干扰素对骨肉瘤细胞MMP-2和Cath-D表达的调节作用

目的探讨干扰素（ＩＦＮｓ）对骨肉瘤细胞表达基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）和组织蛋白酶－Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）的调控作用,并为临床上应用ＩＦＮｓ防治肿瘤转移提供一些实验基础。方法采用ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ对体外培养的ＯＳ－７３２骨肉瘤细胞ＭＭＰ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达进行诱导调节,并利用细胞酶联免疫吸附试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）方法对其表达水平的变化进行半定量检测。结果ＩＦＮ。及ＩＦＮ－γ对ＭＭＰ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ的表达均有显著的诱导降低作用（Ｐ＜０．０１）,且诱导规律较为一致,即随ＩＦＮｓ浓度的增加其表达量随之逐渐下降。结论ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ在一定程度上能抑制骨肉瘤的浸润转移潜能,在治疗骨肉瘤中有一定的积极作用。     

类风湿关节炎与骨性关节炎成纤维样滑膜细胞蛋白酪氨酸磷酸化状态的比较

目的 比较类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ）与骨性关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＯＡ）成纤维样滑膜细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ,ＦＬＳ）蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异。方法滑膜细胞原代培养,流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别,提取蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ单向电泳和ＩＣＥ－ＰＡＧＥ双向电泳分离后,应用抗蛋白酪氨酸磷酸化抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测。结果 滑膜细胞原代培养至第三代时,ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｉｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ阳性细胞比例小于１％,ＲＡ ＦＬＳ蛋白酪氨酸磷酸化程度是ＯＡ ＦＬＳ的４～６倍。结论 滑膜细胞原代培养至第三代时即可以获得型别均一的ＦＬＳ,ＲＡ ＦＬＳ酪氨酸磷酸化程度较ＯＡ ＦＬＳ明显增     

肝癌特异性细胞毒 T 淋巴细胞的实验及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＴＳ－ＣＴＬｓ），观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其抗肝癌术后复发的临床应用价值。方法：用细胞因子体外短期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８单抗共刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化并随访其术后复发情况。结果：体外研究表明，肝癌细胞经ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＩ类分子，ＩＣＡＭ－１及Ｂ７分子的表达增高，用此细胞辅以ＣＤ２８单抗刺激诱导产生的ＴＳ－ＣＴＬｓ体现了高度的对自体肝癌的杀伤活性及特异性，其杀伤活性由ＴＣＲ－ＣＤ３复合物、ＣＤ８、ＬＦＡ－１、ＩＣＡＭ－１及ＭＨＣＩ类分子所介导。体内研究的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬｓ对ＳＣＩＤ小鼠人肝癌模型具有显著的抑瘤作用。１２例初步临床应用的结果表明，ＴＳ－ＣＴＬ对于提高机体的Ｔ细胞免疫功能，对于预防肝癌术后复发均具有良好作用，值得进一步深入研究和应用。结论：ＴＳ－ＣＴＬｓ作为一种新的肿瘤特异性免疫治疗方法可望进一步提高肝癌和其它实体肿瘤的外科综合治疗水平。     

Fas系统与药物诱导结肠癌细胞株凋亡的关系

本实验旨在阐述肿瘤细胞表面Ｆａｓ/Ｆａｓ配体 (ＦａｓＬ)的表达与细胞凋亡的关系 ,并用于判断化疗药物的抗癌效果。一、材料与方法1.细胞株 :结肠腺癌Ｌｓ 174 ｔ细胞株 (中国科学院细胞库提供 )置于由ＲＰＭＩ 16 40培养基和体积分数为 10 %的小牛血清组成的细胞培养液中 ,ＣＯ2培养箱中孵育。2 .化疗药物 :分别将 5 氟脲嘧啶(5 Ｆｕ)、表阿霉素 (ＥＰＩ)、顺铂 (ＤＤＰ)、丝裂霉素 (ＭＭＣ )以血浆峰浓度(ＰＰＣ) [1] 1/ 10×ＰＰＣ、1/ 5×ＰＰＣ、5×ＰＰＣ、10×ＰＰＣ加入培养液内 ,与细胞共孵 2 4、48ｈ。 5 Ｆｕ、ＥＰＩ、ＤＤ…     

5-氟尿嘧啶上调大肠癌Fas受体表达

抗癌化疗药物可通过介导细胞凋亡杀伤肿瘤细胞。Ｆａｓ系统在抗癌药物介导的细胞凋亡中发挥重要作用[1] 。 5 氟尿嘧啶治疗大肠癌的机理同Ｆａｓ系统介导细胞凋亡的关系尚不清楚。为探讨 5 氟尿嘧啶对大肠癌细胞Ｆａｓ受体表达水平的调控作用 ,我们用流式细胞仪检测 5 氟尿嘧啶处理后大肠癌细胞Ｆａｓ受体表达水平的变化。一、材料和方法1.细胞和药物 :ＲＰＭＩ 4788、ＨＣＴ 116、ＤＬＤ 1、ＬｏＶｏ和ＷｉＤｒ均是美国组织培养库 (ＡＴＣＣ)收录的人大肠癌细胞株 ;Ｆｌｏｗ 40 0 0是人纤维母细胞 (日本冈山大学第一外科田中纪章教授惠…     

FasL在肝门部胆管癌免疫逃逸机制中作用的研究

ＦａｓＬ能触发表达细胞表面受体 (Ａｐｏ 1/ＣＤ95 )的致敏淋巴细胞的凋亡〔1〕。ＦａｓＬ介导的凋亡在耐受识别、Ｔ细胞活化诱导的细胞死亡及免疫反应终止等免疫系统的调节方面发挥重要的作用。而在眼和睾丸固有细胞中ＦａｓＬ的表达通过诱导浸润的前炎性免疫细胞的凋亡而介导了它们的免疫赦免。已证实在组织移植实验中ＦａｓＬ也可介导免疫赦免。在啮齿类动物实验中 ,表达ＦａｓＬ组织的同种移植及非免疫特赦细胞 (胰岛细胞 )联合表达ＦａｓＬ细胞共同进行的同种移植均获得成功的存活。稳定转染ＦａｓＬ基因的鼠肿瘤细胞的同种移植显示 ,…     

肝癌特异性细胞毒T淋巴细胞的实施及临床研究

诱导肿瘤特异性细胞毒性Ｔ细胞，观察其体外、体内的抗肿瘤作用及其特异性；评价其扩上癌术后复发的临床应用价值。方法用细胞因子体外周期刺激方法提高肝癌细胞的免疫原性，再与肿瘤浸润Ｔ细胞共同培养，辅以ＣＤ２８产市民人刺激，诱导ＴＳ－ＣＴＬｓ，检测其体内外抗肝癌作用及其效应机制；大量扩增后回输患者，观察其免疫学指标的变化随访其术后复发情况。结果，体外研究表明，肝癌细胞经ＩＮＦ－γ、ＴＮＦ－α诱导后ＭＨＣＯＤ     

膀胱癌化疗中纤维连接蛋白介导的药物耐受研究

纤维连接蛋白 (ＦＮ)与肿瘤的浸润、生长、转移有密切的关系。Ｄａｍｉａｎｏ等[1]发现 ,多发性骨髓瘤细胞粘附于包被ＦＮ的培养板后 ,对化疗药物的敏感性降低 ,将其称为细胞粘附介导的药物耐受(ＣＡＭ ＤＲ)。我们的实验检测了膀胱肿瘤细胞与ＦＮ粘附后对化疗药物敏感性的变化。一、材料与方法1 实验材料 :膀胱癌细胞株Ｔ2 4购自中科院上海细胞所 ;ＭＴＴ、丝裂霉素Ｃ(ＭＭＣ)均购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;ＦＮ与小牛血清 (ＢＳＡ)购自美国ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 ;ＡＮＮＥＸＩＮⅤ试剂盒购自Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ公司。∑ 960型酶标仪、…     

干扰素对骨肉瘤组织MMP—2和Cath—D表达的调节作用

目的 探讨干扰素（ＩＦＮｓ）对骨肉瘤组织表达基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）和组织蛋白酶－Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）的调控作用,并为临床上应用ＩＦＮｓ防治肿瘤转移提供一些实验基础。方法 采用ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ对体外培养的ＯＳ－７３２骨肉瘤细胞ＭＭＰ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达进行诱导调节,并利用细胞－酶联免疫吸附试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）方法对其表达水平的变化进行半定量检测。结果 ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ对ＭＭＰ     

Fas表达水平与抗Fas治疗生物学效应的关系

目的　研究细胞表面Ｆａｓ 表达水平与抗Ｆａｓ 治疗生物学效应之间的关系。　方法　将低表达Ｆａｓ 的膀胱癌细胞系ＥＪ细胞通过脂质体介导的方法转染Ｆａｓ 基因,并用流式细胞直接免疫荧光术检测Ｆａｓ 的表达;采用鼠抗人Ｆａｓ 单克隆抗体ＤＸ２ ＩｇＧ１κ诱导转染Ｆａｓ 基因的和未转染Ｆａｓ 的ＥＪ细胞的细胞凋亡作用,并用碘化丙啶染色流式细胞术检测。　结果　转染Ｆａｓ 基因后的ＥＪ细胞Ｆａｓ分子表达明显增加,Ｆａｓ 分子表达率从２６ ．１１ ％ 增加到６８．６９％ ;鼠抗人Ｆａｓ 单克隆抗体ＤＸ２ ＩｇＧ１κ诱导的转Ｆａｓ 基因的ＥＪ细胞凋亡数明显增多,达６６ ．３％ ,而未转基因的ＥＪ细胞凋亡较少,仅７ ．４％ 。　结论　人类恶性肿瘤细胞系对Ｆａｓ 抗体触发凋亡信号的敏感性主要依赖于细胞表面Ｆａｓ 的表达水平。     

抗CD3与抗CD28单克隆抗体共刺激对淋巴细胞免疫活化基因mRNA表达的影响

目的　观察ＣＤ２８ 共刺激信号对淋巴细胞免疫活化基因表达的影响及环孢素Ａ（ＣｓＡ）对它们的抑制作用。方法　分离健康人外周血单个核细胞, 分别给予抗ＣＤ３ 单克隆抗体（ 抗ＣＤ３ｍＡｂ） 单刺激或抗ＣＤ３ ｍＡｂ＋ 抗ＣＤ２８ 单克隆抗体（抗ＣＤ２８ ｍＡｂ）共刺激培养; 加或不加入ＣｓＡ。于培养后６ ｈ 和２４ ｈ 收集细胞。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测βＡｃｔｉｎ、ＣＤ４０Ｌ、ｂｃｌｘＬ、ＴＧＦβ１ 、Ｆａｓ、ＦａｓＬ、穿孔素和颗粒酶ＢｍＲＮＡ 表达水平。结果　ＣＤ２８ 共刺激信号能显著增强免疫活化基因ｍＲＮＡ 的表达;ＣｓＡ 对ＦａｓＬ和颗粒酶Ｂ的ｍ ＲＮＡ表达能产生抑制, 而对共刺激后其余免疫活化基因的表达无明显抑制。结论　ＣＤ２８ 共刺激信号通过提高多种Ｔ 淋巴细胞相关的免疫活化基因的表达水平, 而使免疫反应的活化、增殖和效应过程均得到增强;ＣｓＡ 对这一过程并非完全无效, 仍可能具有调节作用。     

肾癌浸润淋巴细胞凋亡与Fas及其配基表达

为探讨肾癌Ｆａｓ、Ｆａｓ配基 (ＦａｓＬ)异常与免疫逃避的关系 ,应用免疫组织化学技术检测 4 4例肾癌组织的Ｆａｓ、ＦａｓＬ、Ｋｉ6 7表达以及肿瘤周围浸润淋巴细胞(ＴＩＬ)凋亡 ,将肾癌细胞株 786 0、ＧＲＣ 1与ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞共培养以检测肿瘤ＦａｓＬ功能。一、资料和方法肾癌患者 4 4例的组织标本 ,12例取远离肾癌的正常肾组织 12份作为对照。患者平均 4 9岁。其中透明细胞癌 30例 ,颗粒细胞癌 14例。按Ｒｏｂｓｏｎ分期 ,各分期例数见表 1。ＧＲＣ 1为肾颗粒细胞癌细胞株 ,786 0为肾透明细胞癌细胞株 ,Ｊｕｒｋａｔ细胞为…     

创伤后多脏器功能衰竭患者白细胞流变性和细胞粘附分子水平的变化

目的 探讨创作后多器官功能衰竭（ＭＯＦ）患者白细胞流变性和细胞粘附分子（ＣＡＭｓ）水平的变化。方法 采用ＤＸＣ－３００Ａ型核孔膜红细胞变形能力测定仪、ＪＹＪ－Ⅲ型体外血栓血小板粘附两用仪、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,分别检测了３６例创伤后ＭＯＦ患者、３１例创伤患者和３５例健康人外周血液白细胞变形能力（ＬＤ）、白细胞粘附功能（ＬＡＦ）、白细胞ＣＤ１８表达、血浆可溶性细胞间粘附分子－１（ｓＩＣＡＭ－     

阻断白细胞介素-6自分泌基因表达对膀胱癌细胞的影响

我们采用反义寡核苷酸阻断白细胞介素 (ＩＬ) 6自分泌基因表达 ,为探讨膀胱肿瘤治疗新途径提供可行性依据。一、材料与方法1 .反义脱氧寡核苷酸 (ＯＤＮ)设计合成 :ＩＬ 6反义ＯＤＮ设计参阅文献[1 ],由Ｃｙｂｅｒｓｙｎ公司合成并硫化修饰。反义ＯＤＮ转染Ｔ2 4用Ｆｕｇｅｎｅｔｍ6转染试剂 (德国Ｒｏｃｈｅ公司产品 )。2 .反义ＯＤＮ对膀胱癌细胞的影响 :( 1 )反义ＯＤＮ对Ｔ2 4细胞ＩＬ 6基因表达的影响 :Ｔ2 4细胞按 5× 1 0 6 个 /瓶接种于培养瓶中 ,分为Ｔ2 4对照组、正义ＯＤＮ组 ( 1 0 μｍｏｌ/Ｌ)、反义ＯＤＮ组 ( 1 0 μｍｏｌ/…     

异体脱细胞真皮基质的研究与应用

脱细胞真皮基质 (ａｃｅｌｌｕｌａｒｄｅｒｍａｌｍａｔｒｉｘ ,ＡＤＭ)是异体皮经特殊处理 ,去除其细胞成分后得到的一种真皮替代品。由Ｌｉｖｅｓｅｙ[1] 开发研制 ,Ｌｉｆｅｃｅｌｌ公司生产 ,商品名为ＡｌｌｏＤｅｒｍ ,已获美国ＦＤＡ批准应用于临床 ,近几年在烧伤和整形外科领域中得到了广泛的应用和发展。1　脱细胞真皮基质的制备方法ＡＤＭ的制备包含去表皮、脱真皮细胞及冷冻干燥处理 3个基本步骤 ,有两种方法。一是尸体皮经高渗盐水和 12烷基硫酸钠 (ＳＤＳ)处理 ,形成ＮａＣｌ ＳＤＳＡＤＭ[1,2 ] ;二是经ＤｉｓｐａｓｅⅡ处理…     

苯乙酸对脑胶质瘤细胞超微结构的影响

本实验旨在观察诱导分化剂苯乙酸 (ＰＡ)对脑胶质瘤细胞形态及细胞周期的影响 ,在细胞水平探讨苯乙酸的作用机理。一、材料与方法1.细胞培养 :苯乙酸及ＩＭＤＭ培养基购于美国Ｆｌｕｋａ公司 ,小牛血清为长春生物制品所生产 ,胰蛋白酶为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,胶质瘤细胞Ｃ6购于美国菌种存储中心ＡＴＣＣ。Ｃ6细胞接种于 2 5ｃｍ2 培养瓶中常规单层培养 ,置于 37℃体积分数为 5 %的ＣＯ2 恒温恒湿培养箱中。2 .电镜观察 :Ｃ6细胞在培养瓶中传代培养 ,分别加入 0、2 .5、5 .0ｍｍｏｌ/Ｌ苯乙酸。 7ｄ后胰酶消化收集细胞 ,离心 ,取离心管底…     

tk基因治疗肿瘤的旁观者效应与缝隙连接的关系

一、材料和方法１．材料　ＳＴＫ质粒由ＭｏｏｌｔｅｎＦＬ教授惠赠。大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６由上海长征医院王驹博士,ＰＡ３１７细胞由上海肿瘤研究所提供,Ｈｅｌａ细胞由武汉生物制品研究所惠赠,大肠杆菌ＤＨ５α为本实验室保存。质粒纯化试剂盒、ＤＭＥＭ培养基、脂质体转染剂ＤＯＳＰＥＲ、Ｇ４１８为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品,新生小牛血清亚法公司产品,ＭＴＴ为Ｓｉｇｍａ公司产品,ＧＣＶ由丽珠公司提供。２．质粒转化、扩增、纯化和鉴定　用氯化钙法将ＳＴＫ质粒转入大肠杆菌ＤＨ５α,阳性菌落在ＬＢ培养基中大量扩增,质粒纯化…     

肝癌病人树突状细胞诱导高效而特异的抗肝癌免疫

目的 以肝癌病人树突状细胞（ＤＣ）体外诱导抗肝癌免疫。方法 自肝癌病人外周血中分离出单个核细胞（ＰＢＭＣ０;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ－４）联合刺激ＰＢＭＣ中ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖,分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ及其上清液对ＨｅｐＧ２,ＢＥＬ－７４０２,ＬＯＶＯｅｙ ＨＯＳ－８６     

抗CD3与抗CD28单克隆抗体共刺激对淋巴细胞免疫活化基因m …

目的 观察ＣＤ２８共刺激信号对淋巴细胞免疫活化基因表达的影响及环孢素Ａ（ＣｓＡ）对它们的抑制作用。方法 分离健康人外周血单个核细胞,分别给予抗ＣＤ３单克隆抗体（抗ＣＤ３ｍＡｂ）单刺激或抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤＷ２８单克隆抗体（抗ＣＤ２８ｍＡｂ）共刺激培养;加或不加入ＣｓＡ。于培养后６ｈ和２４ｈ收集细胞。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测β－Ａｃｔｉｎ、ＣＤ４０Ｌ、ｂｃｌ－ｘＬ、ＴＧＦ－β１、Ｆ     

膀胱癌多药耐药的流式细胞术分析

本实验旨在研究流式细胞术(ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ)在膀胱癌细胞的多药耐药分析方面的作用,现报道如下。一、材料与方法1.试剂及仪器:ＤＭＥＭ、ＤＮＡ提取试剂盒ＤＮＡｚｏｌ、ＲＮＡ提取试剂盒Ｔｒｉｚｏｌ为Ｇｉｂｃｏ产品;秋水仙素、甲酰胺、ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ为Ｓｉｇｍａ产品;缺口平移系统(ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ)为Ｐｒｏｍｅｇａ产品,尼龙膜为ＺｅｔａＰｒｏｂｅ产品;鲑鱼精ＤＮＡ购自晶美生物公司;ＭＤＲ1ＰＣＲ引物Ｐ1:5′ＣＣＣＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧＣＡＧＣ3′,Ｐ2:5′ＣＴＴＣＡＡＡＣＴＴＣＴＧ…