硼替佐米联合毛喉素诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：硼替佐米作为蛋白酶体抑制剂已成为新诊断和复发多发性骨髓瘤患者临床治疗的主要药物,但仍有部分患者对硼替佐米产生耐药而影响其长期生存。近年来研究发现,提高细胞内环腺苷酸浓度可以诱导骨髓瘤细胞凋亡并延缓其生长,成为骨髓瘤治疗新途径。该研究通过观察硼替佐米联合腺苷酸环化酶激动剂毛喉素(forskolin)对硼替佐米耐药骨髓瘤细胞的作用,探究克服骨髓瘤耐药的可能途径及其机制。方法：以硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株H929-R和原代细胞为模型,通过观察细胞生长、形态、凋亡相关基因的改变来研究硼替佐米、毛喉素单独或联合处理对硼替佐米耐药细胞增殖及凋亡的影响;并应用Rh123/PI双染法检测药物处理前后细胞内线粒体跨膜电位的变化;同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测线粒体凋亡相关基因转录水平及抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的蛋白水平的改变。结果：硼替佐米(20 nmol/L)与毛喉素(50 nmol/L)能够协同诱导硼替佐米耐药细胞凋亡。进一步研究发现,毛喉素可协同硼替佐米促使耐药细胞内线粒体跨膜电位下降并下调其Bcl-2和Mcl-1蛋白的表达。结论：毛喉素联合硼替佐米能够诱导硼替佐米耐药骨髓瘤细胞凋亡。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤八例

 目的　初步观察硼替佐米联合地塞米松（DEX）或化疗治疗多发性骨髓瘤（MM）的初步疗效和患者的不良反应。方法　8例 MM患者分别采用硼替佐米（1.3 mg／m2,第1、4、8、11天或3.5 mg,第1、8天）联合地塞米松或VTD[长春新碱（VCR）、吡柔比星（THP）、Dex]方案治疗,每4周为1个疗程,完成1～4个疗程,其中3例行自体外周血造血干细胞移植,评价疗效和不良反应。结果　3例完全缓解（CR）,2例部分缓解（PR）,3例达到微小反应（MR）;总有效（CR+PR）率为62.5 %;常见不良反应有胃肠道反应、白细胞和血小板轻度减少、肢端麻木感、肝功能异常及乏力等,均能耐受。3例行自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）患者获得足量的干细胞数并成功植活。结论　硼替佐米联合DEX或化疗治疗 MM疗效好,不良反应轻微,患者易于耐受,硼替佐米不影响MM干细胞采集和植活。     

硼替佐米对人类多发性骨髓瘤细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响

 目的　探讨硼替佐米对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞抗凋亡蛋白HSP-90的影响。方法　采用RT-PCR技术研究经不同浓度的硼替佐米作用于U266细胞4 h后其内HSP-90 mRNA表达情况的变化。结果　随着硼替佐米浓度的增加,其MM细胞中HSP-90α的mRNA表达量逐渐增加。由低浓度组到高浓度组（0、50、100、150、200 nmol／L）所对应的HSP-90α的灰度值分别为0.343±0.017、0.505±0.039、0.640±0.029、0.760±0.059、0.963±0.054;两两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05 ）。浓度由低到高组对应HSP-90β的灰度值分别为0.610±0.022、0.765±0.050、0.645±0.052、0.770±0.059、0.790±0.027,而HSP-90β的灰度值 0 nmol／L组与50、150、200 nmol／L组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。50、100 nmol／L浓度组对应的HSP-90β的灰度值不同（P＜0.05）。100 nmol／L组与150、200 nmol／L组对应的HSP-90β的灰度值差异有统计学意义（P＜0.05）。HSP-90β的mRNA表达量增加趋势不很明显,但总体差异仍具统计学意义（P＜0.05）。结论　硼替佐米可以上调HSP-90的分子水平的表达,并且以上调HSP-90α的表达为主。     

硼替佐米在多发性骨髓瘤中耐药机制的研究

第一代蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BTZ)已广泛应用于临床,其主要通过竞争性结合蛋白酶体β5亚基、抑制蛋白酶体功能来干扰细胞内蛋白质降解过程,从而诱导肿瘤细胞凋亡.自2000年美国食品和药品监督管理局(FDA)批准BTZ用于治疗多发性骨髓瘤(MM)以来,MM患者的缓解率及长期生存率得到了明显提高,但在疾病终末期多数患者仍面临耐药复发的问题.因此,探讨BTZ耐药机制、寻找克服BTZ耐药的用药策略是MM治疗的一大挑战.本文就近年来多项关于MM中BTZ耐药机制的相关研究进展进行综述.     

蛋白酶体抑制剂bortezomib治疗多发性骨髓瘤的作用机制和临床试验

 蛋白酶体是细胞调节信号的中心通道,可以降解和活化多种调节蛋白;蛋白酶体抑制剂可通过抑制催化中心活性,阻断大量调节蛋白的降解,引起细胞内信号系统的紊乱和超负荷,导致细胞生长的抑制,最终使肿瘤进展过程延缓甚至停滞。Boterzomib作为第一个选择性的蛋白酶体抑制剂在多发性骨髓瘤中有良好的治疗反应率和较少的毒副作用,近年来得到广泛研究。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米在多发性骨髓瘤中的耐药机制

多发性骨髓瘤(MM)是好发于老年人的恶性浆细胞疾病.近年来,小分子蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂(IMiD)的应用,使MM从一种缺乏有效治疗手段的致死性疾病转变成对新型治疗反应良好的慢性疾病.然而,耐药的发生使MM仍不可治愈,这已成为当前MM临床治疗的最大挑战之一.文章对硼替佐米在MM治疗中的获得性耐药机制进行综述,主要包括靶基因修饰、旁路信号等机制.     

硼替佐米治疗12例难治性多发性骨髓瘤

 目的　观察硼替佐米治疗难治性多发性骨髓瘤（MM）的疗效和患者不良反应。方法　12例患者中男9例，女3例，中位年龄67岁，难治性MM患者接受硼替佐米治疗，1.0 mg／m2～1.3 mg／m2，静脉注射，第1、4、8、11天，3周为1个疗程；或者1.6 mg／m2静脉注射，第1、8、15、22天，5周1个疗程。多数患者同时应用地塞米松20～40 mg／d，第1天至第4天；2例同时合用多柔比星脂质体（商品名：楷莱）。疗效采用EBMT标准进行评价，不良反应按照美国国立癌症研究所（NCI）CTCAE评价。结果　中位随访时间6.5（1～13）个月，9例可评价疗效，8例（88.9 ％）有效，其中nCR4例，PR3例，MR1例。7例中断治疗后疾病进展。死亡5例，其中3例为治疗有效后中断治疗者。患者最常见的不良反应为血小板减少，但可以自行恢复。其次为恶心、呕吐、乏力、周围神经毒性、带状疱疹等。结论　硼替佐米治疗难治性MM疗效确凿，患者耐受性好，但需要坚持足疗程治疗。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)基因表达对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法在体外合成针对NAMPT基因的siRNA并转染U266细胞,实验分为si-NAMPT组(转染siRNA-NAMPT的U266细胞)、si-NC组(转染阴性对照siRNA的U266细胞),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后U266细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测转染后各组细胞NAMPT、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、β-catenin表达水平。结果si-NAMPT组转染48、72 h后与si-NC组比较,对U266细胞增殖抑制作用(570 nm处吸光度值)增加(48 h:0.78±0.06比1.62±0.11;72 h:1.23±0.14比2.37±0.18),差异均有统计学意义(t=3.54,P=0.034;t=4.72,P<0.01)。si-NAMPT组与si-NC组相比,细胞早期凋亡率升高[(53.42±0.25)%比(25.98±3.18)%],差异有统计学意义(t=4.41,P<0.01)。与si-NC组相比,si-NAMPT组p-AKT、p-GSK-3β、NAMPT、β-catenin蛋白水平均降低(均P<0.05)。结论沉默NAMPT基因可明显抑制U266细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能通过抑制AKT-GSK-3β-β-catenin信号通路发挥作用。     

硼替佐米联合地塞米松治疗24例多发性骨髓瘤的疗效分析

背景及目的:硼替佐米(bortezomib)是一种有效、可逆性的蛋白酶体抑制剂,通过诱导骨髓瘤细胞的凋亡,在骨髓瘤患者的治疗中发挥持久的疗效。本研究旨在观察硼替佐米联合地塞米松治疗初治、难治/复发多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的疗效和毒副作用,及该方案在肾功能不全患者中应用的安全性。方法:24例MM患者接受硼替佐米联合地塞米松方案治疗,每3周为一个疗程。所有患者共接受中位3个疗程(1～8个疗程)的化疗。采用EBMT疗效评价标准评价疗效,按国立癌症研究所的常规毒性判定标准评价不良反应。结果:全组中位随访4个月,总有效率79.2%(19/24)。轻链型患者CR率57.1%(4/7),明显高于非轻链型患者5.9%(1/17),差异有统计学意义(P=0.014)。7例合并肾功能不全的患者与肾功能正常患者的疗效相近,差异无统计学意义(P=0.272)。Ⅲ～Ⅳ级不良反应包括白细胞减少(2/24,8.3%)、血小板减少(8/24,33.3%)、腹泻(2/24,8.3%)和乏力(1/24,4.2%),经对症治疗或推迟化疗后均可恢复。结论:硼替佐米联合地塞米松方案治疗MM患者有明显疗效,在轻链型患者疗效更加显著。副作用可以耐受,在合并肾功能不全的患者可安全应用。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米治疗多发性骨髓瘤的分子机制

 泛素-蛋白酶体通路是生物体内蛋白质选择性降解的重要途径之一,它参与了细胞内许多重要的生理、生化过程。硼替佐米作为一种蛋白酶体抑制剂,可抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞的生长并诱导肿瘤细胞凋亡,克服了传统药物的化疗耐药性。就硼替佐米治疗MM作用机制的研究进展作一综述。     

Effect of different doses of dexamethasone combined with bortezomib and thalidomide in treatment of elderly patients with multiple myeloma

Objective: To observe the efficacy and safety of different doses of dexamethasone combined with bortezomib and thalidomide in the treatment of elderly patients with multiple myeloma (MM). Methods: A total of 33 elderly MM patients treated in Shanghai Fifth People's Hospital between August 2014 and August 2019 were enrolled in the study. According to the dosage of dexamethasone, the patients were divided into the observation group (low dose dexamethasone, 20 mg/d on day 1-4, and 11-14) and the control group (high dose dexamethasone, 40 mg/d on day 1-4, 9-12, and 17-20). Twenty-eight days was a course of treatment. The clinical efficacy and safety of patients was assessed after 4 courses of treatment. The patients were followed up till June 30th, 2021. Kaplan-Meier and log-rank were used to analyze the survival. Results: The overall response rate (ORR) and median overall survival (OS) were not significantly different between the observation and control groups (82.4% vs 87.5%, P=0.973; 58 months vs 61 months, P=0.859). The incidence rates of lung infection and hyperglycemia in the observation group were both significantly lower than those in the control group (both P< 0.05). Conclusions: Different doses of dexamethasone combined with bortezomib and thalidomide have definite curative effects in the treatment of elderly MM patients. But low dose dexamethasone has fewer adverse reactions and better safety. © 2022, The Second Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University.. All right reserved.     

硼替佐米治疗难治性复发性多发性骨髓瘤疗效分析

 目的　探讨硼替佐米联合地塞米松治疗难治性复发性多发性骨髓瘤（MM）的临床疗效及不良反应。方法　硼替佐米1.3 mg／m2静脉注射第1、4、8、11天,地塞米松20 mg／d,第1天至第4天,第8天至第11天,第17天至第20天静脉滴注,21 d为1个周期,双周期时,地塞米松20 mg／d,第1天至第4天。结果　经4～6个周期治疗,3例完全缓解,4例接近完全缓解,3例部分缓解。结论　硼替佐米联合地塞米松治疗难治性复发性MM是较好的选择。     

硼替佐米联合阿霉素、地塞米松治疗初治多发性骨髓瘤的疗效观察

目的　比较硼替佐米联合阿霉素、地塞米松方案（ＰＡＤ方案）与长春新碱联合阿霉素、地塞米松方案（ＶＡＤ方案）治疗初治多发性骨髓瘤（ＭＭ）的疗效和不良反应。方法　ＰＡＤ方案组４１例患者给予硼替佐米１.３ｍｇ／ｍ２静推,第１、４、８、１１天;阿霉素１０ｍｇ／ｄ静滴,第１～４天;地塞米松２０ｍｇ／ｄ静滴,第１～４天,３周为１个周期,每例接受２～６个周期化疗。４０例ＶＡＤ方案组患者予长春新碱０.５ｍｇ／ｄ静滴,第１～４天;阿霉素１０ｍｇ／ｄ静滴,第１～４天;地塞米松２０ｍｇ／ｄ静滴,第１～４天,４周为１个周期,每例接受２～８个周期化疗。化疗２个周期后评价两组患者的疗效和不良反应。结果　两组患者均可评价疗效和不良反应。化疗２个周期后,ＰＡＤ方案组获显效２２例（５３.７％）,ＶＡＤ方案组获显效１０例（２５.０％）,差异有统计学意义（Ｐ＜０.００１）。两组主要不良反应包括消化道症状、周围神经炎、血小板减少、白细胞减少和感染,多为１～２级,经对症治疗后均可缓解。结论 ＰＡＤ方案治疗初治ＭＭ的显效率明显高于ＶＡＤ方案,不良反应可耐受。     

硼替佐米治疗多发性骨髓瘤后严重肺损伤二例报告并文献复习

目的 分析复发多发性骨髓瘤(MM)患者接受硼替佐米治疗后患者出现严重肺损伤的情况,提高对硼替佐米副作用的认识.方法 报道2例复发MM患者接受硼替佐米联合地塞米松或沙利度胺的化疗过程中出现严重肺损伤并复习文献.结果 2例复发MM患者在应用硼替佐米治疗过程中出现哮喘、呼吸困难、发热、低氧血症.胸部X线片提示肺部感染,细菌学检查无阳性发现,广谱抗生素治疗无效,糖皮质激素治疗有效.结论 硼替佐米治疗MM导致严重肺损伤尽管少见,但预后凶险,值得重视.预防性应用激素可能降低肺损伤的发生率.     

Allogeneic bone marrow transplantation in 24 patients with multiple myeloma reported to the EBMT registry

Twenty-four patients with multiple myeloma received an allogeneic bone-marrow graft from HLA-compatible sibling donors (n = 23), or a twin donor (n = 1). Eighteen patients are alive, 1-36 months post bone-marrow transplantation (median 14 months). Ten of these patients had no signs of multiple myeloma as judged by immunoglobulins in serum, light chains in urine, or the percentage of plasma-cells in bone-marrow aspirate. Bone lesions on X-ray were mainly unchanged. Six patients died from transplant-related complications 3 weeks to 5 months post transplantation. One of these patients had severe acute graft-versus-host disease (aGVHD). In other patients aGVHD was a minor problem. Allogeneic bone-marrow transplantation appears to be a promising method for treatment of a selected group of patients with multiple myeloma.     

硼替佐米治疗复发难治性多发性骨髓瘤43例

 目的　观察硼替佐米联合地塞米松、甲泼尼龙或其他化疗药物治疗复发难治多发性骨髓瘤（MM）的临床疗效与不良反应。方法　43例复发难治MM患者,男34例,女9例,年龄36～72岁,平均年龄58.13岁,其中31例接受硼替佐米联合甲泼尼龙或地塞米松（VMP或VD）方案治疗,12例接受硼替佐米联合环磷酰胺、泼尼松、沙利度胺（VCPT）治疗或联合环磷酰胺、地塞米松、顺铂、依托泊苷（VDECD）治疗,每个患者至少接受2～8个疗程的治疗。采用Bladè标准评价疗效,按照美国国立癌症研究所常规毒性判断标准（NCI CTCAE3.0）判断不良反应。结果　中位随访9个月,复发难治患者43例,完全缓解（CR） 5例（11.6 %）,接近CR（nCR）11例（25.6 %）,部分缓解（PR）15例（34.9 %）,轻微反应（MR）5例（11.6 %）。总有效率（CR+ nCR+ PR+ MR）83.7 %。主要不良反应有乏力、胃肠道症状、周围神经病变、不同程度的血小板减少、皮疹及带状疱疹等,经过对症治疗以及调整剂量后均能改善。结论　硼替佐米联合其他药物治疗复发难治MM是一种安全可靠、有较好治疗前景的方法。     

Bortezomib in combination with dexamethasone and subsequent thalidomide for newly-diagnosed multiple myeloma: A Chinese experience

ObjectiveBortezomib–dexamethasone–thalidomide has been reported to be effective in newly-diagnosed multiple myeloma (MM) with an overall response rate of 92% and a CR rate of 18% (Alexanian et al, Hematology 2007;12(3):235–9), but this regimen has not been tested in the Chinese patients. We report here our results testing with this combination in the Chinese population and to investigate the efficacy and safety of bortezomib in combination of dexamethasone plus subsequent thalidomide as primary treatment for MM.MethodsBetween June 2006 and March 2008, 20 consecutive newly-diagnosed patients with symptomatic MM were treated with bortezomib at 1.3 mg/m² IV on days 1, 4, 8 and 11 and dexamethasone at 20 mg/m² IV daily on the day of bortezomib and the day after. All patients received daily oral thalidomide that was escalated from 100 mg to 200 mg. Fourteen patients were male and 6 were female. Median age was 59 years (range 43–86 years). 11 patients were stage 2 according to the International Staging System, 8 were stage 3, only 1 patient was stage 1. All patients received a median of two cycles of therapy (range 1–6). The EBMT criteria were used for response evaluation. Toxicities were evaluated according to the NCI Common Toxicity Criteria version 3.Results16 out of 20 patients (80%) achieved PR and 3 (15%) achieved CR; therefore the overall response rate was 95%. With a median follow-up duration of 7.8 months (4–22 months), no patients died. Grade 3–4 toxicities included fatigue (3/20), thrombocytopenia (10/20) diarrhea (5/20) and orthostatic hypotension (3/20) Grade 2 neuropathy occurred in four out of 20 patients and herpes zoster occurred in four out of 20 patients. Routine anticoagulation or anti-thrombosis was not used. Only 1 patient suffered from DVT/PE.ConclusionsOur preliminary experience in Chinese patients indicated that bortezomib–dexamethasone–thalidomide is highly effective in newly-diagnosed MM. Grade three and 4 toxicities are rare after median 2 cycles of therapy. The relative lower rates of neuropathy and DVT/PE in the Chinese patients with MM are being cautiously observed.     

间断口服伐昔洛韦预防多发性骨髓瘤患者应用硼替佐米致带状疱疹的临床观察

背景与目的：随着硼替佐米成功用于多发性骨髓瘤的治疗,药物导致带状疱疹激活现象受到关注。本研究探讨硼替佐米治疗期间伐昔洛韦不同用药方法预防带状疱疹的效果。方法：31例多发性骨髓瘤患者随机分成伐昔洛韦间断应用组和连续应用组,分别观察2组患者带状疱疹发生情况、药物不良反应、抗病毒治疗费用及情绪状态。结果：2组患者治疗期间均未合并带状疱疹,未发生3级以上药物不良反应,间断用药组的抗病毒费用支出低于连续治疗组。患者情绪取决于基础疾病疗效,既往治疗不理想的连续用药组患者有焦虑抑郁表现。结论：伐昔洛韦间断应用能够有效预防硼替佐米治疗期间多发性骨髓瘤患者带状疱疹发生。     

冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤 U266细胞增殖与凋亡的影响及其相关分子机制。方法培养 U266细胞至对数生长期,分别采用高、中、低浓度的地塞米松、冬凌草甲素单独或联合处理 U266细胞,以二甲基亚砜（DMSO）处理为对照,于处理后24、48、72 h 利用 CCK-8法检测细胞增殖情况;应用 Annexin V-FITC／PI 标记及流式细胞术检测细胞凋亡;利用实时荧光定量 PCR 法检测细胞 Notch1、NF-κB／p65、bcl-2基因表达水平的变化;Westernblot 法分析 Notch1、cleavedNotch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,不同剂量的药物处理组均能有效抑制 U266细胞的增殖并促进其凋亡（P＜0.05）,两种药物联合应用对 U266细胞的抑制增殖和诱导凋亡具有协同作用（P＜0.05）。 U266细胞经地塞米松处理后其 NF-κB／p65、bcl-2 mRNA 和蛋白表达水平均有所下调（P＜0.05）,冬凌草甲素处理组及联合处理组 U266细胞 Notch1、cleaved Notch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05）。结论冬凌草甲素联合地塞米松对 U266细胞增殖的抑制作用及凋亡诱导作用显著增强,其作用机制可能与抑制 Notch1信号通路有关。     

Activation of reactive oxygen species/AMP activated protein kinase signaling mediates fisetin-induced apoptosis in multiple myeloma U266 cells

We investigated the molecular mechanisms responsible for fisetin-induced apoptosis in U266 cells. Fisetin elicited the cytotoxicity in U266 cells, manifested as an increased fraction of the cells with sub-G1 content or stained positively with TUNEL labeling. Fisetin enhanced caspase-3 activation, downregulation of Bcl-2 and Mcl-1(L), and upregulation of Bax, Bim and Bad. Fisetin activated AMPK as well as its substrate acetyl-CoA carboxylase (ACC), along with a decreased phosphorylation of AKT and mTOR. Fisetin also stimulated generation of ROS in U266 cells. Conversely, compound C or N-acetyl-L-cystein blocked fisetin-induced apoptosis. Our data suggest that fisetin-induced apoptosis in U266 cells is through ROS and AMPK pathways.