糖痹康颗粒调控AMPK/NF-κB通路改善糖尿病大鼠坐骨神经炎症反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调控腺苷活化蛋白激酶/核转录因子-κB（AMPK/NF-κB）通路对糖尿病大鼠坐骨神经炎症的影响。方法 SD大鼠高脂高糖饲料诱导连续8周后按单次35 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造模。成模后按体质量、血糖随机将大鼠分为模型组和各给药组、糖痹康颗粒低、中、高剂量组（0.625、1.25、2.5 g·kg^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1）,并设正常组。成模后持续给药干预12周。期间分别检测治疗前及治疗第4、8、12周大鼠的体质量、血糖水平及热痛阈;于给药第12周时取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）、劳克坚牢蓝（LFB）染色,扫描电镜观察坐骨神经超微结构变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠坐骨神经组织中AMPK、磷酸化（p）-AMPK、NF-κB的蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠造模后各时间点血糖浓度、热痛阈均显著升高（P<0.01）;坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达显著升高（P<0.01）,p-AMPK/AMPK蛋白表达显著降低（P<0.01）。经糖痹康颗粒治疗后,与模型组比较,糖痹康颗粒各组热痛阈明显降低（P<0.05,P<0.01）,坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;糖痹康颗粒高、中剂量组p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。坐骨神经形态学观察显示,糖痹康颗粒治疗后大鼠坐骨神经排列整齐度、致密程度、脱髓鞘变化均优于模型组。结论 糖痹康颗粒可以改善糖尿病大鼠坐骨神经功能、减轻神经炎症损伤,其作用机制可能与上调AMPK/NF-κB通路中AMPK的表达,抑制下游NF-κB表达,从而减轻因NF-κB激活引起IL-1β、TNF-α等炎症因子升高造成的神经炎症反应相关。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经内质网应激IRE1α/CHOP通路的影响

目的 基于肌醇需求酶1α（IRE1α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路,研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经在内质网应激方面的保护作用。方法 取60只大鼠予高糖高脂饲料喂养6周,然后按35 mg·kg^-1腹腔注射链尿佐菌素,3 d后检测大鼠随机血糖,连续检测3 d,将血糖持续≥16.7 mmol·L^-1的大鼠纳入实验,共48只。将48只大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,另设置10只为正常组。连续干预16周。16周后通过卢卡斯快蓝染色（LFB）光镜下观察各组大鼠坐骨神经结构,透射电镜观察各组大鼠坐骨神经超微结构,采用化学荧光法检测大鼠血清活性氧（ROS）含量,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应分别检测大鼠坐骨神经磷酸化IRE1α（p-IRE1α）蛋白、IRE1α mRNA、CHOP蛋白和mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中ROS含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠血清中ROS含量显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经出现病理改变;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经病理有所改善。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经（p-IRE1α）、CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经p-IRE1α、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经IRE1α、CHOP mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经IRE1α和CHOP mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可以通过抑制内质网应激IRE1α/CHOP途径相关蛋白和mRNA的表达,从而减轻内质网应激诱导的细胞凋亡,改善糖尿病大鼠坐骨神经结构和功能,从而防治糖尿病周围神经病变。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关Bax和Caspase-12的影响

目的 研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白与mRNA表达的影响,以探究黄芪桂枝五物汤加减治疗糖尿病周围神经病变的作用机制。方法 选用动物实验方法进行研究,将60只雄性SD大鼠通过高糖高脂饲料喂养联合链尿佐菌素（STZ）腹腔注射诱导成糖尿病大鼠动物模型,连续3 d随机血糖≥16.7 mmol·L^-1者为糖尿病大鼠造模成功,将48只造模成功的糖尿病大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,每组各12只,并设正常组10只。监测大鼠体质量和随机血糖水平;干预16周末通过Key point肌电采集系统检测大鼠坐骨神经传导速度;分别通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经中Bax和Caspase-12蛋白与mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量显著下降（P<0.01）,随机血糖水平显著升高（P<0.01）;干预16周,与模型组比较,中药高剂量组大鼠体质量明显升高（P<0.05）,其他给药组体质量变化差异无统计学意义;各给药组随机血糖水平均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,干预16周,模型组大鼠运动和感觉神经传导速度显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠运动和感觉神经传导速度均明显升高（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经Bax和Caspase-12 mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,α-硫辛酸组、中药高剂量组大鼠坐骨神经Bax mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药低剂量组坐骨神经Bax mRNA表达降低有下降趋势;各给药组大鼠坐骨神经Caspase-12 mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可能通过抑制坐骨神经细胞凋亡来改善和修复糖尿病大鼠坐骨神经损伤。     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

补阳还五汤对大鼠坐骨神经横断吻合术后MAP-2，NF-M，GAP-43蛋白表达的影响

目的 探讨补阳还五汤对坐骨神经横断吻合术后，大鼠坐骨神经中微管相关蛋白-2（MAP-2），神经丝蛋白（NF-M），生长相关蛋白-43（GAP-43）表达量的影响，探究补阳还五汤促进周围神经再生的机制。方法 实验选取SD大鼠作为实验对象，实验模型选取坐骨神经横断模型，随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组高、中、低剂量（29.6，14.8，7.4 g·kg^-1）组、弥可保（0.156 mg·kg^-1）组，模型组、假手术组给予等体积蒸馏水灌胃。造模成功后各组使用相应药物干预4周，4周后测试各组大鼠的坐骨神经功能指数（SFI），斜板实验度数及坐骨神经苏木素-伊红（HE）染色，并通过免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠坐骨神经吻合处的MAP-2，NF-M，GAP-43的蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠SFI，斜板实验度数，MAP-2，NF-M，GAP-43表达量显著增高（P<0.01）；与模型组比较，补阳还五汤高、中、低剂量组SFI，斜板实验度数，MAP-2，NF-M，GAP-43表达量均明显增加（P<0.05，P<0.01）。结论 补阳还五汤对大鼠坐骨神经横断吻合术后神经再生具有十分积极的作用。     

肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠高原肺水肿的防治作用

目的：探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎（UC）大鼠髓样分化因子88（MyD88）的影响。方法：将60只大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组（0.3 g·kg^-1）及健脾益肠散高（204 g·kg^-1）、中（136 g·kg^-1）、低剂量（68 g·kg^-1）组,每组10只;除正常组外,其余均采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇法复制UC大鼠模型;灌胃给药21 d后,用ELISA、免疫组化、Western blot及RT-PCR法检测各组大鼠血清MyD88含量和结肠组织MyD88的表达。结果：模型组大鼠血清MyD88水平及结肠组织MyD88蛋白和mRNA表达均明显高于正常组（P<0.01）;健脾益肠散高、中剂量组血清MyD88含量和结肠MyD88蛋白及mRNA表达均较模型组降低,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;健脾益肠散低剂量组MyD88蛋白表达亦低于模型组（P<0.05）;健脾益肠散高剂量组对MyD88的影响与柳氮磺吡啶组比较差异不显著,但明显优于低剂量组（P<0.05）。结论：健脾益肠散对UC肠黏膜免疫的保护作用可能与降低外周血MyD88水平及结肠组织MyD88的蛋白和基因表达有关。     

双蓣调脂汤对高胆固醇血症模型大鼠肝组织HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路的影响

目的 观察高胆固醇血症大鼠肝组织中肝细胞核因子1α（HNF1α）,前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型（PCSK9）,低密度脂蛋白胆固醇受体（LDLR）的表达水平,探讨双蓣调脂汤调节胆固醇代谢、缓解高胆固醇血症的作用机制。方法 40只雄性SD大鼠随机抽取8只为正常组予普通饲料喂养,其余32只予高脂饲料喂养,高胆固醇血症模型造模成功后,分为模型组,双蓣调脂汤低剂量组（7.8 g·kg^-1）,双蓣调脂汤高剂量组（15.6 g·kg^-1）,辛伐他汀组（4 mg·kg^-1）,每组8只,连续灌胃给药8周。生化法检测血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组化检测大鼠肝组织中PCSK9和LDLR的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝组织HNF1α,PCSK9和LDLR mRNA与蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著升高（P<0.01）,肝脂肪变性明显,HNF1α,PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,LDLR mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,双蓣调脂汤高剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著降低（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠血清TC,LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,各给药组HDL-C水平没有明显变化,各治疗组肝脂肪变性明显改善,各治疗组大鼠肝脏HNF1α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,双蓣调脂汤低、高剂量组大鼠肝脏PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,辛伐他汀组大鼠肝脏PCSK9 mRNA水平显著升高（P<0.01）,蛋白表达水平呈降低趋势,各治疗组大鼠肝脏LDLR mRNA水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤高剂量组大鼠肝脏LDLR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠肝脏LDLR蛋白表达量呈升高的趋势,免疫组化结果显示各治疗组PCSK9阳性表达减弱,LDLR阳性表达增强。双蓣调脂汤高剂量组的治疗效果略优于辛伐他汀组,双蓣调脂汤低剂量组的治疗效果与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。结论 双蓣调脂汤可能通过HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路降低血脂水平,在调节胆固醇代谢和减轻大鼠高胆固醇血症中发挥积极作用。     

酸枣仁汤防治睡眠剥夺性大鼠学习记忆功能变化及其对NLRP3通路的影响

目的 基于Nod样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体通路探讨酸枣仁汤改善睡眠剥夺大鼠学习记忆功能的作用机制。方法 将实验大鼠随机分为正常组,模型组,艾司唑仑组（5.4×10^-4 g·kg^-1·d^-1）,酸枣仁汤低剂量组（4.59 g·kg^-1·d^-1）,酸枣仁汤高剂量组（18.36 g·kg^-1·d^-1）。除正常组外,其他组构建睡眠剥夺动物模型,造模与给药同时进行,连续给药30 d。应用水迷宫评价小鼠学习记忆力;应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠海马中Nod样受体蛋白3（NLRP3）,半胱天冬酶募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-18（IL-18） mRNA和蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠上平台潜伏期,游泳总路程和第1次抵原平台时间则显著增加（P<0.01）,穿越平台次数和目标象限时间减少（P<0.01）;与模型组比较,酸枣仁汤低剂量组和酸枣仁汤高剂量组大鼠上平台潜伏期,游泳总路程和第1次抵原平台时间不同程度减少（P<0.05,P<0.01）,穿越平台次数和目标象限时间明显增加（P<0.05,P<0.01）,艾司唑仑组变化不显著。与正常组比较,模型组大鼠海马中NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18 mRNA和蛋白表达量明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组大鼠比较,酸枣仁汤低剂量组和酸枣仁汤高剂量组大鼠海马中NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18 mRNA表达量均有不同程度降低（P<0.05）,艾司唑仑组大鼠海马中NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18 mRNA表达量也有所减少,但差异无明显统计学意义。结论 酸枣仁汤可改善睡眠剥夺大鼠学习记忆功能,其机制与抑制海马NLRP3炎性小体通路,减轻神经炎性相关。     

糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠血清NGF含量及坐骨神经NGF mRNA表达的影响

目的：观察中药复方糖络宁对糖尿病大鼠血清NGF含量及坐骨神经组织NGF mRNA表达的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、西药组和糖络宁高、中、低剂量组并分别给药,共给药12周,另设正常对照组,给药结束后,观察各组大鼠血清NGF含量及坐骨神经组织NGF mRNA表达。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠血清NGF含量明显下降;与模型组比较,西药组与糖络宁各剂量组大鼠血清中NGF含量明显升高;糖络宁高剂量组血清NGF含量又明显高于西药组。与正常对照组比较,模型组大鼠坐骨神经组织中NGF mRNA表达明显下降;与模型组比较,西药组与糖络宁中、高剂量组大鼠坐骨神经组织中NGF mRNA表达明显升高。结论：糖络宁可提高糖尿病大鼠血清NGF水平,可上调糖尿病大鼠坐骨神经组织NGF mRNA表达,这可能是糖络宁治疗糖尿病周围神经病变的机制。     

二十五味鬼臼丸通过Wnt/β-catenin信号通路改善去卵巢大鼠骨质疏松症

目的 探讨藏族药二十五味鬼臼丸通过经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路改善去卵巢大鼠的骨质疏松症的机制。方法 将48只3月龄SD雌性大鼠随机分为模型组（OVX）、假手术组（Sham）、雌二醇组（E₂）、二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组,除假手术组大鼠摘取卵巢附近部分脂肪组织外,其余各组大鼠均摘取卵巢构建去卵巢骨质疏松大鼠模型。术后2周开始给药处理,雌二醇组给予戊酸雌二醇0.1 mg·kg^-1,二十五味鬼臼丸组给予二十五味鬼臼丸高剂量800 mg·kg^-1,中剂量400 mg·kg^-1,低剂量200 mg·kg^-1,模型组及假手术组给予同体积的生理盐水,连续灌胃12周,每日1次。取材后,苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠右侧股骨及腰椎的骨形态变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）、Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）、骨钙素（BGP）的水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测股骨中β-catenin、矮小相关转录因子2（Runx2） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测β-catenin、Runx2和低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（Lrp‐5）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨小梁紊乱且稀疏,骨小梁间连接较少,血清BALP、BGP、PINP水平显著下降（P<0.01）,CTX-Ⅰ、TRAP5b水平显著升高（P<0.01）;股骨组织中β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平下降（P<0.01）;Lrp‐5、β‐catenin和Runx2的蛋白表达显著下降（P<0.01）。与模型组比较,二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组大鼠上述指标的异常改变得到不同程度的恢复（P<0.05,P<0.01）。结论 藏族药二十五味鬼臼丸对于治疗去卵巢大鼠骨质疏松症具有较好的效果,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关,通过上调信号通路中成骨相关基因的表达影响骨代谢。     

三黄糖肾康对糖尿病大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察三黄糖肾康对糖尿病大鼠骨组织Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。方法 采用高糖高脂饮食4周联合左下腹腔内注射新鲜配制的2%链脲佐菌素（pH 4.5）30 mg·kg^-1体质量制备糖尿病模型,成模大鼠按血糖水平随机分为模型组、三黄糖肾康低、高剂量组（12.8、38.4 g·kg^-1）、骨疏康组（1.8 g·kg^-1）,另设同周龄喂食普通饲料大鼠为空白组。各组予相应药物或生理盐水灌胃12周后,全自动生化仪检测各组大鼠空腹血糖（FBG）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清空腹胰岛素（FINS）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）;计算机微断层扫描（Micro-CT）扫描大鼠股骨,观察骨组织微结构,检测骨密度（BMD）;苏木素-伊红（HE）染色、番红O-固绿染色观察大鼠股骨组织病理变化;免疫组化（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP-5）及β-catenin蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠FBG、FINS、TRAP显著升高（P<0.01）,BALP显著降低（P<0.01）,BMD显著降低（P<0.01）,骨小梁结构松散不规则,细长疏稀,出现断裂,脂滴增多,Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,三黄糖肾康低、高剂量组FBG降低、BALP升高（P<0.05）,三黄糖肾康低剂量组FINS降低（P<0.05）,各给药组TRAP均显著降低（P<0.01）;各给药组BMD均有不同程度提高（P<0.05,P<0.01）;各给药组大鼠股骨骨小梁增多、增粗,排列较紧密、整齐,脂滴数量减少,骨微结构形态得到一定的改善;各给药组Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白平均光密度值均有不同程度提高（P<0.05,P<0.01）;Wnt3a、LRP-5和β-catenin蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）。结论 三黄糖肾康可能通过提高骨组织Wnt3a、LRP-5及β-catenin蛋白的表达,调节Wnt/β-catenin信号传导通路的失调状态,促进骨形成,减少骨吸收,降低血糖,从而达到防治糖尿病骨质疏松症的效果。     

基于“以方测证”理论从AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路探讨雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型的中医证候属性

目的 采用雷公藤多苷诱导卵泡发育不良大鼠模型,基于“以方测证”理论从腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/缺氧诱导因子-1/血管内皮生长因子（AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF）信号通路探索该模型的证候属性。方法 将48只具有规律动情周期大鼠随机分为正常组（n=8）和造模组（n=40）,造模组大鼠连续灌胃雷公藤多苷混悬液（75 mL·kg^-1）30 d,造模后将其分为模型组、四物汤组（3.69 g·kg^-1）、右归饮组（3.11 g·kg^-1）、左归饮组（7.29 g·kg^-1）和归肾丸组（10.35 g·kg^-1）,每组8只。相应药物干预14 d。巴氏染色检测各组大鼠动情周期变化;体视镜观察卵巢组织形态;苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理学及卵泡计数;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）及雌二醇（E₂）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织AMPK、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,次级、成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多,FSH、LH、AMPK mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,E₂含量,mTOR、HIF-1、VEGF mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,归肾丸组次级、成熟卵泡增多,闭锁卵泡减少,FSH、LH含量、AMPK mRNA表达及蛋白表达显著降低（P<0.01）,E₂含量、mTOR、HIF-1、VEGF mRNA表达及蛋白表达显著升高（P<0.01）。与归肾丸组比较,四物汤组、右归饮组、左归饮组成熟卵泡数量显著减少,闭锁卵泡数量显著增多（P<0.01）;四物汤组、右归饮组、左归饮组LH显著升高（P<0.01）,FSH明显升高（P<0.05）,E₂明显降低（P<0.05）;右归饮组AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05）,mTOR和HIF-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）,VEGF蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）;四物汤组mTOR和HIF-1 mRNA,VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）;左归饮组mTOR mRNA和VEGF蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 归肾丸可以抑制AMPK/mTOR/HIF-1/VEGF通路来改善卵泡发育不良大鼠模型的卵巢功能、促进卵泡成熟,且总体疗效优于左归饮、右归饮和四物汤,表明该模型的证候更符合肾精亏虚证。     

加味温胆汤调控NF-κB/NLRP3通路干预炎性反应抗大鼠糖尿病动脉粥样硬化的机制

目的 通过观察加味温胆汤对糖尿病动脉粥样硬化模型大鼠核转录因子-κB（NF-κB）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路及其相关炎性因子表达的影响,探讨该方防治糖尿病动脉粥样硬化的机制。方法 将54只SPF级大鼠随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、加味温胆汤高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组均采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）+高糖高脂饲料喂养法建立糖尿病动脉粥样硬化大鼠模型,空白组注射等剂量的柠檬酸缓冲液并喂养普通饲料。加味温胆汤高、中、低剂量组给药剂量分别是18.2、9.1、4.55 g·kg^-1·d^-1,阿托伐他汀组给药剂量为0.9 mg·kg^-1·d^-1,连续给药4周,每隔6 d检测1次大鼠尾静脉血糖,经末次给药后,麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-18（IL-18）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测腹主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白相对表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测腹主动脉NLRP3、白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平。苏木素-伊红（HE）染色法观察胸主动脉病理变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠血清IL-18、CRP、TNF-α、ICAM-1及血糖含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、IL-1β mRNA表达明显升高（P<0.05）。与模型组比较,加味温胆汤组能明显降低大鼠血清IL-18、CRP、TNF-α、ICAM-1及血糖的水平（P<0.05,P<0.01）,显著降低腹主动脉NF-κB p65、NLRP3、ICAM-1蛋白表达水平（P<0.01）,明显降低腹主动脉NLRP3、IL-1β mRNA表达水平（P<0.05,P<0.01）,明显改善大鼠胸主动脉病理损伤。结论 加味温胆汤可能通过调控NF-κB/NLRP3信号通路减少炎性因子释放和黏附,调节血糖,发挥抗糖尿病动脉粥样硬化作用。     

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的 基于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/受体相互作用蛋白激酶（RIPKs）信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖（LPS）方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^-1·d^-1灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^-1·d^-1灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、混合系列激酶样结构域蛋白（MLKL） mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低（P<0.05,P<0.01）。结论 二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。     

糖痹康对糖尿病大鼠血清神经性因子及坐骨神经神经性因子基因表达的影响

目的 :探讨糖痹康对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病周围神经病变(diabetic penipheral neuropathy,DPN)大鼠神经生长因子基因表达的影响。 方法 :用STZ建立糖尿病大鼠模型,分为正常组、模型组、弥可保组、糖痹康低、中、高剂量组。连续给药8周后处死大鼠,用ELISA法测定血清神经生长因子(NGF)活性,实时荧光定量PCR法检测坐骨神经中NGF基因的表达。 结果: 与模型组比较,糖痹康中、高剂量组血清NGF水平均显著增高(P<0.01),坐骨神经NGF基因含量显著增高(P<0.01)。 结论: 糖痹康能增加糖尿病大鼠NGF蛋白及基因的表达,从而起到对周围神经的保护作用。     

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎大鼠的影响及作用机制

目的 探讨半夏泻心汤通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）-核因子E₂相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应元件（ARE）信号通路防治慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法 取SD大鼠,除12只正常组大鼠外,其余大鼠联合造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎（CAG）模型,造模成功后随即分为模型组,维酶素组（VG,60 mg·kg^-1）及半夏泻心汤高、中、低剂量组（280,140,70 mg·kg^-1）,分别相当于半夏泻心汤生药量28,14,7 g·kg^-1。正常组及模型组大鼠给予等体积的蒸馏水,各治疗组给予相应容积的药物灌胃。治疗12周后采用苏木素-伊红（HE）染色法观察CAG大鼠胃黏膜病理变化情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测CAG大鼠胃黏膜中Nrf2,醌氧化还原酶-1（NQO1）,谷胱甘肽-S-转移酶（GST）蛋白及mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平升高（P<0.05）,胃黏膜萎缩,甚至肠化。与模型组比较,维酶素组及半夏泻心汤高、中剂量组Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05）,胃黏膜萎缩、肠化情况明显改善,且以高剂量组改善最为明显,但半夏泻心汤低剂量组作用不明显。结论 半夏泻心汤降低Nrf2的转录活性,关闭Nrf2信号通路,降低NQO1,GST的表达水平,实现正常的氧化-抗氧化平衡可能是其治疗CAG的作用机制之一。     

探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用

目的 观察蛇床子催眠活性组分（CHC）对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学、褪黑素（MT）合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶（AANAT）的影响，探讨其对松果体的保护机制。方法 60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型，MT阳性药，CHC高、中、低剂量6组，每组10只。除正常组其余各组腹腔注射4.5%PCPA混悬液，10 mL·kg^-1，连续2 d，建立大鼠PCPA失眠模型。造模后正常及模型组灌胃等体积2%聚山梨酯-80，MT组（10 mg·kg^-1），CHC高、中、低（60，30，15 mg·kg^-1）给予10 mL·kg^-1给药体积的药物，每日1次，连续7 d。给药4 d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验，采用酶联免疫吸附法检测血清MT；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测松果体AANAT蛋白表达变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加（P<0.05，P<0.01），高架开臂次数及时间比例下降（P<0.05），入睡潜伏期显著延长（P<0.01）；与模型组比较，低剂量组无明显差异，其余各组大鼠活动总距离均减少（P<0.05，P<0.01），高架开臂次数百分比升高（P<0.05），入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，模型组MT含量显著下降（P<0.01）；与模型组比较，低剂量组差异无明显统计学意义，其余各组血清MT不同程度的升高（P<0.05）。与正常组比较，模型组AANAT mRNA表达量，AANAT蛋白表达量下降（P<0.01）；与模型组比较，MT组，CHC高剂量组表达量明显增加（P<0.05）。结论 CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT，提高血清MT水平，与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关。     

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察加味真武汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅳ型胶原蛋白（COL-Ⅳ）的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量（7.2 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤中剂量（14.4 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤高剂量（28.8 g·kg^-1·d^-1）组、盐酸贝那普利（10 mg·kg^-1·d^-1）组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-Ⅳ mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高（P<0.01）;血清IL-6含量显著上升（P<0.01）;大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著升高（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.05）;肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低（P<0.01）;血清IL-6含量显著下降（P<0.01）;大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平明显升高（P<0.05）;肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著上升（P<0.01）。结论 加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。     

补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠卵巢内质网应激的调节

目的 探讨补肾助孕方对米非司酮诱导的黄体功能不全（LPD）模型大鼠卵巢内质网应激（ERS）的调控机制。方法 使用随机数表法将50只SD大鼠分为空白组，模型组，地屈孕酮（0.02 g·kg^-1）组，补肾助孕方低（0.08 g·kg^-1）、高剂量（0.24 g·kg^-1）组。使用蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠卵巢免疫球蛋白重链结合蛋白（BIP），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK），肌醇必需酶-1（IRE-1），活性转录因子6（ATF6），C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白和mRNA表达水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清孕酮（P）和雌二醇（E₂）水平。结果 与空白组比较，模型组BIP，PERK，CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01），PERK及CHOP mRNA表达明显下降（P<0.05）；而IRE-1，ATF6蛋白表达，IRE-1，BIP，ATF6 mRNA表达，血清E₂，P水平差异无统计学意义。与模型组比较，地屈孕酮组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白表达，PERK，IRE-1，BIP，ATF6，CHOP mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方低剂量组CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平明显升高（P<0.05），而PERK，IRE-1，BIP，ATF6蛋白和mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义；补肾助孕方高剂量组PERK，BIP，CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01），CHOP mRNA表达水平显著升高（P<0.01），而IRE-1和ATF6蛋白表达，PERK，IRE1，BIP，ATF6 mRNA表达及血清E₂，P水平差异无统计学意义。结论 补肾助孕方可以改善黄体功能不全，其机制可能与缓解内质网应激作用有关。     

葛根素对高血糖模型大鼠降糖作用的机制研究

 目的 探讨葛根素对糖尿病大鼠的降血糖作用及其可能机制。方法 SD大鼠随机分成6组：正常对照组,糖尿病模型组,葛根素高(160 mg·kg^-1)、中(120 mg·kg^-1)、低(80 mg·kg^-1)剂量治疗组,氨基胍（AG,100 mg·kg^-1)治疗组;各组大鼠每天腹腔注射相应药物一次,正常对照组及糖尿病模型组腹腔注射等体积丙二醇。治疗12周后,用生化、免疫学方法测定血糖、胰岛素及血清、脑垂体、胰腺组织β-内啡肽（β-endorphin,β-EP)含量,采用RT-PCR方法检测脂肪、骨骼肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、葡萄糖转运体4(glucose transporter-4,GLUT-4) mRNA的表达水平。结果 糖尿病模型组大鼠血糖含量明显高于正常对照组（P<0.01）,而胰岛素和血清、脑垂体、胰腺组织β-EP含量及脂肪、骨骼肌组织PPAR-γ、GLUT-4 mRNA表达明显低于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。经葛根素治疗后,血糖水平明显降低（P<0.01）,而胰岛素和血清、脑垂体、胰腺β-EP含量及脂肪、骨骼肌PPAR-γ、GLUT-4 mRNA表达明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论 葛根素对糖尿病大鼠血糖有降低作用,其机制可能与增加脑垂体、胰腺组织β-EP合成,增加胰岛素分泌,上调脂肪、骨骼肌组织GLUT-4基因的表达,促进葡萄糖的摄取利用有关。