Common leukemia- and lymphoma-associated genetic aberrations in healthy individuals

Leukemia- and lymphoma-associated (LLA) chromosomal rearrangements are critical in the process of tumorigenesis. These genetic alterations are also important biological markers in the diagnosis, prognosis, and treatment of hematopoietic malignant diseases. To detect the presence or absence of these genetic alterations in healthy individuals, sensitive nested RT-PCR analyses were performed on a large number of peripheral blood samples for selected markers including MLL partial tandem duplications (PTDs), BCR-ABL p190, BCR-ABL p210, MLL-AF4, AML1-ETO, PML-RARA, and CBFB-MYH11. Using nested RT-PCR, the presence of all of these selected markers was detected in healthy individuals at various prevalence rates. No correlation was observed between incidence and age except for BCR-ABL p210 fusion, the incidence of which rises with increasing age. In addition, nested RT-PCR was performed on a large cohort of umbilical cord blood samples for MLL PTD, BCR-ABL p190 and BCR-ABL p210. The results demonstrated the presence of these aberrations in cord blood from healthy neonates. To our knowledge, the presence of PML-RARA and CBFB-MYH11 in healthy individuals has not been previously described. The present study provides further evidence for the presence of LLA genetic alterations in healthy individuals and suggests that these mutations are not themselves sufficient for malignant transformation.     

多重RT-PCR联合毛细管电泳法检测BCR-ABL融合基因

目的建立多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)联合毛细管电泳法检测BCR-ABL融合基因,以期应用于慢性粒细胞白血病(CML)辅助诊断。方法采用重叠延伸法构建BCR-ABL融合基因阳性模板,设计并优化检测BCR-ABL融合基因的多重RT-PCR联合毛细管电泳体系,对检测体系进行初步的性能评估。结果多重RT-PCR技术检测BCR-ABL融合基因(e1a2、e13a2和e14a2)的最低检测限在102~103拷贝/μL;50例临床确诊CML的患者应用该法检测BCR-ABL融合基因的阳性率为86.0%,其中e13a2型(20.0%),e14a2型(66.0%);本方法与骨髓细胞培养染色体核型分析相比,阳性符合率为97.6%,阴性符合率为75.0%,总符合率为94.0%,2种方法具有较高的一致性(Kappa=0.765,P0.05)。结论成功建立检测BCR-ABL融合基因的多重RTPCR联合毛细管电泳方法。该方法操作简单快捷、特异性好、灵敏度高,适合于临床上CML的辅助诊断和分子分型。     

98例原发性血小板增多症Jak2基因突变的定量分析及其临床意义

为研究JAK2V617F在原发性血小板增多症（ET）患者中的发生率和突变类型,定量分析突变转录本水平并初步探讨其临床意义,采用ARMS（amplification—refractorymutationsequencing）PCR法检测JAK2V617F突变的发生率及其突变类型,采用毛细管电泳法定量分析JAK2V617F突变转录本水平。结果显示：98例ET患者中59例JAK2V617F为阳性,其中纯合突变18例。纯合突变及杂合突变患者的平均年龄均较野生型为高（P值均〈0．05）;18例纯合突变患者的白细胞计数高于41例杂合突变者,且二者均高于野生型（P值均〈0．05）。毛细管电泳定量分析显示,纯合突变患者JAK2V617F突变转录本水平为（89．9±6．7）％,高于杂合突变患者的（57．1±6．7）％（P〈0．05）;年龄小于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为（62．3±16．5）％,低于年龄大于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为（72．4±15．8）％（P〈0．05）。JAK2V617F阳性组中血栓的发生率高于阴性组,其中纯合突变者高于杂合突变者,发生血栓者的JAK2V617FF转录本水平高于无血栓者（P值均〈0．05）。结论：JAK2V617F阳性与阴性ET患者有着不同的临床特征,分析其突变类型及检测其转录本水平对明确疾病状态、观察疾病进展及指导治疗有重要意义。     

BCR-ABL融合蛋白多样性及其与白血病表型的关系

本文报告了BCR-ABL融合蛋白及其与白血病表型的关系。首先报告BCR-ABL融合基因的结构及其转录本,其中包括这些融合基因可分为M-bcr,m-bcr和u-bcr三种类型及其见于那些白血病;其次报告了BCR断点位置的变化,ABL的特殊断点,BCR-ABL信息RNA的拼接,BCR-ABL融合蛋白的结构与白血病表型的关系;此外,还介绍了BCR/ABL细胞有染色体的其它异常和Ph染色体的变种等;最后论述了BCR/ABL融合蛋白起源于何种细胞系,何种成熟阶段。少数文献报告此蛋白起始于多能干细胞。     

bcr—abl融合基因及其检测

bcr-abl融合基因位于染色体t(9;22)(q34;q11),由位于9号染色体上的细胞原癌基因abl部分序列从其正常位置易位至22号染色体的BCR区而形成。在绝大多数病例中,断裂点集中在5.8 kb的M-BCR区,主要形成b2a2和b3a2二种形式的转录物及蛋白质,二者差异仅为75个碱基及25个氨基酸。bcr-abl融合基因及其表达的检测对CML有重要的诊断与预后价值。用Southern印迹杂交、间期或中期染色体原位杂交等方法检测DNA,发现Ph阴性或变异型Ph病人存在bcr-abl融合基因,检测到许多新的融合类型,并确认异基因BMT后白血病的复发是源于自身MRL。用优化的RT-PCR,定量RT-PCR或RNA原位杂交检测RNA,可精确定位罕见或混合的接合型,还发现正常人中bcr-abl基因有低量表达且有随年龄增长而增加的趋势。用Western印迹或酶联免疫反应检测,发现BCR-ABL蛋白与C-ABL蛋白之比在外周血与骨髓中相似且与Ph染色体重排率有线性关系,还发现如果P190继P210之后出现,则CML的预后很差。