肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位单克隆抗体的制备和生物学特性鉴定

目的制备出高效价的抗志贺毒素ⅡA1亚单位(STX2A1)的单克隆抗体。方法以重组GST-STX2A1融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用细胞杂交瘤技术制备,以天然STX2毒素为筛选抗原,采用间接ELISA法筛选产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株;以体内诱生法产生腹水,并采用Protein A-Sepharose柱对其纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚类,采用间接ELISA相加实验鉴定抗原识别表位。结果获得3株产生针对STX2A1的单克隆抗体细胞株STX2-1A3、STX2-1E10、STX2-3A7,Ig亚类分别为IgG1λ型、IgG1κ型和IgG3κ,亲和力常数分别为5.76×109、1.21×109和3.97×108。结论成功制备3株稳定分泌抗STX2A1的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体特异性好,亲和力高,能与天然STX2A亚单位反应。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westen blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2a基因约950bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%.结论EHEC O157:H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157:H7菌的感染机制奠定基础.     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11 c( )-stx2 a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和W esten b lot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2 a基因约950bp;原核表达质粒pET-11 c( )-stx2 a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%。结论EHEC O157∶H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157∶H7菌的感染机制奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素2B亚基的表达

目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质.方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx28的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E. coli BL-21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot (WB)分析重组蛋白生物活性.结果:PCR扩增stx2b基因约220bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应.结论:成功克隆EHEC O157:H7 stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157:H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础.     

抗衣原体单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的：制备抗衣原体的单克隆抗体,为研制表原体快速检测卡作准备。方法：用沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体分别免疫BALB／c小鼠．按常规淋巴细胞杂交瘤技术制各单克隆抗体。结果：获得抗沙眼衣原体及抗鹦鹉热衣原体单克隆抗体各3株,经检测6株单抗均具有较高的属特异性,不与其他微生物发生交叉反应。结论：本研究为进一步研制衣原体快速检测卡奠定了基础。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素2B亚基的表达

目的:克隆肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 AH07株志贺样毒素2B(Stx2B)亚单位基因,应用原核表达系统制备重组蛋白质。方法:根据靶基因序列设计特异性寡核苷酸引物,采用PCR法克隆EHEC AH07株Stx2B的编码基因stx2b,靶基因经TA克隆后连接到表达载体pET-28a构建重组质粒,阳性重组子转化表达宿主菌E.coliBL-21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,应用SDS-PAGE和Western-blot(WB)分析重组蛋白生物活性。结果:PCR扩增stx2b基因约220 bp,成功构建重组质粒pET28a-stx2b,并在原核细胞中得到高效表达,目的蛋白质的相对分子质量约为7500,约占蛋白质总量的40%;WB显示目的蛋白质可与特异性抗体发生特异性反应。结论:成功克隆EHEC O157∶H7stx2b基因,在原核系统获得目的蛋白质的高效表达,为O157∶H7感染机制及疾病诊断和疫苗研究奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的研究进展

大肠杆菌是 1885年由德国科学家埃希发现的 ,是存在于人和动物肠道的一种很常见的杆状细菌。直到1945年Ｂｒａｙ从小儿腹泻粪标本中分离到大肠埃希菌 ,并发现这些细菌能使家兔发病时 ,人们才知道原来有一部分大肠杆菌具有致病性的。 1982年在美国俄勒冈州和密执安州首次报道了两起由肠出血性大肠杆菌 (Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍ ｏｒｒｈａｇｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ .Ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)Ｏ157:Ｈ7引起的出血性肠炎爆发流行 ,此后在美国、加拿大、日本等发达国家不断发生流行或爆发流行。 1996年 5～ 8月 ,在日本东京、大阪、京都等地相继发生…     

肠出血性大肠杆菌O157:H7感染的研究进展

ＷＨＯ不久前指出在过去的 2 0年里 ,世界上出现了大约 30种新的传染病 ,1982年美国首次报告的Ｏ15 7:Ｈ7大肠埃希氏菌 (ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ15 7:Ｈ7)引起的出血性肠炎即是其中之一。肠出血性大肠埃希氏菌 (Ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒ ｈａｇｉｃＥ .Ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)是大肠埃希氏菌众多血清型中非常重要的一组 ,其中目前公认的能引起人血性腹泻的血清型有Ｏ15 7:Ｈ7、Ｏ2 6 :Ｈ11、Ｏ111:Ｈ8等 ,而Ｏ15 7:Ｈ7则是其主要的血清型[1] 。近年来 ,ＥＨＥＣ感染已成为世界性卫生问题。由Ｏ15 7:Ｈ7引起的食物中毒的暴发流行在发…     

肠出血性大肠杆菌O157:H7流行病学调查

目的 了解芜湖县动物宿主携带肠出血性大肠杆菌 O157:H7的情况,为防治工作提供依据.方法 选择芜湖县境内家畜粪便、水样以及各类养殖场饲料等标本821份,以免疫磁珠法和血清学方法检测EHEC O157:H7.结果 821份标本检出1株EHEC O157:H7,检出率为0.12%.结论 芜湖县部分动物携带EHEC O157:H7.     

氯胺酮单克隆抗体的制备及生物学特性的研究

目的制备抗氯胺酮(ketamine)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为氯胺酮的胶体金免疫试纸条研制奠定基础。方法氯胺酮-BSA免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗氯胺酮的mAb。采用间接ELISA、竞争抑制ELISA和Western blot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(FB12b和CH10),其Ig亚类分别为IgG2a和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶106;mAb FB12b和CH10的相对亲和力均在105以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功制备抗氯胺酮的2株mAb,为建立快速特异检测氯胺酮滥用的现场检测方法提供了有力的工具。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7感染性腹泻

肠出血性大肠杆菌 (ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃＥ .Ｃｏｌｉ,ＥＨＥＣ)因其引起出血性肠炎 (ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｃｏｌｉｔｉｓ,ＨＣ)而得名 ,Ｏ1 5 7∶Ｈ7是最主要的血清型之一 ,其它血清型还包括Ｏ2 6∶Ｈ1 1、Ｏ1 1 1∶Ｈ8等十余种。Ｏ1 5 7∶Ｈ7是目前与ＨＣ及溶血性尿毒综合征 (ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｒｅｍｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＨＵＳ)有关的主要病原菌。该菌主要通过食物传播[1] 。 1 982年首次在美国爆发ＨＣ中分离出病原菌以来 ,在发达国家已发生多次流行 ,主要分布在北欧、日本、加拿大、美国等地 ,年发生人数为 8/1…     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染性腹泻

肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.Coli,EHEC)因其引起出血性肠炎(hemorrhagic colitis,HC)而得名,O157∶H7是最主要的血清型之一,其它血清型还包括O26∶H11、O111∶H8等十余种.O157∶H7是目前与HC及溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome,HUS)有关的主要病原菌.该菌主要通过食物传播[1].1982年首次在美国爆发HC中分离出病原菌以来,在发达国家已发生多次流行,主要分布在北欧、日本、加拿大、美国等地,年发生人数为8/10万;我国自1986年首次发现0157∶H7感染患者.由于其病死率高,对人类健康构成的威胁大,所以受到各国卫生部门的重视.本文就O157∶H7的流行病学、临床特征、诊断及治疗情况作一综述.     

肠出血性大肠杆菌O157:H7流行特征和控制对策研究

肠出血性大肠杆菌 O157:H7(以下简称 O157:H7)是一种新发现的病原菌。1982年首次在美国引起出血性肠炎暴发,其后世界上许多发达国家和一部分发展中国家发生了O157:H7感染的疫情.特别是1996年在日本发生的 O157:H7暴发,9000多名儿童感染,引起全世界的广泛关注。O157:H7感染已成为世界性的公共卫生问题。1986年我国首次在江苏省徐州地区从腹泻病患者的粪便标本中分离到 O157:H7,到1998年之前我国已经在14个省市分离到该菌,并在8个省市发现了由该病原体引起的腹泻病人,但未出现过暴发。1999年在江苏淮北部分地区及邻近的安徽部分地区突然     

EMA-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的 将叠氮溴化乙锭 （ethidium monoazide bromide,EMA）与PCR技术相结合,建立一种有效、快速检测活肠出血性大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 以rfbE为PCR检测靶基因,O157∶H7培养物经EMA处理后制备模板进行PCR检测,并对EMA使用浓度、作用时间等进行优化。结果 不抑制O157∶H7活菌PCR扩增的最大EMA浓度为10 μg/mL;抑制2×107 CFU/mL死菌PCR反应的最小EMA浓度为0.5 μg/mL;该法对O157∶H7检测的灵敏度为2×104 CFU/mL,结果显示能检出混合体系中含有的1%的活菌。结论 EMA-PCR技术能有效检测活的O157∶H7,在突发公共卫生事件的快速检测中具有良好的应用前景。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7流行病学调查

目的 了解芜湖县动物宿主携带肠出血性大肠杆菌P157：H7的情况，为防治工作提供依据。方法选择芜湖县境内家畜粪便、水样以及各类养殖场饲料等标本821份，以免疫磁珠法和血清学方法检测EHEC0157：H7。结果821份标本检出1株EHEC O157：H7，检出率为0．12％。结论芜湖县部分动物携带EHEC O157：H7。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备和鉴定

以自由合成的黄曲霉毒素Ｂ１－人血清白蛋白（ＡＦＴＢ１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ１单克隆抗体（ＡＦＴＢ１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为１Ｂ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱产生含特异性抗体的腹水。