雷沙吉兰(Rasagiline)对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的防护作用

目的探讨雷沙吉兰(Rasagiline)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导PC12细胞损伤阿尔茨海默病(AD)模型的保护作用及其机制。方法不同浓度的Aβ25-35(1μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)作用于PC12细胞48h,MTT法检测细胞存活率,选用使细胞存活率降低到64%的Aβ浓度20μmol/L。用不同浓度的雷沙吉兰(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育PC12细胞1h,再加入20μmol/L的Aβ共孵育48h,再测MTT活性,并用荧光染料丫啶橙和溴化乙啶染色,在荧光显微镜下计数凋亡细胞检测凋亡细胞百分率。结果Aβ在20μmol/L时使PC12细胞存活率降低至64%,与对照组差异显著,1μmol/L的雷沙吉兰可显著提高细胞存活率至85%。对照组细胞凋亡率为2%,20μmol/L Aβ作用48h后,PC12细胞凋亡率达13%,1μmol/L的雷沙吉兰使20μmol/L Aβ诱导的PC12细胞凋亡率下降到5%。结论雷沙吉兰对Aβ引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制Aβ诱导的凋亡有关。     

β-淀粉样蛋白25-35片段致大鼠嗜铬细胞瘤细胞损伤的钙离子机制

目的：探讨水溶性Aβ25-35损伤体外培养大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的钙离子机制。方法：应用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）分析法研究细胞活性的改变，应用激光共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度的 相对变化。结果：用MTT分析法发现10μmol/LAβ25-35、10μmol/LAβ25-35＋5μmol/L硝苯地平、10μmol/LAβ25-35＋10μmol/L硝苯地平3个实验组的细胞活生较对照组分别下降34．5％、25．1％和11．0％；预加10μmol/L硝苯地平可有效地阻Aβ25-35所致的细胞活性下降。0．1、1、10、20和30μmol/L不同浓度的Aβ25-35可致胞内离子浓度分别升高约6．4％、6．4％、62．2％、69．3％和107．5％，呈一剂量依赖性。预加Aβ25-351min后可以增强氯化钾升高细胞内钙离子的程度。上述两种作用依赖于细胞外钙离子，同时可被L－电压门控钙通道特异性阻断剂硝苯地平所拮抗。结论：水溶性Aβ25-35作用早期可以破坏神经经细胞的钙离子稳态，使细胞对外界生理性或闰理性刺激敏感度增强，空易遭受损伤。     

丹参酮ⅡA对β淀粉样蛋白25-35片段的作用及机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导的褐家鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞系抑制中的作用及机制。方法MTT检测丹参酮ⅡA(2μmol/L)对Aβ25-35(20mmol/L)处理过的细胞活性,应用公式(1-实验组平均OD值/对照组OD值)×100%计算细胞抑制率。RT-PCR、westernblot检测细胞内GSK3β及pi GSK3β的表达量。结果丹参酮ⅡA有效的拮抗了Aβ25-35引起的细胞抑制及GSK3β的高表达和低磷酸化。结论Aβ25-35可以引起PC12细胞抑制,而丹参酮可以拮抗Aβ25-35的作用,并且可能是通过GSK3β通路而发挥作用。     

五味子乙素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨五味子乙素对Aβ25-35引起的褐家鼠肾上腺嗜铬瘤细胞PC12细胞毒性的作用,并探讨其可能机制。方法 10、25、50、75、100μmol/L五味子乙素作用于PC12细胞,MTT法筛选低毒性的五味子乙素浓度,Aβ25-35诱导PC12细胞毒性损伤建立阿尔茨海默病体外模型,加入低毒性的五味子乙素,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性,RT-PCR法检测PC12细胞β淀粉样前体蛋白(amyloidβ-protein precursor,APP)基因mRNA的表达水平。结果 10、25μmol/L五味子乙素单纯处理可促进PC12细胞增殖,以10μmol/L增长作用更明显,差异具有统计学意义(P0.05),50、75、100μmol/L五味子乙素对细胞有抑制作用,抑制率10%;给予Aβ25-35诱导后PC12细胞存活率降低为(46.4±4.9)%,APP基因表达上调(105±9.3)%;给予10μmol/L的五味子乙素处理后的Aβ25-35组,细胞存活率升高至(107±5.5)%,APP基因表达减少(66.9±7.2)%。结论 10、25μmol/L五味子乙素均可以促进PC12细胞增长,但不具有浓度依赖性;10μmol/L五味子乙素可拮抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤作用,机制可能是通过减少APP表达而起作用。     

S14G-humanin对β-淀粉样蛋白纤维化及其细胞毒性的影响

目的 探讨S14G-humanin(HNG)对β-淀粉样蛋白(Aβ)纤维化及其细胞毒性的影响.方法 于体外将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育,并设空白对照,应用硫黄素-T(Th-T)荧光法和透射电镜方法,观察HNG对Aβ1-42纤维化的作用;将Aβ1-42和不同浓度HNG共孵育后加入培养的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞),应用MTT法测定PC12细胞活性,观察不同浓度HNG对Aβ-42细胞毒性的拮抗作用.结果 (1)不同浓度HNG(100、200、400 μmol/L)+Aβ1-42(100μmol/L)组Th-T荧光强度(241.86±8.41,188.27±4.47,112.36±5.27)均较Aβl-42组(514.85±14.52)显著降低(P<0.01),且各组Th-T荧光强度随HNG浓度增加而降低,各组间比较有统计学差异(P<0.01).(2)透射电镜观察表明不同浓度HNG+Aβ1-42组纤维性Aβ均较Aβ1-42组显著减少.(3)不同浓度HNG(10、20、40 μmol/L)+Aβ1-42(10μmol/L)组PC12细胞活性C(67.83±3.57)%、(79.26±3.13)%、(89.67±3.25)%]均较Aβ1-42组[(57.52±5.41)%]显著增加(P<0.01),且各组细胞活性随HNG浓度增加而增加,各组间比较有统计学差异(P<0.01).结论 HNG在体外能够有效减少纤维性Aβ1-42形成并可抑制其细胞毒性作用,提示HNG有可能成为有效防治阿尔茨海默病的新药物.     

雷沙吉兰（Rasagiline）对Aβ25-35诱导PC12凋亡的防护作用细胞

目的探讨雷沙吉兰（Rasagiline）对β-淀粉样蛋白（Ap）诱导PCI2细胞损伤阿尔茨海默病（AD）模型的保护作用及其机制。方法不同浓度的Aβ25-35（1μmol／L，10μmol／L，20μmol／L）作用于PCI2细胞48h，MTT法检测细胞存活率．选用使细胞存活率降低到64％的Aβ浓度20μmol／L。用不同浓度的雷沙吉兰（0．1μmol／L，1μmol／L，10μmol／L）预孵育PC12细胞1h，再加入20μmol／l，的Aβ共孵育48h，再测MTT活性，并用荧光染料丫啶橙和溴化乙啶染色，在荧光显微镜下计数凋亡细胞检测凋亡细胞百分率。结果 Aβ在20μmol／L时使PC12细胞存活率降低至64％，与对照组差异显著，1μmol／L的雷沙吉兰可显著提高细胞存活率至85％。对照组细胞凋亡率为2％．20μmol／L，Aβ作用48h后，PC12细胞凋亡率达13％，1μmol／L的雷沙吉兰使20μmol／L。Aβ诱导的PC12细胞凋亡率下降到5％。结论 雷沙吉兰对Aβ引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用．其机制可能与抑制Aβ诱导的凋亡有关。     

多奈哌齐对Aβ25～35诱导神经毒性的保护作用

目的 观察胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐对Aβ25～35诱导的神经毒性的影响及其可能机制.方法 PC12细胞常规培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测0、0.5、1、5、10、20、50 μmol/L β-淀粉样蛋白(Aβ)25～35或多奈哌齐对细胞活力的影响;1、5、10、20、50 μmol/L多奈哌齐预处理细胞2h后再加入20 μmol/L Aβ25～35,同时设正常对照组和单纯Aβ25～35组,MTT法检测各组细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化;10 μmol/L蛋白激酶C(PKC)的抑制剂GF109203X作用细胞30 min后加入10 μmol/L多奈哌齐,同时设正常对照组、单纯GF109203X组和多奈哌齐组,Westem blotting检测各组磷酸化PKC(P-PKC)、磷酸化PKC底物(P-MARCKS)的表达;免疫荧光染色检测10 μmol/L多奈哌齐作用2h和正常对照细胞PKCα、PKCε亚型的表达.结果 5、10、20、50 μmol/L的Aβ25～35 作用于PC12细胞24 h后可以引起细胞活力下降,差异有统计学意义(P＞0.05).与正常对照组比较,20 μmol/L Aβ25～35组细胞活力下降、LDH释放增加;与Aβ25～35组比较,Aβ 25～35+5、10、20、50μmol/L多奈哌齐组细胞活力增加,LDH释放下降,差异有统计学意义(Ｐ＜0.05).Western blotting检测结果显示,与正常对照组相比,10 μmol/L多奈哌齐组P-PKC和P-MARCKS的表达增加;与多奈哌齐组相比较,GF109203X+多奈哌齐组P-PKC和P-MARCKS的表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光染色证实正常对照组PKCα和PKCε较多地在细胞浆内表达,多奈哌齐组PKCα 和PKCε在膜部分表达增多.结论 多奈哌齐可以拮抗Aβ25～35的神经毒性作用,激活PKC表达可能是其发挥保护作用的机制之一.     

黄芪提取物对β-淀粉样蛋白损伤PC12细胞的保护作用研究

目的 研究黄芪提取物(EA)对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤PC12细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制. 方法 体外培养大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞克隆化的PC12细胞株,应用不同浓度(20、40、80 μg/mL)EA作用于10 μmol/L Aβ25-35损伤的PC12细胞,应用MTT法检测细胞存活率的变化.用荧光比色法和TUNEL染色分别检测PC12细胞胞内活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率的变化. 结果与模型组比较,3种浓度的EA均可使Aβ25-35诱导的PC12细胞MTT比色实验A570值增加,胞内ROS水平减少,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着浓度的增加,作用越明显. 结论 EA可能通过抗氧化损伤和抑制细胞凋亡对抗AB的神经毒性,发挥神经保护作用,且这种作用呈浓度依赖性.     

BDNF对β-淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用

目的 探讨脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对凝聚态β-淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 采用PC12细胞作为研究对象,将培养的细胞随机分为20 μmol/L Aβ25-35处理不同时间组(0、30 min以及1、3、6、12、48 h)、20 μmol/L Aβ25-35+不同浓度的BDNF(20、50、100 ng/mL)处理组、单独Trk B受体抑制剂K252α(200 nmol/L)处理组、20 μmol/L Aβ25-35+50 ng/mL BDNF处理组、K252α(200 nmol/L)+20 μmol/L Aβ25-35+50 ng/mL BDNF处理组.采用MTT法观察不同处理组PC12细胞的活力,采用Western blot法检测不同处理组PC12细胞Cleaved caspase-3表达的变化.结果 20 μmol/L的Aβ25-35作用不同时间后细胞活力均明显下降,且呈一定的时间依赖趋势(P<0.05);不同浓度的BDNF(20、50、100 ng/mL)预处理后均可明显抑制 20 μmol/L的Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05); 20 μmol/L的Aβ25-35可诱导PC12细胞Cleaved caspase-3表达增高(P<0.05),50 ng/mL的BDNF可明显抑制20 μmol/L的Aβ25-35诱导的Cleaved caspase-3表达的增高(P<0.05),Trk B受体抑制剂K252α(200 nmol/L)预处理后,50 ng/mL的BDNF对20 μmol/L的Aβ25-35诱导的Cleaved caspase-3表达增高的抑制作用明显减弱(P<0.05).结论 BDNF对Aβ25-35诱导的细胞损伤具有保护作用,且其保护作用是通过与其特异性受体Trk B结合而实现.     

淀粉样蛋白25～35片段对血小板聚集及钙离子变化的诱导作用

目的观察淀粉样蛋白25～35片段(Aβ25～35)对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集及血小板胞质内钙离子水平的影响,探讨淀粉样蛋白在血小板中的作用。方法采集18例健康志愿者肘静脉血,检测在不同浓度Aβ25～35(0、5、10、20、40μmol/L)的作用下二磷酸腺苷诱导的血小板最大聚集率(PAGMax);以50%最大聚集反应的二磷酸腺苷浓度(EC50)1μmol/L作为测定Aβ25～35对血小板聚集影响的二磷酸腺苷基础浓度;激光共聚焦显微镜检测不同浓度Aβ25～35作用下钙荧光探针Fluo-3/AM标记的血小板胞质内钙离子([Ca2+]i)变化。结果(1)于富血小板血浆中加入二磷酸腺苷后,以二磷酸腺苷浓度为1μmol/L时血小板EC50最高,为(26.33±6.57)%,故以此作为测定Aβ25～35影响血小板聚集功能的基础浓度。(2)Aβ25～35作用前后,二磷酸腺苷诱导的PAGMax均不同程度增高(P<0.05),且随着Aβ25～35浓度增加,血小板最大聚集率呈逐渐增加(P<0.05),其中以40μmol/L浓度组血小板聚集率最大,与单纯给予二磷酸腺苷(Aβ25～35为0μmol/L时)相比差异具有显著性意义(P<0.01)。(3)不同浓度Aβ25～35(0、5、10、20、40μmol/L)诱导后,血小板胞质内[Ca2+]i水平均不同程度升高(P<0.01),[Ca2+]i浓度平均增高水平随Aβ25～35浓度的增加而增加(P<0.01),其中以40μmol/L浓度组血小板胞质内[Ca2+]i水平升高最为显著(P<0.01)。结论较高浓度的Aβ25～35具有促进二磷酸腺苷诱导血小板聚集、升高血小板胞质内[Ca2+]i水平的作用,Aβ25～35促进血小板聚集的作用可能与血小板胞质内钙离子水平的升高有关。     

亲环素A对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨亲环素A(CyPA)对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡影响及可能的作用机制.方法 将PC12细胞分为正常对照组(0 μmol/L Aβ25-35)、Aβ25-35诱导组(10 μmol/L Aβ25-35)和药物保护组(0.1、1、10、100 nmol/L CyPA+10 μmoi/Lβ25-35),药物保护组采用相应浓度CyPA预处理PC12细胞30 min,再加入Aβ25-35继续培养.MTT法分析细胞存活率,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达,Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 1、10和100 nmol/L CyPA可提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的细胞凋亡,增加Bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达,降低Bax mRNA表达以及Bax蛋白表达,与Aβ25-35诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05),且CyPA剂量越高效果越明显.结论 CyPA可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,减少细胞凋亡,其机制与上调抗凋亡基因Bcl-2表达和下调凋亡基因Bax表达有关.

Abstract：

Objective To explore the effect of cyclophilin A (CyPA) on apoptosis of PC 12 cells induced by Aβ25-35 and its potential mechanism. Methods PC 12 cells were divided into normal control group (0 μmol/L Aβ25-35), Aβ25-35 inducement group (10 μmol/L Aβ25-35) and drug protection groups (0.1, 1,10 and 100 nmol/L CyPA+10 μmol/L Aβ25-35). Cells in the drug protection groups were pretreated by CyPA of different concentrations for 30 min, and then co-cultured with Aβ25-35 We evaluated the survival rate of PC12 cells with MTT assay, analyzed the apoptosis of PC12 cells with Hoechst33258 staining, and detected the mRNA expressions of Bcl-2 and Bax with PT-PCR and the protein levels of Bcl-2 and Bax with Western blotting. Results Cells pretreated wth CyPA of 1, 10 and 100 nmol/L enjoyed an obvious elevation of survival rate of PC 12 cells, a significant reduction of apoptosis induced by Aβ25-35,an obvious increase of mRNA expression of Bcl-2 and protein level of Bcl-2, and a statistical decrease of mRNA expression of Bax and protein level of Bax as compared with those cells of the Aβ25-35 inducement group (P<0.05);and these effects were dose-dependent. Conclusion CyPA could resist the toxic role of Aβ25-35 on PC 12 cells and reduce the apoptosis in a dose-dependent manner by up-regulation of anti-apoptosis gene Bcl-2 and down-regulation of apoptosis gene Bax.     

不同浓度β-淀粉样蛋白寡聚体的毒性差异

目的探讨不同浓度的β淀粉样蛋白(amyloid beta,Aβ)寡聚体毒性的差异。方法 0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L,2μmol/L,2.5μmol/L,3μmol/L的Aβ1-42寡聚体(A-βderived diffusible ligands,ADDLs)处理PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞),western blot检测钙蛋白酶(calpain)的激活程度,蛋白激酶A的催化亚基(catalytic subunits of cAMP-dependent kinase,PKA-C)和磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(phosphory lated cAMP response element binding protein,pCREB)的表达水平。结果所有浓度的ADDLs均导致pCREB的下降(P0.05),但均未影响PKA-C的含量(P0.05)。0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L的ADDLs导致pCREB的下降与calpain的激活无关,而2μmol/L,2.5μmol/L,3μmol/L的ADDLs导致pCREB的下降与calpain激活有关。结论不同浓度ADDLs通过不同毒性通路导致pCREB下降:高浓度的ADDLs通过激活calpain,而低浓度ADDLs则可能通过其他途径,但两者均未通过影响PKA-C的含量来降低pCREB水平。     

灵芝多糖对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护性研究

目的观察灵芝多糖(GLP)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法将Aβ25-35或(和)不同浓度的GLP加入体外培养的PC12细胞中,用MTT检测PC12细胞活力的变化;以DCFH-DA来检测细胞内活性氧(ROS)水平的改变;通过Western Blotting来检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果 Aβ25-35处理36h后的PC12细胞存活率仅为对照的60.7%,细胞内ROS水平上升到原来的222.7%,同时Bcl-2/Bax比值下降,为对照组的60.0%。经不同浓度的GLP预处理后,细胞存活率均显著提高,分别能达到69.7%,80.7%和88.3%(P<0.01);10g/ml GLP预处理PC12细胞24h后,细胞内ROS水平下降至正常组的160.6%,Bcl-2/Bax比值升高到93.6%,P值均<0.01。结论 GLP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤有保护作用。     

阿尔茨海黙病细胞模型：MCI-186的抗氧化损伤作用

背景：氧化应激在阿尔茨海默病的发病过程中起着重要作用。MCI-186,作为自由基清除剂,可以特异性的清除羟自由基。 目的：研究MCI-186对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。 设计：非随机、对照实验,吉林大学第三临床医学院,2006.07-2008.11 材料：PC12细胞：吉林大学第一临床医学院神经内科胡林森教授惠赠;MCI-186购自南京先声制药公司。 方法：实验对象分为三组：正常对照组、MCI-186预处理组(MCI-18620μmol/L,Aβ25-35 30μmol/L)和Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30μmol/L)。采用MTT法测定细胞生存率;ELISA法测定羰基蛋白和晚期糖基化终产物(AGEs)的含量;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)的含量。 主要观察指标：PC12细胞的生存率,细胞内羰基蛋白、糖化血红蛋白、丙二醛含量的测定;DNA损伤的测定：彗星细胞百分率、尾部DNA百分含量、彗星尾长、尾矩和Olive尾矩。 结果：与正常对照组相比,Aβ25-35干预组细胞生存率降低(P<0.001),细胞内羰基蛋白、AGEs 和MDA含量升高(P<0.001)。MCI-186预处理组与Aβ25-35干预组相比,细胞生存率明显升高(P<0.001),细胞内羰基蛋白、AGEs和MDA含量减低(P<0.01),但都未达到正常水平。与正常对照组相比,Aβ25-35干预组彗星细胞百分率、尾部DNA百分含量、彗星尾长、尾矩和Olive尾矩明显高于正常(P<0.001);经过MCI-186干预,DNA损伤各指标明显下降,与Aβ25-35干预组相比,有着显著性差异(P<0.001)。 结论：MCI-186能够减少Aβ25-35对PC12细胞内蛋白质氧化产物、晚期糖基化终产物及脂氧化终末产物的生成;同时,MCI-186能够减少氧化应激所致的DNA损伤,具有神经保护作用。     

脑源性神经生长因子通过调节Bax/Bcl表达抑制β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡

目的 探讨BDNF对凝聚态β-淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导细胞损伤特别是凋亡的影响.方法 MTT法观察细胞活力,Annexin V-PI双染色法观察细胞凋亡,Western blotting法检测Bax及Bcl-2表达,应用Trk B受体抑制剂K252a(200 nmol/L)观察50 ng/mL BDNF对20 μmol/L的Aβ25-35诱导细胞损伤的抑制作用机制.结果 MTT检测结果及Annexin V-PI双染色法发现50ng/mL的BDNF预处理可显著地抑制20μmol/L的Aβ25-35诱导的PC12细胞活力的下降及细胞凋亡;Western blotting检测发现50 ng/mL的BDNF对20μmol/L的Aβ25-35诱导的PC12细胞Bax表达升高、Bcl-2表达降低及Bax/Bcl-2比值上调均有明显的抑制作用,该作用可被Trk B受体抑制剂K252a(200 nmol/L)抑制.结论 BDNF对Aβ25-35诱导的细胞损伤特别是细胞凋亡具有保护作用,该保护作用是通过与其特异性受体Trk B结合实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect of BDNF on cell injuries, cell apoptosis especially, induced by 25-35 segment of β-amyloid protein (Aβ25-35) at condensed state in PC12 cells.Methods The viability of PC12 cells, the apoptosis of PC12 cells and the expressions of Bax and Bcl-2 were detected by MTT, Annexin V-PI staining and Western blotting, respectively. Trk B receptor inhibitor K252a (200 nmol/l) was employed to observe the mechanism of 50 ng/ml BDNF on Aβ25-35 (20 μmol/L)-induced cell injury. Results BDNF (50 ng/ml) could significantly prevent the decrease of cell viability and cell apoptosis, and the increase of Bax expression and the decrease of Bcl-2 expression induced by 20 μmol/L Aβ25-35, and prevent the increase of up-regulation of Bax/Bcl-2 ratio; and these effects were blocked by K252a (200 nmol/1). Conclusion BDNF can prevent Aβ25-35-induced cell injury, cell apoptosis especially, by binding to its specific receptor Trk B.     

促红细胞生成素对Aβ25-35诱导的细胞tau蛋白磷酸化的抑制作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β淀粉样蛋白25-35片断(Aβ25-35)诱导的SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响.方法 MTT法观察不同浓度的Epo(0、5、10、20、50 U)单独作用24 h对SH-SY5Y细胞存活率的影响;20 μmol/L的凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞不同时间点(0 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h)后,Western blot法检测tau蛋白磷酸化(Ser199、Ser396及taul)水平的变化;观察不同浓度的Epo(5、10、20 U)预处理细胞3 h后对Aβ25-35作用的影响以及P13K/Akt抑制剂LY294002(50μmol/L)预处理细胞1 h后Epo抑制作用受到的影响.结果 不同浓度的Epo作用24 h后,MTT示细胞存活率无明显变化.20 μmol/L的Aβ25-35作用不同时间点后,tau蛋白Ser396、Ser199位点的磷酸化水平3 h时开始增加,6 h达到最高峰,12 h后又逐渐下降,24h时仍维持较高水平,与0min、30min时比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而总的tau蛋白没有任何变化.5、10、20U Epo预处理均可有效地抑制Aβ25-35引起的Ser396、Ser199位点的磷酸化,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).LY294002预处理细胞后,Epo的作用受到抑制.结论 Epo可通过P13K/Akt途径对Aβ25-35诱导的tau蛋白磷酸化发挥抑制作用,本研究为研究AD的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

β淀粉样蛋白（1-42）促进α-突触核蛋白在Ser129位点磷酸化和聚集

目的：通过转染人α-突触核蛋白（α-syn）A53T突变基因的PC12细胞（A53T-PC12细胞）模型,探讨β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）对A53T-PC12细胞在Ser29位点α-syn磷酸化（Pα-syn）水平、聚集程度的影响。方法：分别予H2O2、PBS、Aβ1-42干预A53T-PC12细胞（将A53T-PC12细胞分为：PBS干预组;5μmol.L-1Aβ1-42干预组;5μmol.L-1Aβ1-42＋300μmol.L-1维生素C干预组;200μmol.L-1H2O2干预组）,观察细胞内活性氧自由基（ROS）水平变化。并通过双重免疫荧光染色观察A53T-PC12细胞内α-syn聚集情况,并通过Western blot半定量分析A53T-PC12细胞内Ser129位点磷酸化Pα-syn水平。结果：Aβ1-42增加细胞内ROS。免疫荧光染色提示Aβ1-42干预后促进A53T-PC12细胞内α-syn聚集;Western blot半定量分析显示Pα-syn较PBS干预组升高（P〈0.001,P〈0.05）。结论：Aβ1-42促进A53T-PC12细胞内α-syn在Ser129位点磷酸化和聚集。     

β-淀粉样蛋白对海马神经元钙离子浓度的影响及其机制研究

目的　观察β-淀粉样蛋白 (Aβ1 -40 )对海马神经元内钙离子浓度的影响及尼莫地平的拮抗作用。方法　采用大鼠海马神经元的原代培养技术 ,分别用 MTT法和激光扫描共聚焦显微镜结合 Fluo-3 /AM标记观察神经元存活率和细胞内游离钙离子浓度变化。结果　 Aβ1 -40在较高浓度 (1μmol/L和 1 0μmol/L )下 ,对神经元存活率和 [Ca2 + ]i 的影响与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;5 μmol/L尼莫地平可部分降低Aβ1 -40引起的 [Ca2 + ]i 升高。结论　 Aβ1 -40可引起培养海马神经元存活率下降及胞内钙离子浓度升高 ,尼莫地平有部分拮抗作用。     

α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞保护作用的研究

目的 观察α7烟碱受体拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞远期影响,探讨其细胞保护的作用.方法 采用高分化的PC12细胞为研究对象,以Aβ25-35制作细胞损伤模型,以烟碱受体激动剂(尼古丁)和α7烟碱受体拮抗剂(甲基牛扁亭碱)进行预处理.试验分为4组,分别是:对照组(蒸馏水)、模型组(Aβ25-35)、尼古丁组(尼古丁和Aβ25-35)、甲基牛扁亭碱组(甲基牛扁亭碱和Aβ25-35).通过MTT比色法在多个时间点观察药物对细胞活力影响的动态变化,在此基础上采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡和坏死的影响.结果 在所有时间点,模型组的细胞活力均显著低于对照组,凋亡和坏死率均高于对照组(P ＜ 0.01).药物作用36 ～ 60 h,尼古丁组的细胞活力显著高于模型组和甲基牛扁亭碱组(P ＜ 0.05),凋亡和坏死率较低(P ＜ 0.01);甲基牛扁亭碱组细胞活力及凋亡和坏死率与模型组差异无统计学意义.在药物作用84 h后,与模型组和尼古丁组相比,甲基牛扁亭碱组细胞活力显著升高,凋亡和坏死率显著降低(P ＜ 0.01).结论 随着作用时间的延长(84 h),烟碱受体激动剂(尼古丁)对PC12细胞的保护作用逐渐消失,而α7烟碱拮抗剂(甲基牛扁亭碱)逐渐显现出细胞保护作用.     

水溶性β-淀粉样蛋白25-35片段诱致大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡

目的　探讨β-淀粉样蛋白 ( Aβ)在形成淀粉样沉积前对体外培养的 PC1 2细胞的毒性作用。方法　应用流式细胞仪检测 Aβ的剂量依赖性毒性 ;应用 DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA末端标记和电镜判断 Aβ损伤细胞的途径。结果　流式细胞仪检测发现随着 Aβ2 5 -35浓度的增加 ,PC1 2细胞的死亡率增加 ;加入 1 0 μmol/L Aβ2 5 -35 2 4 h后 ,经 TUNEL发现细胞核着色 ,并可见细胞核碎片 ;DNA琼脂糖凝胶电泳可见间隔 1 80～ 2 0 0 bp左右的梯度条带 ;电镜显示细胞核浓缩 ,胞浆内有空泡形成 ,胞浆内细胞器完好。结论　 Aβ在形成纤维状沉积前即对神经细胞有毒性作用 ,可促进神经细胞的凋亡。