四川省46株疑似非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定结果分析

目的对四川省46株疑似非结核分枝杆菌进行菌种鉴定。方法针对四川省46份临床分离疑似非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM) 16S rRNA基因和16S-23S rRNA内转录间隔区(ITs)进行基因测序和序列分析。结果 46株菌株中,35株鉴定为NTM (经基因测序,分别为11种菌),10株为戈登氏菌,1株为诺卡氏菌。结论四川省NTM至少有11种,以胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为主。NTM菌种鉴定对临床鉴别诊断和合理治疗有一定的意义。     

43株甘肃临床分离非结核分枝杆菌分类鉴定

目的了解甘肃当前临床流行的非结核分枝杆菌(NTM)的病原谱特点及其主要NTM种类,为指导临床诊疗、有效防治NTM肺病提供参考依据。方法收集2012年~2014年来源于甘肃省不同地区的875株临床分离分枝杆菌菌株,经PNB/TCH方法初步鉴定为疑似NTM菌株,采用16SrRNA基因测序技术进行菌种鉴定。结果 875株分枝杆菌临床分离菌株中分离出疑似NTM菌株46株。经16SrRNA基因序列分析鉴定,43株为NTM,3株为诺卡氏菌。43株NTM菌株分别为胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、塞内加尔分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登氏分枝杆菌、楚尔盖分枝杆菌、罕见分枝杆菌、偶然分枝杆菌和脓肿分枝杆菌。其中,胞内分枝杆菌有31株,占总NTM菌株数的72.09%。结论甘肃省非结核分枝杆菌群以胞内分枝杆菌为主,应用16SrRNA基因序列分析鉴定方法能准确鉴定出NTM菌种,为临床诊治提供依据。     

福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.     

多位点PCR用于安徽391株分枝杆菌分离株的快速鉴定

摘要：目的 评价多位点PCR用于分枝杆菌临床分离株快速鉴定效果。方法 收集从临床结核病患者分离到的抗酸染色阳性的培养物,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16SrRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120 基因位点进行扩增,鉴定至种,再经rpoB-PRA、hsp65和rpoB基因测序进行验证。结果 共对391株分枝杆菌临床分离株应用多位点PCR进行了鉴定,结果显示结核分枝杆菌378株,非洲分枝杆菌I型6株,非结核分枝杆菌7株。7株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌1株,马赛分枝杆菌2株,胞内分枝杆菌4株。而PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群385株,非结核分枝杆菌6株。多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65和rpoB基因测序结果一致。结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义。     

一株马鼻疽诺卡菌临床分离株的鉴定

目的应用基因测序分析进行诺卡菌（Nocardia farcinica）鉴定。方法将临床分离菌株BJ7菌株与诺卡菌标准参照菌株AY756551和结核分枝杆菌H37Rv接种L-J、PNB/TCH鉴别培养基。用生长良好的培养物提取全基因组DNA。设计引物,对rpoB、16S rDNA基因片段进行PCR扩增,对其PCR产物进行测序和网上同源性比对。结果 PNB/TCH鉴别培养基鉴定BJ7为非结核分枝杆菌,进化树中BJ7 16S rDNA序列亲缘关系与诺卡菌标准参照菌株AY756551比较相近,且16S rDNA和rpoBDNA序列与马鼻疽诺卡菌同源性极高,分别达到100%和99%。结论从结核病患者分离的菌株BJ7为马鼻疽诺卡菌。DNA测序分析能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌。     

2株胞内分枝杆菌临床分离株的鉴定

目的联合应用多种分子生物学技术进行分枝杆菌菌种鉴定。方法从经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株285株中选取6株,其中包括oxyR-ahpC基因间隔区检测时PCR产物分子量异常的2株和另外随机选择的PCR产物分子量正常者4株,采用H37Rv、鸟分枝杆菌95001和胞内分支杆菌95002做对照,PCR扩增oxyR-ahpC基因间隔区,对其产物进行测序和网上同源性(H37Rv、U18263、U71061)比对。同时,采用多位点PCR扩增和hsp65 PCR-限制性酶切片段长度多态性分析,从而判定分枝杆菌菌种类型。结果经PNB、TCH鉴别培养基鉴定初步判定为结核分枝杆菌的285株临床分离株中2株临床菌株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物大小约为1 000bp,DNA序列与胞内分枝杆菌同源性极高,达99%,而与同片段序列结核分枝杆菌H37Rv的差异大,同源性为84%。多位点PCR指纹显示为非分枝结核杆菌,hsp65 PCR-RLFP/RFLP指纹与95002一致。结论2株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物分子量异常的经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株确定为胞内分枝杆菌。多种分子生物学技术联合应用能够快速、简便、更准确地鉴定分枝杆菌菌种。     

福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定（英文）

目的对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定。方法分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16srRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定。结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌。结论在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现。     

湖南省525株非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定与流行特征

目的 对2019-2020年湖南省分离的非结核分枝杆菌(NTM)进行菌种鉴定,并分析其分布特征,为非结核分枝杆菌病的防治提供基础科学依据。方法 收集2019-2020年湖南省胸科医院疑似结核病患者分离到的分枝杆菌临床分离株,通过MPB64蛋白免疫胶体金法、PNB(对硝基苯甲酸)培养基生长试验进行结核分枝杆菌复合群和NTM鉴定,应用16S rRNA和Hsp65测序分析法对NTM菌株进行菌种鉴定。结果 共收集到6 515份分枝杆菌阳性培养物,初步鉴定为NTM共525株,占比8.06%,其中分离于男性患者285株,占比54.29%;女性患者240株,占比45.71%;人群分布以农民为主,共367株,占比69.90%;年龄分布以40岁以上中老年患者最多,共402株,占比76.57%。2019-2020年NTM菌种分布达27种,菌种分布位列前4者分别为脓肿分枝杆菌(190株,36.19%)、胞内分枝杆菌(174株,33.14%)、鸟分枝杆菌(64株,12.19%)、戈登分枝杆菌(47株,8.95%);其它50株(9.52%)包含23种NTM。脓肿分枝杆菌主要在郴州市、湘西自治州地区、衡阳市和永州市等地区流行;胞内分枝杆菌主要在郴州市、岳阳市和湘潭市流行。结论 2019-2020年湖南地区分枝杆菌中NTM检出率仍保持较高水平,以脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和戈登分枝杆菌为主;感染人群以男性、中老年、农民为主。     

hsp65 and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定(英文)

目的探讨和评价hsp65and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定。方法收集经PNB/TCH鉴别培养基表型鉴定和16s rRNA基因测序鉴定为龟/脓肿分枝杆菌复合群的临床分离菌株,用hsp65and rpoBPCR-RFLP进行种/亚种鉴定。结果经表型鉴定为非结核分枝杆菌的27株临床菌株,16s rRNA基因测序分析与龟/脓肿分枝杆菌的同源性达到99.7%。经hsp65PCR-RFLP and rpoBPCR-RFLP鉴定18株为脓肿分枝杆菌(M.abscessus),4株为溃疡分枝杆菌(M.absecces),另5株表现为独特的指纹特征,可能是一个新的亚种。结论能够快速进行龟/脓肿分枝杆菌复合群种/亚种的鉴定。     

129株非结核分枝杆菌采用两种分子检测技术行菌种鉴定的结果分析

目的 分析北京地区3个单位非结核分枝杆菌 (NTM)临床分离株采用芯片杂交法(简称“芯片法”)和16S rRNA基因测序(简称“基因测序”)进行菌种鉴定的结果,为临床分枝杆菌病的快速准确诊断提供科学依据。方法 用芯片法和基因测序进行北京地区3个单位129株NTM临床分离株的菌种鉴定,实验操作者之间采用双盲法,对两种鉴定方法的结果进行比较和评价。结果 129株NTM菌株中,有107株进行分枝杆菌基因测序,其中59株为胞内分枝杆菌(55.1%);29株为堪萨斯分枝杆菌(27.1%);5株为龟分枝杆菌/脓肿分枝杆菌(4.7%);3株为鸟分枝杆菌(2.8%);2株为偶发分枝杆菌(1.9%);2株为戈登分枝杆菌(1.9%);1株为蟾蜍分枝杆菌(0.9%);1株为草分枝杆菌(0.9%);1株为瘰疬分枝杆菌(0.9%);4株为其他NTM(3.7%)。有116株进行芯片法分枝杆菌菌种鉴定,且有96株同时进行芯片法和基因测序法检测,两种方法进行菌种鉴定的符合率为88.5%(85/96)。基因测序发现有3株外来菌株,分别为明尼苏达分枝杆菌、熊本分枝杆菌、提门分枝杆菌(M.temen)。结论 北京3家机构NTM菌种以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和龟分枝杆菌/脓肿分枝杆菌为主。用芯片法和基因测序对NTM临床分离株进行菌种鉴定的一致率较高。     

安徽省非结核分枝杆菌临床分离率及人群分布和耐药性分析

目的分析安徽省非结核分枝杆菌(NTM)临床分离率和人群分布及耐药性情况,为NTM的防治提供科学依据。方法按照分层整群抽样方法从全省86个结核病门诊抽取42个调查点,连续纳入2015年9月15日至2016年8月31日的涂阳疑似肺结核患者3047例,对痰标本酸性罗氏培养阳性的2652株菌株行菌种鉴定[对硝基苯甲酸(PNB)培养和早期分泌蛋白(MPB64)胶体金法]和基因测序(16S rRNA和hsp65 DNA测序),再对其中的NTM临床分离株在不同人群中的分布特征和耐药性检测(微孔板法)进行研究和分析。结果 2652株培养阳性菌株经初步菌种鉴定获得122株NTM菌株,进一步经基因测序获得NTM临床分离株107株[符合率为87.70%(107/122),分离率为4.03%(107/2652)]、结核分枝杆菌12株、诺卡菌1株、污染菌2株;其中107株NTM共计分离出6种优势菌种,以胞内分枝杆菌[65.42%(70/107)]和脓肿分枝杆菌[25.23%(27/107)]为主。NTM菌株在复治[9.26%(41/443)]、女性[6.32%(39/617)]、≥40岁[5.11%(100/1...     

杭州地区流行非结核分枝杆菌鉴定、易感因素和耐药性分析

目的了解近年杭州地区非结核分枝杆菌(NTM)感染、优势菌种及其耐药性。方法采用PNB/TCH生长试验对1 972例患者分枝杆菌阳性培养物标本中NTM进行初步鉴定。采用分枝杆菌分子线性探针法和16SrRNA基因PCR产物测序鉴定NTM菌种。分析性别和年龄对NTM易感性的影响。采用浓度比例法检测NTM分离菌株对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)的敏感性。结果 9.8%(193/1 972)分枝杆菌阳性培养物标本PNB/TCH生长试验结果阳性。分子线性探针法和16SrRNA基因PCR产物测序结果显示,193例PNB/TCH生长试验阳性标本中,66.3%为单一NTM、18.1%为2种分枝杆菌、8.3%为结核分枝杆菌、7.3%为非分枝杆菌属细菌感染。173株NTM(单一感染128株+混合感染45株)中,胞内分枝杆菌占57.8%,其次为脓肿分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、龟分枝杆菌和鸟分枝杆菌(12.1%、9.8%、9.8%和5.8%)。35例分枝杆菌混合感染标本中,28.5%和20.0%分别为胞内分枝杆菌或龟分枝杆菌与结核分枝杆菌混合感染。NTM感染者男性多于女性(1.67∶1),50岁以上人群感染率(80.4%)高于50岁以下人群(P0.01),肺部感染比例(95.1%)远高于其他部位(P0.01)。NTM分离株对INH耐药率为100%,对其他5种抗结核药物的耐药率也高达70.3%~90.6%。结论胞内分枝杆菌是杭州地区近年优势流行的NTM菌种,NTM主要引起肺部感染且中老年人易感,NTM临床菌株对常用抗结核药物有很高的耐药性。     

河南省363株非结核分枝杆菌分离鉴定及耐药分析

目的 了解河南省结核病患者中非结核分枝杆菌(NTM)分布情况及其耐药性,为其临床诊治提供支持。方法采用传统PNB/TCH生长试验对分枝杆菌培养阳性标本初步鉴定。用探针熔解曲线法和PCR产物测序鉴定NTM菌种,采用比例法检测分离菌株的抗结核药物敏感性。结果 从PNB/TCH生长试验结果阳性的404株菌株中,鉴定出NTM菌株363株,其中357株为单一感染,6株为混合感染。363株菌株中,胞内分枝杆菌273株(74.93%),堪萨斯分枝杆菌34株(9.37%),脓肿分枝杆菌21株(5.79%),鸟分枝杆菌11株(3.03%),其他25株(6.89%)。其中南阳、洛阳、平顶山、濮阳、开封、许昌、郑州、周口和驻马店等地市胞内分枝杆菌比例都高于50%;安阳、鹤壁和商丘等地市堪萨斯分枝杆菌比例较高。河南省NTM总分离率为3.93%。18个地市中鹤壁市NTM分离率最高为11.20%,其次为南阳10.23%;分离率最低的为周口1.11%,其次为商丘1.21%,差异有统计学意义(χ²=135.604,P<0.001)。结论 河南省NTM分离以胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、脓肿...     

2017年绍兴地区106株非结核分枝杆菌菌种鉴定结果分析

目的 分析绍兴地区非结核分枝杆菌(NTM)的流行情况,为NTM诊疗提供科学依据。方法 对绍兴地区2017年临床分离的972株分枝杆菌,采用结核分枝杆菌抗原检测胶体金法进行结核分枝杆菌复合群和NTM的初步菌种鉴定,结果106株为NTM,占分枝杆菌培养阳性菌株的10.91%(106/972),对初步鉴定为NTM的菌株应用 DNA微阵列芯片法进行NTM菌种鉴定。结果 106株NTM菌株经DNA微阵列芯片法鉴定,共有14个菌种,其中菌株数量前3位的菌种为:胞内分枝杆菌[55株(51.89%)]、鸟分枝杆菌[19株(17.92%)]、堪萨斯分枝杆菌[13株(12.26%)]。其余分别为:龟-脓肿分枝杆菌[4株(3.77%)]、瘰疬分枝杆菌[3株(2.83%)]、戈登分枝杆菌[3株(2.83%)]、土分枝杆菌[2株(1.89%)]、其他[7株(6.60%)]。结论 2017 年绍兴地区NTM 临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10.91%;NTM种类多,以胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌为主要流行菌种。     

广州市非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定及药物敏感性试验结果分析

目的 对广州市非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定与药物敏感性试验(简称“药敏试验”),为临床诊断和治疗NTM病提供依据。方法从2016年广州市胸科医院行分枝杆菌分离培养的1250份标本中搜集培养阳性的717株临床分离株,采用水溶性对硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)对其进行培养,以鉴别MTB与NTM,通过多靶位基因聚合酶链反应 (PCR)测序,对PNB和TCH培养确定为NTM的菌株进一步行菌种鉴定,并采用最低抑菌浓度法(MIC)检测98株NTM对18种抗结核药物的耐药性。结果717株分枝杆菌中,检出106株NTM菌株,检出率为14.4%;其中103株传代成功,传代率为97.2%(103/106)。经NTM菌种鉴定,按照构成比高低依次为脓肿分枝杆菌[34.0%(35/103)]、胞内分枝杆菌[25.2%(26/103)]、马赛分枝杆菌[20.4%(21/103)]、鸟分枝杆菌[9.7%(10/103)]、堪萨斯分枝杆菌[5.8%(6/103)]、偶发分枝杆菌[1.9%(2/103)],以及1株缓黄分枝杆菌、1株猪分枝杆菌和1株阿加普尔分枝杆菌[均占0.9%(1/103)]。98株NTM菌株的药敏试验结果显示,敏感者前3位依次为阿米卡星[93.9%(92/98)]、克拉霉素[91.8%(90/98)]和阿奇霉素[71.4%(70/98)],耐药者前3位依次为利福平[89.8%(88/98)]、左氧氟沙星[83.7%(82/98)]和亚胺培南[77.6%(76/98)]。并且NTM不同菌种对部分药物的耐药性存在种间差异。结论广州市NTM的检出率高于我国其他地区,流行的菌种以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主;克拉霉素和阿米卡星是临床治疗NTM患者的优选抗生素,应重视对利福平和左氧氟沙星的耐药性。     

福建省临床分离非结核分枝杆菌菌种分布研究

目的 分析我院临床分离非结核分枝杆菌(NTM)菌株,探讨福建省NTM临床分离率和菌种分布情况。方法 对我院2009-2012年临床分离6 362株分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM鉴别,对鉴定为NTM菌株应用hsp65-和rpoB- PCR-RFLP进行菌种鉴定。结果 6 362株临床分离分枝杆菌共鉴别出649株NTM。鉴别出的649株NTM菌株,经hsp65-和rpoB-PCR-RFLP鉴定,菌种分布达24个种,其中菌株数量前3位菌种为:胞内分枝杆菌(M.intracellulare)302株(46.5%),鸟分枝杆菌(M. avium)138株(21.3%),脓肿分枝杆菌(M. abscessus)81株(12.5%)。结论 2009-2012 年福建省NTM临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10.2%,NTM种类多,以鸟-胞内分枝杆菌复合群(MAC)为福建省NTM的主要流行菌种,占总数的67.8%。     

结核分枝杆菌胶体金法快速鉴别试剂盒的临床应用观察

目前,传统的分枝杆菌菌种鉴定方法需在改良罗氏L-J培养基、硝基苯甲酸PNB和2-噻吩羧酸肼(TCH)鉴别培养基上初步鉴定结核分枝杆菌(MTb)和非结核分枝杆菌(MOTT)后,再观察细菌菌落形态、生长速度、生长温度和色素,并进行一系列生化试验,操作繁琐、费时,影响因素多;其他,如BACTEC-TB系统的NAP试验和Gen-Probe系统的结核分枝杆菌直接检测(MTD)试验等也可快速鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)和MOTT,但试剂仪器价格昂贵,难以在普通实验室广泛开展。     

对硝基苯甲酸鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌的机制研究

目的研究对硝基苯甲酸(PNB)鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)与非结核分枝杆菌(NTM)的机制。方法应用高压液相色谱(HPLC)和液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)鉴定5株MTC标准株和33株NTM标准株的PNB代谢产物。结果 33株NTM标准株均可将PNB还原为对氨基苯甲酸(PABA),而5株MTC标准株则不具备该能力。结论 PABA是PNB的代谢产物之一。NTM能将PNB还原为细菌可利用的PABA,因此能够耐受PNB;MTC不具备该能力,因而不能耐受PNB。这可能就是PNB选择性培养基用于鉴别MTC与NTM的机制。     

利用960系统快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的可行性研究

目的探讨应用BACTEC MGIT960系统的分枝杆菌生长指示管(Mycobacter GrowthIndicator Tube,MGIT)加入对硝基苯甲酸(ρ-Nitro benzoic Acid,PNB)区分结核分枝杆菌复合群(MTBC)与非结核分枝杆菌(NTM)的可行性。方法用含PNB MGIT检测5株标准分枝杆菌菌株的体外抑菌浓度,并对111株临床分离菌株与传统改良罗氏(L wenstein-Jensen,L-J)PNB鉴定进行比较。结果以PNB300μg/ml为界,111株临床分离菌株PNB MGIT法与L-J PNB的菌群鉴定相比较符合率为90.09%;鉴定结果报告平均7.72 d,与L-J PNB法比较有显著性差异,检测时间明显缩短(P&lt;0.001)。结论应用960系统PNB MGIT法鉴定分枝杆菌菌群的方法快速、准确、实用。     

对硝基苯甲酸生长试验鉴别结核与非结核分枝杆菌应用评价

目的对应用对硝基苯甲酸（PNB）生长试验鉴别结核分枝杆菌复合群（MTC）与非结核分枝杆菌（NTM）进行评价。方法采用PNB生长试验、PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA直接测序对52株MTC和264株NTM临床分离株进行鉴定。结果以PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA测序结果为鉴定标准,PNB生长试验中52株MTC菌株均为（100％）阴性（-）,264株NTM菌株中233株（88％）为阳性（＋）,31株（12％）为（-）。结论仅应用PNB生长试验鉴别MTC与NTM存在局限性。用PCR-反向核酸探针杂交能将分枝杆菌鉴定至属、将MTC与NTM相鉴别,并能将NTM准确鉴定至种的水平。