利用cDNA微阵列进行宫颈鳞癌的分子筛查

目的使用cDNA微阵列筛选浸润性宫颈鳞癌的淋巴结转移相关基因。方法应用包含18 432个基因的cDNA微阵列测定IB期宫颈鳞癌的全基因序列,包括已知功能的人类转录子和表达序列标签ESTs,分为正常组、淋巴转移组、无淋巴转移三组宫颈组织。为了证实不同的基因表达,选择3个基因进行了冰冻组织的RT-PCR检测和石蜡组织的免疫组化检测。结果经统计学分析,与无淋巴转移浸润性宫颈鳞癌组织比较,有淋巴转移的癌组织有677个基因大于2倍差异,其中上调494个(72.97%),下调183个(27.03%),表达序列标签EST为61个(9.01%),这些基因涉及代谢、发育、信号传导、分化、DNA结合转录和离子通道等。6倍差异基因14个,其中只有nel(chicken)like-2下调,其余为上调基因。RT-PCR和免疫组化的结果与cDNA微阵列结果一致。结论利用cDNA微阵列检测基因的表达状态可以预测宫颈鳞癌淋巴结转移和宫颈癌的预后情况。Cx43的低表达、ETV5和整合素alpha 2的高表达可能会成为评估浸润性宫颈鳞癌恶性程度的重要指标。这些分子有利于预测浸润性宫颈鳞癌的预后及其相应的分子治疗。     

基因芯片筛选早期子宫颈鳞癌淋巴转移相关基因

目的应用基因芯片技术筛选早期子宫颈鳞癌淋巴转移相关基因。方法利用代表人类全基因组的Affymetrix U133 plus 2．0基因表达谱芯片筛查淋巴转移的早期子宫颈鳞癌组织、未转移子宫颈鳞癌组织及正常子宫颈上皮之间的基因表达差异,并进行生物信息学分析。结果与未转移子宫颈鳞癌相比,淋巴转移宫颈癌2倍以上差异表达的基因322条,其中表达上调的基因182条,表达下调的基因140条;4倍以上差异基因37条,其中在淋巴转移组织中上调基因21条,下调基因16条。差异表达基因的功能分类包括：DNA依赖的转录调节基因、发育基因、免疫反应基因、蛋白质水解基因和细胞问信号传导基因等。而三组间两两比较发现,在正常子宫颈与无转移宫颈癌组织中表达无差异的基因中,发现转移组和未转移组表达水平具有2倍以上差异的基因有23条,其中在转移组中,上调基因16条,下调基因7条。与正常子宫颈相比,未转移组中表达上调的基因中有8条基因在转移组表达下调;与正常组相比。未转移组中表达下调的基因中有6条基因在转移组表达上调。在所有未转移宫颈癌组织较正常宫颈组织表达上调的基因中,未发现在转移组有进一步表达上调的基因;在所有未转移宫颈癌组织较正常宫颈组织表达下调的基因中,也未发现在转移组有进一步表达下调的基因。结论早期子宫颈鳞癌淋巴转移是复杂的多基因作用的结果。本实验初步提供了宫颈癌发生淋巴转移的总体基因表达改变图谱。     

VEGF-C在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:在组织病理学水平探讨VEGF-C与宫颈浸润癌局部浸润、远处淋巴转移等的关系。方法:采用免疫组化LsAB法检测68例宫颈浸润癌组织、10例正常宫颈组织的石蜡标本中VEGF-C蛋白的表达;分析其与宫颈癌的临床分期、病理组织分级、淋巴结转移及间质浸润等病理特征的关系。结果:VEGF-C在正常组织中没有表达,在宫颈癌组织中高表达,并且与宫颈癌的临床分期、病理分级、淋巴转移、间质的浸润深度有关,而与组织病理类型无关。结论:宫颈癌组织中VEGF-C表达与宫颈癌的进展和淋巴转移有关。     

蛋白酶活化受体-1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨蛋白酶活化受体（PAR）-1在宫颈鳞癌、腺癌及原位癌组织中的表达情况。方法收集宫颈鳞癌组织35例、腺癌组织25例、原位癌组织20例及正常宫颈组织标本20例，采用免疫组织化学方法、PAR-1单克隆抗体检测上述组织中PAR1表达。结果PAR-1在正常宫颈组织中无表达，宫颈原位癌和宫颈浸润癌I期及Ⅱ期组的阳性表达率分别为20．0％、36．4％和44．7％，显著高于正常宫颈组（P=0．0028）。有盆腔淋巴转移的宫颈癌组的PAR-1阳性表达率为68．4％，显著高于无淋巴转移组的29．3％（P=0.0042）。结论PAR-1与宫颈癌的发生和转移密切相关。     

宫颈鳞癌组织转移相关基因的初步筛查

目的: 应用基因芯片检测盆腔淋巴结转移组和无转移组宫颈鳞癌组织中差异表达基因,从中筛选肿瘤转移相关基因。方法: 利用基因芯片技术对4例盆腔淋巴结转移组和6例无转移组宫颈鳞癌组织标本进行差异表达基因检测,并用Real-time PCR对部分差异表达基因进行验证。通过基因库检索、PUBMED文献检索和基因本体分析从差异表达基因中筛选肿瘤转移相关基因。结果: 从盆腔淋巴结转移组及无转移组宫颈鳞癌组织中筛选出表达差异明显的基因329个,通过Real-time PCR验证,基因芯片结果可靠。从差异表达基因中筛选出与肿瘤转移相关基因44个。结论: 通过基因芯片筛查,初步建立了宫颈鳞癌转移相关差异基因表达谱,说明宫颈鳞癌的转移过程受多基因调控。     

不同宫颈病变患者血清和宫颈病变组织中凋亡相关因子的表达及其临床意义

目的: 观察凋亡相关因子在不同宫颈病变患者血清和宫颈病变组织中的表达,探讨其与宫颈鳞状细胞癌(鳞癌)临床病理特征的关系。方法: 选取镜检确诊为不同宫颈病变的患者140例,其中子宫颈鳞癌70例、宫颈原位癌(CINⅢ)50例和宫颈炎20例,均空腹抽取静脉血同时留取镜检组织。采用酶联免疫法、实时荧光定量法和免疫组织化学法分别检测患者血清及不同宫颈病变组织中凋亡相关因子--肿瘤抑制基因(p53)、细胞凋亡信号受体(Fas)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞周期素E (cyclin E)蛋白和mRNA表达,并分析其蛋白表达与宫颈鳞癌临床分期、病理类型和淋巴结转移的关系。结果: 与宫颈炎患者比较,宫颈鳞癌和宫颈原位癌患者血清及宫颈组织中p53、Fas、TNF-α蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.01),而cyclin E蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01),宫颈鳞癌患者与宫颈原位癌患者比较差异无统计学意义(P>0.05);p53、Fas、TNF-α和cyclin E阳性表达率与宫颈鳞癌临床分期、病理类型和淋巴结转移均有密切关联(P<0.01)。结论: 宫颈鳞癌和宫颈原位癌患者血清和宫颈病变组织中p53、Fas和TNF-α表达水平下调和cyclin E表达水平上调可能与宫颈癌的浸润和转移有关联,可作为宫颈癌早期诊断的标记物,并可为宫颈癌的术后用药和预后判断提供理论依据。     

宫颈癌组织survivin表达的意义

目的 检测宫颈癌组织中凋亡抑制蛋白生存素(survivin)的表达,分析survivin与宫颈癌临床特征的关系.方法 采用免疫组织化学技术检测46例宫颈癌组织和癌旁宫颈组织中survivin的表达.结果 46例宫颈癌组织中survivin基因表达28例,癌旁宫颈组织中无survivin基因的表达.Survivin的表达与结肠癌的发病年龄、性别、分化程度无关(P＞0.05),而与宫颈癌的转移有关联性(P<0.05).结论 在结肠癌中survivin的表达能促进宫颈癌的发生发展和转移.     

宫颈癌淋巴道转移中VEGFR-3和TFPI的作用及关系

目的 :观察 VEGFR- 3在宫颈癌组织中的表达情况、患者血浆 TFPI抗原含量与宫颈癌淋巴道转移的关系及临床意义。方法 :用免疫组化法及图像分析法检测 VEGFR- 3在宫颈癌组织中的表达及定量 ,用 ELISA法检测患者血浆 TFPI抗原含量。结果 :宫颈鳞癌VEGF- C表达阳性 ,淋巴结发生转移者其 VEGFR- 3灰度值显著降低、TFPI水平显著增加 ,两者在鳞癌组的变化与对照组相比较有显著差异 ,VEGFR- 3灰度值与 TFPI水平在宫颈癌淋巴结转移方面呈负相关。结论 :VEGFR- 3与血浆 TFPI共同作用增加宫颈癌淋巴道转移可能 ,它们是宫颈癌淋巴道转移的有效诊断、预测指标     

HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及其与淋巴道转移的关系

目的：研究HIF-1α在宫颈鳞癌中的表达及与淋巴道转移的关系。方法：采用免疫组化法检测10例正常宫颈、55例宫颈上皮内瘤变（CIN）及75例宫颈鳞癌组织中HIF-1α及VEGF-C的表达,采用VEGFR-3免疫组织化学法标记组织标本中的淋巴管并测定微淋巴管密度（LMVD）,并分析其与临床病理特征的关系。结果：HIF-1α及VEGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达水平明显高于正常宫颈及CIN（P〈0.05）;微淋巴管主要集中在癌周组织,LMVD的高低与淋巴结转移相关（P〈0.05）;HIF-1α的表达水平与VEGF-C表达水平及癌周组织LMVD呈正相关（r=0.269,P〈0.05;r=0.407,P〈0.05）,VEGF-C的表达与癌周组织LMVD呈正相关（r=0.431,P〈0.05）。结论：HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达与淋巴结转移显著相关。HIF-1α可能通过上调VEGF-C的表达影响微淋巴管的形成,从而参与宫颈癌的淋巴道转移过程。     

宫颈鳞癌中RECK与MMP-9的表达及意义

目的:探讨宫颈鳞癌中逆转录富含半胱氨酸蛋白（RECK）和基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达及意义。方法:应用免疫组织化学法,检测20例正常子宫颈组织及70例子宫颈鳞状细胞癌中RECK和MMP-9的表达。结果:RECK蛋白在正常宫颈组织、子宫颈鳞癌组织中表达的阳性率分别为95.00%和31.43%,差异有统计学意义（P<0.01）;有淋巴转移组的阳性率较无淋巴转移组明显降低（P<0.01）。MMP-9在正常宫颈组织、子宫颈鳞癌组织中表达的阳性率分别为25.00%和80.00%,差异亦有统计学意义（P<0.01）;MMP-9表达在宫颈鳞癌有淋巴转移组的阳性率较无淋巴转移组明显升高（P<0.01）。RECK及MMP-9在宫颈鳞癌中的表达呈负相关关系（P<0.01）。结论:RECK在宫颈鳞癌中表达减少或缺失可能是通过上调MMP-9的表达从而促进宫颈鳞癌的侵袭与转移,RECK和MMP-9与宫颈鳞癌的浸润转移密切相关。     

P21及CDK6与宫颈鳞状细胞癌的关系

目的 观察P21、CDK6在宫颈鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其与宫颈鳞状细胞癌的关系.方法 采用免疫组织化学ABC法检测100例宫颈鳞状细胞癌、20例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常宫颈组织中P21及CDK6的表达情况,分析他们与癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期的关系.结果 宫颈鳞状细胞癌组织的P21及CDK6表达率均明显高于CIN组及正常组;P21的低表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床分期(P＜0.05)有关,与肿瘤分化程度(P＞0.05)无关;CDK6的高表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期(P＜0.05)均有关.结论 P21及CDK6表达异常可能在宫颈鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用;且二者对判断宫颈鳞状细胞癌的预后有一定意义.     

nm23基因在下咽癌中的表达及其意义

目的 探讨nm23基因与下咽癌组织生物学行为之间的相关性。方法 运用免疫组化二步法检测下咽癌组织中nm23单克隆抗体的表达。结果 36例下咽癌组织中nm23蛋白表达阳性率为64％。nm23蛋白表达在高、低分化肿瘤中差异有显著性（P＜0.05)，并且在发生颈淋巴结转移的肿瘤中其阳性率明显低于未发生淋巴结转移者（P＜0.05)。而与肿瘤的临床分期无明显关系（P＞0.05)。结论 nm23基因可能具有抑制下咽癌淋巴结转移的作用。     

子宫颈鳞癌中转移相关基因2的表达及其与预后的关系

目的：研究转移相关基因2(metastasis tumor-associated protein 2,MTA2)在子宫颈鳞癌组织中的表达水平,探讨其与子宫颈鳞癌临床病理因素之间的联系及其预后价值。方法：采用免疫组织化学和RT-PCR检测MTA2蛋白及mRNA在子宫颈鳞癌、子宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中的表达情况,分析其与临床病理因素的关系,同时综合临床病理资料及随访数据对子宫颈鳞癌患者进行预后分析。结果：MTA2蛋白在正常宫颈组织、子宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中的表达率分别为0,30.0%,73.4%,且其表达水平与宫颈癌国际妇产科协会(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);MTA2 mRNA 在正常宫颈组织、子宫颈上皮内瘤变组织、宫颈鳞癌组织中的表达量分别为0.437±0.028,0.737±0.102,1.172±0.068,且其表达量亦与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄及肿瘤的分化程度无关(P>0.05);Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,MTA2蛋白表达阳性患者与阴性患者无瘤生存期分别为(23.19±1.87)和(39.57±3.16)个月,经log-rank检验得出两组患者无瘤生存期差异有统计学意义(χ2=20.225,P<0.001);多因素COX比例风险模型预后分析显示,MTA2蛋白表达水平、FIGO分期及淋巴结转移为宫颈癌有效的独立预后指标(P<0.05)。 结论：MTA2的高表达与宫颈癌的发生、进展及转移有关;MTA2蛋白表达水平、FIGO分期及淋巴结转移可作为宫颈癌预后的3个相对独立的因素;MTA2有可能成为判断宫颈癌患者进展及预后的一个新的分子标志物。     

VEGF-C表达及D2-40标记的微淋巴管密度与宫颈癌淋巴道转移的关系

目的 探讨血管内皮生长因子C（VEGF-C）表达和D2-40标记的微淋巴管密度（MLVD）与宫颈癌淋巴道转移的关系.方法 应用全自动多功能组织病理检测系统检测80例宫颈癌组织中VEGF-C及D2-40表达,对D2-40阳性脉管进行MLVD计数.结果 宫颈癌组织中VEGF-C表达明显增高（49/80）,而正常宫颈黏膜组织中未见VEGF-C表达;宫颈癌有淋巴结转移组（20/26）VEGF-C表达水平较无转移组（29/54）增高.宫颈癌组织中MLVD较正常黏膜组织增高;有淋巴结转移组MLVD高于无转移组,且宫颈癌组织中VEGF-C表达与MLVD呈正相关.结论 VEGF-C在宫颈癌组织中表达增高及MLVD计数增高与宫颈癌浸润、淋巴道转移等生物学行为密切相关,可作为评估宫颈癌预后的重要生物学指标;VEGF-C可能促进淋巴管新生.     

子宫颈鳞癌组织中MMP-7和CK20的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)和细胞角蛋白20(CK20)在子官颈鳞癌中的表达特点及其相互关系,以及它们在子官颈鳞癌侵袭转移中的作用.方法 采用RT-PCR法检测33例子宫颈鳞癌和12例正常宫颈组织中MMP-7 mRNA和CK20 mRNA的表达水平,分析其表达水平与临床病理特征的关系.结果 MMP-7 mRNA在子宫颈鳞癌组织中的表达水平显著高于正常宫颈组织(P＝0.018),与子宫颈鳞癌分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与临床分期、年龄等因素无关(P>0.05);CK20 mRNA在子宫颈鳞癌组织中的表达水平高于正常宫颈组织(P=0.002),与子宫颈鳞癌分期、分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与年龄等因素无明显相关(P>0.05).在子宫颈鳞癌中MMP-7mRNA与CK20 mRNA的表达之间存在正相关关系(r=0.42735,P=0.0262).PCR法检测MMP7和CK20mRNA阳性率显著高于免疫组化法(P<0.05).结论 MMP-7 mRNA及CK20 mRNA的高表达与子宫颈鳞癌的侵袭转移有关,可作为检测早期官颈鳞癌淋巴转移的生物学指标.     

利用组织芯片检测上皮型钙黏素在宫颈癌浸润转移中的作用

目的 检测上皮型钙黏素E-cad在宫颈鳞癌中的表达，探讨其在浸润转移中的作用。方法 利用组织芯片的免疫组化染色对10例正常宫颈上皮、63例无淋巴结转移宫颈鳞癌、63例有淋巴结转移宫颈鳞癌组织中E-cad的蛋白表达进行检测。结果E-cad在正常宫颈组织的表达高于宫颈鳞癌P〈0．05，在无淋巴结转移宫颈鳞癌组织显著高于有淋巴结转移组织（P〈0．05），且E-cad的表达与淋巴结转移相关（P〈0．05）。结论 E-cad与宫颈鳞癌的浸润转移密切相关，可用于判断预后及指导临床治疗。     

Survivin在喉鳞癌组织中的表达及临床病理特征

目的探讨Survivin在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法应用SP免疫组化检测Survivin在喉鳞癌组织及正常组织中的表达,并进一步分析喉鳞癌组织中Survivin的表达与临床病理指标的关系。结果Survivin在喉鳞癌组织中的阳性率达62．5％,而正常组织中无阳性表达,两组阳性率比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。喉癌组织中Survivin的阳性表达与癌肿的分化程度以及肿瘤分期、淋巴结转移关系密切,差异有统计学意义（P〈0．05）。有淋巴结转移者的Survivin的阳性表达率明显高于无淋巴结转移者。差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Survivin在喉鳞癌组织中的阳性表达与淋巴结转移、肿瘤分化程度及分期关系密切,一定程度上反映了肿瘤的侵袭程度,因此,可以将其作为一个肿瘤标记物进行有针对性地靶向治疗作为未来研究的发展方向。