白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法常规培养肺腺癌A549细胞(购于中国科学院细胞生物学研究所)至对数生长期,加入不同浓度的Res(终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L),以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应(RT-PCR)检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度(10、30、100 mg/L) Res可抑制A549细胞增殖; Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量(10、30、100 mg/L)的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组比较,不同剂量Res(10、30、100 mg/L)诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

PEDF对肺鳞状细胞癌SK-MES-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的: 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)对肺鳞状细胞癌(鳞癌)SK-MES-1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,阐明PEDF与肺鳞癌发生发展的关系。方法: 培养SK-MES-1细胞,设不加PEDF的细胞为阴性对照组,PEDF干预组细胞分别加入180、360和720 nmol·L^-1 PEDF;MTT法检测各组SK-MES-1细胞增殖抑制率,细胞侵袭实验测定阴性对照组和720 nmol·L^-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数,倒置显微镜观察各组SK-MES-1细胞形态学,流式细胞术检测各组SK-MES-1细胞凋亡率。结果: PEDF干预组细胞增殖抑制率均显著高于阴性对照组(P<0.01),不同剂量PEDF干预组间比较差异也有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组细胞贴壁生长良好,PEDF干预组细胞排列逐渐稀疏,形态改变明显。720 nmol·L^-1 PEDF干预组SK-MES-1细胞穿透数(31.6±15.8)低于阴性对照组(75.4±19.3),差异有统计学意义(P<0.01)。随着PEDF干预剂量增加,细胞凋亡率逐渐升高,不同剂量PEDF干预组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: PEDF抑制SK-MES-1细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,对肺鳞癌生长和转移发挥对抗效应。提示PEDF可能成为肺鳞癌患者预后判定、抗癌治疗的有效因子。     

重铬酸钾对人肺腺癌A549细胞hMGMT蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制效应以及对O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(hMGMT)蛋白表达的影响.方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定9种不同浓度K2Cr2O7,(0.000、0.010、0.040、0.160、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000.μmol/L)对A549细胞的增殖抑制率;用损伤修复试验观察在不同浓度K2Cr2O7,作用下人肺腺癌A549细胞的划痕修复情况;以β-actin为参照,应用Western blotting技术检测不同浓度K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞hMGMT表达的影响.结果:MTT比色法检测显示,大于0.625μmol/L浓度组K2Cr2O7,可抑制细胞活性,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).损伤修复试验显示,与空白对照组比较,0.625、1.250.2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,抑制细胞损伤修复,而0.312、0.160、0.040μzmoL/L的K2Cr2O7促进细胞损伤修复.Western blotting显示,0.312、0.160、0.040 μmoL/L的K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达具有促进作用,0.625、1.250、2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达具有抑制作用.结论:低浓度的K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞的增殖、损伤修复和hMGMT蛋白的表达呈现低剂量兴奋效应;高浓度K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达则呈现抑制作用.     

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

黄芪总苷对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究黄芪总苷(TA)对人肺腺癌A549细胞增值及凋亡的影响.方法:采用不同药物浓度作用于人肺腺癌A549细胞,应用MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析药物对细胞的影响.结果:TA对A549细胞有明显的生长抑制及凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性.DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带.结论:在一定条件下,TA可抑制人肺腺癌细胞增殖,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性,同时可诱导其凋亡,凋亡可能与细胞周期阻滞有关.     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

洛铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的实验研究

目的探讨洛铂(LBP)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用机制。方法取对数生长期的A549细胞分为阴性对照组和实验组(分别加入2.5、5和10μmol/L LBP)。采用倒置相差显微镜观察各组A549细胞形态学改变,利用流式细胞仪检测各组A549细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡A549细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果显微镜下观察到LBP抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪结果显示LBP诱导A549细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性;RT-PCR结果显示LBP可使A549细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,二者呈负相关。结论 LBP明显诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,通过线粒体途径参与其凋亡过程。     

Effects of paclitaxel on cell proliferation and apoptosis and its mechanism in human lung adenocarcinoma A549 cells

INTRODUCTION Primary bronchogenic carcinoma is one of thecommonest malignancy tumors in the world.The incidence and mortality rate are rising in recent30 years. Adenocarcinoma accounts for about 25%of all primary bronchogenic carcinomas, the curativerate is not ideal by traditional chemotherapy and ra-diotherapy[1-4]. Paclitaxel is a extensive anti-cancerdrug whose mechanism is anti-microtubules and sta-bilizes cell microtubules specially, and has also beenused widely in ovarian cancer, b…     

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloids from tripterygium hypoglaucum hutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响.方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性.流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高.结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡.     

吡咯烷二硫氨基甲酸对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的:探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及可能机制。方法:不同浓度PDTC(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)干预A549细胞24h、48h、72h后,MTT法检测细胞生长抑制率,Westernblot和免疫细胞化学法分别检测PDTC干预48h后A549细胞凋亡抑制基因bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:随着PDTC干预浓度的增大和时间延长,A549细胞生长抑制率增加(P<0.05、0.01);PDTC干预后Bcl-2及PCNA蛋白表达均下降,呈剂量依赖性(r=-0.980,P<0.01;r=-0.977,P<0.01)。结论:PDTC可抑制人肺腺癌A549细胞生长,其机制可能与Bcl-2表达下调及抑制细胞增殖有关。     

丁酸、全反式维甲酸对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的观察丁酸(BA)、全反式维甲酸(ATRA)单用及联合应用对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响.方法采用绘制细胞生长曲线法、MTT比色法.结果经BA、ATRA处理后A549细胞生长曲线趋于平坦,细胞增殖速度、倍增时间降低,72h、120h生长抑制率显著增高,并呈剂量依赖性,其中BA和ATRA联合处理作用后72h、120h生长抑制率分别为(72.77±2.54)%、(84.03±1.58)%,较等浓度单药BA、ATRA显著增强.结论 BA对肺腺癌A549细胞具有与ATRA相近的增殖抑制作用,BA和ATRA联合应用具有良好的协同增效作用.     

肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

目的：观察肺腺癌A549细胞培养上清液（TSN）对人单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响。方法：制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原；人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组，分别于培养全程或晚期（第7d）加入TSN或第4d加入冻融抗原冲击致敏，制备MoDC瘤苗，第9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应（MLR）、MoDC诱导的细胞毒性T细胞（CTL）抑瘤活性、培养上清液中IL－12含量。结果：培养全程加TSN的MoDC，相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原（HLA－DR）明显下调，凋亡率明显升高，同时，激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL－12的量均显著低于正常培养组；培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC，均无上述影响；脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗，表型明显上调、各项免疫指标明显升高，诱导出了高效的抗A549免疫应答。结论：TSN能干扰MoDC成熟过程，下调基表型表达，诱导其凋亡发生、抑制其介导的抗肿瘤免疫应答；而脱离TSH影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高铲的抗瘤免疫应答。     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

过表达NK4对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:构建含有NK4基因的重组慢病毒载体(LV-NK4),感染人肺腺癌A549细胞后观察NK4基因的表达,并研究NK4对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响?方法:采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的慢病毒载体GV358,脂质体介导法将其与慢病毒包装系统共转染293T细胞,包装为慢病毒,感染A549细胞,观察感染效率?采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测NK4基因和蛋白的表达?建立A549(空白对照组)?A549/NK4(实验组)?A549/LV(空病毒对照组)3组细胞;RT-PCR 法测定各组细胞c-met基因水平;噻唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞第1~7天增殖情况,绘制生长曲线;流式细胞术检测各组细胞凋亡率?结果:经基因测序证实LV-NK4构建成功;感染后A549细胞中可见明显的NK4蛋白表达,Western blot显示50 000处有蛋白条带;RT-PCR结果显示实验组NK4 mRNA水平较空白对照组和空病毒对照组明显升高(P < 0.01),c-met mRNA水平较其他两组下降(P < 0.05);MTT结果显示实验组细胞从第4天起生长比正常对照组和空病毒对照组均缓慢(P < 0.05);流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率高于正常对照组和空病毒对照组(P < 0.05)?结论:成功构建NK4慢病毒载体且有效转染A549细胞;NK4具有抑制A549细胞增殖并促进其凋亡的作用,可能与下调c-met基因水平有关?     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。     

芒果苷对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究芒果苷对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,为深入研究芒果苷抗肿瘤机制提供试验基础。方法 0、50、100、150、200、250μmol.L-1芒果苷处理肺癌A549细胞24或48 h后,采用四甲基偶氮噻蓝法检测芒果苷对A549细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测芒果苷作用后细胞凋亡情况;荧光显微镜观察芒果苷作用后细胞形态变化。结果随着芒果苷浓度的增加和作用时间的延长,对A549细胞的增殖抑制作用增加,呈现明显的时间-剂量效应关系;流式细胞检测细胞凋亡分析表明,随着芒果苷浓度的增高,A549细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均逐渐增加,与0μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光电子显微镜观察芒果苷作用后的细胞中可见核固缩、核碎裂等典型的凋亡改变。结论芒果苷在体外能有效抑制肺癌细胞生长,其机制与其诱导肺癌细胞凋亡有关。