海马类药材的分子遗传标记鉴定研究

应用古DNA研究技术从5种海马药材中提取DNA,用PCR技术扩增约450bp的12SrRNA基因片段和约490 bp的细胞色素b基因片段。对扩增产物进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析和DNA序列分析。用RFLP分析方法可以鉴别2种海马,用DNA序列分析方法得到的分子遗传标记可以鉴别所有5种海马。对其它动物类药材的鉴定有一定参考价值。     

DNA指纹图谱技术及其在中药研究中的应用

目的介绍DNA指纹图谱技术，阐述其在中药研究中的作用。方法综合介绍建立DNA指纹图谱的一般技术步骤，结合近年来国内外在这方面的研究，探讨其在中药有关领域的应用。结论作为中药指纹图谱的一个组成部分，DNA指纹图谱这一现代分子生物学技术在现代中药研究中有其独特的作用，目前应用于中药研究的DNA指纹技术有RFLP、PCR、RAPD、PCR—RFLP、RAPD-RFLP、AFLP等。DNA指纹图谱技术在药材鍪别、GAP实施、道地药材研究、遗传育种和种质资源研究及中成药质量控制等领域有重要价值和广阔的应用前景。     

新疆中麻黄DNA片段的克隆与序列分析

对新疆3种中药麻黄(Ephedra)进行了RAPD分析，回收随机引物s13的PCR产物(750bp左右)，克隆到pMD18-T载体中，经电泳鉴定后进行序列分析。结果表明，已成功克隆并获得了新疆中麻黄771bp的DNA片段，对中药材的鉴定和标准化提供依据。     

新疆甘草DNA片段的克隆、序列分析及其基因组DNA文库的构建

目的克隆新疆甘草DNA片段 ,构建新疆甘草基因组DNA文库。方法对新疆产 4种甘草进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析 ,回收甘草随机引物s12 1的PCR产物中 5 0 0bp左右的带 ,克隆到pMD18 T载体中 ,经电泳鉴定后测定序列 ,进行序列分析。用Sau3AI对所提新疆甘草基因组DNA进行酶切 ,回收 15～ 2 3kb之间的酶切产物片段 ,然后与LambdavectorBamHIArms进行连接、包装形成文库 ,计算文库重组噬菌体滴度、包装效率。结果获得了甘草 4 90bp的DNA片段 ,所建文库的重组噬菌体滴度为 3× 10 6pfu/ml、包装效率为 6× 10 6重组子 /μg载体DNA。结论成功克隆了新疆甘草DNA片段 ,并构建了基因组DNA文库 ,为进一步研究奠定了基础。     

三角帆蚌及其相似种的分子标记技术(RAPD)鉴别

目的以30个随机引物对三角帆蚌及其相似种进行鉴别分析。方法随机扩增多态DNA(RAPD)分析。结果最终筛选出2个引物,分别能扩增出1～5条大小不等的片段,片段长度在250～1000bp之间。结论RAPD的技术方法能鉴别三角帆蚌软体组织与相似种软体组织。     

弱精子症病人精子线粒体DNA 4977-bp缺失分析

人线粒体DNA(mt DNA)为16569bp的闭环双链DNA分子。它的全部核苷酸序列已经清楚,其完整的限制酶谱及mt DNA的RFLP资料也已建立,但mtDNA突变与人类疾病的研究却远远落后于人们对核DNA异常引起的遗传病的认识。近年来,随着PCR技术的应用和发展,mtDNA的研究有了突破性进展,1988年Wallace等人首次     

检测CYP2A6基因多态性的PCR技术的基因型方法

综述检测CYP2A6基因多态性的PCR技术的基因型方法。CYP2A6基因多态性存在于白种人、东方人及非洲裔美国人群中 ,包括CYP2A6 1至CYP2A6 12 ,总共 12个变异等位基因。本文列举了检测CYP2A6基因型的不同的DNA来源、引物和限制性内切酶。已开发PCR技术结合诊断性限制性内切酶分析 (RFLP)如两步PCR和一步PCR RFLP方法检测CYP2A6基因型。此外 ,尚有PCR SSCP +RFLP及直接DNA测序方法。     

野生天麻和栽培天麻的DNA指纹图谱分析

目的对野生天麻和三种人工栽培天麻进行DNA指纹图谱的鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建议天麻品种的检定方法.方法采用RAPD技术.结果从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到209个遗传标记.DNA指纹图谱显示,各样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论RAPD技术可作为天麻鉴别的参考方法.     

分子生物学技术在中药领域的应用及其对中药新药研究的影响

分子生物学技术在中药领域已得到广泛应用,并对中药新药研究产生了深刻的影响.该文介绍了 PCR, RFLP, PCR- RFLP, RAPD等技术和方法在中药的分子鉴定与中药质量控制、中药进化与系统学及中药新品种选育中的应用,以及基因干预和蛋白质组学在中药作用机理研究与新药开发研究方面的应用和影响.     

中药材蒲公英及其混淆品的DNA指纹鉴别研究

采用分子生物技术包括任意引物聚合酶链式反应（AP－PCR）和随意扩增多态性DNA（RAPD）方法扩增蒲公英及其六种土公英混淆品的基因组DNA，获得清晰可靠的DNA指纹图谱。根据琼脂糖胶上显示的DNA带型差异可鉴别蒲公英和土公英混淆品。     

DNA芯片技术用于贝母的基因分型和种类鉴别

目的通过对贝母几个种遗传多态性的研究来开发在分子水平上用于鉴别贝母基因型及不同种类的DNA芯片技术。方法用PCR扩增法和DNA直接测序法确定核苷酸多态性,用DNA芯片进行基因检测。结果首先提取来自多种贝母根茎的基因组DNA,对26S rDNA基因D2与D3区的多态性片段进行扩增和测序,然后将不同种属多态性片段的特异性寡核苷探针点置于经多聚赖氨酸处理包被的芯片。用来自不同种贝母的荧光素标记的PCR产物与DNA芯片进行杂交,可在芯片特定位置检测到不同种贝母的荧光信号。结论本研究显示DNA芯片技术可为植物种属的验证与质量控制提供一种快速、高通量的检测工具。     

PCR技术应用中的注意事项

PCR(聚合酶链反应)是美国petus公司的karymullis等人在1985年创建的核酸分析技术,近年来得到了飞速地发展.这一技术建立在DNA复制理论的基础上,用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段,其优点是无需进行克隆化即可有目的地扩增基因内某一特异的DNA片段.PCR反应包括3个过程:①变形,②退火,③延伸.PCR是模拟DNA体内复制过程,在DNA聚合酶的作用下,进行特定DNA的体外复制.PCR能将极微量DNA在体外扩增几百万倍,实际操作中稍有不慎就有可能出现假阴性或假阳性.因此在实际工作中一定要严格按照操作说明,尽量避免假阴性及假阳性和污染的存在.     

耐药性结核分枝杆菌的分子生物学检测方法研究进展

结核病的重新流行使人类健康再次面临严重威胁,为提高抗结核药物的治疗效果,临床需要对结核分枝杆菌的耐药性进行快速鉴定。本文阐述了基于DNA测序技术(DNA直接测序、焦磷酸测序技术)、DNA扩增技术(包括巢式 PCR、PCR-SSCP 法、多位点酶切联合PCR-SSCP法、异源双链形成法、分子信标法等)、分子杂技术(包括限制性片段长度多态性(RFLP)分析、多列探针检测法(LiPA)、基因芯片技术)和 DNA 信号放大技术等分子生物学检测方法在检测结核分枝杆菌耐药性方面的研究进展,以期为临床提供一定的方法参考。     

限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测人细胞色素氧化酶2D6药物代谢相关基因位点多态性

目的建立测定人细胞色素氧化酶 2D6(CYP2D6)基因多态性的限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction?restriction fragment length polymorphism,PCR?RFLP)检测方法。方法通过增加 PCR扩增体系中 DNA模板上样体积、降低引物浓度以及减少限制性内切酶的用量等方法改进、优化实验条件,建立以 PCR?RFLP法为基础的肝药酶 CYP2D6基因型检测方法。结果采用 PCR?RFLP法能够检测 CYP2D6?2、CYP2D6?10和 CYP2D6?14基因型,且过程简便,经济实用。结论该方法检测 CYP2D6药物代谢相关基因位点基因型具有简便、高效、准确和经济的特点,可在临床及实验室推广使用。     

鱼腥草种质资源的RAPD分析

目的分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用RAPD技术对92份鱼腥草种质资源进行检测。结果34个随机引物中有32个引物(94.1%)扩增产物具多态性。34个引物共得到200条扩增DNA片段,其中93.5%的片段具多态性。每个多态性引物平均可扩增出5.8个多态性片段。峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗传相似系数(genetic similarity,GS)分别为0.521和0.572,二者种间GS值为0.517。峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度最高,其平均GS值达0.530。栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高。聚类分析表明,利用RAPD技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为14类。其中,绝大多数(62个)聚为一类,且根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论(1) 鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。(2) RAPD标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具。(3) 鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定。     

利用DNA洗牌技术一次性克隆多个基因

目的探讨DNA洗牌技术(DNA shuffling)对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法利用DNA洗牌技术一次性克隆多个基因片段到表达载体,并同时突变基因内部的2个氨基酸位点,PCR、酶切、测序检测构建表达载体的准确性。结果成功地一次性克隆了3个编码小RNA的串联短片段MSb1、MSb2、MSb3以及3个蛋白编码基因Fok I、MS2、Fok I,并一次性将PLRV-P0基因内部2个编码色氨酸(W)的密码子TGG突变为编码丙氨酸(A)的GCG密码子。结论 DNA洗牌技术可应用于基因组学、多基因功能鉴定、融合基因表达和一次性构建基因内部多个点突变的研究,具有精确、快速和高效的特点。     

金钱白花蛇及其伪品的DNA分子诊断鉴别

为建立金钱白花蛇品种的DNA分子标记鉴定方法,本文通过提取金钱白花蛇及其伪品药材和原动物样品的模板DNA,用通用引物扩增样品的Cyt b基因片断。PCR扩增所得产物纯化后直接测序,所得序列经对位排列和比较金钱白花蛇及其伪品的DNA序列,发现Cyt b基因片段的种间差异显著大于种内个体间变异,因此该基因片段是蛇类药材鉴定中一个很好的分子标记。基于所得DNA序列数据,设计了一对高度特异性的鉴别引物用于金钱白花蛇的PCR鉴定。用该对引物对金钱白花蛇进行PCR鉴定。在60℃－65℃的复性温度条件下,样品的误检和漏检率为0,能100％地正确区分出正品与伪品药材,此外该方法还能检测出混合粉末中是否含有正品金钱白花蛇成分。研究结果表明用本鉴定引物对金钱白花蛇的PCR鉴定方法简便、有效,实用性强,该方法还有可能成为中成药复方组分鉴别的一种新手段。     

DNA分子遗传标记技术及其在生药学中的应用

DNA分子遗传标记(DNA molecular genetic markers)本质上是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段.这种DNA片段是由基因组DNA经限制性内切酶切割或PCR扩增、分子杂交后在电泳胶上或杂交膜上检测到的[1].物种的生物多样性(biodiversity)就是由于其基因组中DNA遗传多态性的结果,检测这种多态性的方法就是DNA分子遗传标记技术.而利用比较物种间DNA分子的遗传多样性的差异来鉴别物种就是遗传标记鉴别.     

PCR／RFLP用于黑龙江立克次体的鉴定

为探讨应用聚合酶链反应／限制性片段长度多态性图谱分析(PCR／RFLP)用于立克次体鉴定的高效性和特异性，将PCR／RFLP用于2株黑龙江立克次体的鉴定，并与以往其它鉴定黑龙江立克次体的分析结果作比较。结果表明，结论一致，均可鉴定出黑龙江立克次体为斑点热群立克次体的一新种。结论：PCR／RFLP以其简便、可信，采用菌体少等优点．适合在实验室进行立克次体研究时广泛应用。     

内蒙古产丹参的随机扩增多态性DNA研究

目的 用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术对内蒙古产丹参进行多态性分析. 方法 通过CTAB 法提取内蒙古产丹参干品DNA,用10个条随机引物进行RAPD分析. 结果 有2个随机引物扩增出了清晰的多态性图谱. 结论 该RAPD体系可用于评价内蒙古产丹参的质量.