胃癌患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞检测及临床意义

目的观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞与胃癌患者的关系,探讨其临床意义。方法用流式细胞术分析胃癌患者外周血淋巴细胞中Treg细胞的表达。结果胃癌患者手术前、后外周血淋巴细胞中Treg细胞比例分别为(6.35±1.85)和(4.54±1.42)%(P<0.05),术后复发时比例为(7.17±1.55)%;化疗前、后分别为(6.47±1.97)%和(8.81±2.01)%(P<0.05)。早期胃癌Treg细胞为(5.88±1.54)%,明显低于进展期胃癌(7.04±1.66)%(P<0.05)。结论胃癌患者外周血Treg细胞在术后1周比例减少,复发时比例上调,提示其参与了胃癌发生、发展的全过程。化疗后Treg细胞增加,可能与药物诱导的增值分化有关。不同进展期病人外周血中Treg细胞的水平有助于了解病情,判断预后。     

不同分期胃癌患者外周血淋巴细胞Foxp3 mRNA表达水平的研究

目的 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,研究不同分期胃癌患者外周血淋巴细胞Foxp3 mRNA的表达水平.方法 普通RT-PCR结合胶回收制备Foxp3 mRNA-CDS标准品,利用标准品制备定量PCR标准曲线,对曲线进行灵敏度、精密度和特异性分析,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测40例胃癌和8例正常对照外周血Foxp3 mRNA.结果 获得Foxp3全长CDS标准品,标准曲线范围（2.8×10^2）～（2.8×10^8）拷贝/μl,最低检测值280拷贝/μl,批内和批间变异系数（CV）＜5%.Foxp3基因在胃癌患者外周血表达水平显著高于健康对照（P＜0.01）,表达水平与肿瘤分期显著相关（P＜0.05）.结论 Foxp3基因上调表达与胃癌的发生、发展和预后有关.     

CD4＋CD25＋Treg细胞的分选、表型鉴定及Foxp3表达鉴定

目的为验证从C57BL／6小鼠脾脏中分离出高纯度CD4＋CD25＋Treg细胞及证实CD4＋CD25＋Treg细胞中Foxp3基因的表达。方法使用免疫磁珠分选出CD4＋CD25＋Treg细胞,流式细胞仪检测纯度;使用TRIZOL抽提Foxp3基因mRNA,使用RT—PCR方法逆转录出Foxp3基因的cDNA。结果从C57BL／6小鼠脾脏中分离出了纯度达到90％CD4＋CD25＋Treg。进一步应用RT—PCR技术克隆出Foxp3的cDNA,通过凝胶电泳证实了克隆出了Foxp3的cDNA。结论使用免疫磁珠方法能够分离出C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞,并进行了Foxp3基因表达的鉴定。     

SEMA3B在胃癌中的表达和临床意义

摘要：目的探讨SEMA3B在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法应用Western Blot及RT—PCR方法检测60例胃癌患者癌组织和正常胃粘膜组织的SEMA3B蛋白及mRNA表达量变化。结果胃癌组织中SEMA3BmR—NA表达量明显高于胃正常黏膜（0．18±0．04vs0．36±0．08，P=0．009〈0．05）。结论SEMA3B在抑制胃癌的发生发展过程中具有重要作用。     

Foxp3基因在URSA患者外周血中的表达及其临床意义

目的 探讨叉头样转录因子P3(Foxp3)基因在原因不明复发性流产(URSA)患者外周血中的表达及其临床意义.方法 选取本院2017年9月至2018年9月收治的55例URSA早孕妇女作为研究组,同时选取同期50例正常早孕妇女为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Foxp3 mRNA的表达量;采用酶...     

Stat3、Survivin和Bcl-2在胃癌组织中的表达

目的探讨Star3、Survivin和Bcl-2在胃癌组织中的表达情况。方法对42例胃癌组织和19例正常胃组织采用免疫组织化学方法分析,采用Mann—WhitneyU法分析组间差异。结果胃癌组中Stat3、Survivin和Bcl-2表达阳性的分别有31例、29例和25例,正常组Stat3、Survivin知Bcl-2表达阳性的分别有2例、0例和3例,三者在两组间均存在统计学差异（P〈0．01）。结论胃癌组织中Star3、Survivin和Bcl-2表达上调,可能与肿瘤的发生和发展相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Foxp3的表达及意义

摘要 目的：探讨转录因子Foxp3在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者外周血单个核细胞中的表达水平及其在SLE发病中的作用及意义。方法：选择SLE活动性、SLE非活动性患者和正常对照，运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测SLE患者和正常对照组外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平。结果：活动期SLE组Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于SLE非活动性患者和正常对照（P<0.05），SLE非活动性患者Foxp3mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常对照（P<0.05）。结论：SLE患者外周血单个核细胞中Foxp3mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常对照，随着SLE患者病情的好转，Foxp3mRNA和蛋白的表达水平逐渐增高。提示Foxp3与SLE疾病的活动性呈一定的线性相关关系。     

SOCS-3 mRNA在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达

目的探讨人胃癌组织及胃癌细胞系中细胞因子信号转导抑制因子3（suppressors of cytokine signaling-3，SOCS-3）的表达。方法应用RT-PCR法测定10例人正常胃组织、10例人胃癌组织及人胃癌细胞系SWWC中SOCS-3的表达。结果与正常胃组织相比较，本研究中所测定的人胃癌组织（P〈0．05）及人胃癌细胞系SWWC（P〈0．001）SOCS-3 mRNA的表达呈降低趋势。结论在人胃癌的发生、发展过程中SOCS-3基因发生显著变化。     

小鼠Foxp3融合蛋白的原核表达及纯化

目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy vector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸“标签”)的pET 32a( )原核表达载体中构建pET 32a( )-MFoxp3表达载体。用IPTG诱导转化pET 32a( )-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白。结果经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a( ),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性。结论构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白。     

从纤支镜刷落细胞提取微量RNA并检测Foxp3基因表达

目的建立纤维支气管镜刷落细胞提取微量核糖核酸（RNA）的方法,检测分析调节性T细胞（Treg）Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。方法以磁珠吸附法提取154例肺癌及肺良性疾病患者纤支镜刷脱细胞的微量RNA,以实时荧光定量RT—PCR的方法检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在肺癌及肺良性疾病患者中的表达水平。结果平均总RNA提取量为5．08μgRNA／例,最低为3．20μg,最高为15．25μg。肺癌患者组中Foxp3 mRNA的表达水平（0.0000—13682．0805,四分位数间距0．0011）显著高于肺良性疾病组（0．0000—0．0061,四分位数间距0．0000）（Z=-3．508,P〈0．01）,肺癌患者组中Foxp3的阳性率,（29．34％,27／92）亦明显高于肺良性疾病组（3．23％,2／62）（x^2=16．535,P〈0．01）。结论利用纤支镜毛刷刷取病灶部位涂片后毛刷中的剩余细胞．采用磁珠吸附的方法可以提取微量RNA,并用于基因表达水平的检测。     

异基因造血干细胞移植患者外周血T淋巴细胞Foxp3表达水平与aGVHD关系的研究

目的探讨异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)患者外周血T淋巴细胞Foxp3表达水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系。方法选择15名接受异基因造血干细胞移植患者为研究对象,同时取15名健康志愿者作为正常对照。15名患者采移植前及移植后3—4周血常规白细胞数>1×109/L外周静脉血3—5 ml,分离出T淋巴细胞,通过RT-PCR方法检测Foxp3的表达水平。结果 Allo-HSCT患者移植前外周血T淋巴细胞的Foxp3平均表达水平与正常对照组相比P(0.05。异基因造血干细胞移植患者移植后外周血T淋巴细胞的Foxp3平均表达水平低于正常对照组平均表达水平(t=0.557,P<0.01)。发生aGVHD患者与没有发生aGVHD的患者移植前的Foxp3平均表达水平比较P(0.05。发生aGVHD患者移植后的Foxp3平均表达水平低于没有发生aGVHD的患者移植后的Foxp3平均表达水平(P<0.05)。没有发生aGVHD的患者移植前后Foxp3的平均表达水平与正常人相比统计学均无显著性差异(P>0.05)。Allo-HSCT患者外周血T淋巴细胞的Foxp3的表达水平随aGVHD程度加重有下降的趋势。结论发生aGVHD的患者的Foxp3平均表达水平低于没有发生aGVHD的患者,且随aGVHD程度加重有下降的趋势。Foxp3可能成为aGVHD预测和随访的有效指标之一。     

自身免疫性甲状腺炎大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞变化及意义

目的研究CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞在自身免疫性甲状腺炎（AITD）大鼠外周血中的比例变化,并初步探讨其在疾病进程中的意义。方法选取17例A1TD大鼠,取静脉血,应用流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3^＋表达,并与甲状腺炎球蛋白抗体（TgAb）,甲状腺过氧化酶抗体（TPOAb）,甲状腺微粒体抗体（TmAb）和甲状腺组织活检结果作相关分析。取正常大鼠作为对照。结果AITD大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（5．35％±1．27％）显著低于正常对照组（8．02％±2．29％,P〈0．01）,AITD大鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞占CD4‘T细胞比例（3．12％±0．78％）明显低于正常对照组（6．45％±2．12％,P〈0．01）,AITD大鼠Treg与TgAb、TmAb、TPOAb呈负相关（r=-0．291,-0．357,-0．389,P〈0．05,0．05,0．05）,并与小鼠甲状腺组织的炎症程度呈负相关（r=-0．511,P〈0．01）;Foxp3mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致。结论AITD大鼠CD4^＋CD25^＋T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了AITD的病理进程。     

脓毒症患者自然调节性T细胞及可溶性CD25水平研究

目的 通过前瞻性研究探讨脓毒症患者外周血自然调节性T细胞(Treg)百分比和血浆可溶性CD25分子(IL-2sRa)水平的变化及其临床价值.方法 将2009年2月至2010年2月上海交通大学附属瑞金医院重症医学科所收治的符合ACCP/SCCM于1997年提出的SIRS与脓毒症诊断标准的37例脓毒症患者与15例非感染SIRS患者,以及上海交通大学附属瑞金医院体检中心24例排除感染及免疫系统基础疾病患者,根据诊断标准分为脓毒症组、非感染SIRS组与正常对照组.其中脓毒症组男性26例,女性11例,年龄(61.67±11.87)岁;非感染SIRS组男性8例,女性7例,年龄(67.06±12.57)岁;正常对照组男14例,女10例,年龄(56.54±6.37)岁.脓毒症组肺部感染28例,腹腔感染6例,其他4例;非感染SIRS组为择期清洁手术后24 h内无感染征象者.所有入选对象均排除免疫系统基础疾病和(或)近期(30 d内)曾使用或正在使用强效免疫抑制剂患者.流式细胞分析术检测三组外周血Treg细胞百分比,ELISA检测血浆IL-2sRa,IL-4,IFN-γ水平.所得数据采用方差分析及非参数检验的Kruskal-Wallis H方法.结果 ①Treg细胞在脓毒症组、SIRS组和正常对照组占外周血CD4+CD25+T细胞的比例分别为:(66.82±21.79)%,(51.79±21.79)%、(56.45±10.68)%,脓毒症组Treg细胞显著高于SIRS组和正常对照组(P=0.001).②与SIRS组(381.664±189.83)和对照组(164.132±56.37)相比,脓毒症组可溶性CD25分子(IL-2sRa)水平(425.619±270.12)显著增高(P=0.000).③IL-2sRa浓度与Treg细胞占CD4+CD25+T细胞的比例相关分析示:Spearman相关系数=0.390,P=0.003(P＜0.05),两者存在正相关关系.结论 Treg细胞在脓毒症患者外周血的表达水平特征性增高.而外周血IL-2sRa水平可以反映Treg细胞表达水平,也有助于简化判断脓毒症的免疫状态的方法.

Abstract：

Objective To explore the CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell percentage and plasma levels of soluble CD25 molecules in peripheral blood of septic patients and their clinical value through prospective study. Method A total of 37 septic patients and 15 non-infectious SIRS patients, who conformed to the criteria of SIRS and sepsis which proposed by American College of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine Consensus Conference ( ACCP/SCCM ) in 1997, were collected in ICU of Ruijin Hospital ( Shanghai Jiaotong University) from February 2009 to February 2010. Twenty-four health people were from Medical Center of Ruijin Hospital, who were excluded infection and (or) autoimmune diseases. There were 26 male and 11 female in sepsis group, average age ( 61.67 ± 11.87 ) years old; 8 male and 7 female in SIRS group, average age (67.06 ± 12.57)years old; 14 male and 10 female in health control, average age (56.54 ± 6.37 )years old. All selected patrents were excluded the autoimmune diseases and (or) patients within recent (30 days) had used or now used immunosuppressive agents. We therefore measured the Treg cell percentage in peripheral blood by Flow Cytometry and the plasma levels of IL-2sRa, IL-4, IFN-γ by ELISA. The data were analyzed by analysis of variance or nonparametric Kruskal-Wallis H test. Results ① The percentage of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells among septic patients, SIRS patients, and control group was: ( 66.82 ± 21.79 ) %, ( 51.79 ± 21.79 ) %, ( 56.45 ± 10. 68 ) %, respectively. septic patients showed the highest percentages of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell among CD4 + CD25 + T cells(P ＜ 0.05 ). ② The plasma levels of soluble CD25 in septic patients (425. 619 ± 270.12 ) were significantly higher than SIRS patients (381. 664 ± 189.83) and the control group ( 164. 1 32 ± 56.37 ) ( P ＜ 0.05 ). ③ The correlation analysis between the concentration of soluble CD25 molecules in plasma and the ratio of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cells to CD4 + CD25 + T cells showed Spearman correlation coefficient =0.390, P = 0.003 ( P ＜ 0.05 ). Conclusion: the expression of natural regulatory T cells characteristically increased in septic patients. And the levels of soluble CD25 in peripheral blood were related to the percentages of natural regulatory T cells, which simplified the assessment of the immune status in Septic patients.     

胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T水平与细胞因子相关性分析

目的观察胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞(Treg细胞)分布及与外周血白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β_1的关系。方法采用流式细胞术检测48例胃癌患者(淋巴结转移26例,无转移22例)区域引流淋巴结中Treg细胞频数;ELISA方法检测外周血血清TGF-β_1和IL-10水平。分析Treg细胞与TGF-β_1、IL-10相关性。结果 Treg细胞在淋巴结转移患者阳性淋巴结中水平为(18.16±2.51)%,显著高于阴性淋巴结[(13.51±2.48)%],差异有统计学意义(P0.05),且阴性淋巴结Treg细胞比例显著高于无转移患者淋巴结[(9.27±2.16)%],差异有统计学意义(P0.05)。ELISA结果提示淋巴结转移患者外周血TGF-β_1和IL-10水平显著高于无转移患者,差异有统计学意义(P0.05)。胃癌患者引流区淋巴结Treg细胞分布比例与外周血血清TGF-β_1(r=0.73,P0.01)和IL-10水平(r=0.81,P0.01)呈明显正相关。结论胃癌患者区域引流淋巴结中Treg细胞分布与淋巴结转移密切相关,Treg细胞可能通过分泌TGF-β_1和IL-10导致胃癌淋巴结微环境发生免疫抑制,是胃癌发生淋巴结转移的重要因素之一。