糖基化终产物对人视网膜Müller细胞的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对人视网膜Müller细胞的影响.方法 MTT法观察体外不同浓度、不同作用时间下AGEs对Müller细胞的影响.结果 不同浓度的AGEs对Müller细胞作用3天后,细胞形态和数量无明显变化;而作用6天和9天后,细胞的数量有不同程度的减少.结论 AGEs抑制视网膜Müller细胞的生长.     

高糖高胰岛素对兔视网膜Müller细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的　利用体外培养的兔视网膜M櫣ｌｌｅｒ细胞 ,观察其在高糖、高胰岛素条件下血管内皮生长因子 (VEGF)表达的变化。　方法　采用免疫细胞化学法、原位杂交法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行定性定量测定高糖、高胰岛素条件下体外培养的M櫣ｌｌｅｒ细胞ＶＥＧＦ的表达?〗峁「咛恰⒏咭鹊核啬艽碳櫣ｌｌｅｒ细胞ＶＥＧＦ的表达 ,并且是通过转录水平调节的 ,高糖对M櫣ｌｌｅｒ细胞分泌的VEGF的调节呈时间和剂量依赖性。　结论　高糖和高胰岛素都可以通过刺激M櫣ｌｌｅｒ细胞编码VEGF基因转录 ,增强VEGF蛋白表达 ,而在糖尿病视网膜病变 (DR)的新生血管形成中发挥重要作用。     

视网膜Müller细胞在糖尿病视网膜病变中的作用

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病(DM)最为常见和严重的微血管并发症之一,发病率随DM病程的延长而增加,致盲率占眼科双眼盲的第一位.目前越来越多的研究表明Müller细胞在DM早期发生的一系列改变可能是视网膜血管改变的一个主要因素.近年来的临床和基础研究已证实动物模型和DM患者中Müller细胞超微结构和生理功能发生了变化,这种变化早于视网膜血管损伤.DM患者眼底尚未出现改变时,图形视网膜电图(P-ERG)的 b波已有所下降[1],而P-ERG b波起源与Müller细胞关系密切,反映了DM早期Müller细胞已发生功能障碍.     

褪黑素对糖尿病大鼠视网膜中糖基化终产物及其受体表达的影响

目的研究褪黑素(MT)对糖尿病大鼠视网膜中糖基化终产物(AGE)和其受体(RAGE)表达的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠80只,体重180~200 g,随机分为正常对照组、模型对照组、低剂量MT组和高剂量MT组。模型对照组、低剂量MT组和高剂量MT组给予高脂高糖饮食配合链尿佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型。造模成功后,低剂量(10 mg·kg~(-1)体重·d~(-1))和高剂量(20 mg·kg~(-1)体重·d~(-1))MT灌胃16 w。HE染色观察大鼠视网膜病理学改变,免疫组化(SABC)法检测各组大鼠视网膜中AGE和RAGE表达的变化。结果 16 w后,HE染色观察,低剂量和高剂量MT组视网膜病理改变程度均较模型对照组轻。与模型对照组比较,免疫组化法检测低剂量和高剂量MT组AGE和RAGE蛋白阳性表达量明显降低(P0.05)。结论 MT可改善糖尿病大鼠视网膜形态变化,并可下调AGE和RAGE在糖尿病大鼠视网膜中的表达。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

视网膜Müller细胞在糖尿病视网膜病变发病中的作用及其研究进展

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的重要并发症,其发病机制尚未完全明了。以往对DR的研究主要关注其血管病变,而近年来研究表明,在DR的视网膜血管病变发生之前,已有视网膜神经变性,包括视网膜神经元及神经胶质细胞的变性及丢失。Müller细胞作为视网膜最主要的神经胶质细胞,分布于整个视网膜,包绕视网膜上各级神经元的胞体、突起及视网膜血管。Müller细胞不但可以影响视网膜血管的病变,还能影响视网膜神经细胞的病变,     

血管内皮生长因子与增殖性糖尿病视网膜病变

血管内皮生长因子是一种能选择性促进血管内皮细胞分裂的蛋白质。经定量检测发现,增殖性糖尿病视网膜变病人中,眼玻璃体和房水内血管内皮生长因子基因在ｍＲＮＡ水平表达增高。血管内皮生长因子与高亲和力受体ＫＤＲ结合后刺激玻璃体内毛细血管增生。由此,血管内皮生长因子被确认在增殖性糖尿病视网膜病变形成中起关键作用。通过动物实验证实药物ＡＲＩ－５０９和ＡＭＧ可阻断或下调血管内皮生长因子免疫细胞化学表达,有临床应用     

血管内皮生长因子与糖尿病视网膜病变的相关性研究

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是常见致盲眼病之一,DR的基本病理过程表现为微循环障碍,其病理特征为视网膜新生血管形成和血-视网膜屏障（blood retinal barrier,BRB）破坏。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）与其发生、发展密切相关,本文就VEGF与糖尿病视网膜病变的相关性的研究进展作一综述。     

血清非酶糖基化终产物与糖尿病视网膜病变的相关关系

96例2型糖尿病视网膜病变（DR）患者，35例2型DM不伴DR患者，以及40例正常对照的研究显示，血清糖基化终末产物的含量与DR病变严重程度呈正相关。     

递法明对糖尿病视网膜病变血管内皮生长因子表达的影响

把50例非增殖期糖尿病视网膜病变患者,分为治疗组和对照组,所有病例在继续原治疗的前提下,治疗组给予递法明,对照组给于维生素C治疗,连用三个疗程（60天）,检测两组治疗前后血浆血管内皮生长因子水平,并进行比较。结果治疗组血管内皮生长因子水平低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,治疗组治疗前后差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论递法明可以降低血浆血管内皮生长因子含量,抑制糖尿病视网膜病变的新生血管形成。     

糖基化终产物引起晚期内皮祖细胞功能障碍

目的观察与糖尿病患者血清浓度类似的糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白对体外培养脐血来源晚期内皮祖细胞功能的影响并探讨可能机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,用差速贴壁法分离、培养晚期内皮祖细胞。流式细胞术、免疫细胞化学染色及荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白、植物凝集素被用于鉴定培养的细胞。将晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共同培养24h后,利用噻唑蓝法检测细胞的增殖能力,AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;Boyden小室法检测血管内皮生长因子趋化的细胞迁移;ECMatirx-gel检测形成毛细血管样网状结构的能力。利用逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法测定糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达水平。结果脐血单个核细胞在体外培养过程中先后出现两种细胞:第5～7天出现集落样生长细胞,扩增不明显,存在14天左右即消失,这类细胞被称为"早期内皮祖细胞";10～15天时,逐渐出现20～50个细胞组成的细胞簇,1～3天即可形成大于500个细胞簇,细胞呈铺路石样,可传代,大于95%的细胞免疫表型为CD45-/CD146+/CD105+,表达内皮细胞特有的vWF因子,可摄取乙酰化低密度脂蛋白并可与荆豆凝集素1结合,这类细胞被称为"晚期内皮祖细胞"。50～400mg/L晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共培养24h后,与对照组相比,细胞的增殖能力未见明显变化(P0.05)。当晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白浓度大于100mg/L时,与对照组相比,晚期内皮祖细胞的凋亡增加(P0.05)、血管内皮生长因子趋化的迁移以及在ECMatirx-gel上形成新生血管的能力下降(P0.05),糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达均增加(P0.05)。结论糖基化终产物通过促进凋亡、抑制迁移及体外形成新生血管的能力引起晚期内皮祖细胞功能障碍,这些影响可能与糖基化终产物上调晚期内皮祖细胞上糖基化终产物受体表达有关。     

糖基化终产物与血管病变及糖尿病肾病

糖基化终产物与血管病变及糖尿病肾病沈克勤杨俊伟关键词糖尿病肾病糖基化终产物血管病变中图法分类号Ｒ５８７．２近年，糖尿病的发生率不断上升，继发于糖尿病的一系列并发症正成为影响这些患者生存的主要危险因素。流行病学调查资料表明，糖尿病患者发生动脉硬化以及危...     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时最高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.     

糖尿病视网膜病变患者玻璃体中AGE、VEGF的表达及意义

目的 探讨糖尿病视网膜病变玻璃体中糖基化终产物(AGEs)和血管内皮生长因子(VEGF)水平与糖尿病视网膜病变的关系.方法 采用ELISA法测定41例糖尿病视网膜病变患者(A组)玻璃体中的AGEs和VEGF,并与28例非糖尿病(B组)进行对照;A组选20例和B组选18例,用黄嘌呤氧化酶法测定玻璃体内超氧化物歧化酶(SOD),用改良Witko-Sarsat法测定血清晚期氧化蛋白产物(AOPP).结果 A组玻璃体内AGEs 和 VEGF水平明显高于B组(P＜0.01),AGEs与VEGF呈正相关(r=0.64, P＜0.001),A组玻璃体内的抗氧化能力较B组明显降低(P＜0.01).结论 糖尿病视网膜病变的发生与其玻璃体内AGEs和抗氧化能力的降低有关,其作用是通过VEGF而产生的 ;玻璃体内AGEs 和 VEGF水平越高,其抗氧化能力越低.     

血管内皮生长因子与糖尿病视网膜病

糖尿病视网膜病是进展性微血管病变,而血管内皮生长因子(VEGF)是内皮细胞特异性促有丝分裂原,具有促进内皮细胞增殖、增加微血管通透性、诱导血管生成等多种功能,可调节内皮细胞外基质溶解、内皮细胞迁移、增生和管腔形成,参与生理过程的血管形成。VEGF能诱导视网膜血管闭塞,引起视网膜缺血。VEGF抑制剂以及VEGF信号转导通路抑制剂的研究及其应用,将为糖尿病视网膜病变的诊断和治疗提供广阔的前景。     

晚期糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞管样结构形成和崩解的影响及机制

目的研究晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)管样结构形成和崩解的影响及其初步机制。方法分离、培养SD大鼠CMECs,将AGEs-BSA与大鼠CMECs共同孵育,实验分为对照组(只加DMEM培养液)、BSA组(100 μg/ml BSA)、AGEs-BSA组(100μg/ml AGEs-BSA)。分别在孵育第1、3天时,用管样结构形成实验观察CMECs管样结构的长度;流式细胞仪检测CMECs的凋亡;ELISA法测定CMECs半胱天冬酶3(caspase-3)的活性。孵育1天采用Western blot法检测CMECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果第1天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs管样结构的长度明显增加,VEGF蛋白表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01);而CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性,差异无统计学意义(P>0.05)。第3天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs的管样结构长度明显降低,CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs-BSA在早期可能通过自分泌VEGF促进CMECs管样结构的形成,晚期可能通过促进CMECs的凋亡,加速管样结构的崩解。     

色素上皮衍生因子对高糖环境下大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的 探讨高糖环境下色素上皮衍生因子(PEDF)对大鼠视网膜Müller细胞的影响.方法将体外25 mmoL/L葡萄糖培养的大鼠Müller细胞以100 ng/ml PEDF或10 ng/ml白细胞介素-1β(IL-1β)孵育24 h,采用间接免疫荧光、Western印迹和实时定量PCR检测相关蛋白和mRNA表达,采用MTT检测Müller细胞活性.结果细胞免疫荧光组化、Western印迹和实时定量PCR检测显示在高糖环境下PEDF可以下调Müller细胞IL-1β蛋白和mRNA的表达,同样IL-1β也可以下调Müller细胞PEDF蛋白和mRNA的表达(P＜0.05);PEDF明显提高视网膜Müller细胞活性(0.48±0.09对0.64±0.17,P＜0.05).结论模拟糖尿病状态下,PEDF可以下调Müller细胞中IL-1β的表达,提高Müller细胞活性,可能对糖尿病炎症引起的病理改变起到一定抑制作用.     

高糖刺激血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达

平滑肌细胞可分泌血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ) 〔1〕,在糖尿病视网膜组织中ＶＥＧＦ表达明显增高〔2〕。ＶＥＧＦ的主要功能是增加血管通透性、促进内皮细胞增生和促进新血管增殖。推测ＶＥＧＦ与糖尿病视网膜血管病的病理变化直接相关。本研究探讨Ｄ 葡萄糖浓度、作用时间以及波动糖浓度刺激对ＶＥＧＦ表达的影响。一、材料和方法1.血管平滑肌细胞培养 :无菌条件下取大鼠胸主动脉段 ,按Ｈｏｆｍａｎ的贴片法原代培养血管平滑肌细胞。本实验选用 5～ 10代细胞进行实验。2 .细胞总ＲＮＡ的提取 ,ＲＮＡ变性电泳 ,转膜 :采用异硫氰酸胍一步法…     

血管紧张素Ⅱ、血管内皮生长因子与糖尿病视网膜病变的关系

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病的主要慢性眼部并发症之一，DR的发生主要与糖尿病的病程有关，患糖尿病10年者，约50％有DR；20年后，几乎80％-90％的患者将发生DR。DR也是一种主要的致盲眼病，能导致双眼不可逆性失明，在失明的患者中，约85％由DR引起。目前对于DR的发病机制尚未完全清楚，近年来多数的学者认为血管内皮生     

糖尿病性视网膜病变血管内皮生长因子与糖基化终末产物的关系

目的 研究糖尿病性视网膜病变(DR)血管内皮细胞生长因子(VEGF)与蛋白质糖基化终末产物(AGEs)的关系.方法 建立糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(M),糖尿病1个月组(M1)、3个月组(M3)、5个月组(M5).在不同时间点取视网膜,在视网膜切片上行VEGF免疫组化,同时在透射电镜下观察各组视网膜超微结构,并检测动脉血清中AGEs水平.结果 视网膜VEGF免疫组化染色显示,M3组VEGF阳性表达率为33.3%,M5组为88.9%;VEGF免疫组化阳性组的AGEs水平(91.31±17.28)高于阴性组(68.60±14.38),差异有统计学意义(F=5.80,P=0.029 4).M1组与M组相比AGEs水平增加,但差异无统计学意义(P>0.05),而M3、M5组与M组相比AGEs水平明显增加(P<0.05,P<0.01).透射电镜观察:M 组未见视网膜微血管异常改变,从M1组开始出现异常改变,以M5组最明显,表现为基底膜节段性增厚,内皮细胞肿胀变形,周细胞核异染色质浓集居边,线粒体肿胀变性,甚至呈空泡状.结论 糖尿病视网膜病变模型AGEs水平升高与VEGF表达增强一致.