肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)的研制和应用

目的开发研制简易、快速、经济、准确的肺吸虫病诊断试剂盒。方法以肺吸虫成虫可溶性蛋白为检测用抗原,以胶体金标记羊抗人IgG为探针,采用自行设计的渗滤装置,检测病人血清中肺吸虫特异性IgG抗体;用深圳康百得生物技术有限公司提供的肺吸虫抗体ELISA检测试剂盒作比较。结果用本试剂盒检测90人份肺吸虫病人血清和100人份健康人血清,其敏感性为98.9%(89/90),特异性为100%(100/100),Youden’s指数为0.989。用该试剂盒分别检测25人份血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为24%(6/25)和4%(1/25);与姜片虫、囊虫、丝虫、肺结核病人血清均未见交叉反应。ELISA检测结果比较,符合率为93.5%,无显著性差异(χ2=0.7949,P>0.05)。结论肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)敏感性高、特异性强,可与ELISA相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,不需特殊仪器设备,非常适合临床检验和现场查病。     

快速ELISA法诊断血吸虫病的应用研究

目的对快速酶联免疫吸附试验（ELISA）的血吸虫病诊断实验条件进行优化,并观察其应用价值。方法同时将抗原、待测血清、HRP-SPA共置进行反应,替代常规ELISA法的分步反应。通过比较不同稀释度HRP-SPA的检测效果,确定其最佳工作浓度。观察待测血清和HRP-SPA不同混合反应时间对检测效果的影响,优化快速ELISA法的检测条件。用快速ELISA法、常规ELISA法和胶体染料试纸条法（DDIA）平行检测慢性血吸虫病人、华支睾吸虫病人及健康人血清,观察快速ELISA法的血吸虫病诊断实用价值。结果 HRP-SPA的最佳工作浓度为1∶2 000,待测血清和HRP-SPA最佳混合反应条件是37℃同步反应60 min。快速ELISA法检测慢性血吸虫病人血清抗体阳性检出率为93.8%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为4.0%,检测健康人血清的假阳性率为1.5%,与常规ELISA法和DDIA检测结果相似。结论快速ELISA法具有快速、简便等优点,是一种简便实用的血吸虫病免疫诊断方法。     

ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG_4的诊断价值

目的　探讨用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 的诊断价值。　方法　用华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行ELISA分别检测华支睾吸虫病患者 (76例 )血清中的特异性IgG和IgG4 抗体及日本血吸虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病患者 (分别为 63、3 5、41例 )和健康者 (65人 )血清中的交叉抗体。　结果　检测 76例华支睾吸虫病患者血清中IgG4 的检出率为 93 .42 % ,检测 65例健康者血清中的IgG4 均为阴性 ,分别与检测IgG结果比较差异均无显著性意义 (P均 >0 .0 5 ) ;与其它寄生虫病的交叉反应率 ,IgG4 显著低于IgG ;诊断效率及阳性、阴性预告值分别为 96.45 %、10 0 %和 92 .85 %。　结论　用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 具有较高的诊断应用价值。     

检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究

目的探讨检测患者血清特异IgG4诊断包虫病的效果.方法采用两种抗原(棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过ELISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异IgG4.结果粗抗原和抗原B检测棘球蚴患者血清特异IgG4的阳性率分别为94.4%和89.8%;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应.结论检测棘球蚴患者血清特异IgG4敏感性高,特异性强,具有较好的诊断价值.     

肺吸虫特异性IgG4快速检测方法的建立与应用

目的创建简易、快速、准确的肺吸虫病免疫诊断方法。方法用卫氏并殖吸虫成虫粗提液为抗原,以胶体金标记抗人IgG4单抗为检测探针,采用自行设计的垂直流渗滤装置,创建快速检测人血清肺吸虫特异性IgG4方法(P-IgG4-DIGFA),平行检测IgG作比较分析;以经典ELISA为对照,评价其诊断价值,应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后病人血清,评价其疗效考核价值。结果P-IgG4-DIGFA检测人血清中肺吸虫特异性IgG4的敏感性和特异性分别为95.2%(40/42)、100%(50/50),与血吸虫病患者血清的交叉反应率仅为2%(1/50),未发现与华支睾吸虫病有交叉反应。P-IgG4-DIGFA的敏感性和特异性略高于经典ELISA,差异无统计学意义(χ2=0.25,P>0.05);应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后3个月、6个月和12个月病人血清特异性IgG4,阴转率分别为0%、16.7%(1/6)和100%。结论金标渗滤法快速检测肺吸虫特异性IgG4,不仅操作简便、快速,而且敏感性高、特异性强,适用于临床检验和现场查病,对治疗后1年病人具有疗效考核价值,有待进一步开发应用。     

间接ELISA检测弓形虫感染鼠NTPase-Ⅱ抗体的研究

目的建立检测小鼠血清中刚地弓形虫NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体的间接ELISA法,探讨用于弓形虫感染早期检测的应用价值。方法以刚地弓形虫NTPase-Ⅱ融合蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,动态检测刚地弓形虫实验感染鼠血清NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体变化。试验设脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清对照。结果小鼠血清中的抗NTPase-Ⅱ抗体IgM于弓形虫感染后第3 d开始出现阳性反应,IgG抗体于感染后第7 d开始出现阳性反应,脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清特异性IgG阳性率分别为0、1.92%和0。结论间接ELISA检测弓形虫感染鼠血清NTPase-Ⅱ抗体的敏感性和特异性较高,有望应用于人感染弓形虫的早期检测。     

结核和肺吸虫抗体快速联检的鉴别诊断价值

目的探索结核抗体、肺吸虫抗体快速联合检测技术的诊断和鉴别诊断价值。方法结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)抗原、肺吸虫成虫可溶性抗原分别点样在硝酸纤维素膜上,以胶体金-蛋白A结合物为检测标志物,建立结核抗体、肺吸虫抗体联合检测的金标免疫渗滤法(TB/Pw-DIGFA);用TB/Pw-DIGFA检测肺结核病人、肺吸虫病人及健康人血清样本,以敏感性、特异性、灵敏度等指标考核其诊断价值。结果TB/Pw-DIGFA检测涂阳肺结核病人、涂阴肺结核病人和肺吸虫病人抗体的敏感性分别为85.9%(134/156)、83.0%(44/53)和95.6%(22/23);对肺结核病和肺吸虫病的特异性分别为92.6%(100/108)和99.1%(107/108);与TB-Dot平行检测结核病人和健康人群血清共94人份,符合率达96.8%(91/94),经Kappa检验,两者有高度一致性(K=0.935,P<0.001);与ELISA肺吸虫抗体检测试剂盒平行检测肺吸虫病人和健康人群血清共90人份,检测结果完全一致;未发现结核病和肺吸虫病人血清之间有交叉反应。结论TB/Pw-DIGFA诊断肺结核病和肺吸虫病具有较高的敏感性和特异性;该方法一次操作同时完成结核和肺吸虫二项特异性抗体测定,不仅检测效率高而且便于临床医生鉴别诊断。     

金标渗滤法快速检测曼氏裂头蚴病患者血清IgG

目的探索简易、快速的人曼氏裂头蚴病血清学免疫诊断方法。方法将曼氏裂头蚴可溶性抗原点样于硝酸纤维素膜上,以胶体金-SPA为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测病人血清中曼氏裂头蚴特异性IgG抗体。结果曼氏裂头蚴病病人血清阳性检出率为92.0%(23/25),健康人群血清假阳性率为2.0%(2/100);与囊虫病、肺吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、旋毛虫病病人血清的交叉反应率分别为40.0%(16/40)、52.0%(13/25)、13.3%(4/30)、8.0%(2/25)、6.7%(2/30),未发现与广州管圆线虫病、结核病病人血清有交叉反应;与ELISA平行检测74人份血清,两种方法检测结果的一致性有极显著性意义(К=0.871,P<0.001)。结论金标渗滤法检测曼氏裂头蚴病病人血清中特异性IgG,不仅简易、快速而且检出率高,但与肺吸虫病、囊虫病病人血清存在较高的交叉反应,需根据病人饮食史等流行病学资料进行鉴别诊断。     

登革重组抗原与登革IgG抗体反应的敏感性和特异性分析

目的对登革重组包膜蛋白(E蛋白)抗原与登革病毒IgG抗体反应的敏感性和特异性进行评估和分析。方法将登革1-4型重组E蛋白抗原包被ELISA反应板,用间接法ELISA检测登革病人及其它血清样本登革病毒IgG抗体。结果重组抗原能检测出登革病人体内IgG抗体水平和变化情况,对2004年中山登革热疫情病人恢复期血清IgG抗体检出率达100%,无一漏检;在曾流行过登革热的疫区,能检出登革病毒IgG抗体阳性血清;重组抗原与乙脑病人血清没有交叉反应;评估结果显示“登革病毒IgG抗体检测试剂”的灵敏度为95·93%,特异度为96·86%。结论登革1-4型重组E蛋白抗原对登革病毒IgG抗体具较高的敏感性和特异性,可作为“登革病毒IgG抗体酶联免疫诊断试剂盒”开发的原材料。     

肺吸虫病ELISA等5种免疫诊断方法的比较

<正> 近年来,我们在应用酶联免疫吸附试验间接法(ELISA)诊断肺吸虫病的研究中,证明具有高度的敏感性和特异性。为了评价ELISA,与其它4种免疫诊断方法间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CFT)、对流免疫电泳试验(CIE)和琼脂扩散试验(ID)进行了比较试验,现将结果报道如下。 一、RLISA与其它4种免疫诊断试验对痰检肺吸虫卵阳性患者,以及正常人血清的肺吸虫抗体试验结果见附表。     

检测华支睾吸虫特异性IgG4生物素-亲和素复合酶联免疫吸附法的建立及检测效能分析

目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、弓形虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病和曼氏裂头蚴病患者血清样本。以Ig G4-ELISA和Ig GELISA法为对照,比较3种方法用于诊断华支睾吸虫病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率。结果成功建立了用于检测华支睾吸虫特异性抗体的Ig G4-ABC-ELISA法,用此方法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G4的敏感性为90.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.8%,阴性预测值为97.0%,诊断效率为96.3%;Ig G4-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体敏感性为86.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为95.9%,诊断效率为95.4%;Ig G-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G的敏感性为94.0%,特异性为88.1%,阳性预测值为70.1%,阴性预测值为98.0%,诊断效率为89.4%。Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体的敏感性高于Ig G4-ELISA法(P0.05),特异性高于Ig G-ELISA法(P0.05)。结论 Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性抗体IgG4具有高度敏感性与特异性,在华支睾吸虫病诊断中具有较好应用价值。     

免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫抗体的研究

目的探索用免疫酶染色试验检测斯氏狸殖吸虫病抗体的敏感性和特异性。方法从病犬肺虫囊中收集斯氏狸殖吸虫成虫,冰冻切片,制作抗原片。采用免疫酶染色试验(IEST)检测斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清抗体。试验设健康大鼠血清对照及其他寄生虫病血清对照。结果斯氏狸殖吸虫病人和病鼠血清特异抗体阳性率分别为96.7%和97.4%。实验动物从感染后第2周开始抗体检测阳性,第4周阳性率达97.4%,持续10周。结论免疫酶染色试验敏感性高、特异性强,对斯氏狸殖吸虫病的早期诊断有重要参考价值。     

2种棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒应用效果比较

目的 观察不同厂家生产的2种棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒的检测效果。 方法 采用2种不同厂家生产的棘 球绦虫IgG抗体检测试剂盒检测相同数量的棘球蚴病人、 正常人血清, 以及卫氏并殖吸虫、 华支睾吸虫、 日本血吸虫和猪囊 尾蚴病人血清, 统计2种方法的特异性、 敏感性和交叉反应性。 结果 2个厂家生产的棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒的特 异性和敏感性均为100％。深圳康百得公司生产的试剂盒与卫氏并殖吸虫病、 华支睾吸虫病、 日本血吸虫病和猪囊尾蚴病 的交叉反应率分别为25.00％、 26.09％、 10.00％和87.50％; 珠海海泰公司生产的试剂盒的交叉反应率分别为5.00％、 13.04％、 20.00％和93.75％。2种试剂盒间, 卫氏并殖吸虫病检出率差异有统计学意义 （P ＜ 0.05）, 其他检出率差异均无统 计学意义 （P均 ＞ 0.05）。结论 2个厂家生产的棘球绦虫IgG抗体检测试剂盒均具有敏感性高、 特异性强、 简便快速等优 点; 但需进一步解决与其他寄生虫病的交叉反应问题, 以提高早期诊断的准确性。     

建立和评价ELISA法检测血清和唾液中旋毛虫IgG抗体的研究

目的 建立检测血清和唾液中旋毛虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.方法 应用方阵滴定法,筛选适宜的旋毛虫抗原(肌肉幼虫可溶性抗原、肌肉幼虫排泄分泌抗原、成虫可溶性抗原、成虫排泄分泌抗原)浓度、血清和唾液稀释度、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔、山羊抗人IgG抗体稀释度.共有20份旋毛虫感染兔、10份旋毛虫病患者血清和唾液用于这4种抗原的敏感性试验,20份健康兔与38份其他寄生虫感染兔和患者的血清和唾液用于这4种抗原的特异性试验.结果 这4种抗原适宜包被浓度依次为8.0 μg/ml、6.0 μg/ml、10.0 μg/ml、9.0 μg/ml.适宜的血清稀释度依次为1:100、1:200、1:50、1:200,唾液均用原液.适宜的山羊抗兔、山羊抗人IgG稀释度分别为1:2 500和l:2 000.这4种抗原检测旋毛虫感染兔血清和唾液的敏感性分别为100%和80%~100%,检测旋毛虫病患者血清和唾液的敏感性分别为100%和60%~80%;检测血清和唾液的特异性依次为81.03%、89.65%、77.59%、82.76%和93.10%、96.55%、89.65%、91.35%.结论 建立了检测兔和人血清及唾液中旋毛虫lgG抗体的ELISA方法.当采集血清标本有困难时,可将唾液替代血清用于检测旋毛虫病.     

华支睾吸虫病金标诊断试剂盒的研制和现场初步实验

目的　研制华支睾吸虫病金标快速免疫诊断试剂盒 ,评价其敏感性、特异性和现场试用效果。　方法　以华支睾吸虫成虫水溶性抗原、分泌排泄抗原和重组抗原磷酸甘油酸激酶 (PGK)作为诊断试剂 ,制备胶体金免疫层析检测 (Im-munochromatography test,ICT)试剂盒 ,检测患者血清和唾液中抗华支睾吸虫 Ig G,并与常规 EL ISA血清学检测方法和粪便虫卵检查法相比较。　结果　实验室检测临床确诊的华支睾吸虫病人血清中特异的 Ig G,3种抗原的敏感性均为10 0 %。天然抗原除与慢性血吸虫病人血清有较强的交叉反应外 ,与囊虫、包虫、弓形虫病人血清没有交叉反应。重组PGK抗原同慢性血吸虫病人血清也没有交叉反应。用分泌排泄抗原制备的 ICT检测试剂盒在流行区现场检测被调查者的血清和唾液 ,总符合率为 92 .31% ;ICT与 EL ISA血清检测的总符合率为 81.5 4 %。现场获取了 9人的粪便样本 ,其中 4人检出华支睾吸虫卵 ,其血清 ICT和 EL ISA检测均呈强阳性 ,另外未检出虫卵的 5人中 ,1人血清 ICT和 EL ISA均呈阳性 ,另 1人仅血清 EL ISA呈弱阳性。　结论　诊断华支睾吸虫感染的 ICT抗体检测技术 ,尤其是无创性唾液检测技术 ,简便、快速、准确、安全 ,优于血清 EL ISA检测和粪便虫卵检测 ,适用于临床检验和现场大规模流行病     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG_4考核疗效的比较研究

目的探讨ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法,用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常人和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ＞０．０５）;用ＳｊＭＡｇ和ＫＬＨ分别检测治疗后１２个月血清中ＩｇＧ和ＩｇＧ４的阴转率均显著高于ＳＥＡ（Ｐ＜０．０１）、检测治疗后２４个月血清中ＩｇＧ４的阴转率均达９７．６％。结论ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２具有与ＳＥＡ相似的诊断价值和较高的疗效考核价值;特异性ＩｇＧ４可能系一种疗效敏感抗体,可望成为疗效考核评价指标。