难治性肺结核患者PBMCs结核分枝杆菌特异性Th1细胞因子反应低下

目的研究难治性肺结核患者外周血单个核细胞（PBMCs）经结核分枝杆菌特异性抗原肽（ESAT-6,CFP．10）刺激后代表性Thl细胞因子IFN一叫、IL-2和TNF．d的表达特点及意义。方法纳入67例初治肺结核患者、28例难治性肺结核患者和25位结核分枝杆菌潜伏感染者,分离外周血单个核细胞（PBMCs）,用ESAT-6,CFP-10肽库刺激PBMCs,采用FlowCytomix流式技术检测细胞培养液上清中细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α的浓度。结果PBMCs经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后,IFN-γ、IL-2和TNF-α均因刺激而升高,初治组的三个因子的水平均显著高于难治组和潜伏感染组（与难治组比较,Mann-WhitneyU值=119．0,282．5、339．5,P均〈0．01;与潜伏感染组比较,Mann-WhitneyU值=387．0,477．0、374．5,P=0．0002,0．0033、0．0001）,难治组IFN-γ和IL-2的水平显著低于潜伏感染组（Mann-WhitneyU值=105．5、162．5,P〈0．01）,TNF-α的水平在难治组和潜伏感染组间的差异无统计学意义（Mann-WhitneyU值=265．0,P=0．2695）。结论难治性肺结核患者结核分枝杆菌特异性Thl细胞因子反应低下,针对结核病的免疫治疗可能对难治性肺结核发挥更大的作用。     

难治性肺结核患者PBMCs结核分枝杆菌特异性Th1细胞因子反应低下

目的 研究难治性肺结核患者外周血单个核细胞(PBMCs)经结核分枝杆菌特异性抗原肽(ESAT-6,CFP-10)刺激后代表性Th1细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α的表达特点及意义.方法 纳入67例初治肺结核患者、28例难治性肺结核患者和25位结核分枝杆菌潜伏感染者,分离外周血单个核细胞(PBMCs),用ESAT-6,CFP-10肽库刺激PBMCs,采用FlowCytomix流式技术检测细胞培养液上清中细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-oα的浓度.结果 PBMCs经结核分枝杆菌特异性抗原肽刺激后,IFN-γ、IL-2和TNF-α均因刺激而升高,初治组的三个因子的水平均显著高于难治组和潜伏感染组(与难治组比较,Mann-Whitney U值=119.0,282.5、339.5,P均＜0.01;与潜伏感染组比较,Mann-Whitney U值=387.0,477.0、374.5,P=0.0002,0.0033、0.0001),难治组IFN-γ和IL-2的水平显著低于潜伏感染组(Mann-Whitney U值=105.5、162.5,P＜0.01),TNF-α的水平在难治组和潜伏感染组间的差异无统计学意义(Mann-Whitney U值=265.0,P=0.2695).结论 难治性肺结核患者结核分枝杆菌特异性Th1细胞因子反应低下,针对结核病的免疫治疗可能对难治性肺结核发挥更大的作用.     

T细胞斑点试验对活动性结核与非结核分枝杆菌感染的鉴别诊断价值

目的结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)感染的鉴别较困难,本研究拟评估T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在活动性MTB与NTM感染的鉴别诊断价值。方法选取医院2013年1月-2017年2月各类标本分枝杆菌培养阳性并确诊为活动性感染患者176例,查找患者同期T细胞斑点试验结果,分别计算其对MTB与NTM感染的诊断灵敏度与特异度。结果活动性结核分枝杆菌感染114例,84例接受T-SPOT.TB试验,81例阳性,阳性率96.4%;非结核分枝杆菌感染62例,46例接受T-SPOT.TB试验,9例阳性,阳性率19.6%;T-SPOT.TB鉴别诊断灵敏度与特异度分别为96.4%、80.4%;肺部感染病例中,71例肺结核患者接受T-SPOT.TB试验,70例阳性,阳性率98.6%;40例非结核分枝杆菌肺病患者中,T-SPOT.TB阳性6例,阳性率15.0%,肺部感染患者中T-SPOT.TB灵敏度与特异度分别为98.6%、85.0%。结论 T细胞斑点试验对于MTB与NTM感染的灵敏度、特异度高,具有优良的临床鉴别诊断价值。     

天然细胞因子在结核分枝杆菌感染中的作用

天然免疫系统细胞分泌的细胞因子可很大程度地影响结核分枝杆菌感染情况。了解细胞因子对病原体,宿主相互作用这一重要特性可以为毒力机制研究提供新的视角,并且可为结核病和其他分枝杆菌感染疾病提供新的免疫干预方法。此文对当前主要的天然细胞因子如IL、IFN、TNF等在控制结核分枝杆菌感染、促进和维护适应性T细胞反应,调节宿主防御或免疫病理学方面发挥的信息传导作用进行综述。     

T细胞耗竭在结核分枝杆菌感染中的作用

机体感染结核分枝杆菌(MTB)后,由T细胞介导的细胞免疫在控制MTB感染中起关键作用。然而,在慢性MTB或病毒感染或肿瘤疾病中,T细胞持续大量接触抗原后,会出现T细胞耗竭的状态。T细胞耗竭表现为:T细胞增殖能力及细胞因子分泌水平呈渐进性下降,一些抑制性受体水平逐渐升高[如程序性死亡受体-1(PD-1)]。近期的文献研究表明,T细胞耗竭与机体对MTB感染的无效控制存在关联,在MTB的持续或潜伏感染的发展中可能起重要作用。因此,进一步探索T细胞耗竭在MTB持续感染中的作用及其机制,可能有助于找到潜在的治疗靶点。     

结核分枝杆菌抗原Rv0585c人T细胞抗原表位鉴定及其免疫原性评价

目的 研究结核分枝杆菌抗原Rv0585c的抗原表位及其免疫原性,为结核病特异免疫诊断技术和疫苗的研发提供基础。方法 利用生物信息学TE-predict和IEDB人T细胞抗原表位预测软件进行结核分枝杆菌抗原Rv0585c的人T细胞抗原表位预测,根据预测结果,合成表位多肽,用ELISpot试验检测预测表位在临床结核病患者中的免疫反应性。分别采用高、低剂量（100 μg/只和50 μg/只）的Rv0585c抗原表位多肽、同时以高、低剂量（50 μg/只和20 μg/只）的Ag85B蛋白抗原为对照,对随机分组的BALB/c小鼠进行免疫。利用ELISA方法检测IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的水平。结果 经生物信息学技术预测到Rv0585c 66个人T细胞抗原表位,选取合成了表位分布集中的抗原表位多肽9条。人群ELISpot试验筛选出3条阳性人T细胞表位多肽：P10110、P10112、P10117,用于肺结核检测的灵敏度分别为14.00%、12.00%和6.00%,特异度分别为100.00%、100.00%和97.96%;联合用于肺结核检测的灵敏度和特异度分别为22.00%和97.96%。动物免疫试验结果显示,P10110多肽高、低剂量刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10,P10112多肽高、低剂量刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-2和IL-10,均高于阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.001）。结论 Rv0585c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性,能刺激机体产生较强烈的细胞免疫应答,具有潜在的结核病细胞免疫诊断和新型结核疫苗的应用价值。     

T细胞斑点试验对活动性结核与非结核分枝杆菌感染的鉴别诊断价值北大核心CSCD

目的结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)感染的鉴别较困难,本研究拟评估T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在活动性MTB与NTM感染的鉴别诊断价值。方法选取医院2013年1月-2017年2月各类标本分枝杆菌培养阳性并确诊为活动性感染患者176例,查找患者同期T细胞斑点试验结果,分别计算其对MTB与NTM感染的诊断灵敏度与特异度。结果活动性结核分枝杆菌感染114例,84例接受T-SPOT.TB试验,81例阳性,阳性率96.4%;非结核分枝杆菌感染62例,46例接受T-SPOT.TB试验,9例阳性,阳性率19.6%;T-SPOT.TB鉴别诊断灵敏度与特异度分别为96.4%、80.4%;肺部感染病例中,71例肺结核患者接受T-SPOT.TB试验,70例阳性,阳性率98.6%;40例非结核分枝杆菌肺病患者中,T-SPOT.TB阳性6例,阳性率15.0%,肺部感染患者中T-SPOT.TB灵敏度与特异度分别为98.6%、85.0%。结论 T细胞斑点试验对于MTB与NTM感染的灵敏度、特异度高,具有优良的临床鉴别诊断价值。     

重组结核分枝杆菌特异性分泌抗原融合蛋白的活性鉴定及初步应用

目的：融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白CFP10-ESAT-6或ESAT-6-CFP10，研究其免疫学特性，为结核病的血清学诊断提供物质基础。方法：将一个柔性的氨基酸“接头”插入原核表达载体pET32c（＋）中，构建pET32c（＋）-linker。PCR法扩增CFP10、ESAT-6基因。将CFP10克隆入改建的载体pET32e（＋）的linker前，ESAT-6克隆入linker后，构建CFP10-ESAT-6融合基因；或将ESAT-6克隆入改建的载体pET32c（＋）的linker前，CFP10克隆入linker后，构建ESAT-6-CFP10融合基因，分别转化大肠杆菌XL1-blue，抽提质粒，酶切鉴定；在大肠杆菌B121中表达，通过Western blot分析其抗原性。结果：两个目的基因分别被按顺序成功克隆入载体pET32c（＋）的linker前或后。重组质粒pET32c（＋）-CFP10-ESAT-6或pET32c（＋）-ESAT-6-CFP10靶基因的测序结果与预计序列完全一致。融合蛋白在B121菌中高效表达。Western blot分析表明，融合蛋白与活动性肺结核患者血清能发生特异性免疫反应。结论：成功地构建了多抗原基因DNA质粒；pET32e（＋）-CFP10-ESAT-6或pET32c（＋）-ESAT-6-CFP10质粒在B121菌中能高效表达rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白，该蛋白兼具CFP10和ESAT-6两种蛋白的抗原性。本研究为rCFP10-ESAT-6或rESAT-6-CFP10融合蛋白在结核病血清学诊断中应用奠定了基础。     

临床分离结核分枝杆菌耐药性分析

目的：分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法：用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核分枝杆菌的耐药情况。结果：结核分枝杆菌总耐药率79．6％，耐多药率为58．2％。其中初治耐药率60．5％，初治耐多药率34.2％，复治耐药率91.7％，复治耐多药率80．0％。结论：耐药结核分枝杆菌感染是临床治疗结核病的一个严重问题。分析临床分离结核分枝杆菌菌株的耐药特点，对控制结核病传染及指导临床合理用药具有重要意义。     

结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测在结核病诊断中的价值

目的探讨结核病诊断中应用结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测可行性和有效性。方法回顾性分析2008年1月-2011年10月年收集的425例肺结核患者、218例肺外结核、78例除结核病以外其他肺部疾病和184例符合入选条件的健康志愿者临床资料。对全部样本进行结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测,对痰结核分支杆菌涂片及培养检查肺结核患者和肺结核肺部疾病。观察检测敏感度和特异度。结果经实验发现,结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测菌阳肺结核敏感度、菌阴性敏感度分别为70.0%和66.3%,肺外结核病75.2%,结核总敏感度66.1%;而至于特异度,除结核病以外其他肺部疾病为79.5%,健康人群为68.4%,结核总敏感度71.8%,以上敏感度和特异度显著高于此前临床预测值。讨论利用结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测诊断结核病有较为显著的敏感度和特异度,但依然存在较高的假阳性率,建议采取多种蛋白抗原联合应用以进一步提高诊断率。     

Effect of exogenous vitamin E on proliferation and cytokine production in peripheral blood mononuclear cells from patients with tuberculosis

Micronutrient deficiencies are frequently associated with tuberculosis (TB) worldwide. We tested the effect of exogenous vitamin E on proliferation and cytokine production of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from TB patients and healthy purified protein derivative (PPD)+ volunteers. Proliferation was stimulated with mycobacterial antigen (PPD) and evaluated by the incorporation of tritiated thymidine in PBMC cultured with or without 50 microm-vitamin E for 6 d. Cytokine production (IL-2 and interferon (IFN)-gamma) was determined by intracellular cytokine staining and by ELISA in the supernatant of PBMC stimulated for 24 h with phytohaemagglutinin or PPD. Our results show that culture with vitamin E increased (P < or = 0.05 ) the antigen-induced proliferation of PBMC in TB patients but not in healthy PPD+ volunteers. No significant changes in the number of cytokine-producing cells or in the production of IFN-gamma were observed with vitamin E treatment. These results indicate that vitamin E may enhance the antigen-specific in vitro response of PBMC from TB patients.     

广泛耐药性肺结核外周血T细胞亚群结构及临床特点分析

目的分析耐多药物(MDR)和广泛耐药(XDR)肺结核患者外周血T细胞亚群结构和临床特点比较。方法选取2017年10月-2018年10月在本院就诊的120例患者作为研究对象,其中MDR患者60例,XDR患者60例,采用流式细胞仪分析患者T细胞亚群结构,对比2组患者药敏结果、T细胞亚群结构、临床资料的特点。结果 XDR组患者慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、慢性乙型肝炎的合并率明显高于MDR组患者,复治率明显更高,且XDR-TB组患者并发支气管结核、结核性胸膜炎、支气管扩张、呼吸衰竭的发病率均明显高于对照组患者。XDR组患者Treg细胞水平,Treg/Th17细胞水平,均明显低于MDR组患者,差异均有统计学意义(P <0. 05),而Th17细胞水平,明显高于MDR组患者。XDR-TB组患者对链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、乙硫异烟胺、卡那霉素、卷曲霉素耐药率明显高于对照组。结论广泛耐药肺结核外周血T细胞结构紊乱,值得临床重点关注。     

肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的研究肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的水平及变化特点。方法采用流式细胞技术,对41例肺癌患者术前检测外周血T淋巴细胞亚群水平,并与50例健康献血者作对照研究。结果与对照组比较,肺癌患者CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞减少,CD4+/CD8+降低,差异均有统计学意义(P均<0.01)。淋巴细胞亚群变化与分期相关:Ⅰ期肺癌患者T淋巴细胞亚群未见明显抑制;Ⅱ期CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞减少,但较Ⅰ期差异无统计学意义;Ⅲ期肺癌患者所有亚群均降低,分别与Ⅰ期和Ⅱ期比较,差异均有统计学意义;随着分期增加,CD4+/CD8+明显降低,各期之间差异均有统计学意义。淋巴结转移组NK细胞和CD4+/CD8+均明显低于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论肺癌患者存在免疫功能低下,免疫功能随着肿瘤的进展进一步受到削弱。     

非耐药与耐多药肺结核患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的变化

目的对非耐药(DS)及耐多药(MDR)肺结核患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的变化及意义进行探讨。方法 对某医院及某结核病防治所2011年7月-2012年7月住院的肺结核患者（其中DS肺结核患者20例,MDR肺结核患者15例）以及医院同期26例健康体检者（对照组）外周血的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群进行检测;同时检测外周血干扰素（IFN） γ、白细胞介素（IL） 10,对3组数据进行比较。结果DS肺结核组、MDR肺结核组及对照组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的表达率比较,差异无统计学意义（P＞0.05);3组患者CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞绝对值比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;各组间两两比较,差异亦有统计学意义（P＜0.05),其中对照组CD3+［（1 426±485）/μL］、CD4+［（825±306）/μL］、CD8+T淋巴细胞［（516±213）/μL］绝对值最高,MDR肺结核组最低［分别为（746±358）/μL、（461±204）/μL、（213±101）/μL］。3组间IFN γ浓度比较,差异有统计学意义（P＜0.01);各组间两两比较,差异亦有统计学意义（P＜0.05),其中对照组浓度 ［（65.04±36.31）pg/mL］最高,MDR肺结核组 ［（23.32±14.04）pg/mL］最低。3组间IL 10浓度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论人类痰菌阳性肺结核及MDR肺结核患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞绝对值及血清IFN γ有不同程度下降,其下降可能促进了结核病情进展,且可能为耐药肺结核形成的原因之一。     

谷氨酰胺抑制单个核细胞细胞因子过度表达的研究

目的:探讨谷氨酰胺(Gln)抑制人外周血单个核细胞(PBMC)细胞因子过度表达的分子机制。方法:用Ficoll密度梯度离心法提取健康志愿者新鲜外周血单个核细胞,在培养液中加入Gln、P38MAPK通路阻滞剂(SB203580)和HSP70阻断剂(Quercetin),用内毒素刺激4 h后,留取细胞和上清液,ELISA法测定内毒素刺激下单个核细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-10的表达,Western blot方法检测细胞内磷酸化P38的表达情况。结果:Gln能明显增加HSP70的表达,同时TNF-α和IL-10表达受抑;使用Quercetin和SB203580后,磷酸化P38减少的同时TNF-α和IL-10也减少了。结论:Gln下调LPS刺激下PBMC细胞因子的过度表达依赖于P38MAPK信号蛋白的抑制。     

肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的 研究肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的水平及变化特点。方法 采用流式细胞技术，对41例肺癌患者术前检测外周血T淋巴细胞亚群水平，并与50例健康献血者作对照研究。结果与对照组比较，肺癌患者CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋和NK细胞减少，CD4^＋／CD8^＋降低，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。淋巴细胞亚群变化与分期相关：Ⅰ期肺癌患者T淋巴细胞亚群未见明显抑制；Ⅱ期CD3^＋、CD4^＋、CD9^＋和NK细胞减少，但较Ⅰ期差异无统计学意义；Ⅲ期肺癌患者所有亚群均降低，分别与Ⅰ期和Ⅱ期比较，差异均有统计学意义；随着分期增加，CD4^＋／CD8^＋明显降低，各期之间差异均有统计学意义。淋巴结转移组NK细胞和CD4^＋／CD8^＋均明显低于无淋巴结转移组，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论肺癌患者存在免疫功能低下，免疫功能随着肿瘤的进展进一步受到削弱。     

Mycobacterium bovis isolates with M. tuberculosis specific characteristics

Our study is the first report of exceptional Mycobacterium bovis strains that have some characteristics of M. tuberculosis. The strains were isolated from 8 patients living in Kazakhstan. While molecular markers were typical for M. bovis, growth characteristics and biochemical test results were intermediate between M. bovis and M. tuberculosis.     

Vitamin E supplementation and oxidative status of peripheral blood mononuclear cells and lymphocyte subsets in hemodialysis patients.

Increased oxidative damage to cell membrane constituents causes profound changes in the membrane cytoarchitecture and modifications of the membrane physiological properties, e.g., the ability to respond to hormonal stimuli. In uremic patients receiving intermittent hemodialysis, a metabolic block of the phosphate pentose shunt has been described. This leads to insufficient detoxication of the hydroxyl radicals formed within the cells and therefore to increased oxidative damage to the polyunsaturated fatty acid constituents of the cell membranes. Vitamin E is known to reduce this oxidative damage and its harmful effects. We studied vitamin E (alpha-tocopherol acetate) administration in 10 chronically uremic patients receiving intermittent hemodialysis for positive effects on cell membrane-receptor response. The patients were studied before and after treatment for the extent of oxidative damage in peripheral mononuclear cells and for response to monoclonal antibodies to specific markers of T-lymphocyte subsets. After vitamin E treatment, oxidative damage decreased, and the membranes of peripheral mononuclear cells contained greater amounts of some unsaturated fatty acids. This is in agreement with a modification of the membrane phenotype markers of T-lymphocyte subsets and seems to confirm in vivo that changes in membrane structure first induced by increased oxidative damage due to the blockage of the phosphate pentose shunt can be reduced by the antioxidant action of vitamin E, which significantly influences the expression of membrane determinants.     

恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群的检测及其临床意义

目的检测分析恶性肿瘤患者外周血CD3 ,CD3 CD4 ,CD3 CD8 比例及CD3 CD4 /CD3 CD8 比值的变化,并探讨其临床意义。方法采用多参数流式细胞术(FCM)检测254例恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群水平与31例健康者比较研究。结果与正常人比较,恶性肿瘤患者外周血CD3 ,CD3 CD4 细胞比例明显减少(P<0.01),而CD3 CD8 细胞比例明显增多(P<0.01),CD3 CD4 /CD3 CD8 比值明显下降(P<0.01)。性别、各年龄阶段不影响T细胞亚群水平的表达,差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌患者CD3 CD4 细胞比例及CD3 CD4 /CD3 CD8 比值明显低于其他种类肿瘤患者(P<0.01)。结论恶性肿瘤患者细胞免疫功能紊乱,监测肿瘤患者T细胞亚群水平,对评估患者的细胞免疫功能及疾病的诊断和预后判断具有积极的临床意义。     

Proinflammatory cytokine production by mitogen-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in trauma patients fed immune-enhancing enteral diets

Widespread metabolic changes associated with injury facilitate the delivery of nutrients to the immune system. The effect of specific nutrients administered by the enteral route on the immune response in trauma victims is not well understood. The purpose of this study was to examine whether the synthesis of proinflammatory cytokines (tumor necrosis factor-alpha [TNF-alpha], interleukin-1 beta [IL-1 beta], and interleukin-6 [IL-6]) by peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are influenced by the nature of the dietary fat in critically injured trauma victims. We measured plasma TNF-alpha, IL-1 beta, and IL-6 and their release stimulated by phytohemagglutinin (PHA) and endotoxin (lipopolysaccharide, LPS) from PBMCs of 13 severely injured (injury severity score = 30 +/- 2) patients once within 48-60 h after injury and then after 7 d of enteral feeding (1.5 g protein[P].kg-1.d-1). Group I (n = 6) received diet A (Crucial) and group II (n = 7) received diet B (Impact). The plasma levels of TNF-alpha and IL-1 beta in trauma patients are not significantly different from those in healthy volunteers, but plasma IL-6 levels are significantly increased (five times) in severely injured patients. Stimulation of TNF-alpha and IL-1 beta secretion by LPS and PHA were significantly higher in patients than in control subjects; in contrast, there was no stimulation of IL-6 because of trauma or nutritional support by either of the diets. Stimulation of IL-1 beta by LPS was normalized by Crucial but was further enhanced by Impact. The higher fat content in Crucial may contribute in part to the apparent immunomodulation. Crucial seems to be a better choice in correcting the nutritional deficiency.