沉默Twist基因对胃癌BGC-823细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨干扰Twist基因表达对胃癌细胞株BGC-823细胞上皮-间质转化的影响。方法采用干扰技术并构建质粒、生物信息学软件、qRT-PCR技术、划痕实验、Transwell实验和Western blot法对BGC-823细胞进行体外实验。结果 Twist在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P0.05),且与胃癌患者的预后呈负相关性(P0.05)。干扰Twist表达后,胃癌细胞株的迁移、侵袭能力减弱(P0.05);E-cadherin的相对表达量增高(P0.01),而N-cadherin的相对表达量降低(P0.05)。结论胃癌细胞株BGC-823中Twist的表达可促进胃癌细胞发生上皮-间质转化,Twist在胃癌发生发展中起癌基因的作用。     

IL-6调节Twist的表达对肝癌细胞BEL-7402上皮-间质转化的影响

目的探讨白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)通过调节Twist的表达调控肝癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchy-mal transition,EMT)及侵袭转移的相关机制。方法用IL-6处理肝癌细胞BEL-7402,采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力。采用Western blot和qRT-PCR技术检测低表达Twist对E-cadherin和vimentin蛋白表达水平的影响和mRNA表达的变化。结果 IL-6处理BEL-7402细胞后侵袭和迁移能力明显提高。相较于空白对照组(CON组)和RNA干扰阴性对照组(RNAi-NC组),在转染组RNAi-Twist细胞中,E-cadherin蛋白和mRNA的表达水平明显增加;vimentin的蛋白表达水平明显下调,而mRNA的表达水平差异无显著性。加入50 ng/ml IL-6孵育细胞24 h后,CON组和RNAi-NC组E-cadherin蛋白和mRNA表达均较未处理时明显减少,RNAi-Twist组减少的趋势不明显;vimentin蛋白表达均较未处理时明显升高,而RNAi-Twist组升高不明显,相应mRNA的表达水平差异均无显著性。结论 IL-6可提高肝癌细胞BEL-7402体外侵袭、迁移能力,促进EMT过程,其机制可能通过调节Twist的表达,从而诱导发生EMT和侵袭转移。     

Twist1对胶质瘤样干细胞的增殖和侵袭影响

目的研究Twist1对胶质瘤样干细胞增殖和侵袭影响。方法通过无血清干细胞培养基方法从原代培养的多形性胶质母细胞瘤中获得悬浮生长的肿瘤细胞球,利用免疫荧光方法及血清诱导分化方法对培养的肿瘤球进行鉴定;通过Western blot方法比较胶质瘤样干细胞和原代培养的多形性胶质母细胞瘤中Twist1表达;SiRNA抑制Twist1表达后,应用CCK-8方法及Transwell方法检测Twist1对胶质瘤样干细胞增殖和侵袭影响。结果无血清干细胞培养基方法可以从原代培养的多形性胶质母细胞瘤中诱导出悬浮生长的肿瘤细胞球;肿瘤细胞球表达肿瘤干细胞标记物CD133和Sox2,在含血清培养基中可以分化为表达神经元和神经胶质细胞标记物的细胞;胶质瘤样干细胞高度表达Twist1;利用siRNA抑制Twist1后,可以抑制胶质瘤样干细胞增殖和侵袭。结论Twist1可能是维持胶质瘤样干细胞干性的关键基因。     

胃癌组织中Twist、HIF-1α表达与上皮间质转化的关系

目的分析Twist、HIF-1α在胃癌组织中的表达及与胃癌临床病理参数之间的相关性,探讨两者在判断患者预后中的意义及两种蛋白的表达与上皮间质转化的关系。方法采用免疫组化SABC法检测120例胃癌标本及其对应癌旁组织中Twist、HIF-1α、E-cad、N-cad的表达,分析Twist、HIF-1α的表达与患者临床病理参数、术后生存时间之间的关系;探讨两种蛋白的表达与上皮间质转化的关系。结果在胃癌组织中Twist、HIF-1α、N-cad、E-cad的阳性率分别为59.1%、61.7%、46.7%、37.5%,癌旁组织中的阳性率分别为18.3%、22.5%、10.8%、91.7%。4种蛋白在肿瘤组织中的表达率与癌旁组织中的表达率之比有明显差异性(P<0.05)。Twist与肿瘤远处转移、淋巴结转移及浸润深度明显相关(P<0.05)。HIF-1α与肿瘤的组织学分型、浸润深度、淋巴结转移呈明显相关性。Twist和(或)HIF-1α阳性的患者其五年生存率明显低于其阴性的患者。Twist、HIF-1α的表达与E-cad的低表达和N-cad的反常性高表达存在密切相关性。结论胃癌组织中Twist、HIF-1α表达与肿瘤的...     

Twist对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化的影响

RNA干扰技术抑制Twist在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达,观察其沉默对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响.以乳腺癌细胞MDA-MB-231为空白对照,shRNA-NC空载体为阴性对照,构建Twist沉默表达载体,转...     

IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究北大核心CSCD

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。     

肿瘤干细胞在肿瘤转移中作用与相关机制的研究进展

目前国内外对肿瘤转移的机制已进行了系统而深入的探索。随着肿瘤干细胞概念的提出和相关领域的深入研究,肿瘤干细胞作为肿瘤转移的最佳候选细胞的观点正逐渐被人们接受。目前和肿瘤转移过程相关的分子细胞机制包括:上皮间质转变(EMT)、肿瘤微环境及血管生成机制等。近年来许多研究成果显示上述机制在肿瘤干细胞转移过程中起到不可低估的作用。本文就肿瘤干细胞转移相关机制的进展做一简要综述。     

转录因子TWIST及其促进肿瘤转移作用的研究进展

TWIST是胚胎发育过程中的重要转录调控因子,最近发现它在肿瘤转移的起始阶段使癌细胞发生EMT现象,即细胞从上皮极性表型向间质成纤维细胞表型的形态学上的转变,同时伴有上皮细胞分子标记的抑制和间质细胞分子标记的强烈表达,从而促进细胞的运动和迁移,使肿瘤呈现恶性表型,导致患者预后不良.目前已经证实有多种细胞信号通路和细胞内因子参与了TWIST的表达和激活,它们对TWIST功能起重要的调控作用.本文主要就目前TWIST的结构、功能及在肿瘤中的作用作一综述.     

消化系统肿瘤中上皮-间质转化的研究进展

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是在多细胞生物胚胎发育过程中胚层和组织重建中存在的一种现象,最近的研究认为它不仅存在于多细胞生物的胚胎发生过程中,而且与上皮性恶性肿瘤的发生、发展及浸润转移密切相关[1].在EMT过程中,由于E-cadherin的表达下降,细胞间的粘附性减弱或丧失,导致肿瘤细胞运动和侵袭能力大大增加,最终得以向周围组织浸润和转移.国内外的多项研究显示,在消化系统肿瘤中普遍存在EMT现象,并与这些肿瘤的浸润转移及预后差密切相关.本文就近年来EMT与消化系统肿瘤及其在恶性进展中的作用作一简要概述.     

构架蛋白1及Twist在宫颈癌组织中的表达与临床意义

目的 探讨构架蛋白1(RACK-1)和Twist在宫颈癌中的表达与临床意义.方法 选取2010年5月至2012年5月在深圳市第二人民医院住院并接受手术治疗的宫颈癌患者70例,选取同期本院因宫颈良性病变行肿物剥除或附件切除的20例患者作为对照,应用免疫组化(SP)方法检测70例宫颈癌组织(宫颈癌组)、70例宫颈癌癌旁组织(癌旁组)、正常宫颈组织20例(正常组)中的Twist及RACK-1蛋白表达,分析其与宫颈癌患者临床病理指标的关系.结果 ①Twist在正常宫颈组织、癌旁组织和宫颈癌中的阳性率分别为5.0%(1/20)、22.9%(16/70)和95.7%(67/70)(χ2=24.581,P=0.001);RACK-1在正常宫颈组织、癌旁组织和宫颈癌中的阳性率分别为10.0%(2/20)、61.4%(43/70)和90.0%(63/70)(χ2=11.538,P=0.001).②Twist表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05).RACK-1表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05).③Twist及RACK-1存在正相关性(r=0.3,P<0.05).④Twist(+)~(++)表达者和(+++)表达者5年总生存率分别为51.2%和29.2%(HR=11.637,95%CI:4.351~38.213;P=0.002);RACK-1(+)~(++)表达者和(+++)表达者5年总生存率分别为41.3%和35.3%(HR=10.143,95%CI:4.285~33.275;P=0.006).结论Twist及RACK-1的增强表达与宫颈癌侵袭性增强有密切关系,其表达可作为判断宫颈癌患者预后的指标.     

肺纤维化中上皮-间质转型信号转导机制研究进展

肺泡上皮细胞向间质细胞转型是纤维化局灶成纤维细胞的重要来源，各种刺激因子作用于细胞受体，诱导细胞通路改变，从而对上皮-间质转型进行调控。对肺纤维化中上皮-间质转型信号转导调控机制的研究，为发展新的治疗策略提供了重要信息。     

Targeting the Twist and Wnt signaling pathways in metastatic breast cancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related deaths in the United States with over 232,000 new diagnoses expected in 2014 and almost 40,000 deaths. While treatment of primary breast cancer is often well-managed with surgery and radiation, metastatic breast cancer (MBC) that has spread to the brain, bones, liver, and lungs is often incurable. One of the major challenges in the treatment of breast cancer is the presence of a subpopulation of cancer cells that are chemoresistant and metastatic. Given that metastasis is the driving force behind mortality for breast cancer patients, it is essential to identify the characteristics of these aberrant cancer cells that allow them to spread to distant sites in the body and develop into metastatic tumors. Understanding the metastatic mechanisms driving cancer cell dispersal will open the door to developing novel therapies that prevent metastasis and improve long-term outcomes for patients. In this review we assess the feasibility of targeting the Twist and Wnt signaling pathways in breast cancer. These pathways mediate epithelial-mesenchymal transition (EMT), a process that can give rise to chemoresistance. We review potential treatment strategies for targeting EMT and drug resistance as well as the problems that may arise with these targeted delivery therapeutic approaches. Finally, we examine recent advances in the field, including nanoparticle delivery and small interfering RNA (siRNA) technology, and discuss the impact that these approaches may have on translating much needed therapeutic approaches into the clinic, for the benefit of patients battling MBC.     

Neurotensin,a Novel Messenger to Cross-Link Inflammation and Tumor Invasion via Epithelial-Mesenchymal Transition Pathway

Multiple cytokines and growth factors are critical for the prognosis of cancer which has been regarded as a worldwide health problem. Recently, neuropeptides, soluble factors regulating a series of functions in the central nervous system, have also been demonstrated to stimulate the proliferation and migration of tumor cells. Among these signaling peptides, the role of neurotensin (NTS) on malignancy procession has become a hot topic. The effects of NTS on tumor growth and its antiapoptosis role have already been identified. Subsequently, studies demonstrated the impact of NTS on the migration and invasion, but the molecular mechanisms involved are still unclear at present. Recently, some reports indicated that NTS could induce expression and secretion of interleukin-8 (IL-8) to promote local imflammatory response which might participate in epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related tumor migration. In present review, we highlight the process of tumor EMT induced by NTS through stimulating IL-8 and the significance of NTS/IL-8 pathway in clinical application prospect.     

Snail和Twist在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Snail和Twist在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测194例乳腺癌组织和60例乳腺腺瘤组织中的Snail和Twist蛋白的表达,分析其表达与临床病理参数及预后的相关性,并分析二者表达的相关性;同时采用Real-time PCR法检测20例乳腺癌组织和20例乳腺腺瘤组织中Snail和Twist mRNA的表达,并分析二者表达的相关性。结果 Snail和Twist蛋白在乳腺癌组织中的表达明显高于乳腺腺瘤组织(P0.05)。Snail的表达与乳腺癌组织学分级、组织学类型、TNM分期及淋巴结转移密切相关;Twist的表达与乳腺癌组织学分级、组织学类型、淋巴结转移及三阴性乳腺癌关系密切。Snail和Twist高表达的患者预后明显差于低表达的患者(P0.05),二者具有显著正相关性(P0.05)。结论 Snail和Twist乳腺癌组织过表达与组织学分级、组织学类型等临床病理参数密切相关,提示乳腺癌预后不良,二者表达呈正相关性。     

间质表型循环肿瘤细胞在结肠癌中的预后价值

目的 探究间质表型循环肿瘤细胞 (mesenchymal circulating tumor cells,M CTCs) 在结肠癌 (coloncancer, CC) 中的预后价值。 方法 选取2015 年1 月至2016 年6 月在武汉大学中南医院胃肠外科住院治疗的 115 例 CC 患者为研究对象, 在入院后 24 h 内经外周静脉采取静脉血 2. 5 mL 于 EDTA 抗凝管中, 采用团队前期自主研发的 CTCBIOPSY ^® 设备结合免疫荧光染色 ( immunofluorescence staining, IF) 检测患者外周血中间质表型 CTCs 的数目, 分析其与患者临床病理因素的相关性; 继而, 采用 Kaplan-Meier 生存曲线和 COX回归分析方法探究间质型 CTCs 与患者预后的关系。 结果 不同肿瘤位置患者外周血中的间质表型 CTCs 的数目无明显差异, 而肿瘤低中分化患者外周血中间质表型 CTCs 的数目显著多于高分化患者, Ⅲ期患者外周血中间质表型 CTCs 的数目显著多于Ⅱ期和Ⅰ期; 进一步分析表明, 间质表型 CTCs 阳性与肿瘤分化程度(P = 0. 013)、 肿瘤浸润深度 (P = 0. 010)、 淋巴结转移 (P = 0. 043)、 TNM 分期 (P< 0. 001)、 脉管浸润(P< 0. 001)、 神经侵犯 (P = 0. 004) 以及 CEA 水平 (P< 0. 001) 相关; 生存分析显示, 间质表型 CTCs 阳性患者的总生存期显著低于阴性者 (χ2= 9. 726, P = 0. 002), 且间质表型 CTCs 阳性是影响 CC 患者总生存期的独立危险因素 (HR = 1. 752, 95 % CI: 1. 104 ~ 3. 871, P = 0. 015)。 结论 结肠癌患者外周血中间质表型 CTCs 与肿瘤的恶性进展及患者的不良预后密切相关, 有望成为临床预后评估的新型生物标志物。     

利用SmartFlare技术进行胶质瘤细胞系U87中Twist1hi亚群分选及其对顺铂耐药性研究

目的 利用特异性SmartFlareTM RNA检测探针在人脑胶质瘤细胞系U87中分选Twist1hi-U87细胞亚群,并研究其对顺铂的耐药性.方法 用SmartFlareTM RNA探针对Twist 1hi-U87细胞亚群进行分选.以未分选细胞作为对照.CCK8法检测Twist1hi-U87亚群和亲代U87细胞对顺铂的化疗敏感性.流式细胞仪检测顺铂作用后细胞凋亡情况.结果 根据细胞核内Twist1的表达量,流式细胞分选所得Twist1hi-U87亚群约占亲代U87细胞的57.9％～ 69.8％.CCK8结果显示,加药后24h和48h,Twist1hi-U87亚群对顺铂的耐药性均高于亲代U87细胞(P＜0.05).经顺铂处理后,Twist1hi-U87细胞凋亡率(14.07％±0.96％)明显低于U87细胞(20.4％±1.29％)(P＜0.05).结论 Twist1基因高表达可以抑制胶质瘤细胞凋亡,进而降低顺铂的杀伤作用.     

Twist1在结直肠癌多药耐药中的作用机制

目的探讨Twist1在结直肠癌多药耐药中的作用机制。方法建立人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株(SW620/OxR),构建带G418抗性的Twist1-shRNA质粒转染SW620/OxR细胞作为实验组,同时,设置转染带G418抗性阴性对照质粒的SW620/OxR细胞作为阴性对照组,并在转染成功后用G418筛选建立稳定转染细胞株。采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测SW620/OxR细胞中Twist1基因和蛋白的表达,采用流式细胞术间接法检测细胞中Twist1、p-STAT3、P-gp、Survivin蛋白变化,Western blot法检测两组细胞Twistl、STAT3、p-STAT3蛋白表达变化。结果 Twist1-shRNA干扰质粒能够明显降低SW620/OxR细胞Twist1 mRNA及蛋白水平。且实验组的E-cadherin表达水平明显降低,vimentin表达水平明显升高。采用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡,阴性对照组细胞凋亡率为5.08%,实验组则明显增高至30.69%。流式细胞术间接法检测实验组中Pgp、Survivin、p-STAT3及Twist1阳性率分别为5.25%、1.93%、2.51%、3.58%,阴性对照组中P-gp、Survivin、p-STAT3及Twist1阳性率分别增加至21.98%、22.36%、19.42%、53.68%,二者差异有统计学意义(P0.01)。实验组Twist1、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论 Twist1可能是结直肠癌多药耐药机制中的关键因子,其可能通过逆向调控STAT3信号通路发挥作用。