RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因的初步研究

目的对RNA干扰抑制神经母细胞瘤细胞（LAN-5）MYCN基因表达进行初步研究。方法体外化学合成针对MYCN基因的小干扰RNA（siRNA），经脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染神经母细胞瘤细胞，以无关siRNA和未转染的细胞为对照，采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测siRNA的抑制效果。结果脂质体转染siRNA效率可达84.83％，化学合成的siRNA可抑制神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA表达，转染72h后抑制率达58．3％。结论化学合成的siRNA可以有效抑制神经母细胞瘤MYCN基因的表达，为神经母细胞瘤基因治疗开辟了新的途径。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

MYCN基因监测在儿童恶性实体瘤中的临床研究进展

恶性实体瘤在儿童中发病率不高,却是儿童主要死亡原因.MYCN基因扩增是神经母细胞瘤的独立的不良预后因素,参与神经母细胞瘤肿瘤形成,是分层治疗的重要依据.同时MYCN基因扩增在其他儿童恶性实体瘤中亦可检测到,并与髓母细胞瘤的不良病理表现、肾母细胞瘤和肺泡型横纹肌肉瘤的不良预后有关.该文比较MYCN基因的各种检测方法,总结其与儿童实体瘤的临床关系,探讨分子特异性治疗提高儿科实体瘤治愈率的可能.     

荧光定量RT-PCR 检测神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA的表达

目的：MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ) 实时检测的逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞 MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法。方法：提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 细胞总RNA,采用SYBR GREEN I 实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平。结果：反应标准曲线有良好的相关性( R2>0.99), PCR 产物特异, 神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2。结论：只要严格控制PCR 反应条件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR 法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能。［中国当代儿科杂志,2007,9（1）：47-50］     

生物学及病理学检查在神经母细胞瘤诊断治疗中的应用

神经母细胞瘤是最常见的外周神经系统恶性肿瘤,起源于交感神经节和肾上腺髓质细胞,占儿童肿瘤的8%~10%[1]。好发于5岁以内,临床表现差异很大,从自行消退到病情迅速进展,提示其疾病的异质性。因此,合理的分类对判断预后及决定治疗强度十分重要。现就近几年来临床工作中常用的生物学检查及病理检查作一简要介绍。一、MYCN MYCN为MYC癌基因家族成员之一,于1983年首先在神经母细胞瘤细胞系中克隆成功,它位于染色体2p24,主要功能是促进细胞增殖、抑制分化和凋亡[2]。每个正常人体细胞含1个拷贝,并只在胚胎发育期表达。目前发现多种肿瘤存在M…     

MYCN基因表达抑制促TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的神经母细胞瘤(NB)为小儿常见恶性肿瘤。MYCN基因高扩增NB细胞对TRAIL诱导凋亡多有抵抗。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株为研究对象,抑制其MYCN基因的表达,探讨其对TRAIL诱导凋亡有无增强作用。方法构建MYCN siRNA,转染NB细胞株SK-N-BE(2),抑制MYCN基因表达后,Western-blot法检测SK-N-BE(2)细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bid、DR4、DR5表达的变化,ELISA法检测细胞凋亡。结果转染MYCN siRNA的SK-N-BE(2)细胞中MY-CN基因表达显著降低(P<0.05)。MYCN基因表达抑制后,SK-N-BE(2)细胞DR5、Bid表达增高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL表达降低(P<0.05),DR4表达无变化(P>0.05),TRAIL诱导细胞凋亡显著增强(P<0.05)。结论 MYCN基因表达抑制后,可调控Bcl家族中相关蛋白、DR5的表达,促进TRAIL诱导NB细胞凋亡。     

抑癌基因P16与小儿恶性肿瘤

抑癌基因P16在小儿肿瘤中普遍丢失，神经母细胞瘤未发现P16丢失，P16与神经母细胞瘤的凋亡有关，P16与小儿恶性肿瘤的发生、发展有关。P16可用于小儿恶性肿瘤的基因诊断和基因治疗。     

Eg5蛋白靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine对神经母细胞瘤增殖和分裂的影响

目的 研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-三苯甲基-L-半胱氨酸(S-Trityl-L-Cysteine,STLC)对神经母细胞瘤的诱导作用.方法 通过免疫荧光及Western-blot检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤中的表达水平,通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学的影响,采用CCK-8法、流式细胞术检测STLC对细胞增值、凋亡及周期的影响,采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,并经DAPI细胞核染色实验观察STLC对细胞核形态变化的影响.结果 免疫荧光及Western-blot结果显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤中稳定表达.细胞形态学观察结果表明,细胞经不同浓度的STLC诱导,当浓度≥5μmol/L,诱导时间为72 h时,细胞形态变圆,出现大量凋亡样小体.CCK-8细胞增殖能力检测及流式细胞术分析结果显示,STLC具有促进细胞凋亡,抑制细胞分裂与增殖的作用,将细胞周期阻滞在G2/M期,且其诱导作用呈时间剂量依赖性.FISH实验证实STLC对MYCN基因扩增无影响.结论 神经母细胞瘤组织及细胞株中均表达Eg5蛋白,STLC通过抑制Eg5,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增值,从而促进细胞凋亡.结果表明Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点.     

小儿恶性肿瘤细胞凋亡的形态和超微结构特征及凋亡指数的临床意义

目的：了解细胞凋亡的光镜和超微结构特征，调查小儿常见恶性肿瘤细胞凋亡的程度。方法：光镜观察４２例小儿恶性肿瘤的ＨＥ染色组织切片和电镜观察１１例新鲜肿瘤标本切片，计算凋亡指数和分裂指数。结果：所有肿瘤均有程度不同的细胞凋亡，其形态特征为细胞皱缩，核密度增高，核断裂成几片，可见凋亡小体，凋亡细胞散在分布，无炎症反应。凋亡指数以神经母细胞瘤最高，为９．１３±４．７２，以下依次为肾母细胞瘤、淋巴瘤和横纹肌肉瘤，而肝母细胞瘤最低，仅０．４７±０．３１。结论：细胞凋亡有独特的形态特征，凋亡程度可能与肿瘤类型有关。     

短链RNA抑制神经母细胞瘤MYCN基因表达诱发肿瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨MYCN高扩增神经母细胞瘤肿瘤细胞中MYCN基因的表达改变对肿瘤细胞凋亡、增殖的影响.方法 采用RNA干扰抑制MYCN基因表达,荧光定量PCR法及Westernblot法检验基因表达受抑制情况;ELISA法检验肿瘤细胞凋亡情况,Western-blot法检验神经元特异性烯醇酶表达变化.结果 siRNA转染12 h、24 h MYCN mRNA表达,相对灰度值分别为0.53±0.10(对照组为1)、0.28±0.09(对照组为1.12±0.31),表达显著降低(P＜0.05);Western-blot结果显示转染12 h、24 h MYCN蛋白表达,相对灰度值分别为0.76±0.13,对照组为1.25±0.21、0.44±0.07,对照组为1.39±0.29,表达显著降低(P＜0.05);MYCN基因表达抑制后肿瘤细胞凋亡增加,抑制组DNA碎片值1.90±0.12,对照组1.13±0.09,P＜0.05;神经元特异性烯醇酶表达增高,抑制组相对灰度值为1.04±0.14,对照组相对灰度值为0.47±0.10,P＜0.05.结论 抑制MYCN基因的表达可以促进神经母细胞瘤细胞凋亡及分化.     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与神经母细胞瘤

早期转移是神经母细胞瘤最为显著的生物学特征之一。降解细胞外基质是肿瘤浸润和转移过程中最为重要的一步，而基质金属蛋白酶又是降解细胞外基质的最重要的酶类，组织金属蛋白酶抑制剂是其天然抑制剂。许多研究已证实基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达异常和比例失调与神经母细胞瘤的浸润和转移密切相关。抑制基质金属蛋白酶的活性成为抗神经母细胞瘤转移治疗的一个新靶点。     

神经母细胞瘤的诊断及治疗

神经母细胞瘤是最常见的外周神经系统恶性肿瘤 ,在儿童恶性肿瘤发病率中占第 4位 ,仅次于白血病、脑瘤、淋巴瘤。据估计我国每年新发病 30 0 0例。临床表现变异很大 ,1岁以内患儿大部分可自行痊愈 ,1岁以上患儿恶性程度高 ,诊断时大部分已为晚期 ,预后差。一、神经母细胞瘤的生物学特性1.神经母细胞瘤起源于原始神经脊 ,后者产生交感神经细胞 ,包括交感神经节和肾上腺髓质细胞。因此神经母细胞瘤可发生于肾上腺及有交感神经的部位 ,包括颅内、眼眶、胸腔、腹腔、盆腔等。2 .染色体　染色体缺失为最常见改变 ,在原发肿瘤中 ,1/ 3患者存在 1p3…     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

血清循环MYCN基因扩增在神经母细胞瘤预后及复发监测中的应用进展

MYCN基因在神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞生长、凋亡、分化、浸润、转移及血管形成等方面发挥重要作用。临床中, MYCN基因扩增是NB危险度分级的重要指标之一。然而, MYCN基因检测面临检测方法操作复杂、检测成本高及不易获得瘤组织细胞等问题。研究表明, NB患儿血清循环MYCN基因扩增情况与瘤组织中一致, 血清循环MYCN基因扩增情况作为NB预后及复发监测指标具有灵敏度高、特异性好、操作简便及无创等优势。因此, 血清循环MYCN基因扩增检测有望替代瘤组织中MYCN基因扩增检测, 用于NB预后及复发监测。本文通过介绍NB患儿血清循环MYCN基因扩增情况在NB诊断、预后及复发监测中的应用研究进展, 并对其未来发展进行展望, 以期推进其临床转化应用的速度。     

抑癌基因P16与小儿恶性肿瘤

抑癌基因Ｐ１６在小儿肿瘤中普遍丢失，神经母细胞瘤未发现Ｐ１６丢失，Ｐ１６与神经母细胞的凋亡有关，Ｐ１６与小儿恶性肿瘤的发生，发展有关。Ｐ１６可用于小儿恶性肿瘤的仍断和基因治疗。     

儿童肾母细胞瘤基因突变的研究进展

肾母细胞瘤是是小儿泌尿系统最常见的恶性肿瘤.该文综述了肾母细胞瘤发生及预后相关基因方面的研究进展,其中WT1基因、CTNNB1基因及WTX基因与该肿瘤的发生相关,MYCN基因、P53基因与SIX1基因可能与预后相关.     

中危神经母细胞瘤患者临床和生存分析

目的本研究回顾性分析中危神经母细胞瘤患者的临床特点和治疗结果。方法以美国儿童肿瘤组织(Children's Ocology Group,COG)神经母细胞瘤分层标准为基础,但略有不同。中危神经母细胞瘤定义:A:年龄0～21岁无MYCN基因扩增的3期患者;B:年龄0～548 d、无MYCN基因扩增的4期患者。分析中山大学肿瘤防治中心儿童肿瘤科2004年1月至2012年12月收治的中危神经母细胞瘤患者临床资料。治疗采用手术+化疗±放疗±异维甲酸。化疗方案CAV/EP交替4～6个疗程。结果共22例神经母细胞瘤患者纳入分析。中位年龄:2(7个月~10)岁,3期18例,4期4例。最常见的起病部位为肾上腺和腹膜后。中位随访49.5个月,2例复发。复发后2例挽救化疗后存活。4例进展死亡,共18例存活。5年总生存率和无事件生存率分别是:(81.6±8.3)%和(60.4±11.2)%。结论中危神经母细胞瘤患者经手术和中等强度化疗可达到较高的总生存率和无事件生存率。中危神经母细胞瘤患者复发后积极挽救治疗仍有生存机会。     

PI3K／Akt信号通路与小儿恶性实体肿瘤研究进展

小儿恶性实体肿瘤包括神经母细胞瘤、肾母细胞瘤、肝母细胞瘤、横纹肌肉瘤等，是严重危害儿童健康的重要疾病之一。目前研究表明，细胞的存活、凋亡、分化或信号传导异常可能导致恶性肿瘤发生发展，其中以细胞信号传导异常尤为重要。已发现多条信号通路（如PI3K／Akt、MAPK通路，Ras途径等）与肿瘤关系密切，     

自噬调控在神经母细胞瘤中的作用研究进展

神经母细胞瘤是儿童和婴儿时期常见的实体肿瘤之一,早期即可发生转移,恶性度极高。本病的治疗以手术联合化疗为主,但预后不理想。因此寻找新的治疗靶点是当今的研究热点之一。近年来研究发现,细胞自噬调控异常与肿瘤的炎症反应、能量代谢、细胞程序性死亡及对肿瘤治疗的耐药性等方面有密切联系。因此,本文就细胞自噬调控与神经母细胞瘤之间的关系作一综述,旨在为神经母细胞瘤防治工作提供新的思路。     

IGF2和H19基因与儿童胚细胞恶性肿瘤的关系

目的：探讨儿童胚细胞起源的恶性肿瘤的发生与ＩＧＦ２和Ｈ１９基因胚胎印迹缺失（ＬＯＩ）的关系及肿瘤时这两个基因之间的协同关系。方法：通过ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测包括６例肾母细胞瘤、２例神经母细胞瘤和２例内胚窦瘤在内的１０例儿童胚细胞起源的恶性肿瘤中ＩＧＦ２和Ｈ１９基因的ＬＯＩ及Ｈ１９基因的ｍＲＮＡ表达。结果：①三种肿瘤中均可检测到频发的ＩＧＦ２基因的ＬＯＩ，Ｈ１９基因的ＬＯＩ相对少见；②肾母细胞瘤中发生ＩＧＦ２基因ＬＯＩ的病例全部伴有Ｈ１９基因ｍＲＮＡ的低水平表达。结论：ＩＧＦ２基因的ＬＯＩ与儿童胚细胞起源的恶性肿瘤的发生有密切关系，而这两个基因的相互协同作用可能是肾母细胞瘤发病的重要因素之一。