Sonic Hedgehog信号通路与乳腺癌抑癌基因LKB1的相互影响

目的：研究环靶明（cyclopamine）抑制Sonic Hedgehog（SHH）信号通路后,转染LKB1基因的乳癌细胞的凋亡、周期及信号通路相关基因表达的改变。方法：抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,分MDA-MB-231组（231组）和转染LKB1基因的MDA-MB-231（LKB1组）两组,每组分别采用0,5×10-6mol/L,10×10-6mol/L,20×10-6mol/L 4种浓度的环靶明处理细胞,各小组细胞分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,用RT-PCR法和Western blot法检测Sonic Hedgehog信号通路相关基因Shh、Smo、Ptch、Sufu、Hip及LKB1的mRNA和蛋白表达水平。结果 ：在LKB1组和231组中,各小组细胞的凋亡率变化与Sonic Hedgehog相关基因Shh、Smo表达变化一致,随环靶明浓度增大凋亡率增加、基因表达受抑制,在环靶明浓度达10×10-6mol/L时变化最明显,且LKB1组较231组的变化更为明显。在231组中,各小组细胞周期变化与Sonic Hedgehog相关抑制基因Sufu、Hip表达变化一致。而在LKB1组中,各小组细胞周期与抑制基因Sufu、Hip表达变化均无明显差异。在231组中,各小组抑癌基因LKB1的表达随药物浓度增加渐增强。Ptch表达在两组均无明显变化。结论 ：抑癌基因LKB1可协同Sonic Hedgehog信号通路抑制剂环靶明促进乳腺癌细胞凋亡,调控细胞周期,推测其机制可能是通过如上信号通路相关基因表达变化而实现。信号通路抑制剂环靶明可提高乳腺癌细胞抑癌基因LKB1的表达,推测此也是信号通路抑制剂降低癌细胞活性机制之一。     

siRNA沉默LKB1基因激活Hedgehog信号通路及对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型生长的实验研究

目的探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抑癌基因LKB1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中Hedgehog信号通路相关因子的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法构建LKB1基因siRNA质粒LKB1-siRNA;建立LKB1表达抑制的MDA-MB-435细胞模型;裸鼠乳晕皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型;成瘤后,观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中LKB1和Hedgehog信号通路中信号肽Shh、Sufu、膜受体Ptch、Smo、转录因子Gli1、Hip蛋白表达的变化。结果 LKB1-siRNA质粒组裸鼠的肿瘤体积明显增长(P<0.05);肿瘤内LKB1基因表达水平明显下降,而Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Ptch、Smo的表达升高,Hedgehog信号通路抑制因子Sufu、Hip表达下降。结论 LKB1基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的LKB1基因的表达,上调Hedgehog信号通路相关因子的表达,促进肿瘤生长。LKB1基因和Hedgehog信号通路在乳腺癌细胞中呈现负相关表达。     

乳腺癌组织中Hedgehog相关蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Hedgehog相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 从334例乳腺癌 组织中制备组织块。免疫组织化学法检测六种Hedgehog信号蛋白（Shh、ptch、Smo、Gli-1、 Gli-2和Gli-3）的表达。结果 Hedgehog信号蛋白表达与一些预后因素显著相关,包括淋巴结转 移与Shh（P=0.001）、Gli-3 (P<0.001)、Ptch(P=0.025)的相关性、分期与Shh和Ptch表达（P分别 为0.007和0.037）的相关性,核分级与Smo(P=0.004)和Gli-3（P=0.026）的相关性,组织学分级与 Smo(P=0.007)的相关性。Shh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3表达在表型之间差异有统计学意义 （P分别为<0.0001、<0.0001、0.004、0.039、0.031和0.003）。Gli-2表达与较差的整体生存结果相关 （P=0.012）。结论 Hedgehog通路表达激活与乳腺癌的侵袭性相关,可能是乳腺癌的一个有效的治 疗靶点。Gli-2可作为乳腺癌的一个预后指标。     

Shh和Gli-1在人乳腺癌MCF-7耐药细胞株中的表达及意义

目的 研究Shh和Gli-1在人乳腺癌耐药株中的表达情况,探讨Hedgehog信号通路与乳腺癌耐药的关系。方法 高浓度间歇诱导法建立人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX,MTT法检测紫杉醇（PTX）对MCF-7与MCF-7／PTX细胞的半数抑制浓度（IC50）。实时定量PCR（QPCR）检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1 mRNA的表达。Western blotting检测MCF-7、MCF-7／PTX细胞中Shh、Gli-1蛋白的表达。结果 PTX 对 MCF-7细胞的IC50为（0.10±0.02）mg／L,对 MCF-7／PTX细胞的 IC50为（5.30±0.01）mg／L;耐药指数为53.0。Shh mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.78±0.12和1.45±0.56（P＜0.01）;Gli-1 mRNA在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.86±0.02和3.56±0.26（P＜0.01）。Shh 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为0.58±0.06和1.03±0.22（P＜0.01）;Gli-1 蛋白在MCF-7、MCF-7／PTX细胞中的表达量分别为1.17±0.12和2.78±0.09（P＜0.01）。结论 人乳腺癌耐药细胞株MCF-7／PTX高表达Shh、Gli-1,化疗药物可能通过上调Hedgehog信号通路相关蛋白及基因介导乳腺癌耐药,针对该信号通路的靶向治疗将是克服乳腺癌耐药的一个新的选择。     

乳腺癌中Hedgehog信号通路的表达及其与LKB1基因相关性的研究

目的：探讨Hedgehog（Hh）信号通路主要蛋白在乳腺癌中的表达及其与LKB1基因的相关性,以及与临床病理特征、预后的关系。方法：采用免疫组化方法检测75例人乳腺癌标本中Hh信号通路主要蛋白（Shh、Smo、Sufu、Gli1、Ptch）及LKB1基因的表达,分析二者相关性,并分析Hh信号通路的表达与临床病理特征及预后的关系。结果：在75例乳腺癌样本中,阳性表达Shh、Gli1、Smo、Ptch、Sufu、LKB1分别为69（92.0%）、58（77.3%）、65（86.7%）、50（66.7%）、34（45.3%）、33（44.0%）,而在其相邻的正常乳腺上皮不表达或低表达。Hh信号通路与LKB1的表达呈负相关;Hh信号通路的表达情况与患者年龄、淋巴结转移情况、分子分型具有一定的相关性,且高表达的患者预后较差。结论：Hh信号通路在乳腺癌中过度激活,与临床病理特征及预后相关,并与LKB1基因的表达呈负相关,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治及预后可能有重要影响。     

Hedgehog信号通路在食管癌中的异常活化

  目的   探讨Hedgehog（Hh）信号通路与食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。   方法   采用免疫组织化学随机分析30例ESCC及癌旁组织样本的Hh信号通路中主要组分Smo和Gli2及靶蛋白CyclinD1表达。构建分泌型配体ShhN的条件培养液,利用条件培养液及Hh信号通路激动剂Purmorphamine或Hh通路抑制剂环杷明及GANT61处理CaEs-17细胞后,MTT法检测细胞生存率的变化。   结果   ESCC组织中的Smo、Gli2和CyclinD1表达普遍高于癌旁组织。含有ShhN的条件培养液能有效激活Hh信号通路下游靶基因CCND1的表达并明显促进食管癌CaEs-17细胞的生存率,提示食管癌中Hh信号通路以配体依赖的方式激活。直接作用于Smo的Hh信号通路激动剂Purmorphamine促进食管癌CaEs-17细胞的生长;而Smo特异性抑制剂环杷明有效地抑制CaEs-17细胞生存率。Gli1/Gli2的抑制剂GANT61比环杷明更为有效地抑制CaEs-17细胞生存率。   结论   Hh信号通路在ESCC中异常活化,将可能成为新的治疗食管癌的药物靶点。      

LKB1基因与Hedgehog信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制机制的探讨

目的:探讨乳腺癌细胞中LKB1基因与Hedgehog信号转导途径的关系.方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,LKB1基因转染或干扰处理后,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测Hedgehog信号通路中Shh、Sufu、Ptch、Smo、Gli 1、Hip mRNA和蛋白表达的变化.建立LKBI 基因表达抑制的细胞移植瘤模型,验证体外实验结果并进行对比分析.结果:Hedgehog 信号通路激动因子Ptch的mRNA和蛋白的表达在各组细胞中差异无统计学意义.而激动因子Shh、Gli1和Smo的mRNA和蛋白的表达在MDA-MB-231正常细胞及其空质粒细胞、siRNA无关序列细胞中差异无统计学意义;在LKB1转染细胞中降低(F=29.56,P＜0.05),在LKBI转染siRNA细胞中升高(F=32.15,P＜0.05).而抑制因子Sufu、Hip的mRNA和蛋白的表达正好相反,在LKB1转染细胞中升高,在LKB1转染siRNA细胞中降低,F=30.25,P＜0.05.移植瘤检测Shh、Sufu、Smo、Gli 1、Hip蛋白表达与体外实验相似,F=8.40,P＜0.01.而且发现LKB1转染siRNA细胞组裸鼠肿瘤平均体积显著大于对照组(F=4.68,P＜0.05),生存时间显著短于对照组,F=3.50,P＜0.01.LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达呈负相关,r=0.232,P＜0.05.结论:LKB1基因与Hedgehog信号通路相关因子表达在乳腺癌细胞中呈负相关,LKB1基因可能通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞的发生,两者之间的相互作用对乳腺癌的诊治可能有重要影响.     

人参皂苷Rg3调控WNT/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞生长的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg3通过影响WNT/β-catenin信号通路中关键蛋白β-catenin从而阻断结肠癌细胞生长机制的研究。方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞系SW480、HCT116细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度人参皂苷Rg3对SW480、HCT116细胞凋亡及磷酸化β-catenin的影响;RT-PCR和Western blot法检测HCT116细胞中β-catenin及c-myc的表达。结果人参皂苷Rg3具有抑制SW480、HCT116细胞增殖和促进凋亡的能力。一定浓度人参皂苷Rg3能够降低β-catenin蛋白的磷酸化程度,下调β-catenin mRNA的表达,下调β-cetanin和c-myc蛋白的表达。结论人参皂苷Rg3具有一定的抗肿瘤活性,可有效抑制HCT116和SW480细胞生长,且这种作用可能是通过下调β-catenin磷酸化来实现的。     

Hedgehog信号通路与肿瘤的研究新进展

Hedgehog（Hh）信号通路在果蝇中被首次发现。该信号通路能有效调控哺乳动物的胚胎发育过程,此外,在调控细胞的分化、增殖、血管形成及肿瘤形成方面起重要作用。Hh信号通路是一个Hh-Ptch-Smo-Gli的级联反应过程。该通路的配体包括:Hedgehog配体［Sonic Hh（SHh）、Indian Hh（IHh）和Desert Hh（DHh）］,Ptch受体（Ptch1、Ptch2）,Smoothened受体（Smo）,融合同源物（Sufu）的抑制因子,驱动蛋白Kif7,蛋白激酶A（PKA）和环腺苷一磷酸（cAMP）。该级联反应中的终末转录因子Gli调控的下游基因过度表达可能是导致肿瘤产生的关键因素。许多研究者已经发现,Hegehog信号通路与一系列人类实体瘤的形成关系密切。本文就近年来Hedgehog信号通路及其与肿瘤关系的研究进行综述。     

基于Hedgehog通路探究防己诺林碱对三阴性乳腺癌抗肿瘤机制的实验研究

摘 要：［目的］ 探究防己诺林碱对三阴性乳腺癌抗肿瘤机制。［方法］ MTT法检测防己诺林碱对三阴性乳腺癌细胞的抑制率,计算IC50;细胞流式实验观察防己诺林碱对三阴性乳腺癌细胞的凋亡影响;Western blot法探究防己诺林碱对Smo及Gli1蛋白表达的影响。［结果］ 防己诺林碱对三阴性乳腺癌细胞BT549的活力有影响,IC50值为8.99μmol/L。随着防己诺林碱浓度升高细胞凋亡率增加,三阴性乳腺癌细胞BT549通路Hedgehog中的Smo、Gli1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。FAN可以抑制肿瘤的生长。［结论］ 防己诺林碱可通过下调细胞凋亡相关信号通路Hedgehog来影响三阴性乳腺癌细胞凋亡,同时影响三阴性乳腺癌肿瘤的生长。