腺病毒介导的p53和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：研究ｐ５３基因和顺铂联合应用对胆管癌细胞的作用。方法：将重组体腺病毒ｐ５３和顺铂联合作用于人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９，对ｐ５３基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果：用Ａｄ－ＬａｃＺ进行复组腺病毒转导效率的检测，发现当ＭＯＩ为１００以上时，重组腺病毒可使９０％以上的培养的人胆管癌ＱＢＣ９３９细胞被传导，用ＲＴ－ＰＣＲ方法，在胆管癌ＱＢＣ３９细胞系中ｐ５３无表达。重组体腺病毒能介导外源基     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱 导和肝细胞毒性损害

目的：研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法：应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检测法和光镜观察,分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４ 种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果：Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药物顺铂协同,能诱导３０％ 左右的ＱＢＣ９３９发生凋亡,并对肝细胞系Ｌ０２ 和大鼠肝细胞无明显毒性损害。结论：Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ能诱导胆管癌细胞ＱＢＣ９３９ 发生凋亡,且与化疗药物顺铂具有协同增强作用。初步分析对人肝细胞及大鼠肝脏无明显毒性损害,具有一定的临床应用前景。     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱导和肝细胞毒性损害

目的 研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法 应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检查法和光镜观察，分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－、ｐ５３、ＩＬ－２４种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果 Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药     

腺病毒介导的p53对胆管癌细胞生长的抑制作用

目的 研究Ｐ５３基因对胆癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒Ｐ５３转移到人胆管癌细胞ＱＢＣ９３９,用ＲＴ－ＰＣＲ、克隆形成实验、流式细胞仪、ＤＮＡ片段化分析等方法对Ｐ５３基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ａｄ－ＬａｃＺ进行重组体腺病毒转导致率的检测,发现当ＭＯＩ为１００以上时,重组体腺病毒可使９０％以上的培养的人胆管癌ＱＢＣ９３９,细胞被传导,用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测,在胆管癌ＱＢＣ９     

腺病毒介导多基因在胆管癌细胞中的表达

研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ,Ｂ７－１,ｐ５３、ＩＬ－２）在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中的表达及对其生长的影响。方法：构建同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４种目的基因的重组腺病毒载体Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ,应用流式细胞仪、ＥＬＩＳＡ、免疫组化等方法。     

基因治疗与化疗联合应用对人肺腺癌GLC-82细胞作用的实验研究

目的 探讨基因治疗和化疗联合应用提高肿瘤疗效的可能性和初步机制。方法 将重组腺病毒载体（Ａｄ）介导的ｐ５３基因（Ａｄ－ｐ５３）与化疗药顺铂（ＣＤＤＰ）或三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）联合,通过细胞生长和存活的抑制实验,流式细胞分析,末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记检测,逆转录－聚合酶链反应,免疫组织化学检测,以及裸鼠皮下移植瘤模型的治疗实验,观察其对人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞的作用及可能机制。结果 Ａ     

CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理

目的：研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机制。方法：小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３ｄ后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续１０ｄ腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果：与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润,黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论：联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用。     

腺病毒介导的反义c-myc选择性诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡的研究

目的 构建介导反义ｃ－ｍｙｃ的重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的细胞周期,增殖和凋亡的影响。方法 将ｃ－ｍｙｃ基因反向克隆于穿梭质粒载体ｐＡｄＣＭＶ中,通过脂质体与ｐＪＭ１７共转染２９３细胞,经同源重组产生编码反义ｃ－ｍｙｃ的重组腺病毒。体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２和ＳＰＣ－Ａ－１以及人胚肺二倍体细胞２ＢＳ后,细胞周期的改变,凋亡的发生和相关基因表达的变化;体内观察对肿瘤     

携带内皮型一氧化氮合酶基因重组腺病毒载体的构建

目的：构建带有内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因的重组腺病毒载体。方法：将ｅＮＯＳ　ｃＤＮＡ克隆于腺病毒穿梭质粒ｐＣＡ１４，得到重组质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ。采用磷酸钙ＤＮＡ沉淀法将质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ与腺病毒拯救质粒ｐＢＨＧ１０共转染２９３细胞，通过同源重组，生成带有ｅＮＯＳ基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶｅＮＯＳ）。ｅＮＯＳｃＤＮＡ重组进入腺病毒Ｅ１区并受ＣＭＶ启动子控制。结果：经形态学、病毒ＤＮＡ酶切、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法的鉴定，证实了载体构建的正确性。结论：带有ｅＮＯＳ基因的重组腺病毒载体的成功构建，为心血管等疾病的基因治疗打下了基础。     

重组RA538腺病毒对人胃癌细胞的体内及体外分子治疗研究

目的：研究重组ＲＡ５４３８腺病毒对胃癌细胞的体内外生物学作用。方法：ＥａｃＺ基因Ｘ－ｇａｌ染色、ＭＴＴ、克隆形成试验、ＤＮＡ梯度降解试验、原位末端标记、流式仪、裸鼠致瘤性、裸鼠皮下移植溜模型实验等方法,对ＲＡ５３８重组腺病毒在人胃癌ＳＧＣ７９０１细胞的作用进行体内外研究。结果：Ａｄ－ＲＡ５３８对ＳＧＣ７９０１细胞产生明显的生长抑制作用,ＭＴＴ显示生长抑制率为７６．３％。ＤＮＡ梯度降解试验,原位末端     

p16和p53基因及顺铂联用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：探索p16基因和p53基因及p16基因和顺铂（CDDP）联合应用对体内外胆管癌细胞系生长的抑制作用。方法：将重组体腺病毒p16（Ad-p16）和Ad-p53及Ad-p16和CDDP联合作用于人胆管癌细胞系QBC939，观察和分析其对体内外胆管癌细胞生长抑制作用及其机制，结果：Ad-p16在QBC939细胞中表达能抑制QBC939细胞的生长，与p53、CDDP联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长，p16和p53基因诱导癌细胞发生G1期阻滞和细胞凋亡，CDDP能诱导癌细胞发生G2期阻滞和细胞凋亡；裸鼠皮下移植瘤模型瘤体内注射Ad-p16及腹腔内注射CDDP均能抑制QBC939肿瘤的生长，两者联合应用具有协同作用。结论：p16基因和p53基因及CDDP联合应用具有协同作用。     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

外源性p16基因与放疗联合治疗喉鳞癌的实验研究

目的　探讨外源性 p16基因对人喉鳞状细胞癌的抑制作用及与放射治疗联合应用的协同增敏作用。方法　应用携带 p16基因的复制缺陷型腺病毒 (Ad- p16 )转染人喉鳞癌细胞株 ,用 Western Blot方法检测 p16基因在喉鳞癌细胞中的表达 ,体外、体内实验观察 p16基因治疗和放射治疗对喉癌细胞的生长抑制作用。结果　复制缺陷型腺病毒载体可有效地将外源性 p16基因转染入人喉鳞癌细胞株中并使其表达 P16蛋白 ;体外、体内抑瘤实验表明 :Ad- p16基因治疗组、单纯放疗组和 Ad- p16基因与放疗联合治疗组肿瘤生长均明显受抑制 ,疗效显著优于携带 L ac Z基因的重组腺病毒 (Ad- L ac Z)组和 PBS对照组 (P<0 .0 5 ) ,其中联合治疗组肿瘤生长最为缓慢 ,与 Ad- p16基因治疗组和单纯放疗组比较均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　 p16基因可有效地抑制人喉鳞癌细胞生长 ,与放射治疗联合应用具有相加和协同效应     

腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应

目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC－82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC－82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的G1期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因（Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。     

肝门部胆管癌神经侵犯裸鼠动物模型的建立

目的建立裸鼠肝门部胆管癌原位种植瘤神经侵犯模型。方法裸鼠全身麻醉后,逐层开腹,将胆管癌细胞系QBC939种植于裸鼠胆总管与门静脉组织间隙处,B超观察肿瘤生长情况,2周后处死裸鼠,肿瘤组织行病理学和S100免疫组化染色,观察神经侵犯情况。结果 B超显示肿瘤成功种植于肝门部,原位种植成瘤率为100%(10/10);肿瘤细胞呈侵袭性生长,腹膜后淋巴结肿大,肿瘤组织内神经侵犯率达80%。结论裸鼠肝门部胆管癌原位移植瘤及神经侵犯模型的建立,为研究胆管癌的神经侵犯机理以及探讨胆管癌防治策略提供了理想的工具。     

低浓度乙醇预防胆管癌术后复发的可行性研究

目的探讨低浓度乙醇预防胆管癌术后复发的可行性.方法以不同浓度乙醇直接作用于培养的胆管癌细胞系QBC939细胞,MTT法筛选抑制肿瘤细胞增殖的乙醇浓度.经不同浓度乙醇预处理15min的QBC939细胞,接种于裸鼠皮下,通过裸鼠种植瘤模型筛选乙醇抑制肿瘤细胞体内生长的安全浓度.将筛选出的安全浓度乙醇蒸馏水溶液注射于大鼠腹腔,观察其对动物生命体征及腹腔脏器的影响.结果乙醇对胆管癌细胞系QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50)为1.8%-2.2%,0.5%以上浓度的乙醇即可显著抑制肿瘤细胞生长;15%乙醇预处理过的肿瘤细胞接种于裸鼠皮下,15d后未见肿瘤结节生长;15%浓度乙醇蒸馏水溶液10ml注射大鼠腹腔后未见其对动物生命体征及腹腔脏器造成显著影响.结论低浓度乙醇可有效抑制胆管癌细胞生长,对动物生命体征及腹腔脏器安全,具有术中浸泡腹腔预防胆管癌术后复发的潜在应用价值.     

Effects of Ad-p27mt gene transfer on the expression of Bax,Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice

In this study, the mechanism by which Ad-p27mt inhibits the growth, invasion and metastasis of transplanted liver tumor was studied by examining the effects of Ad-27mt gene transfer on the expression of Bax, Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice.The model of transplanted hepatic tumor was established in nude mice.The mice were then divided into three groups, which were injected with PBS, Ad-LacZ and Ad-p27mt and the growth of the transplanted liver tumor was observed.The expressions of P27, Bax and Bcl-2 proteins were detected by Western blotting and the expressions of VEGF and MMP-9 were immunohistochemically determined.Our result showed that the tumor size, expressions of Bax, Bcl-2 proteins, VEGF and MMP-9 were all lower than those in PBS and Ad-LacZ groups and the differences were statistically significant (P<0.05).Our study suggested that Ad-p27mt could inhibit the growth, invasion and metastasis of hepatic cancer by lowering the expressions of VEGF and MMP-9.