建立高分辨熔解曲线分析法检测SF3B1基因突变

目的:建立高分辨熔解曲线分析法(high-resolution melting analysis,HRMA),检测骨髓增生异常综合征(my-elodysplastic syndrome,MDS)患者中SF3B1基因的突变。方法:针对SF3B1基因热点突变位点(密码子E622、H662、K666和K700)设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增反应体系,对30例初诊MDS患者的骨髓标本进行PCR扩增,应用HRMA对相应PCR产物进行突变检测,并对HRMA检测结果进行DNA测序验证。结果:HR-MA检测发现2例MDS患者存在异常的熔解曲线,经DNA测序验证1例为K666M杂合子突变,另1例为K700E杂合子突变。所建立的HRMA技术检测SF3B1基因突变的灵敏度为0.05(5%)。结论:成功建立检测SF3B1基因突变的HRMA技术,可快速筛查MDS标本中的SF3B1基因突变。     

骨髓增生异常综合征患者FLT3基因及FLT3／ITD基因突变的检测及价值

目的　研究骨髓增生异常综合征 (MDS)患者DNA水平FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变情况。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)联合单链构象多态性 (SSCP)分析 3 6例MDS患者FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变。结果　 3 6例MDS患者中 9例 ( 2 5 %)FLT3基因检测阳性 ,难治性贫血伴原始细胞增多 (RAEB)、慢性粒单细胞白血病和转变中的RAEB(RAEBT)组FLT3基因检测阳性率显著高于难治性贫血 (RA)和环形铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS)组 (P <0 0 2 5 )。FLT3基因检测阳性MDS转化为急性髓性白血病 (AML)时间显著短于FLT3检测阴性患者 (P <0 0 5 )。 3 6例MDS患者中有 2例 ( 5 6%)出现FLT3 /ITD基因突变 ,RAEB及RAEBT各 1例。结论　部分MDS患者可检测出FLT3基因表达和FLT3基因突变 ,FLT3基因及FLT3 /ITD基因突变检测可能有助于MDS的预后判断     

骨髓增生异常综合征患者的骨髓微血管密度检测意义

目的：观察骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓微血管密度（MVD），分析微血管密度与MDS分型及治疗的关系。方法：MDS低危组25例，高危组21例及正常对照组20例，采用免疫组化法标记骨髓组织中血管内皮细胞。在光学显微镜下计数骨髓微血管数，取平均值为MVD。结果：治疗前低危组MVD为（18．26±2．62）／HP，高危组MVD为（25．75±3．27）／HP，对照组MVD为（8．10±2．93）／HP；低危组和高危组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001）；低危组与高危组比较差异亦有统计学意义（P〈0．001）；低危组及高危组治疗后分别有36％和81％的患者MVD降低，两者对治疗的反应有明显差异。结论：骨髓增生异常综合征患者骨髓血管新生明显，MVD与MDS分型及疗效有密切相关。     

骨髓增生异常综合征患者基因突变特征分析

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因突变与临床特征和对预后的影响.方法 收集新疆医科大学第一附属医院2017年1月至2020年12月就诊的MDS患者210例,采用二代测序技术检测MDS相关的34种突变基因,分析基因突变特点,及与临床特征和修订的国际预后积分系统(IPSS-R)的关系,以及对预后的影响.结果 2...     

骨髓增生异常综合征患者基因突变及临床特征分析

目的 探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者基因突变谱和临床特征及两者间的相关性.方法 在62例初发MDS患者中利用二代测序技术对34种髓系高频基因突变情况进行检测;统计分析突变阳性组和阴性组在染色体核型、临床特征、实验室检查结果、MDS亚型、IPSS-R积分等方面的差异...     

WT1基因在白血病和骨髓增生异常综合征的表达及其意义

Wilms’肿瘤基因(WT1)是与儿童Wilms’肿瘤相关的一种肿瘤抑制基因。然而，野生型WT1基因在淋系和髓系起源的白血病细胞中高度表达，WT1 mRNA可作为监测白血病微小残留病(MRD)和骨髓增生异常综合征(MDS)疾病进展的一种肿瘤标志。推测在白血病中WT1基因起癌基因功能。WT1基因产物作为有效的肿瘤抗原能诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)发挥抗肿瘤效应。     

骨髓增生异常综合征患者中TET2基因突变的检测与临床意义

目的:探讨TET2基因在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者中突变发生率及对预后的影响。方法:随机选取95例初诊MDS患者,采用R显带技术进行常规核型分析(CC),PCR技术及直接测序法检测基因序列;分析该95例初诊MDS患者的临床和实验室特征。结果:95例初诊MDS患者中11例发生TET2基因突变,突变率为11.6%,其中6例发生错义突变,1例2次错义突变,2例无义突变,2例同义突变,5例TET2基因突变位点位于3号外显子上。95例MDS患者中位随访时间为13个月(2～73个月),伴有TET2基因突变的MDS患者中位生存期短于未发生该基因突变者且生存率较低(9个月vs 15个月,P<0.05)。结论:TET2基因突变是一种新型分子学异常,伴有该基因突变的MDS患者预后较差。     

53例骨髓增生异常综合征患者WT1基因表达与临床相关性研究

目的：探讨WT1基因与骨髓增生异常综合征（MDS）发病和病情进展的关系及临床意义。方法：应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，检测53例MDS患者和10例正常人骨髓中WT1mRNA表达，并进行半定量分析。结果：MDS患者WT1mRNA表达阳性率和表达水平均高于正常对照组。WT1mRNA表达阳性率在MDS-RA和MDS-RAS组，明显低于MDS-RAEB和MDS-RAEB-t组，其表达水平从MDS-RA和MDS-RAS组向MDS-RAEB组和MDS-RAEB-t组逐渐升高。结论：WT1基因表达与MDS病情发展有关。WT1基因与疾病进展关系密切，是临床上对MDS病情的高危评估、预测病情变化和动态监测治疗效果及判断预后的重要指标。     

骨髓增生异常综合征患者HLA-DR15基因的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者HLA-DR15基因的表达状况。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)检测MDS患者(n=59)HLA-DR15基因的表达,并与健康对照组(n=104)进行比较。结果MDS组HLA-DR15基因表达率为44.07%,明显高于健康对照组的12.5%(P<0.01)。其中难治性贫血(RA)患者HLA-DR1的表达率为16/34,环状铁粒幼细胞性贫血(RAS)患者为4/6,原始细胞过多难治性贫血及其转化型(RAEB/RAEB-T)患者为4/12,CMML患者为2/7。低危组HLA-DR15表达比例高于高危组(P<0.05)。MDS核型异常和核型正常者HLA-DR15基因表达无差异(P>0.05)。结论MDS患者HLA-DR15阳性率明显增高;HLA-DR15基因可能是MDS的易感基因,可能可作为MDS的一个预后评价指标。     

骨髓增生异常综合征贫血患者Hepcidin的检测意义

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)贫血患者Hepcidin的表达及其与血清铁蛋白(SF)间的关系,为临床诊治铁紊乱相关的贫血寻找理论依据.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫法分别测定45例MDS贫血患者及60例正常对照组血清中的Hepcidin,血清铁蛋白水平.结果:正常对照组中Hepcidin水平...     

男性特发性无精症病人YRRM1基因的检测

目的 :建立对男性无精症病人YRRM1的基因缺失诊断方法。方法 :运用多聚酶链式反应对 10例男性无精症或严重少精症的患者进行YRRM1基因位点缺失检测。结果 :10例发现 1例YRRM1基因发生缺失 ,其它病例未发现。结论 :YRRM1基因位点检测特异性位点的缺失和男性无精症有一定的相关性 ,可以对男性无精症和严重少精症进行一定的病因诊断     

SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义

［摘 要］ 目的：检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓组织中SHIP、Caspase-3 mRNA的表达,探讨其表达与MDS发病及向白血病转化过程的关系。方法：根据国际预后评分系统（IPSS）选择62例MDS患者,其中低危（low-risk）组20例、中危1（Int-1）组12例、中危2（Int-2）组13例和高危（high-risk）组17例,采用RT-PCR法检测62例MDS患者及30例健康正常者(对照组)骨髓单个核细胞(BMNC)中SHIP mRNA及Caspase-3 mRNA的表达水平,并分析两者之间的关系。 结果：MDS低危组和中危1组BMNC中SHIP mRNA表达率（100%,100%）及表达水平(4.467±2.899,4.529±1.975)分别与对照组（100%,4.623±2.979）比较差异均无统计学意义（P>0.05）;在中危2组和高危组中,BMNC中SHIP表达率（92%,88%）下降,表达水平(2.124±1.880,2.574±1.807)低于对照组（P<0.05）。Pearson相关分析,MDS患者BMNC中SHIP mRNA与Caspase-3 mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.714,P<0.05）。随骨髓原始细胞比例升高,SHIP mRNA表达水平降低(F=3.7,P<0.05) ,不同性别（t=0.940,P>0.05）、不同年龄（t=1.419,P>0.05）患者SHIP mRNA表达水平差异无统计学意义。 结论：SHIP在高危MDS患者BMNC中呈低表达或不表达,其表达水平可以作为判定MDS预后的一个指标。     

黑色素瘤抗原-1、3基因在肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的研究黑色素瘤抗原(MAGE)-1和MAGE-3基因在肝内胆管细胞癌(IHCC)组织中的表达,探讨MAGE-1、MAGE-3基因与IHCC患者临床指标的关系。方法RT-PCR方法检测20例IHCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因表达,对全部RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1、MAGE-3基因。分析MAGE-1、MAGE-3基因表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜、肿瘤形态以及乙肝病毒表面抗原等临床指标的关系。结果20例IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率分别为35%和45%,显著高于癌旁组织(0)(P<0·01)。IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜以及乙型肝炎病毒感染等指标均无关(P>0·05);MAGE-3基因表达的阳性率与肿瘤形态有关(P<0·05)。结论MAGE-1、MAGE-3基因在IHCC患者肝癌组织中特异性高表达,MAGE-1、MAGE-3基因可能成为IHCC患者免疫治疗的攻击靶点。     

靶向SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物筛选

目的 构建SF3B1突变等位基因敲除的人葡萄膜黑色素瘤细胞模型,筛选靶向抑制SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物。方法 通过主成分分析法对来自TCGA数据库的葡萄膜黑色素瘤患者分成SF3B1野生型和突变型两组进行转录组可变剪接分析,研究SF3B1突变对可变剪接的影响。通过CRISPR-Cas9技术敲除Mel202细胞株的SF3B1突变等位基因,Sanger测序明确基因编辑的序列。MTT法和克隆形成实验检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的增殖,RT-PCR琼脂糖电泳结合Sanger测序检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的可变剪接事件。MTT法从上市药物库和生物活性化合物库筛选对SF3B1突变细胞具有选择性抑制活性的药物。结果 选择性敲除Mel202细胞SF3B1突变等位基因促进了细胞的增殖（5.47±0.32 vs 10.17±0.27）,改变了ZDHHC16和DYNLL1转录本的可变剪接。化合物库筛选结果显示13个化合物对SF3B1突变的Mel202细胞具有选择性的抑制活性（Fold change≥2）,其中上市药物tetrandrine和lapatinib显示了较好的量效曲线。结论 本研究为SF3B1突变的葡萄膜黑色素瘤患者提供了细胞筛选模型和潜在的个体化治疗药物。     

MEIS1基因在急性白血病中的表达及其意义

目的 研究MEISI基因在急性白血病(AL)中的表达及其意义。方法 采用半定量RT-PCR方法分别检测HEL细胞系(HOX阳性细胞株)、20名健康对照者及92例AL患者MEISI基因的表达。结果 20名正常人骨髓单个核细胞(MNC)中无MEISI基因表达(阴性),HEL细胞系阳性。在92例AL中,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者MEISI基因表达阳性率为5．26％(2／38);急性髓细胞白血病(AML)患者阳性率为42．59％(23／54);表达阳性者完全缓解(CR)率(39．13％)明显低于阴性者(74．19％)。结论 MEISI基因表达与AML有一定的相关性;MEISI基因表达阳性者CR率低,提示MEISI基因有一定的预后意义。     

骨髓增生异常综合征采用WHO新分型建议的临床意义探讨

~~骨髓增生异常综合征采用WHO新分型建议的临床意义探讨(英文)@黄一虹$徐州医学院附属医院血液科!江苏徐州221002 @李德鹏$徐州医学院附属医院血液科!江苏徐州221002 @陈令松$徐州医学院第二附属医院!江苏徐州221006 @鹿群先$徐州医学院附属医院血液科!江苏徐州221002~~~~[ 1 ] Greenberg PL. The myelodysplastic syndromes. In; Hoffinan R,Benz E, Shattil S, et al, eds. Hematology: Basic principles and Practice[M]. 3rd ed. New York, NY: Churchill Livingstone, 2000,1106-1129. Chinese [2] Benn…