鲍曼不动杆菌携带Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因研究

目的 研究鲍曼不动杆菌所携带的Ⅰ型整合子与耐消毒剂基因.方法 琼脂扩散法检测菌株对7种抗菌药物的药敏结果;用聚合酶链反应(PCR)方法检测Int-1、qacA/B、qacE△1-sul1、qacG、smr、ArmA、Isaba1和tnp513共8种基因.结果 24株菌对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、四环素、头孢哌酮/舒巴坦、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、阿米卡星等抗生素敏感率分别为12.5％、4.2％、4.2％、0.0％、12.5％、8.3％和8.3％;PCR结果显示,24株菌qacA/B、qacG、tnp513和smr4种基因检测结果为阴性,携带qacE△1-sul1、ArmA、Isaba1、dfrA17和Int-1基因,且dfrA17位于Ⅰ型整合子基因盒内.结论 本组鲍曼不动杆菌对广谱抗生素耐药严重,并携带了Ⅰ型整合子和消毒剂耐药基因.应规范此类抗生素的使用并采取相应的消毒措施防止多重耐药菌株在院内传播.     

整合子及相关基因盒在临床分离铜绿假单胞菌中的分布

目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子及Ⅰ类整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布,分析整合子对细菌耐药性的影响。方法用纸片法对62株临床分离铜绿假单胞菌进行药敏试验;应用多重PCR法检测62株铜绿假单胞菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;对Ⅰ类整合子阳性菌进行整合子相关基因盒检测。结果62株菌中有40株(64.5%)含有Ⅰ类整合子,1株(1.6%)含有Ⅱ类整合子;没有检测到Ⅲ类整合子阳性菌。在Ⅰ类整合子阳性菌中,有26株携带Ⅰ类整合子相关基因盒(65.0%);分离自同一科室的部分菌株携带大小相同的基因盒;Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率高于整合子阴性的菌株。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在铜绿假单胞菌临床菌株中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

医院污水中大肠埃希菌的耐药谱及Ⅰ类整合子分析

目的调查医院污水中多重耐药菌污染情况及其耐药基因和Ⅰ类整合子携带情况。方法采集河南省郑州大学第一附属医院污水,使用16S rRNA测序和微量生化反应管鉴定细菌种属;采用PCR扩增耐药基因和Ⅰ类整合子基因盒,计算其检出率。结果根据16S测序和生化反应共分离鉴定出23株大肠埃希菌。药敏试验显示23株大肠埃希菌对四环素的耐药率为62.5%(15/23),复方新诺明为56.5%(13/23),氨苄西林为56.5%(13/23)。所有菌株均对美罗培南和亚胺培南敏感。大肠埃希菌多重耐药率为56.52%(13/23)。PCR检测耐药基因携带率aadA1基因为100%,tetA基因为95.8%,aac(6')-Ib-cr基因为79.2%,CTX基因为70.8%,tetB基因为63.5%,Qnrs基因为58.3%,SHV基因为54.2%,qepA基因为41.7%,Sul基因为35%。所有菌株均不携带KPC基因、IMP基因和NDM1基因。有21株细菌检测到Ⅰ类整合子,其中11株细菌的整合子携带空基因盒。整合子携带的大多数基因盒编码DfrA和aadA基因,有1株细菌的基因盒编码OXA-1基因。结论医院污水中的大肠埃希菌存在多药耐药现象且Ⅰ类整合子携带率高,应引起高度重视。     

临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和Ⅰ类整合子的检测

目的了解产超广谱B．内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系。方法采用K—B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和Ⅰ类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型。结果检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44．4％。所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因（78．6％）,SHV型阳性的有2株（3．6％）,CTX-M型阳性的有48株（85．7％）,OXA型阳性的有1株（1．79％）,intl1阳性菌株有35株（62．5％）,占未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌最有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带Ⅰ类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因。     

132株铜绿假单胞菌来源、耐药性及耐药基因携带情况分析

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）的来源、耐药性及相关耐药基因的携带状况。方法回顾性分析132株PAE的来源;用ATB PSE-5药敏实验检测PAE耐药性;用PCR法检测其中16种耐药基因的表达情况。结果132株PAE中110株分离于呼吸道标本。耐药率最高的抗生素为替卡西林（40.9%）,共检出多重耐药菌株27株。PCR结果示TEM阳性110株,PSE-1阳性18例,AmpC阳性81例,Ⅰ型整合子阳性60例,OprD阳性71例,其余基因表达均为阴性。结论 PAE以呼吸内科送检标本和呼吸道标本多见,多对替卡西林耐药。TEM、PSE-1、AmpC阳性、Ⅰ型整合子、OprD是常见耐药相关基因。     

屠宰生猪多重耐药沙门菌I类整合子与耐药基因的检测

目的了解屠宰生猪沙门菌分离株多重耐药与I类整合子及耐药基因的携带关系。方法采用K-B纸片法对屠宰生猪78株沙门菌分离菌株进行22种抗生素敏感试验;应用PCR技术对沙门菌分离菌株进行I类整合子及耐药基因检测。结果78株沙门菌分离株中有41株(52.56%)对2种以上抗生素耐药,属于多重耐药株,强力霉素-四环素-卡那霉素-氯霉素是主要多重耐药谱;41株多重耐药菌中有19株(46.34%)携带I类整合子,tetB、aph(3)-IIa和Flor基因分别检出最高。结论沙门菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致。     

1993-2000年霍乱弧菌耐药整合子的分布状况

目的检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅳ类整合子及Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒在霍乱弧菌临床菌株中的分布，分析整合子对细菌耐药性的影响。方法纸片扩散法行药物敏感试验，PCR法检测50株临床菌株Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅳ类整合酶基因（intⅠ）阳性菌株，并对intⅠ1阳性菌株整合的耐药基因行序列分析。结果全部菌株至少对一种抗生素耐药。3株Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药基因盒PCR扩增得到1009bp的产物。序列分析表明，1009bp序列与已知的aadA 1c 100％同源，为对壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒；未检测到Ⅱ类整合子阳性菌株；50株临床菌株均含有第Ⅳ类整合酶基因，2株菌株第Ⅳ整合酶基因扩增得到2200bp产物，序列分析表明，在第Ⅳ类整合酶基因序列中含有一个插入片段IS1359转座酶基因。结论第Ⅰ类整合子存在于孟加拉国的临床致病弧菌中，第Ⅳ类整合子在霍乱弧菌临床菌株中分布广泛，整合子在细菌耐药中发挥作用。     

产超广谱β内酰胺酶临床分离株可转移多重耐药分子机制的研究

目的 研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)临床分离株可转移多重耐药性的分子机制。方法 采用E-试验条进行药敏检测，电转化试验筛选、分离耐药质粒，聚合酶链反应(PCR)扩增Ⅰ型整合子基因盒插入序列及其分子克隆和序列分析。结果 9个产ESBLs耐药质粒中有8个检测出了插入序列，其中7个携带了1～2种抗药性基因盒。包括氨基糖苷类钝化酶aacA4、aadA2和aadA5；甲氧苄啶钝化酶dhfrA12和dfrA17；利福平钝化酶arr-3；氯霉素外排蛋白cmlA6。基因盒功能与转化子耐药表型一致。结论 质粒定位和整合子介导的抗药性基因盒可能是导致ESBLs产酶株多重耐药性产生和(或)播散的重要原因。     

耐复方新诺明香港海鸥型菌中Ⅰ类整合子、磺胺类耐药基因(sul1、sul2)的检测

摘要：目的 了解香港海鸥型菌淡水鱼与蛙来源分离株磺胺类耐药性以及Ⅰ类整合子介导耐药的情况。方法 采用K-B纸片扩散法检测香港海鸥菌耐复方新诺明药物菌株,PCR方法扩增耐药菌株sul1、sul2和Ⅰ类整合子基因。结果 128株香港海鸥菌中共有20株耐复方新诺明药物,耐药率15.6%,耐药菌株中检测sul1阳性率90%,sul2阳性率55%,Ⅰ类整合子携带率80%。 结论 淡水鱼与蛙来源香港海鸥型菌菌耐磺胺的机制可能与Ⅰ类整合子、sul1、sul2基因有关。     

耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌临床株中CTX-M型ESBLs与Ⅰ类整合子的相关性

目的研究CTX-M型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）及Ⅰ类整合子在耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌中的分布,进一步探讨Ⅰ类整合子与CTX-MM型ESBLs的关系.方法运用K-B法检测阴沟肠杆菌临床株的耐药表型,双纸片协同试验（DDST）初筛产ESBLs的菌株,聚合酶链反应（PCR）扩增确证产CTX-M型ESBLs和含有Ⅰ类整合子的临床菌株,套式PCR及序列测定寻找携带CTX-M型ESBLs基因盒的Ⅰ类整合子.结果37株耐药菌中,21株菌产生CTX-M型ESBLs;20株菌含有Ⅰ类整合子;在13株同时产生Ⅰ类整合子和CTX-M型ESBLs的临床株中,3株菌CH4、CH11和Q1的CTX-M型ESBLs基因盒分布在Ⅰ类整合子上.结论Ⅰ类整合子的存在增加了ESBLs在临床株中水平播散的危险,是造成多重耐药株在院内暴发流行的重要原因.     

肉鸡源多重耐药空肠、结肠弯曲菌的耐药分子特征

目的了解肉鸡源空肠和结肠弯曲菌的耐药谱特征,检测多重耐药菌株Ⅰ类整合子/基因盒、gyrA基因突变位点、tetO基因、23S rRNA突变位点的分子特征。方法利用PCR检测弯曲菌Ⅰ类整合子/基因盒的存在情况;利用MAMA PCR技术检测弯曲菌gyrA基因第257位碱基的突变情况;针对弯曲菌23S rRNA的V区2075突变位点检测突变菌株。结果多重耐药菌株占分离株的94.5%。146株多重耐药空肠和结肠弯曲菌中Ⅰ类整合子检出率为98.6%,有78株菌株检出3种基因盒,1 000 bp+750 bp+500 bp+250 bp为主要谱型,所占比例为92.3%;有131株在gyrA喹诺酮类耐药决定区发生突变,突变率为92.9%。127株四环素耐药弯曲菌tetO基因的检出率为95.3%。81株红霉素耐药菌株中,23S rRNA的V区2075处突变发生率为96.3%。结论空肠和结肠弯曲菌分离株携带aadA2耐药基因盒,与氨基糖苷类药物的耐药性相关;gyrA基因突变、tetO基因的携带以及23S rRNA突变,与弯曲菌对喹诺酮、四环素和大环内酯类耐药密切相关。     

自发性细菌性腹膜炎病原菌大肠埃希菌74株药敏分析

目的分析肝病患者自发性细菌性腹膜炎病原菌大肠埃希菌的药敏检测,以供临床治疗参考。方法回顾性分析74例肝病患者经腹水培养筛选出的74株大肠埃希菌,按照院内感染和非院内感染检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性菌株,采用Kirby—Bauer法检测药物敏感性。结果74株大肠埃希菌中,36株为院内感染,38株为非院内感染,两组患者年龄、性别、病情严重程度比较无显著性差异,ESBLs阳性株分别为21株（58．3％）和18株（47．4％）,两组比较无显著性差异（P=0．3450）。大肠埃希菌产ESBLs率高,产酶大肠埃希菌呈多重耐药,对氟喹诺酮类药物、三代和四代头孢菌素耐药率高,对亚胺培南、阿米卡星、头孢美唑敏感率高。除复方新诺明外,院内感染和非院内感染的大肠埃希菌对常用抗菌素耐药率间无显著性差异。结论无论院内感染还是非院内感染,引起重型肝病患者自发性细菌性腹膜炎的常见病原菌大肠埃希菌对常用抗菌素的耐药性明显较高,氟喹诺酮类药物、三代和四代头孢菌素耐药率高,加用β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂敏感率可提高,头孢美唑、亚胺培南可作为首选抗菌素。     

犬源大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析

目的 了解犬源耐药性大肠杆菌的流行情况。方法 采集犬的肛拭子样品191份,进行大肠杆菌的分离鉴定及分群;对分离的大肠杆菌进行氨苄西林、多粘菌素B等13种抗生素药敏检测及耐药谱分析。结果 从样品中分离鉴定出254株大肠杆菌。细菌耐药性检测结果表明,对阿米卡星和氨苄西林的耐药率最高(77.56%,75.98%),对美洛培南和多粘菌素耐药率较低(3.54%,3.94%);其中187株菌表现为对3类以上抗生素的多重耐药表型(73.62%),仅有8株菌对13种药物都敏感(3.15%);宠物犬携带的大肠杆菌耐药率比工作犬更高。结论 研究获得了犬源大肠杆菌耐药性的基本流行病学数据,检测到了对6类12种抗生素耐药的泛耐药菌,首次发现了对包括多粘菌素在内的全部7类抗生素耐药的超广谱耐药犬源大肠杆菌,为深入研究动物源耐药性产生与传播机制以及指导伴侣动物临床用药提供了科学依据。     

临床痢疾志贺菌整合子检测及耐药基因盒序列分析

目的 检测印度东部1988、1995和2002年部分临床分离痢疾志贺菌中细菌耐药关系密切的1、2、3类整合酶基因及整合子携带的耐药基因盒的分布,分析整合子系统对志贺菌耐药的影响.方法 纸片扩散法检测实验菌株对药物的敏感性;应用PCR方法对16株临床耐药菌株进行1、2、3类整合酶基因(intI)筛选,对阳性样本可变区基因盒序列进行鉴定分析.结果 所有16株菌均耐4种及4种以上药物,包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、氯霉素类和喹诺酮类.13株菌检出1类整合酶基因,全部菌株含2类整合酶基因,即发现同时存在两种整合子结构菌株,未检测到3类整合酶基因.1类整合酶插入基因盒以blaara30-aadAl基因家族为主,分别对β-内酰胺类抗生素、链霉素、壮观霉素耐药;2类整合酶插人基因盒以dfrAl-satl组合为主,分别对甲氧苄氨嘧啶、链丝菌素耐药,同时在4株菌中发现dfrAl-satl-aadAl基因盒组合.结论 2类整合子普遍存在于临床志贺菌中.整合子与志贺菌的多重耐药具有密切相关性.     

多药耐药大肠埃希菌老年患者分离株抗菌制剂11种外排泵基因研究

目的了解多药耐药大肠埃希菌中外排泵基因的存在情况。方法微量稀释法检测耐药菌株的药敏结果,采用聚合酶链反应（PCR）扩增法,检测11种抗菌制剂外排泵基因：emrB、emrD、emrE、mdfA、sugE、mdtI、tehA、oqxA、qacE△1、qacEs、mr-2等11种抗菌制剂外排泵基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60%,对复方新诺明耐药率为95%,对第三代头孢菌素耐药率为100%（均为产ESBLs菌株）,外排泵基因检出率分别为emrB 95.0%、emrD 75.0%e、mrE 50.0%、mdfA 80.0%、sugE 70.0%、mdtI 80.0%、qacE△1 80.0%、tehA 80.0%、oqxA 15.0%,qacE、smr-2基因均未检测到,最少者检出1种基因,最多1株检出9种基因。结论本组分离的大肠埃希菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、氯霉素等抗菌药物呈多重耐药,可能与细菌携带多种抗菌制剂（包括灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等）外排泵基因相关。     

猪源肠出血性大肠杆菌的分离、鉴定及特性研究

目的探讨猪源肠出血性大肠埃希菌病原学特征。方法对所分离的菌株进行生化鉴定、药敏试验,并使用聚合酶链反应(PCR)技术检测毒力基因、耐药基因,同时对致病性的菌株进行外膜蛋白分型、REP-PCR和ERIC-PCR分析。结果从315株大肠杆菌中筛选到山梨醇阴性的EHEC21株,其中含有stx1基因的菌株有4株,含有stx2基因3株,含有eae基因的17株,外膜蛋白分型属于三个型,其中OMP-1型最多,有15株,OMP-2型3株,OMP-3型3株,REP-PCR和ERIC-PCR结果显示这些致病性菌株带型差异性较大,分属于不同的亚群。结论华中地区是养殖业比较发达的地区,而且人均消费猪肉比例也较高,EHEC的存在对人是一种潜在的威胁,应加强监测力度,防止该菌在人群中感染和流行。     

猪源产志贺毒素大肠埃希茵耐药性及超广谱β内酰胺酶基因型分析

目的了解我国猪源产志贺毒素大肠埃希菌（Shigatoxin-producingEscherichiacoli,STEC）产超广谱8内酰胺酶（Extended—spectruml β-lactamases,ESBLs）情况及其基因型。方法对22株分离自重庆地区2个规模化养殖场健康猪粪的STEC菌株进行药物敏感性检测、ESBLs表型确证及7种类型（blaSHV,blaLEN,blaOKP,blaTEM,blaCTX-M,blaGES及blaKPC）ESBLs基因型PCR检测和测序分析。结果22株携带stx2e的STEC菌株中2株对所有23种测试抗生素敏感,其余菌株除对亚胺培南和美罗培南敏感外,对其他抗生素均存在不同程度耐药。10株sTEc菌株（占45．45％）产ESBLs酶。PCR检测其中1株为blaCTX-M-1基因型,其余9株为blaCTX-M-9 ＋blaTEM-1基因型。结论重庆地区猪源STEC中存在较高比例的产ESBLs菌株。在加强人和动物STEC感染检测与监测的同时,应进行细菌耐药性监测。     

大肠埃希菌中新的耐药基因盒aadA23的变异

目的基于整合子-细菌耐药系统在细菌耐药机制中的重要作用,对成人腹泻患者的大肠埃希菌Ⅰ类整合子阳性菌株携带的耐药基因盒的基因特征进行分析.方法应用聚合酶链反应（PCR）检测Ⅰ类整合酶基因intⅠ阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序及用生物信息软件对序列进行分析.结果5株Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药基因盒PCR扩增得到1009 bp的产物.序列分析结果表明,1009 bp序列含有780 bp的开放阅读框,与已知的aadA23和aadA21分别有99.6%和99.5%的相似性,与aadA5只有66.4%相似,为对氨基糖苷类抗菌药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒,建议命名为aadA23b.结论随着选择环境不同,整合子整合的基因盒会发生变异,提示我们要用分子生物学的手段从基因水平分析耐药基因的遗传与变异.     

Variable gene cassette patterns of class 1 integron-associated drug-resistant Escherichia coli in Taiwan

This study characterized class 1 integrons in Escherichia coli in Taiwan. The stability and changes in gene cassettes inserted into integrons were also evaluated. The study included 436 clinical strains of E. coli isolated in 2002. Class 1 integrons were characterized by polymerase chain reaction and direct sequencing. Genetic localization of class 1 integrons was determined by conjugal transfer and Southern hybridization. The results indicated that 64% of E. coli isolates carried class 1 integrons. Molecular analysis revealed that the class 1 integrons harbored 13 different antimicrobial resistance gene cassettes and two unknown gene cassettes; the predominant cassettes were aadA and dfrA. Novel gene cassettes first recovered from E. coli were aacA4 and linF. Cassette arrays orfD-aacA4-catB8 and aadA1-linF were also observed. Gene cassette dfrA12-orfF-aadA2 was stable. The class 1 integron and dfrA17-aadA5 gene cassette were located on the same transferable plasmids and were capable of transmission. Therefore, the increased drug resistance of clinical isolates may be explained by antibiotic selective pressure and widespread presence of integrons. Under antibiotic selective pressure, gene cassette-mediated resistance may not be easily lost. The potential role of integrons in the uptake and dissemination of resistance genes by plasmid between species of bacteria may decrease the therapeutic effectiveness of antibiotics.     

Class 1 integrons and resistance gene cassettes among multidrug resistant Salmonella serovars isolated from slaughter animals and foods of animal origin in Ethiopia

The present study was undertaken to identify and characterize integrons and integrated resistance gene cassettes among multidrug resistant (MDR) Salmonella isolates from slaughter animals and food products of animal origin in Ethiopia. A total of 98 epidemiologically unrelated Salmonella isolates comprising 13 serovars were characterized using serotyping, phage typing, antimicrobial resistance testing and the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) method. Integron-PCR was used to detect the presence of class 1 and class 2 integrons in the MDR strains. The associated individual resistance gene cassettes were identified using specific PCRs and DNA sequencing. The location of the integrons was determined by Southern blot hybridization analysis. Among the Salmonella serovars, a high level of antimicrobial resistance was found to streptomycin (82.6%), tetracycline (75.5%), sulfamethoxazole (60.2%), spectinomycin (53.1%), ampicillin (42.8%), nalidixic acid (34.7%), nitrofurantoin (30.6%), trimethoprim (27.5%), gentamicin (20.4%) and ciprofloxacin (19.4%). Class 1 integrons were detected in 53.1% of the MDR isolates comprising serovars Anatum, Braenderup, Kentucky, Saintpaul and Typhimurium. Of the class 1 integron positive isolates 61.5% harboured the integron-associated gene cassettes: aadA2, aadA2+bla(PSE-1), dfrA1-aadA1 and dfrA12-orf-aadA2 (amplicon sizes 1000 bp, 1000+1200 bp, 1600 bp and 1900 bp, respectively). The chromosomally located aadA2 and aadA2+bla(PSE-1) resistance gene cassettes occurred exclusively in S. Typhimurium DT104 isolates, the other cassettes were found on large plasmids in several serovars. An aacCA5-aadA7 gene cassette array (amplicon size 1600 bp) was exclusively found in all MDR S. Kentucky strains of R type Str/SpeSmxGenNalAmpTetCipCef and this integron was shown to be chromosomally located. Results of the present study indicate that class 1 integrons carrying gene cassettes, which confer resistance to different classes of antimicrobials such as aminoglycosides, beta-lactams and trimethoprim are widespread among the MDR Salmonella serovars isolated from slaughter animals and food products of animal origin in Ethiopia indicating the important role of these genetic elements in the dissemination of multidrug resistance.