慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒前C区基因突变与临床关系

为了解慢性乙型肝炎患者是否有前Ｃ区基因突变及其与临床的关系，应用快速检测乙型肝炎病毒前Ｃ区基因突变方法，对５３例患者进行了研究。结果显示：２５例ＨＢＶＤＮＡ阳性患者中１３例有突变株感染，最常见的突变形式为１８９８位或伴有１９０１位突变（１０／１３例）。     

基因芯片检测肝组织中乙型肝炎病毒前C区/BCP区基因突变的研究

本实验采用PCR技术及芯片杂交原理 ,从待测肝组织中抽提取HBVDNA ,对目的基因进行荧光标记扩增 ,并与基因芯片上的探针进行杂交 ,通过激光共聚焦扫描 ,能准确进行多位点突变平行检测 ,对 96例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者肝组织进行前C区A1896、A1899及BCP区nt1762 /nt1764联合突变检测 ,从而探讨HBV前C及BCP区基因突变的临床意义。材料与方法一、研究对象2 0 0 2年 3月～ 2 0 0 3年 3月某院住院患者共 96例 ,HBsAg及HBVDNA均为阳性 ,而HBeAg均为阴性 ,所有患者均行肝组织活检 ,肝组织标本蜡块包埋。男 62例 ,女 3 4例 ,年龄…     

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒前Ｃ区基因突变的研究进展。前Ｃ区某些部位，特别是第１８９６位核到的终止突变，使ＨＢＶ失去分泌ＨＢｅＡｇ的能力，但不影响其复制与传染，前Ｃ区突变的发生除与ＨＢＶ前基因组逆转不过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外，主要与宿主的免疫压力有关，前Ｃ区的突变常伴有其它基因特点是Ｃ基因的突变，共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归，使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切，     

乙型肝炎病毒前C区基因突变的研究进展

本文综述了乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因突变的研究进展。前C区某些部位,特别是第1896位核苷酸的终止突变,使HBV失去分泌HBeAg的能力,但不影响其复制与传染。前C区突变的发生除与HBV前基因组逆转录过程中缺乏校验酶而发生碱基错配有关外,主要与宿主的免疫压力有关。前C区的突变常伴有其它基因特别是C基因的突变,共同影响突变株的生物学特性及宿主的临床转归,使某些突变株与重症肝炎的发生及干扰素的疗效关系密切,在母婴传播及肝移植中具有特殊意义。     

重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒全基因克隆及测序

目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA克隆并测序，从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系。方法10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA，聚合酶链反应（PCR）扩增HBV全基因。PCR产物构建到PUCm-T载体上，转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞，经酶切鉴定，获得含3．2Kb HBVDNA的重组克隆菌，全基因测序，分析各读码框核苷酸和氨基酸变化。结果4例成功构建HBV DNA克隆，并完成全基因测序。其中3例在前C区发生G1896A变异，产生一个终止密码子，导致HBeAg缺失；1例在C启动子区1762、1764双位点出现突变；有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知细胞毒T淋巴细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的细胞表位。结论该法可用于临床研究HBV病毒基因结构与重型乙型肝炎发病的关系，并为进一步研究其HBV基因功能奠定基础。     

乙型肝炎病毒前C区基因变异研究进展

自１９８９年报道乙型肝炎病毒前Ｃ区终止密友变异一，有关前Ｃ区核苷酸１８９６位突变和其它位点变异的研究增多。这些变异可直接影响病毒的复制水平，或通过阻止ＨＢｅＡｇ的合成与分泌来调节宿主免疫尖答，因而具有较重要的临床意义，本文就ＨＢＶ前Ｃ区基因变异的检测，变异热点的特点及临床意义等方面做一综述。     

乙型肝炎病毒前C区变异的临床意义

一、资料与方法 １．病例来源：３０例慢性ＨＢＶ感染者系我院门诊及住院患者。男２０例,女１０例,其中无症状ＨＢｓＡｇ携带者９例（ＡｓＣ组）;慢性乙型肝炎１２例 ＣＨＢ组）;慢性重型肝炎９例（ＣＨＦ组）,平均年龄３６．４岁（１３～５岁）。２１例行肝活检。肝炎分级分期按１９９５年北京传染病与寄生虫病学术会议修定标准。所选病例全部为ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）、及抗－ＨＢｃ（＋）。 ２．血清ＨＢＶ标志物：采用微粒酶联免疫法系统及试剂盒（Ａｂｂｏｔｔ,ＵＳＡ）。 ３． ＲＦＬＰ分析参照文献［１］进行。将前…     

乙型肝炎和肝癌患者乙型肝炎病毒前C区1896位点突变的研究

为探索乙型肝炎病毒前Ｃ区突变是否与肝损程度及肝癌发生有关，对１３９例ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ和抗－ＨＢｅ阳性，ＨＢｅＡｇ阴性的慢性ＨＢＶ感染者和肝癌患者的血清标本，采用３＇碱基特异性聚合酶反应进行了第１８９６位核苷酸突变的检测分析。     

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒前C区基因突变与干扰素的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ前Ｃ和部分Ｃ区基因，快速检测ＨＢＶ前Ｃ终止密码突变方法，对慢性乙型肝炎患者干扰素治疗与ＨＢＶ前Ｃ突变关系作了初步研究。６例干扰素治疗后４例ＨＢＶＤＮＡ转阴，２例阳性者均检出突变株。１１例非干扰素治疗者中，检出突变株３例。１例干扰素治疗１个月后ＨＢＶｅ抗累（ＨＢｅＡｇ）转阴，优势病毒株已由突变株与野生株共存状态替代原有野生株，提示干扰素治疗后ＨＢｅＡｇ转阴并不意味着ＨＢＶ被清除，而有潜在ＨＢＶ前Ｃ突变的可能。     

重型乙型肝炎e抗原阴性患者前C变异株及其体外翻译

目的：探讨HBeAg阴性的慢性重型乙型肝炎患者HBV前C区变异及前C区T1862突变体对e抗原合成和分泌影响,方法：选取9例重型乙型重病毒性肝炎患者,用PCR方法扩增血清中HBV前C／C基因区,并克隆后测序和序列分析,构建HBV前C区T1862位点突变体表达质粒pGEMT,经体外翻译比较野毒株和变异株的表达产硪,结果：HBV前C区有3个位点异使氨其酸序列改变,A1896,A1899和T1862,A1899并不单独出现,前C区T1862突变并不阻止HBVe前体外合成,同时,有2例并未检测到前C区的变异,结论：部分重型肝炎HBeAg阳性原因降了T1896变异外,还存在T1862变异,前C1862突变对HBVe抗原前体蛋白合成并无影响,可能e抗原前在分泌过程中受阻。     

重型肝炎血清HBV前C区A83变异株比率的动态观察

目的 了解ＨＢＶ前区Ｃ区Ａ８３变异与重型肝炎的关系。方法 用套式错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析和凝胶光密度图象分析仪及定量ＰＣＲ,对９例重型肝炎患者血清ＨＢＶ变异株的比率和ＨＢＶ ＤＮＡ含量进行测定和动态观察。结果 Ａ８３变异株在６例阳性率中均与野生株呈混合感染,其比率〉５０．０％的仅２例,存活死亡各１例,〈３１．０％的４例均死亡,变异株的出现及其比率变化与ＨＢＣＶ ＤＮＡ含量的消长一致,但无统     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）准种在慢性乙型肝炎患者中的存在状态。方法 以已知中国株HBV基因序列为依据。设计特异性聚合酶链反应（PCR）引物,自3例慢性乙型肝炎患者体内扩增HBV全S基因片段,克隆人pGEMTeasy质粒,用限制性片段长度多态性（RFLP）法确定HBV的变异现象,DNA测序确定病毒的变异程度。结果 分别自3例患者血清中克隆出29、28和8个阳性克隆,以EcoRⅠ酶切患者1和2的RFLP结果提示各有5种不同的长度带型,PCR产物XhoI酶切RFLP结果表现为高度保守,测序结果发现HBV体内毒株DNA序列高度一致,同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于97%。结论 慢性乙型肝炎患者体内有HBV准种共存,且呈现出一定的优势克隆现象。可能与患者预后有关。     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒准种特点的初步研究

探讨乙型肝炎病毒（HBV）在慢性患者中存在状态，以HBV基因序列为依据。设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自2例慢性患者体内扩增HBV全S基因片段，克隆入T载体。限制片段长度多态性（RFLP）法确定HBV的变异现象，DNA测序确定病毒的变异程度，质粒EcoRI酶切RFLP结果提示自2例患者血清中克隆出的29和28个阳性克隆中各有5种不同的长度带型，PCR产物XhoI酶切RFLP结果则表现为高度保守，测序结果发现HBV体内毒株碱基序高度一致，同一患者两株全S区序列测序结果表明DNA序列的同源性大于97%。本结果提示HBV慢性患者体内有HBV准种共存，且呈现出一定的优势克隆现象。     

慢性乙型肝炎患者病毒准种特性的初步研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)是否存在准种特性,并初步了解HBV准种的复杂性和遗传差异性。 方法用多聚酶链反应(PCR)技术从1例CHB患者血清中扩增HBV整个PreC/C基因区,然后用T载体克隆PCR产物,从转化阳性的克隆中随机选出34个克隆进行核酸序列分析。结果在34个测序克隆中发现存在28种不同的序列,序列间差异性介于0.2％～2.1％。变异位点分布于整个区域。所有序列nt1896位均无变异。 结论 在CHB患者体内HBV存在复杂的准种特性。     

慢性乙型肝炎急性发作患者血清病毒准种动力学研究

目的揭示慢性乙型肝炎急性发作及重型化过程中血清乙型肝炎病毒(HBV)基因组前C／C 及基本核心启动子(BCP)区准种的动态变化规律。方法选取1例慢性乙型肝炎两次急性发作伴重型化患者病程中5份血清样本,采用聚合酶链反应-TA克隆-构象敏感凝胶电泳-测序的方法,研究慢性乙型肝炎重型化过程中血清HBV准种的动态变化。结果血清HBV准种复杂性在慢性乙型肝炎急性发作时为10～ 12,在好转时为14～17(t=3．133,P<0．05),且随时间推移有逐渐升高的趋势;在此过程中优势准种组成及比例亦发生了变化(t=3．295,P相似文献   

乙型肝炎病毒表面抗原一级结构多态性的初步研究

目的 研究慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原一级结构的多态性。方法 设计特异性引物，自7例慢性乙型肝炎患者血清中扩增S基因全长或全基因组片段，TA克隆法克隆到T载体中，随机选择克隆测序。结果 共20个克隆被测序。20个克隆全S蛋白的总一致率仅为32．0％，13株全长为401氨基酸残基的克隆氨基酸一致效率为82．5％。患者血清中发现2株克隆编码截短型表面抗原中蛋白，在前S1或前S2的免疫决定区或可能的肝细胞结合部位均发现缺失突变。结论 慢性乙肝患者体内存在HBV准种群，病毒编码的截短型表面抗原中蛋白可为HBV诱导原发性肝癌提供一种途径，应加强对HBsAg一级结构多态性的研究。     

拉米夫定耐药后序贯治疗中HBV准种的演变

目的:探讨拉米夫定(LAM)耐药后序贯治疗中HBV准种的演变特点.方法:收集7例拉米夫定耐药患者序贯治疗中的血清,对HBV聚合酶基因逆转录酶区进行PCR扩增克隆并测序,结合临床用药分析序列突变,探讨其演变特征.结果:患者1、4、5在序贯治疗中LAM耐药变异株一直存在,主要以M204I+L80I、M204I+L80I+L180M、M204V+L180M+G173L、M204V+L180M为主,所占比例在不断发生变化,患者2、3在序贯治疗中检测出野生株,但患者2在后续治疗中又选择出LAM耐药变异株.患者6在ADv联合ETV治疗时、患者7在单用ADV治疗时测时分别测出双重耐药株M204v+L180M+G173L+T184A和M204V+180M+G173L+236D.结论:拉米夫定耐药后序贯治疗中原耐药突变不易消失,且容易在此基础上筛选出交叉耐药株或多重耐药株,他的出现影响序贯治疗的应答甚至导致序贯治疗的失败.     

乙型重型肝炎患者血清HBV前C/BCP变异检测及临床意义

目的探索乙型重型肝炎患者HBV前C/BCP区变异与临床病情关系。方法用荧光定量PCR法检测血清HBVDNA载量;PCR扩增前C/BCP区基因后进行序列测定。结果30例乙型重型肝炎患者中BCP变异有18例,HB-VDNA平均水平为2.71×107copies/mL,未发生BCP变异者有12例,HBVDNA平均水平为5.35×106copies/mL,两者间有显著差异。测序结果显示HBV前C区nt1896G→A终止变异和BCP变异(nt1762A→T和1764G→A)在乙型重型肝炎患者中发生率分别为43.3%(13/30)和60%(18/30),在慢性乙型肝炎患者则分别为40%(12/30)和30%(9/30),两组BCP变异(nt1762A→T和1764G→A)相比有显著差异(P=0.02)。结论BCP变异可影响病毒复制,BCP变异可能与肝病的严重程度存在着相关性。