3-氯-1,2-丙二醇对人胚肾293细胞DNA损伤作用

目的 研究3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)对人胚肾293(HEK293)细胞DNA损伤作用.方法 以HEK293细胞为靶细胞,3-MCPD设5个剂量组:0,1.25,2.5,5,10 mmol/L,应用单细胞凝胶电泳检测3-MCPD诱导的HEK293细胞DNA损伤;将3-MCPD设4个剂量组:0,2.5,5,10 mmol/L,以2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)法测定HEK293细胞内活性氧(ROS)水平;将3-MCPD设4个剂量组:0,1.25,2.5,5 mmol/L,通过免疫组化法测定8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)在HEK293细胞内的表达水平.结果 与对照组比较,1.25～10 mmol/L的染毒组细胞DNA链断裂,细胞形成彗星样脱尾,尾DNA%明显上升,且呈剂量依赖关系(P<0.05).2.5～10 mmol/L的染毒组细胞内ROS水平表达升高,在10 mmol/L时明显升高(P<0.05).1.25～5 mmol/L的染毒组细胞内8-OHdG表达水平上升,在2.5和5 mmol/L时8-OHdG表达明显增强(P<0.05).结论 3-MCPD导致了HEK293细胞DNA损伤,可能是通过细胞内ROS升高及8-OHdG形成增加所造成的氧化性DNA损伤作用.     

姜黄素对线粒体DNA和核DNA 8-羟基脱氧鸟苷形成的影响

[目的]探讨姜黄素对人结肠癌HT-29细胞线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的氧化损伤作用.[方法]人结肠癌HT-29细胞暴露于不同浓度姜黄素(0、5、10、20μg/ml)2 h后,细胞免疫组化分析nDNA和mtDNA的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平;2',7'-二氢二氯荧光比色法测定细胞内活性氧(ROS)水平;硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物.[结果]随着姜黄素剂量的增高,mtDNA和nDNA的8-OHdG染色密度均增大,20μg/ml姜黄素组,胞浆的染色密度增长了15倍,核染色密度增长了6倍,表明胞浆中mtDNA的8-OHdG水平的增长明显高于nDNA,差异有统计学意义(P＜0.05);5μg/ml以上剂量姜黄素能引起细胞的ROS水平升高和脂质过氧化产物增加(P＜0.05或P＜0.01).[结论]姜黄素能引起HT-29细胞的ROS增加,并造成脂质和DNA的氧化性损伤,并且mtDNA的损伤明显大干nDNA的损伤.     

羟基酪醇对苏丹红Ⅰ号致DNA损伤抑制作用

目的 探讨羟基酩醇对苏丹红Ⅰ号(Sudan Ⅰ)所致的人肝癌细胞(HepG2)DNA氧化损伤的抑制作用以及作用机制.方法 采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA氧化损伤;以21,71-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;用硫代巴比妥酸反应物(TBARS)法检测细胞内脂质过氧化水平;以免疫组化法检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达水平.结果 100 μmol/L苏丹红Ⅰ号引起HepG2细胞的DNA链断裂程度[尾长(46.49±2.06)μm,尾距(19.99±1.44)μm]、ROS水平[荧光强度(9.03±1.05)]、细胞内TBARS产物(吸光度0.41±0.15)及8-OHdG表达水平(相对染色密度90.4±1.40)比对照组(二甲基亚砜)均明显增加(P<0.01);不同浓度的羟基酪醇(0,25,50,100 μmol/L)分别预处理HepG2细胞30 min后,再加入100 μmol/L苏丹红Ⅰ号后,羟其酪醇预处理组各项指标较单独接触苏丹红Ⅰ号组明显降低(P<0.01或P<0.05),并且呈剂量依赖关系.结论 羟基酪醇能够通过调控细胞氧化应激状态从而减轻苏丹红Ⅰ号所致的DNA氧化损伤.     

微囊藻毒素-LR致HT17细胞毒性及DNA损伤

目的 比较微囊藻毒素-LR(MCLR)对2种人肝癌细胞系HT17和HepG2的细胞毒性差异.研究MCLR对HT17细胞的氧化性DNA损伤作用.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞毒性,免疫酶染色法检测细胞内8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)水平.结果 当剂量增加到1μg/ml时,MCLR对HT17细胞产生明显的细胞毒性,细胞存活率随着处理剂量的增加而降低.HT17细胞对MCLR的敏感性高于HepG2细胞.非毒性剂量的MCLR处理HT17细胞引起8-OHdG水平升高,处理剂量与8-OHdG水平之间呈现剂量-反应关系.结论 HT17细胞对MCLR的毒性更敏感,可能与HT17细胞表达有机阴离子转运多肽(OATP)1B1有关.非毒性剂量的MCLR引起氧化性DNA损伤提示长期少量接触MCLR可能对人类健康产生潜在的远期危害.     

姜黄素对丙烯酰胺致HepG2细胞DNA损伤的保护作用

目的体外研究姜黄素对丙烯酰胺(AA)所致人肝癌HepG2细胞DNA损伤的保护作用。方法AA(0、2.5、5.0、10.0和20.0mmol/L)与HepG2细胞温育1h,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤;姜黄素(0.63、1.25和2.50μg/ml)37℃预处理HepG2细胞1h后,再与不同浓度的AA(0、10和20mmol/L)温育1h,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤,2',7'-二氢二氯荧光比色法测定细胞内活性氧水平。结果2.5、5.0、10.0和20.0mmol/LAA组的彗尾DNA含量、彗星尾长及彗星尾矩均显著高于对照组(P<0.05),姜黄素保护组的彗尾DNA含量、彗星尾长及彗星尾矩均比相同浓度AA处理组降低,2.50μg/ml姜黄素保护组的差异有显著性(P<0.05);AA(10和20mmol/L)作用于HepG2细胞1h后,细胞内ROS水平显著升高(P<0.01),2.50μg/ml姜黄素预处理组ROS水平显著低于单独AA处理组(P<0.01)。结论姜黄素对AA所致HepG2细胞DNA损伤具有保护作用。     

OGG1对PM2.5造成人肺上皮细胞DNA损伤的修复作用

目的研究碱基切除修复酶OGG1对PM2.5造成肺上皮细胞线粒体损伤的保护作用。方法采集湛江市附属医院附近的PM2.5颗粒物,培养肺上皮细胞beas-2b,并转染OGG1过表达载体,以PM2.5 100μg/ml 24 h分别染毒正常和OGG1过表达的beas-2b细胞,DCFH染色后流式测定细胞内活性氧水平,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤水平。结果OGG1过表达后能显著抑制PM2.5造成的细胞内活性氧水平的升高,并能显著抑制PM2.5造成的beas-2b细胞DNA损伤。结论 OGG1能修复PM2.5造成的DNA损伤,该作用可能与其抑制ROS作用相关。     

活性氧在硒致HepG2 DNA损伤中的作用

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)致HepG2细胞DNA损伤的作用机制。方法用0、2·5、5、10、20μmol/L的Na2SeO3、及分别加有还原性谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)的Na2SeO3(10μmol/L)处理HepG2。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;流式细胞仪测细胞内活性氧(ROS)的水平以及用彗星实验检测细胞的DNA损伤。结果5、10、20μmol/L Na2SeO3作用于HepG21h即引起ROS增加,12h后即导致细胞HepG2活性下降,24h后DNA损伤增强,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0·05);抗氧化剂GSH和NAC有效抑制了ROS升高,并增强了细胞活性,减弱了细胞DNA损伤,与未加GSH和NAC的Na2SeO3组(10μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0·05)。结论ROS的产生可能是亚硒酸钠造成HepG2DNA损伤的重要原因。     

PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用

目的：探讨大气中的PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用。方法：采用0,30,60,120和200 μg/mL 5个浓度的PM2.5对HTR8-SVneo细胞染毒24 h,以0 μg/mL浓度为对照组,其余浓度为不同剂量PM2.5染毒组,通过CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒测定细胞存活率;激光全息细胞分析及成像系统观察细胞3D形态及动态监测24 h内各组细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞生长周期;彗星试验检测细胞DNA损伤水平;活性氧簇（ROS）检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果：60,120和200 μg/mL浓度组细胞存活率及增殖能力低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;PM2.5可使HTR8-SVneo细胞的生长周期阻滞在G2/M期（P＜0.05或P＜0.01）;不同浓度PM2.5染毒组彗尾DNA百分比均高于对照组（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。各浓度染毒组细胞中ROS的产生均高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。结论：PM2.5对 HTR8-SVneo细胞有一定毒性作用,造成DNA的损伤,阻碍细胞生长周期,这种毒性作用可能与氧自由基的产生增多有关。     

武汉市饮用水中有机提取物对HepG2细胞DNA的损伤作用

目的研究武汉市生活饮用水中有机提取物对人肝肿瘤HepG2细胞DNA损伤作用。方法用XAD-2/8复合树脂(XAD-2和XAD-8树脂等体积混合)等比富集武汉市生活饮用水中有机污染物,应用慧星试验检测有机提取物的遗传毒性。结果该市不同水源、不同水文期下饮用水中有机提取物对HepG2细胞均产生不同程度的DNA损伤作用。同一水文期不同水源比较,在剂量10和30ml/ml下,汉江水源末梢水有机提取物致DNA损伤程度大于长江水源(P0.05);同一水源不同水文期时比较,在剂量10和30ml/ml下,枯水期有机提取物致DNA损伤程度大于丰水期(P0.05)。结论武汉市主要水源汉江和长江的氯化饮用水有机提取物对HepG2细胞DNA均有损伤作用,损伤作用的严重程度从大到小为汉江水长江水,枯水期丰水期。     

杭州市PM2.5对BEAS-2B细胞的生物学效应研究

目的 观察杭州市不同地区PM2.5对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）的生物学效应。方法 采集杭州市下城区和淳安县的PM2.5样品,通过超声冻干提取后将不同浓度PM2.5样品作用于BEAS-2B细胞,24 h后观察其生物学效应。用CCK-8法检测细胞活力,根据实验结果,将细胞分成空白对照组、25μg/ml浓度组和100μg/ml浓度组。采用γH2AX免疫荧光法和免疫印迹法分别检测γH2AX焦点损伤及γH2AX蛋白表达情况,免疫荧光实验采用平均焦点数和焦点阳性细胞率作为DNA损伤的评价指标;用DCFH-DA探针法观察细胞内ROS生成。结果 CCK-8实验结果显示,下城区和淳安县的PM2.5样品在25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml和400μg/ml浓度时能显著降低细胞活力（P<0.05）,而2.5μg/ml～10μg/ml低浓度作用则未对细胞造成影响。用25μg/ml和100μg/ml浓度PM2.5样品处理细胞后,细胞内γH2AX平均焦点数、焦点阳性细胞率、γH2AX蛋白以及ROS表达均有显著增加（P<0.05）。结论 PM2.5能使BEAS-2...