.45μg/ml、258.68±102.42μg/ml,与AdCpG(149.03±27.34μg/ml、291.92±45.92μg/ml、169.52±25.68μg/ml、134.85±21.67μg/ml)比较有明显差异(P<0.05)。结论 AdCpG-(Aβ3-10)10主动免疫幼龄双转基因小鼠主要产生Th2型体液免疫应答反应,可以减少细胞免疫应答反应引起的炎性反应。     

Aβ3-10基因疫苗对幼年鼠脑内老年斑沉积及记忆障碍预防作用的研究

目的构建表达重复10次的Aβ3-10肽段的DNA疫苗,并探讨其对幼年APP/PS1转基因鼠脑内Aβ沉积的预防及对其延迟记忆障碍的作用。方法将该疫苗用体外电穿孔的方法肌肉免疫3月龄的APP/PS1双转基因鼠,并分别做行为学、Aβ抗体、脾细胞培养上清细胞因子、脑内Aβ沉积及星型胶质细胞测定。结果 p(Aβ3-10)10-MT和Aβ42组免疫一次后即产生抗体,并随着免疫次数增多而增加,类型主要为IgG1,IgG1/IgG2a明显高于Aβ42组。在Morris水迷宫中,p(Aβ3-10)10-MT和Aβ42组潜伏期明显减短,空间探索实验在平台象限所在时间均较pc DNA3.1组长。p(Aβ3-10)10-MT和Aβ42组脾细胞培养上清IL-4和IFN-γ均增高,而在p(Aβ3-10)10-MT组,IL-4较高,IFN-γ较低。免疫组化结果提示皮质和海马区老年斑沉积减少。结论 DNA疫苗p(Aβ3-10)10-MT免疫幼年APP/PS1双转基因鼠后能产生高滴度的抗体,免疫反应为Th2型,预防脑内Aβ的聚集的同时延缓了记忆障碍的发生与发展,避免了副反应的发生,有待成为预防阿尔茨海默病的有效疫苗。     

Aβ3-10重复片段质粒免疫接种AD鼠后对脑内BACE1的影响

目的探讨Aβ3-10重复片段质粒免疫接种3月龄APPswe/PSEN1双转基因(AD)鼠脑内BACE1的影响。方法应用Aβ3-10重复片段质粒免疫3月龄APPswe/PSEN1双转基因鼠,同等剂量的PBS免疫对照组及C57BL/6J组小鼠,各组小鼠均在免疫后2、4、6次后通过RT-PCR法检测BACE1 m RNA水平,Western blotting法检测BACE1/GFAP/NF-κB蛋白水平,免疫组化法观察Aβ1-42脑内分布情况。水迷宫检测其行为学改变。结果在免疫2次后BACE1 m RNA表达水平C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=4.649,P=0.021);免疫4次Aβ3-10组C57BL/6J组对照组(F=115.683,P=0.001);免疫6次C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=86.600,P0.001)。BACE1的蛋白表达水平在免疫2、4、6次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=432.843,P0.001;F=57.673,P0.001;F=26.550,P=0.001),NF-κB的蛋白表达水平在免疫2次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=109.127,P0.001);免疫4,6次后Aβ3-10组C57BL/6J组对照组(F=30.301,P0.001;F=129.967,P0.001)。GFAP的蛋白表达水平在免疫2、4、6次后C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=27.782,P=0.001;F=26.132,P=0.001;F=26.450,P=0.001);Aβ1-42在脑内的分布C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(皮质:F=5.395,P=0.021;F=47.135,P=0.000;F=25.306,P=0.000,海马:F=11.023,P=0.002;F=14.936,P=0.001;F=50.132,P=0.000)。总潜伏期C57BL/6J组Aβ3-10组对照组(F=8.938,P=0.016;F=5.745,P=0.04;F=7.073,P=0.017)。结论 Aβ3-10重复片段质粒可以影响脑内BACE1的表达,影响Aβ产生,改善空间记忆能力。     

α1-抗糜蛋白酶对类淀粉样蛋白Aβ1-42诱导细胞表达核转录因子的影响

目的研究α_1 抗糜蛋白酶(ACT)与类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在体外形成复合物的性质,以及该复合物对神经母细胞瘤细胞(Kelly)表达核转录因子过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)和核因子κB(NFκB)的影响。方法Aβ_(1-42)与ACT溶液以10∶1mol/L混合,用琼脂糖凝胶电泳检测2h和24h反应产物Aβ_(1-42)/ACT(2h)、Aβ_(1-42)/ACT(24h),电泳迁移率检测法(EMSA)检测Aβ_(1-42)/ACT复合物对Kelly细胞表达PPARγ和NFκB的影响。结果Aβ_(1-42)与ACT分子之间可以结合形成复合物,而且复合物的功能随反应时间的不同而不同与对照组细胞相比,Aβ_(1-42)/ACT(2h)使Kelly细胞对PPARγ和NFκB的表达分别增加158% (P<0 05)和77% (P<0 05),而Aβ_(1-42)/ACT(24h)和Aβ_(1-42)、ACT单个分子则无类似作用。结论PPARγ和NFκB是调节人体炎性反应过程的重要细胞核转录因子,与阿尔茨海默病(AD)的病理改变相关。ACT通过与Aβ_(1-42)结合影响两种细胞因子的表达,可能是AD中神经系统炎性反应平衡失调的病理通路之一,提示对AD的发病有影响。     

ω-3不饱和脂肪酸DHA改善β淀粉样蛋白沉积致AD的小鼠模型记忆功能的机制研究

目的 探讨ω-3不饱和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)改善β淀粉样蛋白(Aβ1-42)沉积所致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的小鼠模型记忆功能的作用机制。方法 采用Aβ-intrahippocampal injection法向36只小鼠脑内海马部位注射寡聚态Aβ1-42建立AD小鼠模型,随机分为假手术组(羧甲基纤维素钠灌胃)、Aβ模型组(羧甲基纤维素钠灌胃)和Aβ+DHA组(DHA灌胃)。Morris水迷宫检测小鼠的记忆功能;尼氏染色检测海马神经元的变化; ELISA法检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素16(IL-16)的含量; Western blot检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、干扰素-γ(IFN-γ)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果 与假手术组相比,Aβ模型组和Aβ+DHA组小鼠的潜伏期延长,跨越平台次数和BDNF蛋白相对表达量减少,而TNF-α和IL-16含量、IFN-γ和NF-κB蛋白表达量升高;与Aβ模型组相比,Aβ+DHA组小鼠的潜伏期缩短,跨越平台次数和BDNF蛋白表达量增加,而TNF-α和IL-16含量、IFN-γ和NF-κB蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论 DHA可以改善Aβ1-42致AD小鼠模型记忆功能障碍,其作用机制可能与降低海马组织中TNF-α和IL-16含量,抑制IFN-γ和NF-κB蛋白表达,促进BDNF蛋白表达有关。     

Nasal mucosal inhalation of amyloid-beta peptide 3–10 defective adenovirus attenuates cytotoxicity induced by beta-amyloid(1–42)

Three-month-old Alzheimer's disease model transgenic mice were immunized with Aβ1–42, Plp-Adenovirus [Ad]-X-CMV-(Aβ3–10)10-CpG [AdCpG-(Aβ3–10)10] or AdCpG virus fluid via nasal mucosal inhalation, respectively. ELISA analysis of serum showed Aβ42 antibody titers were significantly increased in mice immunized with Aβ1–42 and AdCpG-(Aβ3–10)10. Concanavalin A and AdCpG-(Aβ3–10)10 stimulation significantly increased the number of proliferating spleen cells cultured from AdCpG(Aβ3–10)10 and Aβ42 groups compared with the control group. In the AdCpG(Aβ3–10)10 group, levels of interleukin(IL)-4 and IL-10 were increased, while those of IL-2 and interferon-γ were decreased. In the Aβ42 group, levels of IL-4, IL-10, IL-2 and interferon-γ were all increased. Experimental findings indicate that AdCpG-(Aβ3–10)10 vaccine can produce strong T helper 2(Th2) humoral immune responses in addition to the production of Aβ42 antibody. The cellular immunologic response was weak and avoided Aβ1–42-mediated cytotoxicity.     

CART阻抑对阿尔茨海默病大鼠记忆能力的影响

目的探讨可卡因苯丙胺调节转录肽(CART)对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)生成和Tau蛋白磷酸化的影响。方法实验分为4组,依次为模型组(AD大鼠)、实验组(AD模型大鼠尾静脉注射CART)、假手术组(用等量的PBS代替Aβ_(1-40))、对照组(正常饲养)。脑侧室注射Aβ_(1-40)构建AD大鼠模型,Morris水迷宫检测各组大鼠逃避潜伏期和穿越平台次数,ELISA法检测脑组织中Aβ_(1-40)水平,RT-PCR检测脑组织中胰岛素降解酶(IDE)、中性内肽酶(NEP)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP-1)水平,Western blot检测脑组织中Tau蛋白磷酸化、IDE、LRP-1、NEP、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、p-GSK-3β水平。结果实验组大鼠逃避潜伏期明显低于模型组,而穿越平台次数明显高于模型组。实验组大鼠Aβ_(1-40)水平、Tau 5水平、Tau磷酸化水平(Tau pSp~(199/202)、Tau~(pT231))、GSK-3β、p-GSK-3β明显低于模型组,而IDE、LRP-1、NEP明显高于模型组。结论CART能够通过调节IDE、LRP-1、NEP水平降低AD大鼠模型中Aβ_(1-40)水平,能够通过调节GSK-3β抑制Tau蛋白磷酸化,进而改善AD大鼠的记忆能力。     

黄芪甲苷Ⅳ通过激活PPAR-γ抑制NF-κB介导的炎症反应减少AD大鼠脑中淀粉样蛋白沉淀

目的探讨黄芪甲苷IV对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑中β淀粉样蛋白和学习记忆功能的影响及其机制。方法将72只老年雄性SD大鼠随机分为6组,对照组、模型组、多奈哌齐组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷高剂量+抑制剂组,每组12只。利用A β_(1-42)脑室注射与AlCl3连续灌胃建立AD模型,造模期间持续使用黄芪甲苷或多奈哌齐进行治疗,水迷宫结束后检测大脑组织中A β_(1-42)、APP及炎症因子表达,Western blot检测PPAR-γ及炎症相关蛋白表达。结果黄芪甲苷Ⅳ与多奈哌齐疗效一致,能够显著改善大鼠学习认知能力,抑制脑中APP水解成A β_(1-42),减少脑中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6表达。黄芪甲苷Ⅳ能够有效升高PPAR-γ蛋白表达,减少NLRP3炎性小体的表达。此外,PPAR-γ抑制剂则逆转黄芪甲苷Ⅳ改善大鼠认知功能的作用,造成大鼠脑中炎症因子含量升高,促进APP水解生成A β_(1-42)。结论黄芪甲苷通过增加PPAR-γ蛋白表达,抑制大鼠脑中炎症因子表达,减少APP水解生成A β_(1-42),改善大鼠认知学习能力降低。     

一种稳定阿尔茨海默病细胞模型的建立方法

目的旨在应用不同浓度Aβ_(1-42)诱导新生SD大鼠海马神经元,建立稳定阿尔茨海默病细胞模型。方法分离并培养新生24 h内SD大鼠原代海马神经细胞;分别加入不同浓度Aβ_(1-42)诱导,诱导后采用MTT法观察细胞活力,选取理想Aβ_(1-42)诱导的海马神经细胞作为阿尔茨海默病细胞模型;通过免疫荧光技术(IF)鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)在海马神经元细胞的表达。结果 Aβ_(1-42)诱导后的海马神经细胞存活率下降,可导致海马神经元细胞胞体变形、收缩和细胞膜完整性破坏,胞间网络结构消失或断裂,细胞外基质乱不清,神经元大量凋亡;Aβ_(1-42)诱导后的海马神经细胞存活率下降与Aβ_(1-42)浓度成线性关系;加入不同浓度Aβ_(1-42)(0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L和50μmol/L)后实验各组细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(98.55±1.42)%、(90.37±3.25)%,(66.34±2.76)%、(53.23±3.41)%和(41.55±2.37)%,其中20μmol/L组与0μmol/L组相比P<0.05,30μmol/L、40μmol/L和50μmol/L组与对照组相比P<0.01。结论 Aβ_(1-42)可导致海马神经元大量凋亡;Aβ_(1-42)浓度为20μmol/L诱导的SD大鼠海马神经元可作为理想的阿尔茨海默病细胞模型。     

血清Aβ_(1-42)、tau蛋白及甲状腺激素水平对缺血性卒中后认知障碍发生的预测价值

目的探究脑梗死急性期血清标志物β淀粉样蛋白(Aβ)、tau蛋白及甲状腺激素水平与卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)的关系及其预测价值。方法纳入急性脑梗死患者214例,记录患者基线资料及血清学指标,评估患者认知功能。根据随访结果分为认知障碍组及正常组,分析两组患者Aβ_(1-42)、tau蛋白及甲状腺素水平的差异及其与患者病情进展的关系,运用Cox回归分析及ROC曲线比较上述指标预测PSCI发展的能力。结果认知障碍组Tau总蛋白(210.6±98.9 pg/mL)高于正常组,Aβ_(1-42)(426.1±123.5 pg/mL)、三碘甲状腺原氨酸(T3)(1.43±0.57 nmol/L)、游离甲状腺素(FT_4)913.15±2.23 pmol/L)低于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。Tau蛋白(r=-0.457)、Aβ_(1-42)9r=0.348)、T3(r=0.211)、FT_4(r=0.306)均与病情进展相关(P0.05)。Cox回归分析显示Aβ_(1-42)及T_3为PSCI发生的重要影响因子。ROC曲线下,Aβ_(1-42)与T_3联合的曲线下面积为0.841,诊断界值0.572,特异性74.8%,敏感性85.3%。结论脑梗死急性期检测Aβ_(1-42)及T_3水平有可能预测PSCI的进展。     

补体C3d-p28对阿尔茨海默病DNA疫苗的免疫增强作用

目的探讨补体C3d-p28作为分子佐剂,在阿尔茨海默病DNA疫苗基因免疫中的作用。方法在第1、8、22、43、64、85、106、127天,将重组质粒p(Aβ3-10)10、p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3和pcDNA3.1(+)肌肉注射于APP/PS1双转基因鼠后腿股四头肌内。疫苗接种前、自第2次注射开始每次接种后7天取鼠眶静脉血共8次,以ELISA法检测抗Aβ抗体的滴度和分型;第8次(最后1次)眶静脉取血后进行6d的Morris水迷宫实验,通过定位航行和空间探索实验评估小鼠空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后处死小鼠,以ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)水平,免疫组化染色法检测小鼠脑内Aβ斑的表达。结果 p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗Aβ抗体水平高于p(Aβ3-10)10组[(55.03±8.93)μg/mLvs.(27.32±7.69)μg/mL,t=-4.455,P0.05],p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗体类型主要是IgG1型[(50.64±6.96)μg/mL],明显高于p(Aβ3-10)10组[(14.15±3.16)μg/mL,P0.05]。与p(Aβ3-10)10组比较,p(Aβ3-10)10-C3dp28.3组Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期变短、穿越平台次数和穿越平台所在象限停留的时间比例明显增多(均P0.05);脾细胞培养上清液中IL-4水平增高[(110.22±18.12)pg/mL vs.(170.12±22.16)pg/mL,P0.05]、IFN-γ水平减低[(800.12±80.11)pg/mL vs.(640.12±70.53)pg/mL,F=6.152,P0.05];脑内沉积的Aβ斑块明显减少(P0.05)。结论补体C3d-p28分子佐剂使p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3抗Aβ抗体的产生增加、Th2型免疫反应增强,转基因鼠空间学习记忆能力提高。     

Aβ_(1-42)寡聚体对α-syn过表达SHSY5Y~(A53T)细胞自噬功能的影响

目的构建人A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞模型,观察Aβ_(1-42)寡聚体对细胞的毒性作用和自噬功能的影响。方法利用慢病毒稳转方法构建A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞及空载体对照细胞,RT-qPCR方法检测SHSY5Y细胞中α-突触核蛋白mRNA的表达。用Aβ_(1-42)寡聚体干预两组细胞24 h,CCK-8法检测Aβ_(1-42)寡聚体对细胞增殖的影响,Western Blot检测细胞自噬相关蛋白的表达水平。结果慢病毒转染SHSY5Y细胞后,过表达组细胞内α-突触核蛋白表达水平较正常细胞组及开载体对照组增加,差异有统计学意义(P0.001);人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响细胞的增殖;不同浓度Aβ_(1-42)寡聚体(0、0.5μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)处理细胞24 h后,细胞增殖抑制率成浓度依赖性;Aβ_(1-42)寡聚体处理后,α-突触核蛋白过表达组细胞LC3-Ⅱ,Beclin-1自噬蛋白表达水平较对照组细胞显著降低(P0.05)。结论人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响的SHSY5Y细胞增殖,Aβ_(1-42)寡聚体对α-突触核蛋白过表达细胞具有显著毒性,对细胞的损伤机制可能通过抑制细胞自噬功能。     

TGF—β1基因修饰的树突状细胞移植对EAMG大鼠T淋巴细胞IFN-γ／IFN-γR表达的影响

目的 探讨TGF-β1基因修饰的树突状细胞(DC)移植对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γ受体(IFN-γR)表达的影响.方法 近交系、8～10周龄、健康雌性Lewis大鼠25只,随机分为健康对照组、EAMG组、DC对照组、pcDNA3-TGF-β1表达质粒转染的DC(pcDNA3-TGF-β1-DC)组与生理盐水对照组5组.除健康对照组外,各组均采用丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体(AChR)蛋白二次免疫方法复制EAMG大鼠模型.初次免疫后第5天分别皮下注射2×106 DC、pcDNA3-TGF-β1-DC及等体积生理盐水,健康对照组和EAMG组不接受任何治疗.初次免疫后7周,分离脾脏T淋巴细胞,分别应用酶联免疫吸附试验和免疫组化方法检测T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR表达水平.结果 (1)体外培养48 h后,健康对照大鼠T淋巴细胞上清液中IFN-γ水平很低,而EAMG组大鼠T淋巴细胞上清液中IFN-γ水平显著升高(P<0.001).pcDNA3-TGF-β1-DC治疗组IFN-γ水平与EAMG组差异无统计学意义(P>0.05).(2)健康对照大鼠T淋巴细胞经体外培养后可见少量IFN-γR阳性细胞,而EAMG组大鼠T淋巴细胞经体外培养后可见较多IFN-γR阳性细胞,其阳性细胞数及平均吸光度均明显高于健康对照组(P<0.001);pcDNA3-TGF-β1-DC组IFN-γR阳性细胞数较EAMG组明显增多,其阳性细胞平均吸光度亦明显高于EAMG组(均P<0.01).结论 EAMG组大鼠T淋巴细胞IFN-γ分泌及其表面IFN-γR表达水平明显提高;pcDNA3-TGF-β1-DC治疗可进一步诱导IFN-γR表达,调节T淋巴细胞IFN-γ/IFN-γR表达可能是TGF-β1基因修饰的DC治疗EAMG的机制之一.     

血浆Aβ_(40)、Aβ_(42)早期诊断广泛性脑萎缩并认知功能障碍的价值

目的探讨血浆Aβ_(40)、Aβ_(42)对广泛性脑萎缩并发认知功能障碍早期诊断的预测价值。方法对150例中、重度广泛性脑萎缩的老年人进行健康体检、磁共振成像扫描,记录性别、年龄、血压、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、白蛋白等一般情况。按认知功能程度不同分为3组,正常组、轻度认知功能障碍(MCI)组、痴呆组。应用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血浆Aβ_(40)、Aβ_(42)含量。结果 Aβ_(40)、Aβ_(42)水平在MCI组即已出现明显下降;Aβ_(40)、Aβ_(42)水平均与MMSE评分值呈正相关;Aβ_(40)与Aβ_(42)呈正相关。结论血浆Aβ_(40)、Aβ_(42)水平可以作为脑萎缩老年人早期诊断认知功能损害的生物学标记物。     

吡格列酮对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其机制的研究

目的 探讨吡格列酮对脑缺血再灌注(CIR)损伤大鼠的神经保护作用及其机制.方法 将80只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、CIR模型组(B组)、吡格列酮干预组(C组)、GW9662+吡格列酮组(D组)及二甲基亚砜组(E组),每组16只.用线栓法制作CIR损伤大鼠模型,于术前3d起分别给予各组大鼠相应药物(A组和B组大鼠为生理盐水)静脉注射;均为每天1次,连续3d.在缺血再灌注24 h后给各组大鼠进行神经功能缺损评分(NDS),用ELISA法测定大鼠脑组织核因子-κB (NF-κB)及干扰素-γ(IFN-γ)水平,HE染色观察缺血区病理学改变,尼氏染色和原位末端标记染色检测神经元数及凋亡细胞数.对大鼠脑组织NF-κB与IFN-γ水平(B组,C组)的相关性作直线相关分析.结果 与A组相比,其他4组的NDS、脑组织NF-κB和IFN-γ水平、细胞凋亡数均明显升高,健存神经细胞数明显减少(P ＜0.05 ～0.01).与C组相比,B组、D组、E组的NDS、NF-κB和IFN-γ水平、细胞凋亡数均显著升高,健存神经细胞数明显减少(均P＜0.05).B组、C组大鼠脑组织NF-κB与IFN-γ水平呈正相关(r=0.952,r =0.978,均P＜0.001).结论 吡格列酮对CIR损伤有显著的神经保护作用.其可能通过下调脑组织NF-κB的表达,减少IFN-γ,的释放,使健存神经细胞增加、神经细胞凋亡减少,从而发挥神经保护作用的.     

尼古丁上调星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集的研究

目的研究尼古丁激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 nicotinic receptors,7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(αB-crystallin,Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Amyloid,Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1-42)寡聚体;将细胞分为对照组、尼古丁组、α7n AChRs阻断剂(methyllycaconitine,MLA)组、Aβ_(1-42)组、尼古丁+Aβ_(1-42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+尼古丁+Aβ_(1-42)组。用蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果尼古丁可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);尼古丁能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);在细胞裂解液及培养基中,尼古丁显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01)。结论尼古丁通过激活星形胶质细胞α7 nAChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与尼古丁激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。为进一步研究尼古丁抑制Aβ集聚的可能机制提供了实验基础。     

芍药苷对Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响

目的探讨芍药苷(PF)对β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应和趋化性的影响。方法原代培养大鼠小胶质细胞,分别用0、5、25、50μmol/LPF预处理细胞后,采用CCK-8法和LDH法检测细胞毒性。将培养的细胞分为空白对照组(正常培养基)、阳性对照组(Aβ_(1-42)处理细胞)和实验组(PF+Aβ_(1-42)处理细胞)。采用ELISA法检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和趋化因子配体1(CXCL1)、趋化因子配体2(CCL2)的表达水平。采用Transwell小室进行小胶质细胞体外趋化实验,观察各组细胞趋化迁移情况。结论培养大鼠原代小胶质细胞纯度达90%以上,CCK-8法和LDH法测定均显示PF对小胶质细胞无明显细胞毒作用(均P0.05)。PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞分泌促炎性介质TNF-α、IL-1β、IL-6和趋化因子CXCL1、CCL2(均P0.01)。同时,PF可抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)的趋化(均P0.05)。结论 PF可抑制Aβ_(1-42)诱导的啮齿动物小胶质细胞生成促炎性介质和趋化因子,并抑制小胶质细胞向Aβ_(1-42)趋化迁移,提示PF可能为阿尔茨海默病的治疗提供新的契机。     

一氧化碳中毒后迟发性脑病与神经免疫的相关性分析

目的分析一氧化碳中毒后迟发性脑病(DEACMP)与神经免疫的关系。方法以我院2012-03—2015-03收治的100例一氧化碳中毒患者为研究对象,其中中毒后迟发性脑病68例,为DEACMP组;单纯一氧化碳中毒(ACOP)32例,为单纯ACOP组;选择同期行体检的50例健康人群为对照组,通过ELISA法对所有对象神经免疫指标(IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β1)进行测定,比较3组相关指标。结果DEACMP组IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β1与单纯ACOP组比较差异有统计学意义(P0.05)。DEACMP组与对照组IL-4、IFN-γ、TGF-β1比较差异有统计学意义(P0.05)。不同认知障碍程度DEACMP患者IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β1比较差异有统计学意义(P0.05)。结论DEACMP发病及其认知功能障碍程度可能与神经免疫损伤相关。