荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ－ＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病（ＨＢＶ）的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了ＨＢＶＦＱ－ＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本,结果 经ＦＱ－ＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原,ｅ抗原,ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢ     

FQ-PCR价测HBV的应用

近年来乙肝病毒的分子生物学研究进展很快 ,ＦＱ -ＰＣＲ (荧光探针定量基因检测技术 )利用了ＰＣＲ技术的核酸高效扩增 ,探针技术的高特异性和光谱技术的敏感性及计量性的优点 ,同时又克服了ＰＣＲ技术易污染和不能定量之不足。因此我们用ＦＱ -ＰＣＲ检测乙肝患者中ＨＢＶ -ＤＮＡ含量 ,有利于了解病情和合理用药及疗效观察。1.材料与方法1.1标本来源　 86例乙肝患者 ,均为近年来我院门诊及住院病人。血清于 - 2 0℃保存。1.2材料来源　ＨＢＶ五项指标检测试剂由中山生物制品公司提供。ＦＱ -ＰＣＲ试剂由中山医科大学达安基因诊断中心提…     

PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用

血浆ＨＢＶ核酸模板提取质量对ＨＢＶＤＮＡ定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了ＰＥＧ沉淀提取制备ＨＢＶ核酸模板方法 ,并用于ＨＢＶＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测。1　材料与方法1.1　标本　本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用ＰＣＲ专用管收集血液 ,ＥＤＴＡ抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2　试剂　沉淀剂由ＰＥＧ 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由ＮＰ40配制而成 ;ＨＢＶＤＮＡ荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司。1.3　ＰＥＧ沉淀提取法　取血浆样本 10 0 μｌ加入等量沉淀剂 ,混…     

斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义

ＨＢＶ ＤＮＡ是一种十分重要的ＨＢＶ感染标志 ,是直接反映ＨＢＶ的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定ＨＢＶ感染的诊断有重要价值[1] 。目前ＨＢＶ感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量ＰＣＲ逐渐应用于临床检测ＨＢＶ ＤＮＡ。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量ＰＣＲ两种方法同时进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1　材料和方法1.1　研究对象　 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学…     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

杂交酶联定量PCR检测HBV DNA的初步应用

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ定量检测已越来越受到临床的重视[1～3] 。我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)杂交定量检测试剂测定乙型肝炎 (乙肝 )患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量 ,并且对检测试剂作初步评价和临床应用观察 ,现报道如下。材料和方法一、检测对象乙型肝炎患者 5 3 8例 ,男 40 2例 ,女 1 3 6例 ,平均年龄 3 5岁。二、ＨＢＶＰＣＲ杂交酶联定量检测1 .试剂　由上海浩源生物科技有限公司提供 ,按说明书操作。2 .仪器　ＢＩＯ -ＲＡＤ5 5 0型酶标仪 ,ＭＪ - 1 0 0热循环仪。结果一、扩增效率由于ＰＣＲ反应的定量结果与ＰＣＲ平均效率直接有…     

慢性乙肝患者血清标志物临床意义的研究

本文应用新的定量ＰＣＲ方法研究慢性乙肝血清标志物的临床意义。1　材料和方法1.1　临床资料　研究对象为 1999～ 2 0 0 0年住院 12 1例患慢性乙型肝炎的患者。男 97例 ,女 2 4例 ,年龄 5～ 67岁。临床诊断采用 1995年全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。1.2　特异性检测　全部患者均采集清晨静脉血 ,血清标志物用ＥＬＩＳＡ法。血清ＨＢＶ ＤＮＡ应用荧光定量ＰＣＲ法 ,结果如小于1× 10 5拷贝 /ｍｌ报阴性 ,如大于该值报实测值 ,并转化成对数值。2　结　果12 1例慢性乙肝血清ＨＢＶ标志物与ＨＢＶ ＤＮＡ情况见表1。抗 -ＨＢｓ(+…     

乙肝患者血清HBV DNA检出率分析

探讨ＰＣＲ技术测定ＨＢＶ ＤＮＡ的临床应用价值。用ＰＣＲ法与ＥＬＩＳＡ法测定乙国清标志物。结果表明ＨＢＶ ＤＮＡ在乙肝患者血清平均检出率５４．８％。人为ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。     

肝癌患者HBV血清标志物与HBV DNA检测的临床意义

为了解肝癌患者乙型肝炎病毒血清标志物 (ＨＢＶＭ )与ＨＢＶＤＮＡ情况 ,我们对 6 8例肝癌患者进行了观察 ,现将结果报告如下。一、对象和方法1.对象　经确诊的肝癌患者 6 8例 ,男 6 1例 ,女 7例 ,年龄 2 8～ 83岁。2 .方法　所有病例均抽取静脉血 ,分离血清用酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)进行ＨＢＶＭ (ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｅ、抗 ＨＢｃ)检测 ,试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供 ;ＨＢＶＤＮＡ用聚合酶链反应 (ＰＣＲ) ＥＬＩＳＡ法检测 ,试剂由上海浩源生物制品有限公司提供 ;所有操作步骤按说明书…     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

标本处理对聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸的影响

目的 研究对血清标本进行乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定前的最佳标本处理方法。方法 使用煮沸裂解方法和核酸纯化方法同时处理２份ＨＢＶ ＤＮＡ含量不同血清标本及３份溶血和正常血清标本,比较荧光定量ＰＣＲ测定的重复性及测定值的差异。结果 煮沸裂解法处理２份标本所得结果的重复性（变异系数ＣＶ分别为０．２１６５和０．３２６２）明显差于对样本进行核酯纯化后的测定重复性（ＣＶ分别为０．０６９９和０．１０９２）;并且,当标本中血红蛋白含量大于５．８９ｕｇ／Ｌ时（肉眼未见有明显溶血）,采用煮沸裂解法处理标本所得ＨＢＶ ＤＮＡ量较核酸纯化方法所得值低约２个数量级（Ｐ〈０．０５）。结论 在ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ检测时,煮沸裂解法不适合用来处理血清标本,而应使用核酸纯化方法。     

乙肝患者血清中HBV DNA含量的测定及其意义

乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异抗原抗体和ＨＢＶＤＮＡ的检测。我们用定量ＰＣＲ方法检测乙肝患者血清ＨＢＶＤＮＡ ,以探讨不同免疫标志的乙肝患者血清中ＨＢＶＤＮＡ含量及其意义。1　材料和方法1 1　研究对象　对象为本院 1999年 3月～ 1999年 5月住院及门诊的乙型肝炎患者 43例 ,全部乙肝病例均为临床确诊的乙型肝炎患者。年龄在 19岁～ 5 0岁 ,其中男 2 5例 ,女18例。另选择 7例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性 ,肝功能正常作为对照。血清采用经高压灭菌的 1 5ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管分装 ,于 - 2 0℃冻存待检。1 2　…     

临床血清标本的HBV－DNAPCR检测指标与若干HBV免疫学指标关系

临床血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检测指标与若干ＨＢＶ免疫学指标关系程宗浩上海青浦县卫校我们应用上海复华公司的ＰＣＲ检测试剂和上海科华公司ＥＬＩＳＡ检测试剂分别检测了３４７份血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ指标。其中ＨＢｓＡｇ阴性３０...     

PCR酶免定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义

我们采用ＰＣＲ酶免定量检测法（ＰＣＲ通用捕集法）检测乙肝病毒携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量，以探讨乙肝患者病毒复制与乙肝病毒标志物之间的关系及其临床意义。１ 材料和方法１．１ 研究对象 为２００１年１月～５月来我院门诊就诊的患者，共３６６人，全部病例均为ＨＢＶ血清学标志物阳性患者，年龄在１０～６７岁，其中男性２２３例，女性１４３例。另选择３０例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性、肝功能正常者作为对照组。血清采用经高压灭菌的 ０．５ｍｌ Ｅｐ－ｐｅｎｄｏｒｆ管分装于－２０℃保存，３天内检测完毕。１．２ 试剂…     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

AmplisensorPCR定量测定血清中乙型肝炎病毒核酸

我们用信号引物能量转移法 (ＡｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒＰＣＲ)定量检测了乙型肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并与ＨＢＶ血清标志物(ＨＢＶＭ)关系作一比较。1　材料和方法1 1　研究对象　 97例乙型肝炎患者均是 1998年 11月～1999年 3月我院住院患者 ,男 80例、女 17例。年龄 18～71岁。按 1995年 (北京 )全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准 ,急性肝炎 (ＡＨ) 14例 ,慢性肝炎 (ＣＨ) 75例 (其中慢性轻度 41例、中度 2 4例、重度 10例 ) ,肝炎后肝硬化 8例。另选 10例体检健康人作对照。分别留取标本同步检测血清标志物及采用Ａｍｐｌｉ…