与Aβ相关的分泌酶及其在药物设计中的意义

从分子生物学的角度综述了β淀粉样蛋白及其相关的β-分泌酶和γ-分泌酶在阿尔茨海默病发病机制中的作用，并对近年来有关的研究成果在治疗阿尔茨海默病的新药设计中的意义进行了介绍，以期为治疗阿尔茨海默病的药物研发提供思路。     

与阿尔茨海默病密切相关的α-，β-和γ-分泌酶的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性的脑内神经元退变性疾病。β淀粉样蛋白(Aβ)学说认为，邶凝集和聚积是AD病理发生、发展的起始因素，而其他的病理改变如脑内神经纤维缠结、神经元的功能紊乱和丢失等，均被认为是由于邶的解离与凝聚、清除与产生的失衡所引发的。目前认为，β-和γ-分泌酶抑制剂是最合理和有效的AD治疗药物。此外，α-分泌酶激动剂也可减少Aβ的产生。近年来，人们对于分泌酶的认识取得了新的进展，本文重点对这方面进行综述。     

靶向β和γ分泌酶治疗阿尔茨海默病的研究进展

β淀粉样蛋白沉积所形成的老年斑是阿尔茨海默病（AD）的三大病理改变之一。淀粉样蛋白代谢关键的分泌酶成为治疗AD很有潜力的靶点，β和γ分泌酶及其抑制成为AD的研究热点。本文介绍了近年来在β淀粉样蛋白假说、分泌酶及其抑制剂上所取得的研究进展和尚存在的不足，为此类新药的开发提供一个很好的参考依据。     

特异酶促使淀粉样前体蛋白裂解成β-淀粉样蛋白

β淀粉样蛋白的沉积是阿尔茨海默病(AD)发病的始发因素,所形成的老年斑是其最基本的病理改变。因此,靶向β淀粉样蛋白措施是AD最有潜力的治疗方法,也是AD的研究热点。淀粉样前体蛋白(APP)在γ分泌酶介导下裂解成β淀粉样蛋白,如能抑制γ分泌酶的活性,则可有助AD病的治疗。然而,     

AD治疗新药物——γ-分泌酶抑制剂

家族性阿尔采末病属常染色体显性遗传 ,其中大部分与编码早老素的基因发生突变所导致的γ 分泌酶功能异常有关 ,γ 分泌酶是一包括PS二聚体、Nicastrin、PEN 2等组分的多酶复合体。γ 分泌酶剪切APP、Notch、E cadherin、ErbB 4受体酪氨酸激酶等膜蛋白。目前已发现了许多类型的γ 分泌酶抑制剂 :基于二氟酮、二氟乙醇基团的γ 分泌酶抑制剂 ;脲多肽模拟化合物 ;基于羟乙基二肽电子等配体的化合物 ;具有α 螺旋结构的小肽 ;具有 4 氯 异香豆素基本母核的非肽抑制剂 ;含有丙氨酰基团的化合物。但这些抑制剂目前大多还只是作为一种工具药来研究γ 分泌酶的结构、功能以及作用机制。其中选择性抑制Aβ生成的γ 分泌酶抑制剂很有希望成为一种高效的阿尔采末病治疗药物     

新型γ-分泌酶调节剂SPI-1865的研发历程概述

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)为进行性的神经退行性疾病,目前缺乏有效的治疗手段.β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在脑神经细胞外过度沉积形成的寡聚体和淀粉样斑块与阿尔茨海默症的发生、发展密切相关.γ-分泌酶是β淀粉样蛋白代谢过程中的关键酶,为研发阿尔茨海默症治疗药物的关键靶点.针对此靶点研发的γ-分泌酶调节剂(γ-secretase modulators,GSM)因对Notch等蛋白影响较小,有广阔的应用前景.本文总结了源于黑升麻(Black cohosh,Cimicifuga racemosa)的环阿尔廷型三萜为先导物的结构优化历程,最终获得γ-分泌酶调节剂药物候选物SPI-1865,以期为γ-分泌酶调节剂的开发与改造提供有价值的参考.     

β-分泌酶抑制剂的研究进展

β-淀粉样多肽(Aβ)聚积被认为是导致阿尔茨海默病(AD)病理变化的重要因素,而β-分泌酶(BACE1)是产生Aβ的限速酶.因此,以BACE1为靶标,抑制BACE1减少或阻断Aβ的生成已成为防治AD药物研究的热点,该文对近几年BACE1抑制剂的设计与进展进行简要的综述.     

阿尔茨海默病新药开发现状

阿尔茨海默病(AD)的病因尚不十分清楚。目前，以β淀粉样蛋白为中心的生理病理学说被广泛接受。简要描叙该病理过程，从抑制β-淀粉样蛋白新药科研入手，全面综述了近年来西方开发抗AD新药研究的进展.     

γ-分泌酶、淀粉样前体蛋白和早老蛋白1在阿尔采末病中相关性的研究进展

阿尔采末病近年来发病率逐渐升高,对其发病机制的研究逐步深入。APP、PS1为已被明确的痴呆基因,γ-分泌酶是生成Aβ的限速酶,三者都是目前AD领域研究的热点,但是三者在AD间的具体相互作用机制及过程迄今还尚未明确,这些都可能是发现AD治疗新途径的潜在位点。     

γ分泌酶调控剂的研究进展

老年痴呆症是影响老年人健康的一个重要疾病,普遍认为淀粉样蛋白（amyloid beta protein, Aβ）与其发病密切相关。γ分泌酶作为Aβ产生途径中一个关键的蛋白酶,其剪切作用决定Aβ不同短肽的形成。本文综述近年来γ分泌酶调控剂的研究进展,总结归纳其构效关系,并探讨其未来的研究方向。     

tetramic和tetronic酸作为β-分泌酶抑制剂

阿尔茨海默病（AD）是一种与年龄相关的神经退行性疾病，在工业化城市人群中患病率约2％，65岁以上和85岁以上人群患病率大约分别为10％和50％，且目前并无有效治疗手段。     

他汀类药物对于阿尔茨海默病的疗效

流行病学和药理学研究结果显示，胆固醇在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease．AD)的发生中起着重要作用，他汀类药物对于AD具有潜在的治疗作用，今后这类药物可能被用来治疗AD。本综述了目前他汀类药物对AD的研究报道，并对他汀类药物、胆固醇、AD之间的作用机制进行了探讨，为AD的治疗和他汀类药物的新应用提供参考。     

γ-分泌酶的空间结构及调节剂的研究进展

γ-分泌酶是与阿尔茨海默病相关的Ⅰ型跨膜蛋白酶。它包括早老素、早老素增强子2、前咽缺陷蛋白1和呆蛋白(nicastrin)4个亚基。最近研究利用超低温电子显微镜在高分辨率的条件下首次揭示了人源γ-分泌酶"马蹄形"的三维空间结构以及各亚基的排列顺序,有助于更深入地认识该酶的调控通路及作用机制。此外,包括非甾体类抗炎药等在内的γ-分泌酶调节剂在体外实验中被证实能抑制γ-分泌酶的活性并选择性地降低β淀粉样蛋白片段42的水平,为阿尔茨海默病的防治提供了有效途径,具有广阔的开发前景,成为近年来的研究热点。本文就γ-分泌酶各亚基调控通路、人源γ-分泌酶的精细三维空间结构以及γ-分泌酶的调节剂进行综述。     

人淀粉样前体蛋白高表达抑制SH-SY5Y细胞M胆碱受体结合

目的观察阿尔茨海默病(AD)致病相关基因淀粉样前体蛋白(APP)基因的高表达及β-淀粉样肽(Aβ)高度生成对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y胆碱能功能的影响，探讨AD脑内Aβ与胆碱能变化的联系。方法将携带野生型人APP基因的pCMV695质粒转染至人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞中，稳定表达后根据APP蛋     

不同治疗方法对阿尔茨海默病患者血浆β-淀粉样蛋白含量的影响

目的　通过检测血浆 β 淀粉样蛋白 (β AP) ,比较不同药物治疗阿尔茨海默病 (AD)的效果。 方法　用放射免疫分析法测定 4 0例患者和 2 0例正常对照者β AP含量 ,并按不同药物分组。 结果　AD组血清β AP含量均明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;治疗后治疗组 β AP含量均低于治疗前 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;脑活素组和脑复康组均有一定的疗效 ,但前者好于后者。结论　阿尔茨海默病患者血浆β AP含量测定 ,对病情预测和疗效评定有一定的帮助。     

异香豆素对阿尔茨海默病Aβ蛋白的抑制作用及其机制

目的:探讨异香豆素对阿尔茨海默病Aβ的影响及其相应作用机制。方法:脂质体转染构建APP695高表达CHO细胞系;MTT实验检异香豆素对CHO/APP695的细胞毒作用;RT-PCR检测APP695的表达;Western-blot实验检测目的蛋白的表达;放射免疫法测定细胞培养上清Aβ含量;ELISA法测定γ-分泌酶活性变化。结果:RT-PCR和Western-blot检测显示CHO/APP695细胞高表达APP蛋白;0,10,20,40μmol·L-1的异香豆素处理CHO/APP695细胞24 h后,Aβ的分泌量从(16.4±1.4)pg.mL-1依次减低为(12.6±1.1),(9.4±0.8),(4.7±0.6)pg·mL-1,各组间差异有统计学意义(P<0.05);Western-blot结果显示异香豆素对CHO/APP695细胞APP蛋白的表达没有影响;ELISA测定显示10、20、40μmol·mL-1的异香豆素分别抑制了(21.4±1.6)%、(41.1±2.5)%和(73.6±5.2)%的γ-分泌酶活性;Western-blot结果显示异香豆素没有减少剪切的Notch1蛋白的表达。结论:异香豆素可以高效的抑制γ-分泌酶对APP蛋白的剪切,减少Aβ的生成,其抑制活性并不影响Notch1蛋白的剪切。     

藻酸双脂钠抑制巨细胞病毒诱导小鼠β分泌酶表达的研究

目的 探讨巨细胞病毒诱导的β-分泌酶在小鼠体内的变化及在藻酸双酯钠（PSS）治疗后淀粉样蛋白前体（APP）和β-分泌酶（BACE-1）的表达。方法 将30只雄性小鼠（雄性和雌性）随机分为3组（每组10只）。对照组小鼠不做任何处理;CMV感染组,腹腔一次性注射MCMV 0.2 mL,30 d后处死;PSS治疗组,CMV感染后,每日灌胃PSS 60 mg/kg,持续14至30 d。在第30天,处死所有的小鼠。通过蛋白质免疫印迹和免疫组化检测β-分泌酶的表达。结果 APP和BACE-1在感染小鼠脑中的表达显着高于PSS处理后,与感染组相比蛋白表达降低。结论 PSS可通过降低断奶小鼠巨细胞病毒诱导的β-分泌酶的表达水平,缓解继发性脑损伤程度,并在未来的治疗中起到保护神经作用。     

治疗阿尔采末病的药物靶点:β-分泌酶

近年来的研究表明,β-淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,有明显的神经细胞毒性作用,在阿尔采末病(AD)的发病过程中发挥了重要作用,因此降低脑中Aβ的生成量是治疗AD的策略。Aβ是由β-和γ-分泌酶裂解其前体蛋白(APP)而生成,其中β-分泌酶(BACE)是启动Aβ形成的关键限速酶,因此BACE是开发治疗AD药物的一个具有吸引力的作用靶点。该文就近来对β-分泌酶的研究作一综述。     

APPβ分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定

目的制备针对人淀粉样蛋白前体(APP)β分泌酶切割位点的特异性单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法设计扩增单克隆抗体细胞株重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗人APPβ分泌酶切割位点单克隆抗体细胞株中扩增出VH和VL基因片段,然后通过重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成ScFv基因片段,再将其亚克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,目的蛋白经镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法对其检测分析。结果成功从一株抗人APPβ位点单克隆抗体细胞株2H10中扩增出VH和VL并拼接成ScFv片段,片段长744 bp,编码248个氨基酸。PCR、酶切和测序表明表达载体构建成功,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导可以表达出约29 ku的目的蛋白,主要为包涵体形式,经镍柱纯化和复性后,获得纯度达90%以上的ScFv蛋白,ELISA和Western blot检测表明可溶性ScFv可以与人APPβ分泌酶切割位点序列短肽和全长APP结合。结论成功构建并表达人APPβ分泌酶切割位点的特异性单链抗体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。     

IL-10对Aβ1-42诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的保护作用

目的研究IL-10对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法 48只大鼠随机均分为正常对照组(A组)、PBS对照组(B组)、Aβ1-420.1、0.2、0.4mM注射模型组(分别为C1、C2、C3组)和IL-10 80μg/ml预处理注射组(D组)。注射2d后,Morris水迷宫测定大鼠潜伏期,Western blot法检测海马组织中APP的表达量。结果与A、B组相比,C1、C2、C3组大鼠水迷宫实验潜伏期、APP蛋白表达均呈浓度依赖性的增加(P<0.01);而D组潜伏期、APP蛋白表达较C3组明显减少(P<0.05)。结论海马内注射IL-10能抑制Aβ1-42诱导的AD大鼠水迷宫潜伏期及海马内APP表达的增加,提示IL-10可能抑制由Aβ1-42诱导的AD神经炎症。