旋转离心柱提取全血DNA在HLA基因分型中的应用

目的采用旋转离心柱提取人类基因组DNA,能更好的适用于临床肾移植特别是尸肾移植的HLA基因分型。方法18份EDTA-K。抗凝的2ml全血标本分别采用标准酚一氯仿法、快速盐析法和旋转离心柱法提取DNA,做HLA-DR基因分型。然后就所获DNA浓度和纯度、操作时间、分型结果3个方面进行统计学分析。结果3种方法提取的DNA平均含量差异无统计学意义;采用旋转离心柱法和标准酚氯仿法提取的DNA纯度高于快速盐析法差异有统计学意义;整个操作时间旋转离心柱快于标准酚氯仿法和快速盐析法,差异有统计学意义;5份全血标本采用这3种方法获得的模板DNA基因分型结果完全相同,差异无统计学意义。结论采用旋转离心柱提取人类白细胞DNA,操作简单、快速,总耗时60～70min,分型方法稳定、可靠,无一例失败,能更好的适用于临床肾移植特别是尸肾移植的HLA基因分型。     

不同样品提取方法对地中海贫血基因诊断的影响

目的:考察不同全血基因组提取方法对地中海贫血基因诊断的影响.方法:使用酚/氯仿抽提法、盐析法、Chelex快速法和硅吸附法提取全血基因组DNA.使用分光光度计和电泳法检测提取DNA的质量.结果:4种方法提取的DNA无明显质量差异,但地中海贫血基因检测试剂盒检测结果标明,除Chelex快速法提取的DNA有时会出现扩增效果不好外,其他方法提取的DNA都可获得满意的效果.结论:4种基因组提取方法均可用于地中海贫血的基因诊断,但在临床应用中应格外小心.     

三种简易提取全血基因组DNA方法的比较

目的比较兰种快速、简便、适用、低成本的从全血中提取基因组DNA的方法。方法选用快速氯仿-异戊醇法、简化盐析法、改良碘化钾法直接从全血中提取基因组DNA。结果改良碘化钾法提取的DNA纯度及含量最高，快速氯仿-异戊醇法次之，简化盐析法则相对较低。结论改良碘化钾法为较好的提取基因组DNA的方法。     

两种从陈旧血中抽提基因组DNA方法的比较

目的比较盐析法和磁珠法从陈旧血中抽提基因组DNA的效果和特点,以便常规用于骨髓库HLA基因分型。方法使用TECAN全自动工作站为平台,分别用Gentra盐析法DNA抽提试剂盒和Promega磁珠法DNA抽提试剂,从48份陈旧全血样本中抽提基因组DNA,提取的基因组DNA均溶于100μlTE中;然后用紫外分光光度计测定其产量和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA样本的完整性。结果从400μl陈旧全血中提取基因组DNA,用盐析法获得的DNA含量为28.6±8.7ng/μl,A260/A280值平均为1.63±0.209;用磁珠法获得的DNA含量为94.2±10.3ng/μl,A260-A320/A280-A320值平均为1.821±0.102;琼脂糖电泳法检测表明两种方法提取的DNA的分子量均大于15kb。结论使用磁珠法从陈旧血中所获得的DNA的产量和纯度明显高于盐析法,适合于骨髓资料库陈旧血样本的常规HLA基因分型实验以及下游的分子生物学实验。     

两种从陈旧血中抽提基因组DNA方法的比较

目的 比较盐析法和磁珠法从陈旧血中抽提基因组DNA的效果和特点,以便常规用于骨髓库HLA基因分型.方法 使用TECAN全自动工作站为平台,分别用Gentra盐析法DNA抽提试剂盒和Promega磁珠法DNA抽提试剂,从48份陈旧全血样本中抽提基因组DNA,提取的基因组DNA均溶于100 μlTE中;然后用紫外分光光度计测定其产量和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA样本的完整性.结果 从400 μl陈旧全血中提取基因组DNA,用盐析法获得的DNA含量为28.6±8.7 ng/μl,A260/A280值平均为1.63±0.209;用磁珠法获得的DNA含量为94.2±10.3 ng/μl,A260-A320/A280-A320值平均为1.821±0.102;琼脂糖电泳法检测表明两种方法提取的DNA的分子量均大于15 kb.结论 使用磁珠法从陈旧血中所获得的DNA的产量和纯度明显高于盐析法,适合于骨髓资料库陈旧血样本的常规HLA基因分型实验以及下游的分子生物学实验.     

人类基因组DNA四种不同抽提方法比较

目的探讨四种不同人类基因组DNA抽提方法的最佳方法.方法分别用淋巴细胞分离液、红细胞裂解液处理全血样本,用经典酚醇法、盐析法、碘化钾法、煮沸法提取DNA,比较这些方法所获得的DNA模板对PCR法检测HLA的影响,并进行了标本放置不同时间对DNA抽提结果的影响的实验.结果在所比较的几种方法中,经典酚醇法、盐析法、碘化钾法提取的DNA有较高的纯度和浓度,以其为模扳所进行的PCR结果较好,其中以碘化钾法的操作最为简便可靠.结论常规抽提DNA以碘化钾法最为适用,一月内4.C放置全血标本对人类基因组DNA抽提结果无明显影响.     

外周血单个核细胞DNA提取方法的研究进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件.外周血作为一种常用的临床检测材料,如何从外周血单个核细胞中快速、高效的分离提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要.目前,DNA的抽提方法有很多,如酚-氯仿法、盐析法、离心吸附柱法等人工方法,以及磁珠法等半自动方法及试剂盒法.本文就从外周血血液中提取DNA方法的原理、具体操作步骤及方法评估等给予简要的综述.     

霍乱弧菌基因组DNA提取方法的比较研究

目的 目前细菌DNA提取方法众多,但由于提取原理和步骤的差别,获得DNA的浓度及纯度各不相同,本文通过霍乱弧菌基因组DNA提取方法的比较研究,为不同需求提供不同的DNA提取方法建议。 方法 本文采用4种不同DNA提取方法(酚-氯仿抽提法、CTAB法、试剂盒法和液氮研磨法)提取霍乱弧菌基因组DNA,并比较各种方法提取DNA的效果。 结果 酚-氯仿抽提法和CTAB法提取的基因组DNA效果相对较差,但成本低;液氮研磨法提取的基因组DNA效果大大改进;试剂盒法不仅操作简便,而且提取的基因组DNA效果最好。 结论 4种方法均适合霍乱弧菌的聚合酶链反应(PCR)检测,试剂盒法还适用于分子分型和基因组测序分析。     

纳米磁珠法与试剂盒法分析载脂蛋白E基因的多态性

背景：相对于血液标本,口腔拭子标本更利于大规模载脂蛋白E基因多态性分析的研究,但目前对口腔拭子标本基因组DNA的提取尚无统一方法。 目的：探索合适的口腔拭子标本基因组提取方法以分析载脂蛋白E基因的多态性。 方法：收集50例散发性阿尔茨海默病患者口腔拭子标本,每份标本分别应用纳米磁珠法与PicoDNA微量核酸提取试剂盒法提取基因组DNA,对比分析两种方法获得的基因组DNA纯度和浓度,后续进行PCR反应,应用DNA电泳确认有无成功扩增出目的条带,通过DNA测序方法分析载脂蛋白E基因的多态性。 结果与结论：两种方法提取的基因组DNA纯度均较好,纳米磁珠法提取的基因组DNA浓度要高于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法所得浓度（P〈0.05）。两组获取的基因组DNA均可成功进行PCR扩增,但电泳结果示纳米磁珠法扩增的目的条带更清楚。两组PCR产物DNA测序结果一致,载脂蛋白E基因ε2、ε3、ε4基因型的比例分别是6%,71%,23%。表明纳米磁珠法相对于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法提取口腔拭子标本基因组DNA更适合用于大样本载脂蛋白E基因多态性的研究。     

固相载体法提取病毒性乙型肝炎患者血清DNA的研究

【目的】寻找简单快速地提取血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA的方法.【方法】分别用盐酸胍-硅胶法、酚氯仿法和煮沸裂解法同时提取血清HBV DNA并应用于荧光定量PCR.【结果】盐酸胍-硅胶法所得HBV DNA量高于酚氯仿法和煮沸裂解法（P〈0.05）,并且盐酸胍-硅胶法所得结果的重复性优于酚氯仿法和煮沸裂解法（CV分别为0.28,0.31和0.37）.【结论】盐酸胍-硅胶法提取HBV DNA简单、快速且可靠,适用于HBV DNA定量测定.     

改良碘化钾法提取冻存外周血基因组DNA的方法探讨

目的探讨用改良碘化钾法（改良法）提取长期冻存外周血基因组DNA的方法。方法对碘化钾（KI）法加以改良,包括：血量由100μL增加到200μL;使用0．9％NH4CL溶液代替无菌重蒸馏水裂解红细胞;增加裂解白细胞膜的5mol／LKI溶液的用量（为70μL）;低温（4℃）离心。然后用改良碘化钾法从82份．80℃冻存外周血标本中提取基因组DNA。同时使用碘化钾法提取其中的30份血标本,比对两种方法提取DNA的浓度和纯度,并进行CYP2C19相关基因PCR扩增。结果两种方法所提取的DNA浓度和纯度分别是碘化钾法为128．2±34．9μg／mL和A260／A280 1．74±0．08,改良法为220±91．29μg／mL和A260／A280 1．87±0．12。改良法获得的DNA纯度更高,差异有统计学意义（P〈0．01）,通过增加样本量及对方法进行改良获得的DNA量较多。对改良后方法提取的基因组DNA进行PCR扩增,结果稳定。结论改良碘化钾法从长期冻存外周血中所提取的基因组DNA质量较高,能够满足对临床冻存样本研究的需求。     

固相载体法提取全血中DNA

目的　寻找简便快速的从全血中分离高质量DNA的方法。方法　分别用异硫氰酸胍 硅胶法和经典的酚 氯仿法从全血中提取DNA并进行比较。结果　异硫氰酸胍 硅胶法提取DNA平均含量 (3.70 μg/ 10 0 μl全血 )高于酚 氯仿法 (2 .99μg/ 10 0 μl全血 ) ,P <0 .0 5 ,纯度无显著差异。 2法抽提的DNA琼脂糖凝胶电泳结果及PCR和限制性酶切反应的效果无差异 ,但异硫氰酸胍 硅胶法更为简便 ,所需时间不到 1h。结论　异硫氰酸胍 硅胶法提取全血中DNA简单、快速且可靠     

石蜡包埋组织中DNA提取方法的比较

目的通过比较两种从石蜡包埋组织中提取基因组DNA的方法,确定一种高效、经济而简便的方法指导实际工作。方法按照两种方法（脱蜡法与非脱蜡法）提取DNA,比较所提DNA的质量,PCR扩增β-Globin基因作为基因分析的对照扩增,并对其中非脱蜡法进行改良。结果两种方法所提取的DNA均能达到相关分子学实验的要求,PCR扩增带清晰,结果较为相似。结论非脱蜡法也能提取出适用于PCR技术要求的DNA,方法简便、经济。     

改良盐酸胍法提取脐血DNA 用于HLA基因分型

为了比较经典的盐酸胍(Gu·HCl)抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法在提取脐血DNA的效果,探讨这两种方法在脐血组织相溶性抗原(HLA)基因分型中的应用,使用盐酸胍抽提DNA法和改良盐酸胍抽提DNA法提取72例脐血标本的DNA,并分别测定其DNA的浓度和纯度,采用序列特异性引物聚合酶反应方法(PCRSSP)比较这两种方法所提取的DNA.结果表明两种方法提取脐血DNA均获成功;根据对DNA的质量监测发现,用改良盐酸胍抽提DNA在质量上较盐酸胍法好;用于HLA基因分型时,改良盐酸胍抽提DNA法可减少非特异性条带的出现.结论改良盐酸胍抽提DNA法不但操作简便,成本下降,而且在最少血量中能提取出高纯度的DNA,减少非特异性条带的出现.该法完全可以满足脐血库的日常脐血样品DNA的提取以及脐血HLA基因分型的要求.     

Modified salting-out method: high-yield, high-quality genomic DNA extraction from whole blood using laundry detergent

Different approaches have been used to extract DNA from whole blood. In most of these methods enzymes (such as proteinase K and RNAse A) or toxic organic solvents (such as phenol or guanidine isothiocyanate) are used. Since these enzymes are expensive, and most of the materials that are used routinely are toxic, it is desirable to apply an efficient DNA extraction procedure that does not require the use of such materials. In this study, genomic DNA was extracted by the salting-out method, but instead of using an analytical-grade enzyme and chemical detergents, as normally used for DNA isolation, a common laundry powder was used. Different concentrations of the powder were tested, and proteins were precipitated by NaCl-saturated distilled water. Finally, DNA precipitation was performed with the use of 96% ethanol. From the results, we conclude that the optimum concentration of laundry powder for the highest yield and purity of isolated DNA is 30 mg/mL. The procedure was optimized, and a final protocol is suggested. Following the same protocol, DNA was extracted from 100 blood samples, and their amounts were found to be >50 microg/mL of whole blood. The integrity of the DNA fragments was confirmed by agarose gel electrophoresis. Furthermore, the extracted DNA was used as a template for PCR reaction. The results obtained from PCR showed that the final solutions of extracted DNA did not contain any inhibitory material for the enzyme used in the PCR reaction, and indicated that the isolated DNA was of good quality. These results show that this method is simple, fast, safe, and cost-effective, and can be used in medical laboratories and research centers.     

肺结核患者粪便TB-DNA提取方法的应用比较

目的比较煮沸裂解法、酚/氯仿法和试剂盒法3种DNA提取法在肺结核患者粪便标本中检测TB-DNA的应用效果。方法收集肺结核患者粪便标本,分别用煮沸裂解法、酚/氯仿法和试剂盒法提取DNA,比较其TB-DNA实时荧光聚合酶链反应(PCR)扩增的检测阳性率及扩增效率,分析不同方法的差异。结果对于痰抗酸涂片阴性患者的粪便标本,3种方法均未测到有TB-DNA扩增。痰抗酸涂片阳性患者的粪便标本,煮沸裂解法、酚/氯仿法和试剂盒法的TB-DNA检出率分别为45%、70%和80%。酚/氯仿法与试剂盒法TB-DNA的定量结果比较,存在显著性差异,试剂盒法提取扩增效果显著强于酚/氯仿法。结论试剂盒法可有效去除粪便标本中的PCR抑制物,TB-DNA检出率和定量结果明显优于煮沸裂解法和酚/氯仿法,对于无法产生痰或咳出痰的肺结核患者的实验室诊断具有较高的应用价值。     

自动提取大样本全血基因组DNA方法的建立

目的建立从大样本全血中自动提取基因组DNA的方法,并评价提取DNA的质量和产量。方法基因组DNA使用MiniPrep75-Ⅱ自动工作站提取;DNA样本的纯度和含量用紫外分光光度法测定;DNA的完整性用琼脂糖电泳法测定。结果从100μl全血中平均可提取到(7.33±2.58)μg基因组DNA;DNA样本的纯度平均为1.647±0.135(A260/A280);琼脂糖电泳法测得DNA的分子量约为21kb。结论本方法可以快速从大样本全血中自动提取较高质量的基因组DNA,所得DNA适用于下游的分子生物学实验。     

基因组DNA高通量提取技术及其在骨髓库捐献者样本HLA基因分型中的应用

本研究旨在建立从全血EDTA抗凝样本中高通量提取基因组DNA的有效方法,以常规应用于Luminex rSSO HLA流式磁珠基因分型。使用2ml深孔板和TECAN DNA全自动工作站,从288份骨髓捐献者样本中提取基因组DNA提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,并采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性;DNA样本用One lambda rSSO HLA—A、B和DRB1基因分型试剂盒进行PCR扩增、分子杂交和Luminex流式磁珠分析仪检测,统计分析每一DNA样本HLA—A、B和DRB1基因扩增产物经DNA探针分子杂交后的阳性磁珠和阴性磁珠的荧光信号强度。结果表明：从400μl全血中提取了基因组DNA,288份样本的DNA产量平均为3．217±0．715μg,A260／A280值平均为1．710±0．103,A260-A320／A280-A320值平均为1．761±0．151;用琼脂糖凝胶电泳法测得DNA的分子量均大于15kb;每一样本mA—A、-B和-DRB1杂交后的阳性磁珠的荧光信号强度均〉600RFU,而阴性磁珠的荧光信号强度〈50RFU。结论：本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得的基因组DNA适用于高通量中华骨髓捐献者样本的HLA流式磁珠基因分型等下游的移植免疫学与分子生物学实验。