RNAi沉默STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的调控

目的:观察RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法:应用STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA表达,软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭性,琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,STAT3 siRNA转染可诱导结肠癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的恶性侵袭,其机制与诱导失巢凋亡有关。     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对膀胱癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨应用RNA干扰技术沉默信号转导和转录激活因子3（STAT3）基因对膀胱癌T24及5637细胞的影响。方法针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA（siRNA）的DNA模板，构建pGenesil-1-shRNASTAT3重组质粒，转染人膀胱癌T24及5637细胞。通过半定量RT-PCR、Western印迹检测STAT3基因不同水平的表达情况，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验、流式细胞仪检测转染后细胞增殖及细胞周期的变化。结果成功构建pGenesil-1-shRNA—STAT3重组质粒，并成功转染T24及5637膀胱癌细胞；半定量RT-PCR、Western印迹检测结果显示，重组质粒实验组细胞的STAT3基因表达在RNA及蛋白水平上显著低于对照组（P〈0．05）；MTT实验、流式细胞仪检测结果显示，重组质粒实验组细胞的增殖明显受到抑制并出现凋亡现象。结论pGenesil-1-shRNA—STAT3转染T24及5637膀胱癌细胞后，可有效抑制STAT3的表达，并抑制膀胱癌细胞的生长及增殖。     

RNA干扰沉默涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞HER2基因表达

目的通过RNA干扰（RNAi）沉默HER2基因在涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞中的表达。方法将目的基因靶序列小干扰RNA（siRNA）转染Mc3细胞,并设置对照组,采用RT-PCR、免疫组化检测RNA干扰后HER2基因在Mc3细胞中的表达情况。结果RT-PCR结果显示RNA干扰后,HER2基因mRNA在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达与对照组比较明显降低;免疫组化实验结果显示RNA干扰后HER2基因蛋白在涎腺黏液表皮样癌细胞中的表达降低,与mRNA表达情况相一致。结论RNA干扰成功抑制了涎腺黏液表皮样癌细胞中HER2基因的表达,为口腔涎腺黏液表皮样癌针对癌基因HER2为靶基因的基因治疗提供研究基础。     

干扰lncRNAXIST通过上调miR-429抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长并提高顺铂敏感性

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）X非活性特异转录本（XIST）对涎腺腺样囊性癌（SACC）细胞生长及顺铂（DDP）化疗敏感性的调节作用及其机制。方法 培养人SACC细胞系SACC-83、腺样囊性癌-2（ACC-2）和正常下颌下腺细胞HSG,建立DDP耐药SACC-83/DDP细胞。使用脂质体2000转染试剂分...     

秦艽对佐剂性关节炎大鼠JAK2/STAT3信号通路的调控作用

目的:研究秦艽醇提物抑制佐剂性关节炎(adjuvantinduced arthritis,AA)大鼠及阻断Janus激酶2-信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的可能机制。方法:雄性,SD大鼠,48只,随机分为6组,每组8只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型。致炎第12天后,各组给予相应药物,每日1次,连续16d,处死,对大鼠体质量进行监测,并对大鼠进行关节评分;HE染色,对固定部位踝关节进行病理学观察;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测SD大鼠血清中IL-6、IL-10和TNF-α的含量;Western blot法检测磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的相对蛋白表达。结果:与模型组相比,秦艽醇提物(2.5、5、10g/kg)组不仅可减轻大鼠关节病理损伤程度,减少血管翳生成,减轻组织增生,还可明显抑制p-JAK2、p-STAT3蛋白的相对表达。结论:秦艽醇提物对AA大鼠具有较好的抑制作用,可能通过抑制JAK2及STAT3过度激活磷酸化,即抑制p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达水平,进而阻断JAK2/STAT3信号转导通路有关。     

VEGF、STAT3在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和信号转导子与转录活化子3(STAT3)表达在大肠癌中的变化,以及与大肠癌临床病理的关系,并研究两者的相关性。方法采用免疫组化方法检测大肠癌中VEGF、STAT3的表达情况。结果大肠癌中VEGF、STAT3蛋白表达阳性率分别为66.7%(22/33)和63.6%(21/33),显著高于正常大肠组织的阳性率(P<0.01);VEGF的表达与Duke′s分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05);而STAT3的表达与肿瘤的分化程度、Duke′s分期有关及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。相关分析表明VEGF和STAT3正相关(P<0.05)。结论大肠癌组织中存在VEGF和STAT3的高表达,VEGF的表达与大肠癌病程的发展及淋巴转移关系相关,而STAT3的表达除与大肠癌病程的发展及淋巴转移相关外,还与大肠癌组织的分化程度有关。另外,大肠癌的发生过程中VEGF可能受STAT3的调控,STAT3可能会成为大肠癌的抗血管生成新的治疗靶点。     

Survivin siRNA诱导人腺样囊性癌SACC-83细胞凋亡的实验研究

目的 应用RNA干扰技术靶向阻断Survivin基因表达,探讨其对人腺样囊性癌SACC-83细胞的诱导凋亡作用.方法 实验设空白对照组,RNA干扰阴性对照组和RNA干扰组.将RNA干扰载体通过Lipofection介导转染腺样囊性癌细胞.采用倒置显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡峰;透射电镜观察细胞凋亡超微结构.结果 转染细胞48 h后RNA干扰组细胞形态学发生改变,呈典型的细胞凋亡形态.流式细胞仪检测在细胞周期G1/G0期前出现亚二倍体凋亡峰,电镜超微结构可见凋亡小体.空白对照组,RNA干扰阴性对照组无此变化.结论 Survivin siRNA干扰能诱导体外培养的人腺样囊性癌SACC-83细胞发生凋亡,以Survivin 为靶点有望成为肿瘤基因治疗的可行性.     

VEGF、STAT3在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和信号转导子与转录活化子3（STAT3）表达在大肠癌中的变化，以及与大肠癌临床病理的关系，并研究两者的相关性。方法采用免疫组化方法检测大肠癌中VEGF、STAT3的表达情况。结果大肠癌中VEGF、STAT3蛋白表达阳性率分别为66．7％（22／33）和63．6％（21／33），显著高于正常大肠组织的阳性率（P〈0．01）；VEGF的表达与Duke’s分期及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）；而STAT3的表达与肿瘤的分化程度、Duke’s分期有关及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。相关分析表明VEGF和STAT3正相关（P〈0．05）。结论大肠癌组织中存在VEGF和STAT3的高表达，VEGF的表达与大肠癌病程的发展及淋巴转移关系相关，而STAT3的表达除与大肠癌病程的发展及淋巴转移相关外，还与大肠癌组织的分化程度有关。另外，大肠癌的发生过程中VEGF可能受STAT3的调控，STAT3可能会成为大肠癌的抗血管生成新的治疗靶点。     

超声对涎腺腺样囊性癌的临床及实验研究

目的：探讨灰阶超声和彩色多普勒血流显像诊断腺样囊性癌的价值。方法：腺样囊性癌患者３例，裸鼠６只，均经手术和病理证实。用声像图及彩色多普勒超声进行检查，观察患者和裸鼠的肿瘤形态学和血流动力学改变。结果：裸鼠腺样囊性癌的形态以分叶型为主，境界则以过渡型为主，内部回声不均匀。有血流信号的只有２例，为散在型。患者肿瘤的形态均为类圆形，境界为过渡型，只有１例有散在的彩色血流信号。结论：腺样囊性癌的超声表现无特异性，彩色多普勒表现与良性肿瘤相似，其诊断需密切结合临床     

半定量RT-PCR检测腺样囊性癌细胞survivin mRNA的表达

目的探讨靶向surv iv in基因阻断后mRNA表达量的变化,以及在体外对肿瘤细胞的抑制作用。方法应用分子克隆技术构建siRNA真核表达载体Pgenesil/sur;通过脂质体转染腺样囊性癌(salivary adeno id cystic carcinom a,SACC)细胞。采用RT-PCR技术检测转染前后surv iv in mRNA表达量以及表达抑制率。结果转染后surv iv in mRNA表达水平x-±s(0.42±0.10)较转染前surv iv in mRNA表达水平(1.56±0.12)明显减低,P<0.05;在mRNA水平其表达抑制率为73.1%。转染空质粒载体Pgenesil-1 surv iv in mRNA表达水平(1.35±0.13)与空白对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论靶向surv iv in siRNA能阻断肿瘤细胞surv iv in基因mRNA表达,并有效抑制体外培养的肿瘤细胞SACC-83的增殖作用。     

靶向STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定

摘要:目的：构建靶向信号转导及转录激活因子5（STAT5）的RNAi重组质粒并进行鉴定。 方法：设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒载体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA 测序分析。脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,westernblot、RT-PCR检测STAT5基因表达。 结果：酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STAT5的序列特异性小发夹状RNA（shRNA）可有效抑制SMMC7721细胞STAT5表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05)。其中以Pgenesil-1-STAT5A1抑制效应最强。 结论：成功构建靶向STAT5的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰载体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础。     

Integrinβ1、EGFR在腺样囊性癌中表达的临床病理研究

[目的]观察β1整合素（Integrinβ1）、表皮生长因子受体（EGFR）在腺样囊性癌（ACC）中的表达及在肿瘤侵袭中的意义。[方法]收集80例ACC,根据病理学诊断分为侵袭组和非侵袭组,用免疫组化SP法分别检测Integrinβ1、EGFR在ACC组织中的表达。[结果]①Integrinβ1、EGFR在ACC组织中的阳性表达率分别为41.25%（33/80）、73.75%（59/80）;②Integrinβ1和EGFR表达在侵袭组和非侵袭组间均有差异（P〈0.05）;③Integrinβ1和EGFR表达相关性无统计学意义。[结论]Integrinβ1、EGFR表达与ACC的侵袭有关。     

Adenoid Cystic Carcinoma of the Lacrimal Gland: A Case Report with a Review of the Literature

Adenoid cystic carcinomas, the most common malignancies of the lacrimal gland, are rare overall. We describe a patient who presented with right periorbital swelling developing over 5 months and magnetic resonance imaging findings of a soft tissue mass in the lacrimal fossa with invasion of the adjacent bone. The patient underwent right lateral orbitotomy with tumor debulking. Pathologic analysis showed neoplastic cells in a predominantly cribriform pattern, and the patient was diagnosed with an adenoid cystic carcinoma of the lacrimal gland. We review the clinical, radiographic, and histopathologic features of these rare, aggressive malignancies as well as treatment options with reference to the current literature.     

血液病患者信号转导及转录激活子5和叉头状转录因子3的表达

目的观察恶性血液病患者外周血中单个核细胞磷酸化STAT5及Foxp3的表达水平及其相关性。方法采用蛋白磷酸化流式细胞术分别检测45例急性白血病患者(AL)、23例慢性白血病(CL)、29例骨髓增生异常综合征(MDS)、20例重型再生障碍性贫血(SAA)及38例对照组外周血单个核细胞磷酸化STAT5(P-STAT5)及Foxp3阳性细胞的百分率。结果PSTAT5表达AL组(2.29±0.79)%、CL组(2.45±0.88)%、MDS组(2.21±0.75)%都较对照组(0.54±0.15)%增高,差异具有统计学意义(P0.05),SAA组P-STAT5表达(0.43±0.17)%较对照组降低,差异无统计学意义(P0.05);Foxp3表达AL组(3.86±1.13)%、CL组(3.60±1.10)%、MDS组(4.01±1.19)%高于对照组(0.89±0.38)%,差异具有统计学意义(P0.05),SAA组Foxp3表达(0.57±0.21)%较对照组降低,差异具有统计学意义(P0.05)。AL、CL、MDS、SAA各组P-STAT5与Foxp3表达水平都呈正相关(P0.05)。结论 STAT5及Foxp3可能共同参与了AL、CL、MDS、SAA这几类恶性血液病的发生过程,同时测定可以提供有临床意义的实验依据。     

抑制STAT3表达增加H_2O_2诱导人胶质瘤U251细胞损伤

目的探讨RNA干涉技术抑制STAT3基因表达对过氧化氢(H2O2)复制的人胶质瘤U251细胞损伤模型的影响。方法转染pSilencer1.0-U6-SiRNA-STAT3重组质粒到U251细胞;Western blot方法观察转染重组质粒对STAT3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞生存率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX表达。结果转染pSilencer1.0-U6-SiRNA-STAT3重组质粒能有效抑制U251细胞STAT3蛋白表达(抑制率50%);抑制STAT3表达能促进H2O2诱导U251细胞生存率下降,增加细胞凋亡率(P0.05)。STAT3抑制能促进H2O2作用下U251细胞BCL-2表达降低,BAX表达增加(P0.05)。结论pSilencer1.0-U6-SiRNA-STAT3可有效抑制U251细胞STAT3的表达,并促进H2O2诱导U251细胞凋亡。