神经干细胞移植对HIBD新生大鼠学习记忆的影响

目的：探讨脑内移植胚鼠神经干细胞 (NSCs)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后学习记忆的影响。 方法： 分离孕龄14 d的Sprague-Dawley（SD）大鼠胚胎前脑皮质，采用无血清悬浮培养的方法获得细胞克隆；7 d龄新生大鼠随机分为假手术组（n=10）、HIBD组（n=11）和移植组（n=13），后两组结扎左侧颈总动脉联合8%氧吸入制作HIBD模型，损伤后3 d利用立体定位仪分别在左侧海马区植入培养基作为对照或BrdU 标记的NSCs，观察植入4 周后大鼠学习记忆功能的恢复情况。计数海马CA1区正常神经元，间接免疫荧光法观察移植细胞在脑内的存活、迁移情况。 结果： 在放射形迷宫测试中，移植组较对照组表现出明显的改善，觅水时间缩短(61.40 s±24.83 s vs 89.32 s±31.52 s)，错误次数（2.65±0.57 vs 3.78±0.41）及重复次数明显减少(0.32±0.43 vs 0.81±0.47)(P<0.05)。BrdU间接免疫荧光显示移植后4周，在脑内可见存活的NSCs在海马内广泛分布；尼氏染色显示移植可明显减少海马CA1区的细胞丢失。 结论： 脑内移植胚鼠NSCs对HIBD新生大鼠的学习记忆恢复有良好的促进作用。     

BMSCs颈内动脉移植在VD大鼠脑内存活迁移及其对海马细胞凋亡的影响

目的观察颈内动脉移植骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)透过血脑屏障在血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠脑内存活、迁移及其对海马细胞凋亡和认知能力的影响。方法取幼年雄性清洁Wistar大鼠股骨骨髓单个核细胞(BMNCs),贴壁培养后,取3~4代BMSCs诱导分化并BrdU标记。制作VD大鼠模型,术后24 h颈内动脉移植0.5 ml 1.2×107/ml的BrdU标记细胞。术后2、4、8周检测移植细胞在VD大鼠脑内存活、迁移以及大鼠学习记忆能力,并检测大鼠海马细胞凋亡情况。结果颈内动脉移植后BMSCs广泛存活于VD大鼠脑组织内,随着时间的延长,迁移方向集中,主要聚集至海马、大脑皮质等缺血易损伤区域;术后2、4、8周模型组大鼠AAR比率低于对照组,差异非常显著(P0.01);治疗组较模型组比例明显提高(P0.01)。治疗组大鼠术后各时相点海马细胞凋亡比例显著低于模型组(P0.01)。结论 BMSCs颈内动脉移植后可透过血脑屏障向海马、大脑皮质等脑缺血易损伤区迁移聚集、存活,显著提高VD大鼠的认知能力,并对大鼠海马区神经细胞具有明显保护作用。     

BMSCs移植后通过分泌神经营养因子对大鼠脑缺血神经功能改善的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植改善大鼠脑缺血后神经功能及探讨其可能机制。方法采用线栓法构建大鼠永久性脑缺血动物模型,实验动物分缺血对照组和移植治疗组(n=24/组),缺血24h后移植治疗组经尾静脉移植体外培养的同种异体骨髓间充质干细胞(2×106cells/mLPBS)。移植后14d用Nissl染色观察移植前后缺血脑组织神经元缺损变化。于移植后1、7和14d用mNSS评分检测大鼠神经功能综合评价,于移植后1、3、7和14d用ELISA方法检测缺血中心区脑组织和缺血半暗带中的海马和皮质中VEGF的表达。移植后14d用免疫荧光观察移植后缺血侧海马新生神经元的迁移。结果BMSCs移植14d后大鼠脑缺血损伤的神经功能明显改善。Nissl染色发现BMSCs移植组缺血脑组织中尼1氏体的缺损比对照组少。BMSCs移植组缺血半暗带区的海马在1和3d[(63.324±0.625)pg/mL,(60.125±1.127)pg/mL]与对照组[(31.097±0.677)pg/mL,(35.05±0.681)pg/mL]相比VEGF表达显著增加,差异具有统计学意义(P0.05),缺血半暗带区的皮质中VEGF的表达在BMSCs移植后7和14d[(36.945±0.625)pg/mL,(32.177±1.127)pg/mL],与对照组比[(31.219±0.677)pg/mL,(25.636±0.681)pg/mL]明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,第14天,BMSCs移植组能观察到缺血侧海马新生神经元的迁移。结论BMSCs移植后可使大鼠脑缺血损伤的神经功能显著改善,其作用机制可能为移植的BMSCs通过分泌VEGF等营养因子,促进内源性神经干细胞向脑缺血损伤区迁移,参与损伤修复从而改善脑缺血神经功能。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.     

胆碱能前体细胞移植入β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内的存活和迁移

目的 观察新生小鼠海马原代培养的胆碱能神经前体细胞移植人淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)转基因小鼠脑内以后的存活和迁移状况,以探索胆碱能神经前体细胞对阿尔茨海默病的治疗前景.方法 取新生24h以内增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因小鼠,以原代细胞分离培养方法获得海马胆碱能神经前体细胞,以前体细胞特异性标记抗巢蛋白(Nestin)和胆碱能细胞特异性标记胆碱乙酰基转移酶(cholineacetyltransferase, ChAT)做细胞免疫组化鉴定细胞特性.细胞培养成功后,收集细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照小鼠脑立体定位图谱对APP转基因小鼠施行脑内注射.移植1周以后灌注取移植鼠脑组织行冰冻切片,在共聚焦显微镜下通过外源细胞的绿色自发荧光观察移植细胞的存活和迁移情况.结果 在移植位点,外源性绿色荧光细胞存活良好并以移植点为中心向外迁移,且呈继续迁移的趋势.结论 新生小鼠海马原代细胞培养以后呈现神经前体细胞的特性并且胆碱能阳性,移植入APP转基因小鼠脑内以后,这些胆碱能阳性的神经前体细胞存活良好并呈现较强迁移能力,为进一步探索该细胞对阿尔茨海默病的治疗可能性提供了依据.     

大鼠海马内移植神经干细胞的存活和迁移

为观察成鼠神经干细胞移植入切割海马伞侧海马和正常侧海马后的存活和迁移状况 ,用无血清培养和单细胞克隆技术获取成年 SD大鼠前脑室下带组织的神经干细胞 ,并用 Brd U标记、扩增。在切割 SD大鼠右侧海马伞术后 14 d,将标记有 Brd U的神经干细胞植入双侧海马齿状回中。分别于术后 1周、2周、1个月和 2个月时取脑、冰冻切片 ,进行 Nissl染色和 Brd U免疫荧光检测。结果发现 ,1周和 2周时移植细胞主要围绕在移植点周围 ;1个月和 2个月时 ,移植细胞沿着海马齿状回颗粒下层迁移排列成条带。在所有的脑组织切片中 ,切割海马伞侧海马内移植细胞的密度均明显地大于正常侧海马内的移植细胞密度 ,且切割海马伞侧海马内 Nissl深染的大胞体神经元样细胞明显地多于正常侧。提示 ,移植至海马齿状回中的神经干细胞可存活并可沿海马齿状回颗粒下层迁移 ;切割海马伞侧海马中存活和迁移的神经干细胞密度大于正常侧者 ,可能与某种物质的表达增加有关     

低剂量木黄酮降低缺血后神经元损伤并改善学习记忆功能

目的探讨染料木黄酮(GEN)对全脑缺血(GCI)大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、GEN处理组、ICI 182,780组和溶剂对照组。采用Fluoro-Jade B和神经元特异性核蛋白(NeuN)染色观察海马CA1区神经元存活情况,TUNEL技术观察海马CA1区神经元的凋亡。Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆功能。结果 GEN发挥神经保护作用的最佳剂量为1.0 mg/kg;与sham组相比,I/R组和溶剂对照组海马CA1区TUNEL阳性神经元数量显著增多(P0.01),而1.0 mg/kg GEN可显著降低缺血后TUNEL阳性神经元数量(P0.01);与I/R组相比,GEN能明显改善缺血后大鼠的空间学习和记忆能力。缺血前侧脑室给予ICI 182,780可显著降低GEN的神经保护作用(P0.01)。结论低剂量(1.0mg/kg)GEN可显著降低缺血后大鼠海马CA1区神经元损伤,改善认知功能,其分子机制可能与雌激素受体活性密切相关。     

新生大鼠神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤的治疗作用

目的:探讨新生大鼠神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性及疗效.方法:体外培养新生大鼠神经干细胞.采用改良的线栓法制作脑缺血再灌注模型,3d后用脑立体定位仪经脑室移植神经干细胞,移植时间点及再灌注1～7周对移植大鼠进行神经功能损伤程度评分(NSS).再灌注1、 2、 3、 5、 7周末麻醉处死大鼠,脑组织石蜡包埋.免疫组织化学方法观察移植后神经干细胞的存活、分布.结果:神经干细胞表达巢蛋白,在血清条件下分化为表达微管相关蛋白(MAP2)的神经元和表达胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)的星形胶质细胞.神经干细胞移植组NSS评分在各个时间点均显著低于对照组.移植的神经干细胞分布于缺血侧皮质、纹状体,再灌注后3、 5、 7周,皮质、纹状体阳性细胞数分别较1、 2周显著增多,第3、 5、 7周之间差异无统计学意义.前3周组织结构疏松,缺损严重,而第5、 7周组织结构较前3周完整致密.结论:移植的神经干细胞能在脑缺血大鼠脑内存活、迁移,并能改善缺血后大鼠的神经功能状况.     

脑室内注射重组BDNF腺病毒对大鼠海马神经发生的影响

目的 观察脑室内注射BDNF对海马神经发生的影响.方法 脑室内注射重组BDNF腺病毒4周后,Morris 水迷宫进行行为学检测,双标组化染色方法观察海马新生神经元数目的 变化.结果 与对照组相比,实验组大鼠空间学习和记忆能力明显增强(P<0.05);实验组大鼠海马DG区Brdu/DCX阳性神经元数目明显多于对照组(P<...     

胚胎嗅鞘细胞和中脑腹侧细胞移植对帕金森病SD大鼠纹状体神经元存活和分化的影响

目的观察胚胎嗅球嗅鞘细胞(OECs)和胚胎中脑腹侧细胞(VMCs)联合移植对帕金森病(PD)SD大鼠纹状体神经元存活及分化的影响。方法 12只PD模型SD大鼠随机平均分成两组:单独VMCs组(在脑立体定位仪下将VMCs植入PD大鼠模型毁损侧纹状体内)和联合移植组(在脑立体定位仪下将OECs和VMCs植入PD大鼠模型毁损侧纹状体内)。OECs来源于5～7d绿荧光鼠的嗅球嗅鞘,VMCs来源于孕13～14d绿荧光胎鼠中脑腹侧的脑组织。于移植后4、14周灌注取脑,切片后做酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,检测胚胎中脑腹侧细胞的存活及分化状况。结果移植4周后单独VMCs组及联合移植组纹状体区都可检测到TH免疫阳性神经元,数量无统计学差异(P0.05)。移植14周后联合移植组纹状体区TH免疫阳性神经元数量比单独VMCs组明显增多(P0.05)。结论胚胎中脑腹侧细胞联合嗅鞘细胞移植入帕金森病大鼠纹状体促使纹状体神经元分化为多巴胺能神经元。     

神经干细胞移植治疗老年痴呆

BACKGROUND:Neural stem cell transplantation has been used to treat a series of brain injury diseases, such as cerebral palsy, but its effect on Alzheimer’s disease is rarely reported. OBJECTIVE:To observe the effect of neural stem cell transplantation on the behavior and immune regulating system of Alzheimer’s disease rats.  METHODS:Thirty-five Sprague-Dawley rats were enrolled to make a postcerebral incision and given hippocampal injection of amanita phalloides acid to establish rat models of Alzheimer’s disease. Another 10 rats were only given hippocampal injection of normal saline after preparation of postcerebral skin incision as sham operation group. Then 32 successful rat models were randomly divided into two groups (n=16 per group): rats in experimental group were administrated hippocamal injection of 5×109/L allogeneic neural stem cell suspension; those in model group were given no injection. Five-day Morris water maze test was conducted at 4 weeks after transplantation. At 1 week after Morris water maze test, levels of interleukin-1 and interleukin-10 in the cerebral homogenate were detected, as well as pathological changes of brain tissues were observed in the three groups. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the model group, the abilities of cognition and memory were significantly higher in the sham operation group (P < 0.01), and the abilities of spatial learning and memory were significantly higher in the experimental group (P < 0.05, P < 0.01). Levels of interleukin-1 and interleukin-10 in the model group were significantly higher than those in the sham operation group (P < 0.01) but significantly lower than those in the experimental group (P < 0.01). Besides, the number of neurons in the model group was obviously less than that in the experimental and sham operation group. These results indicate that neural stem cell transplantation supplements and protects neurons against Alzheimer's disease in rats, thereby significantly improving the learning and memory ability.     

KA诱发癫痫反复发作损伤大鼠空间学习记忆及中脑多巴胺能神经元

目的探讨颞叶癫痫反复发作(Spontaneous recurrent se izure,SRS)对大鼠空间学习记忆影响及中脑内多巴胺能神经元变化。方法以红藻氨酸(kain ic ac id,KA)制备颞叶癫痫大鼠模型,以是否出现SRS为标准将KA大鼠分为伴有反复发作和不伴有反复发作组,盐水为对照组。分别进行水迷宫行为测试,评价其学习记忆能力;并用酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)免疫组化方法来观察各组大鼠中脑内多巴胺能神经元变化。结果KA处理后,按照Rac ine描述标准,KA组动物发作全部达到4~5级。KA后3周大鼠19只出现SRS,16只未见SRS;Morris水迷宫发现,在5 d的空间学习记忆测试中,反复发作KA大鼠的寻找潜伏期明显长于不伴有SRS的KA大鼠和盐水对照组(P<0.01),而不伴有SRS组与盐水对照组没有明显差别;伴有SRS的KA组大鼠总共穿过平台次数显著少于不伴有SRS的KA组大鼠和盐水对照组(P<0.01)。TH免疫组织化学结果发现与不伴有SRS的KA大鼠和盐水对照组比较,伴有SRS的KA大鼠在腹侧被盖的多巴胺能神经元大量脱失(P<0.01)。结论KA大鼠癫痫反复发作可能与空间学习记忆障碍和在腹侧被盖多巴胺能神经元大量脱失相关。     

银杏内酯对拟老年痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨银杏内酯对拟老年痴呆大鼠学习记忆能力影响的可能机制。方法:大鼠海马微量注射冈田酸(OA),银杏内酯灌胃。水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;银染观察大鼠脑内神经原纤维缠结(NFT);免疫组化观察大鼠脑内bax、bcl-2的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,NFT表达增多明显,bcl-2免疫阳性神经元减少明显,bax免疫阳性神经元增多明显;与模型组相比,银杏内酯组大鼠学习记忆能力明显提高,NFT表达减少明显,bcl-2免疫阳性神经元增多明显,bax免疫阳性神经元减少明显。结论:银杏内酯提高拟老年痴呆大鼠的学习记忆能力可能与其抑制OA对tau蛋白的磷酸化,减少神经细胞的凋亡,从而对神经元产生保护作用有关。     

慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及齿状回神经前体细胞增殖的影响

为研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习和记忆功能及齿状回(DG)神经前体细胞增殖的影响,将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组,应激组动物每天交替暴露于复合应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩。同时,采用BrdU标记分裂细胞方法,观察比较各组大鼠DG内BrdU阳性细胞数的变化和差异。结果显示:应激组动物的学习与记忆成绩均优于对照组(P<0.05);与对照组相比,应激组大鼠DG内BrdU阳性细胞数量显著增加(P<0.05)。上述结果表明:慢性复合应激导致大鼠的学习与记忆能力加强,DG内BrdU阳性细胞增多,提示神经细胞数量增加可能是应激所引起的大鼠学习记忆能力增强的原因之一。     

Prenatal exposure to lipopolysaccharide results in cognitive deficits in age-increasing offspring rats

Studies have suggested that maternal infection/inflammation maybe a major risk factor for neurodevelopmental brain damage. In the present study, we evaluated the effects of prenatal exposure to a low level of inflammatory stimulation lipopolysaccharide (LPS) repeatedly on spatial learning and memory performances in rat offspring's lifetime. Sixteen pregnant Sprague–Dawley rats were randomly divided into two groups. The rats in the LPS group were treated i.p. with LPS (0.79 mg/kg) at gestation day 8, 10 and 12; meanwhile the rats in the control group were treated with saline. After delivery, the rat offspring at 3- (young), 10- (adult) and 20-mon-old (aged) were allocated. Spatial learning and memory abilities were tested by Morris water maze. The structure of hippocampal CA1 region was observed by light microscopy. The expression of synaptophysin (SYP) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) in hippocampal CA1 region were measured by immunohistochemistry. Results showed that the rat offspring of LPS group needed longer escape latency and path-length in the Morris water maze and presented a significant neuron loss, decreased expression of SYP, increased expression of GFAP in CA1 region in histological studies. All these changes were more significant with the age increasing. These findings support the hypothesis that maternal systemic inflammation may alter the state of astrocytes in rat offspring for a long time, the alteration may affect neurons and synapse development in neural system, increase the neurons' vulnerability to environment especially as the age increasing, at last result in distinct learning and memory impairment.     

慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达

目的 探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义.方法 成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组.复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周.实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩.运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Western blotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化.结果 与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P＜0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P＜0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P＜0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P＜0.05).结论 慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一.     

单侧磨牙缺失对老年记忆减退大鼠海马结构的影响

为了探讨单侧缺牙对不同学习记忆能力老年大鼠海马结构的影响 ,本研究用 Morris水迷宫筛选出老年记忆减退鼠和老年记忆正常鼠 ,拔除单侧磨牙后 2个月 ,观察其海马结构神经元和胆碱能纤维密度的影响变化。结果显示 :(1)海马 CA1 区锥体细胞密度 :老年记忆减退鼠拔牙组较对照组 (未拔牙 )明显下降 (P<0 .0 1) ;(2 )海马 CA1 区 ACh E阳性纤维密度 :老年记忆减退鼠拔牙组和老年记忆正常鼠拔牙组均较对照组 (未拔牙 )明显下降 (P<0 .0 1)。结果提示 :单侧磨牙缺失可加速老年性学习记忆减退鼠海马结构的损害。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达的影响

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能及其相关蛋白ERK2与CaMKⅡβ表达的影响。方法:采用Pulsinelli’s4血管阻断法制备VD动物模型,设假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼莫地平组,在术后第7d、14d、28d,利用水迷宫试验对各组大鼠进行行为学检测;术后第30d,采用HE染色方法观察海马CA1区形态学变化并进行神经元计数;采用Westernblotting方法观察大鼠CA1区海马组织ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习与记忆成绩明显下降(P0.05);海马CA1区神经元排列紊乱,出现凝固性坏死,细胞脱失明显;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠学习和记忆成绩均明显好转(P0.05);海马CA1区神经元排列整齐,细胞形态正常,脱失不明显,接近假手术组;ERK2与CaMKⅡβ蛋白表达显著增多(P0.05)。结论:补阳还五汤可能通过促进VD大鼠ERK2蛋白和CaMKⅡβ蛋白的表达,从而促进突触构建和学习记忆功能的恢复。     

戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆受损及海马突触后致密物95表达减少

目的探讨戊四氮诱导癫痫对大鼠空间学习记忆功能的影响及海马突触后致密物95(PSD-95)的表达变化。方法戊四氮(PTZ)腹腔注射诱导慢性癫痫(CEP)模型,采用Morris水迷宫对两组大鼠进行行为学检测,运用免疫组织化学方法观察海马CA1、CA3区PSD-95的表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马PSD-95mRNA的表达。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马CA1、CA3区PSD-95免疫阳性产物较对照组明显减少(P<0.05),同时伴有海马PSD-95mRNA表达下降(P<0.01)。结论戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元PSD-95的表达减少有关。