实验大鼠侵袭性肺曲霉病早期诊断的研究

目的 建立高效液相色谱技术（HPLC）检测（1-3）-β-D-葡聚糖的方法，并与巢式聚合酶链反应（PCR）方法进行比较，评价其在实验大鼠侵袭性肺曲霉病（IPA）早期诊断中的意义。方法 将烟曲霉孢子注入实验大鼠左肺以制作IPA模型；采集各组实验大鼠血样及脏器标本，进行巢式PCR、HPLC及培养方法的检测。结果 HPLC检测（1-3）-β-D-葡聚糖最低检测限度为1～2pg／ml，临界值为15pg／ml。模型组检测值和阳性率均较对照组高，差异有统计学意义（P〈0．01）；随感染时间延长检测值和阳性率逐渐上升，各组差异有统计学意义（P〈0．01）；感染死亡大鼠血液标本的检测值与死亡时间呈负相关关系，其相关系数r为-0．949（P〈0．01）。1周内HPLC方法敏感度（77．8％）和特异度（91．7％）均较巢式PCR高，但差异无统计学意义（P〉0．05），两者敏感度均高于血培养，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论HPLC检测大鼠血中（1-3）-β-D-葡聚糖浓度，在早期预测大鼠肺曲霉感染的发生、发展及预后判断方面明显优于传统的血培养，也要优于巢式PCR方法。     

侵袭性烟曲霉菌病大鼠模型的建立及分析

目的:建立侵袭性肺烟曲霉菌病大鼠模型,并对模型研究价值进行相关分析,为侵袭性肺曲霉菌病的实验研究提供参考.方法:腹腔注射环磷酰胺,动态观察大鼠血常规变化,建立免疫抑制大鼠模型.自制气管插管接种烟曲霉菌孢子悬液引起侵袭性肺烟曲霉菌病,分别于接种后1、3、5、7 d处死大鼠后取肺组织进行病理切片观察及组织匀浆培养.结果:分次不同剂量环磷酰胺腹腔注射后大鼠表现为精神萎靡、体重减轻,血常规示白细胞及分类细胞数量明显减少,中性粒细胞、淋巴细胞不能分类.病理切片可见免疫抑制大鼠感染烟曲霉菌后随着时间延长肺组织病变逐渐加重.肺组织出血、纤维素渗出;烟曲霉菌孢子聚集并长出菌丝,引起肺泡结构破坏、弥漫性肺水肿.结论:成功建立了免疫抑制大鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主侵袭性肺曲霉菌病的发病机制、病理生理、药物疗效提供参照.     

酶联免疫吸附法检测血清半乳甘露聚糖用于侵袭性曲霉菌感染早期诊断的实验研究

国外学者通过对血清和尿液中曲霉菌半乳甘露聚糖(galactomannan ,GM )抗原的检测 ,发现其对侵袭性曲霉病(IA)的早期诊断有较重要价值[1 ,2 ] 。我们建立了IA兔模型 ,采用酶联免疫吸附试验法 (ELISA)检测感染后动物血清中GM的含量 ,通过与传统的血培养比较 ,评价ELISA检测GM在诊断IA中的价值。一、材料和方法1 动物和菌株来源 :烟曲霉菌 (CCCCMIDA1 )菌株购自中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心 ,日本大耳白兔购自第三军医大学动物所。2 主要试剂和仪器 :GM检测试剂盒 :PlateliaAspergillus(法国Bio Rad产品 ) ,变色…     

巢式PCR检测血清中烟曲霉基因的实验研究

目的评价巢式PCR在烟曲霉侵袭性感染早期病原学诊断中的应用价值。方法构建烟曲霉播散性感染动物模型,收集不同感染时段动物血液标本20份,分别进行巢式PCR检测和真菌培养,并对感染动物多次进行影像学检查;测定25例临床诊断为侵袭性曲霉病患者的45份血清样本,并与血清半乳甘露聚糖（GM）测定结果进行比较。结果巢式PCR检测疾病模型动物血清曲霉特异基因,标本阳性率为80%（16/20）,最早在感染后的第二天即可检出;而在整个感染过程中,血培养结果均为阴性,影像学检查则在感染后期才提示真菌感染的存在。临床标本的检测结果显示,巢式PCR敏感性和特异度分别为64%和100%。结论巢式PCR具有较好的敏感性及特异度,可用于曲霉深部感染的早期诊断,与血清GM测定联合应用诊断意义更大。     

侵袭性肺曲霉菌病诊断方法的研究进展

侵袭性曲霉菌病(invasive aspergillosis,IA)是免疫功能低下患者最常见的侵袭性真菌感染,致死率高。由于曲霉菌孢子飘浮于空气中而易被吸入,IA中以侵袭性肺曲霉菌病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)最常见。然而,由于临床表现不典型,诊断金标准即病理学依据获得困难,IPA的诊断仍具挑战性,尤其是在疾病早期阶段。因此,寻找简便、快速、准确性高的诊断方法具有重要意义。本文就目前IPA的诊断进展作一综述。     

恶性组织细胞病粒细胞缺乏症期并发侵袭性烟曲霉菌感染1例

曲霉菌广泛分布于自然界,也可存在于正常人体的皮肤和黏膜表面。曲霉菌属于条件致病菌,当人体免疫功能低下时,可诱发曲霉病。曲霉菌可侵犯人体许多部位,尤以呼吸系统最明显,近年来,全身性的曲霉病有增高趋势。临床上常见有烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉和土曲霉等感染。本文将1例恶性组织细胞病粒细胞缺乏症期患者并发侵袭性烟曲霉菌感染的临床资料和诊断情况报道如下。1临床资料患者,男,31岁,半个月前无明显诱因出现发热,稽留热,     

侵袭性肺曲霉菌病的CT特点及其诊断和预后价值

由于糖皮质激素、广谱抗生素、免疫抑制剂、化疗药物的应用,以及某些导管的长期体内留置等原因,导致免疫缺陷群体急剧增加,致使侵袭性肺曲霉菌病(IPA)的发病率和病死率显著升高.而且文献中所报告的资料因漏诊、误诊,存在发病率和病死率低估的问题.据报道,289例重症监护病房(ICU)尸体解剖结果表明,IPA是漏诊的主要原因[1].ICU中IPA的归因病死率为18.9%[2],说明IPA在重症患者中同样具有高发病率、高病死率的特点,抗曲霉菌药物的疗效仍不能令人满意.因此,IPA日益成为特定患者群体的主要危害和死因之一.     

侵袭性肺曲霉菌感染1例报告并文献复习

目的提高对侵袭性肺曲霉菌感染导致重症致死性肺炎的认识。方法对1例侵袭性肺曲霉菌感染所致的重症致死性肺炎的临床表现、实验室检查、影像学、诊断及治疗进行回顾性分析并复习国内外相关文献。结果侵袭性肺曲霉菌感染可在有慢性病(如糖尿病、慢性阻塞性肺疾病)基础的患者中出现,目前临床诊断困难,提倡早期、足量、足疗程地进行治疗。进展为重症致死性肺炎,抗真菌治疗难以逆转。结论临床应高度警惕侵袭性肺曲霉菌感染的出现,尽可能早期开展治疗,如进展为重症致死性肺炎,死亡率极高。     

侵袭性肺曲霉菌感染实验诊断新进展

从病原学(涂片镜检、培养)、组织病理学、分子生物学和13种曲霉菌生物标志物及联合检测等方面探讨不同侵袭性肺曲霉菌感染(IPAI)检测方法的诊断效能.组织病理学阳性率为87.5％;涂片镜检敏感性为87.7％、特异性为72.1％;培养阳性率<61％,其中痰液、支气管肺胞灌洗液(BALF)、血液样本培养阳性率分别为12％、4...     

聚合酶链反应技术诊断苯丙酮尿症

为早期确诊，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶（ＥＣＯＲＩ、ＥＣＯＲＶ）方法，对初筛出具有高度苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可能的６例患儿，行苯丙氨酸羟化酶基因分析。结果确诊３例，还为其中１例患儿母亲再次妊娠的胎儿作产前ＰＣＲ检测，鉴定出与ＰＫＵ致病基因相连锁的遗传特异片段，据此诊断出胎儿为杂合子，并经随访证实。应用ＰＣＲ技术对ＰＫＵ患儿早期诊断乃至产前诊断是可靠且可行的。     

Rapid touchdown PCR assay for the molecular diagnosis of spinocerebellar ataxia type 2

Seven different chromosomal loci, designatedSCA1 toSCA7 (spinocerebellar ataxias), have been identified as responsible for autosomal dominant cerebellar ataxias. Five genes (SCA1, 2, 3, 6, 7) have been cloned to date and show a single type of mutation, an unstable expansion of a CAG repeat coding for a polyglutamine stretch in the corresponding protein. We describe an improved polymerase chain reaction assay, based on a touchdown protocol, for the diagnosis of spinocerebellar ataxia type 2. This method produces an efficient amplification of both normal and pathological alleles and no radioactive labelling is necessary to observe the amplification products. The pathological alleles are identified by a simple non-denaturing polyacrylamide electrophoretic separation followed by ethidium bromide staining. A comparison of this technique with previously reported methods confirmed its utility for the rapid molecular diagnosis of spinocerebellar ataxia type 2. We found that the spinocerebellar ataxia type 2 mutation is responsible for 88% of the examined autosomal dominant cerebellar ataxia type 1 families in our territory (eastern Sicily). With the rapid touchdown polymerase chain reaction method, the trinucleotide expansion was also observed in 2 ataxic patients without family history of the disease, suggesting the necessity for analysis of spinocerebellar ataxia type 2 expansion even in sporadic patients.     

聚合酶链反应检测宫颈癌的前瞻性研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对宫颈癌、宫颈糜烂、正常宫颈组织各５０例进行了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的检查。结果提示从宫颈正常组织到癌，ＨＰＶ＿１６、ＨＰＶ＿１８的检出率逐渐升高，尤其ＨＰＶ＿１６呈明显梯度关系，宫颈癌检出率显著高于正常组织及炎症组织（Ｐ＜０．０１）。说明宫颈组织自身ＨＰＶ＿１６的感染率与宫颈癌的发生密切相关，与ＨＰＶ＿１８有一定的联系。通过癌旁组织，宫颈糜烂组织及正常宫颈刮片检测出不同的ＨＰＶ＿１６阳性率的分析，说明ＨＰＶ感染是癌发前的重要因素，指出凡检出ＨＰＶ＿１６阳性者应视为“高危人群”给予长期密切监护治疗。     

利用PCR衍生技术检测血液系统疾病

PCR技术给血液病的诊断带来了革命性的进展,已经成为临床急性和慢性白血病基因分型,骨髓增殖性疾病确诊,海洋性贫血、血友病等多种血液遗传病的诊断不可或缺的基本技术.在PCR基础上,已经发展了包括多重巢式PCR、荧光实时定量PCR(Q-PCR)、变性高压液相色谱分析(DHPLC)、毛细管电泳、分子杂交和直接测序等方法.多重巢式PCR可检测多种白血病基因,确定白血病的类型.Q-PCR有效地解决了PCR污染的问题,可以监测白血病微小残留病.毛细管电泳法更适于基因片段长度有变化的基因突变.DHPLC适用于大批量标本的突变筛查.PCR产物的直接测序可靠性强,已经用于常规诊断.     

应用生物发光技术定量检测PCR扩增产物

目的　建立一种基于生物发光技术的定量检测PCR产物的方法 ,并用于HBV定量PCR检测。方法　首先利用ATP硫酰化酶 (ATPsulfurylase)将焦磷酸 (PPi)定量转化成ATP ,然后利用虫荧光素酶 (luciferase)系统发光检测ATP ,从而确定样品中PPi含量。利用 2次PCR法扩增HBVDNA目的片段 ,并进行回收纯化定量 ,以之作为阳性标准模板制作标准曲线。选择适当的循环次数扩增样品中HBVDNA ,利用化学发光法检测扩增产物中PPi的量 ,进而确定样品中HBVDNA模板的量。结果　当起始模板量为 (10～ 5 )× 10 5拷贝 ,循环次数为 2 5 ,发光值与起始模板浓度呈现良好的相关。检测 32份样品血清 ,其中 2 3例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 1 6× 10 5拷贝 / μl,9例HBsAg(+)、HBeAg(- )、HBcAb(+)标本中HBVDNA平均含量为 5 6× 10 3 拷贝 / μl。结论　本方法是一种操作简便、灵敏度高的定量PCR方法     

PCR与ELISA检测乙型肝炎病毒标志物的比较研究

目的探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA与常见HBV血清免疫学标志物之间的相互关系及其临床检测意义。方法采用PCR法对HBV-DNA、ELISA法对HBV血清免疫学标志物同时进行检测，数据用SPSS11．0统计软件处理。结果899例11种常见模式HBV-DNA阳性率依次为90．48％、79．12％、73．91％、6667％、62，12％、30．68％、7．79％、7．69％、1．29％、8．54％、0．94％。HBV-DNA与HBsAg（P〈0，01）、HBeAg（P〈0．01）和抗HBc（P〈0．01）明显相关。结论HBV血清免疫学标志物、HBV-DNA的检测都很重要。HBsAg、HBeAg、抗HBc和HBV-DNA有很好的相关性和相似的流行病学意义，但两者不可互相替代。     

聚合酶链反应反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌

目的　研究以非培养为基础的快速检测与鉴定念珠菌的方法。方法　将白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌种特异探针加尾后固定在硝酸纤维素膜上;用氯化苄法提取念珠菌ＤＮＡ,采用真菌特异通用引物ＰＣＲ 扩增ＤＮＡ,在扩增过程中用Ｂｉｏ１１ｄＵＴＰ 标记扩增产物,然后分别与白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌特异探针杂交。结果　对１４ 种念珠菌扩增均为阳性,对３ 种常见细菌扩增均为阴性。３ 种念珠菌只与其对应探针杂交。结论　该方法简便、快速、准确,适于临床实验室快速检测与鉴定念珠菌。     

侵袭性肺曲霉病实验室检测方法的研究进展

侵袭性肺曲霉病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)是指曲霉菌菌丝生长侵入肺实质而引起的感染性疾病,具有发病急性、进展迅速、病死率高的特点。长期中性粒细胞缺乏、血液系统恶性肿瘤发生、造血干细胞或实体器官移植、长期大剂量糖皮质激素或免疫抑制剂使用、遗传性或获得性免疫缺陷状态是感染侵袭性肺曲霉病的危险因素。早期诊断和及时治疗是良好预后的关键。但由于该病缺乏典型的临床表现,早期诊断尤为困难。传统的组织病理学、细胞病理学及分离培养的方法可以确诊IPA,但灵敏度低。近年来,一些非培养实验室检测方法逐渐得到应用,如半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)试验、(1,3)-β-D葡聚糖(BDG)试验(G试验)、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、免疫层析侧流装置(lateralflow device,LFD)技术等,本文就此类检测方法诊断IPA作一综述。