副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型研究在河北省建立副溶血性弧菌DNA指纹图谱基因库，以便将来对不同来源的副溶血性弧菌DNA图谱进行即时比较，确定同源性，进而确定食源性疾病的传染源、传播途径、流行范围等，为从根本上防止食源性疾病的发生提供技术基础。方法对从各类水产品中分离出的副溶血性弧菌NotⅠ进行脉冲场凝胶电泳。结果65株副溶血性弧菌经PFGE方法分型共跑出64个DNA指纹图谱，按照各图谱在聚类图所成的自然类别及亲缘关系的远近，将64个图谱分为11个大的聚类群。并且各群间相似性系数〈56．6％。提示各菌株间亲缘关系较远，同源污染的可能性较小。结论PFGE分型结果与菌株的水产品种类、采样时间、地点都没有任何相关，说明当时当地以及在水产品种类上都不存在流行趋势。     

应用脉冲场凝胶电泳对伤寒沙门菌分型研究

目的:运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对湖北2008年分离的沙门菌菌株进行分析,探讨湖北沙门菌的分布、流行及变异情况。方法:对分离的沙门菌利用全自动生化分析系统、血清分型、及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子生物学技术进行研究。结果:18份测试株用XbaI酶切后产生3个带型。结论:通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)全基因DNA指纹图谱分析,可追溯其同源性。通过18株伤寒菌株的PFGE分型图谱分析,其中相似系数100%15份,占83.33.%,可确认为相同病原菌感染。由此说明PFGE是一种灵敏、可靠的研究沙门菌分子流行病学基因分型方法。     

一起食用糕点引起的肠炎沙门氏菌食物中毒事件的调查分析

目的 分析一起食物中毒事件的原因,为预防此类事件再次发生提供参考。 方法 采用流行病学调查、现场卫生学调查和实验室检测的方法。 结果 本次事件共报告病例596例,临床表现主要以腹泻(98.32%)、发热(87.75%)、腹痛(74.16%)为主,发病潜伏期中位数为13 h( 1～53 h)。所有病例均表示发病前食用过某食品公司制售的糕点“爆浆松松”和/或“流心泡芙”。43份病例标本及7份剩余食品标本中均检出肠炎沙门氏菌,抽取11株不同来源标本中分离到的沙门氏菌菌株经脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)检测具有完全相同的PFGE图谱。 结论 该起事件是一起因食用被肠炎沙门氏菌污染的糕点引起的食物中毒事件。     

脉冲场凝胶电泳技术对一起肠炎沙门菌疫情分子生物学分析

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对一起肠炎沙门菌暴发疫情进行病原菌分子特征、菌株之间的遗传相关性分析。方法对分离到的菌株进行PFGE分析,对菌株进行分子分型,以BioNumericsV4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果食物中毒分离4株肠炎沙门菌以XbaI酶切后PFGE可分为同一型别。结论该次食物中毒的暴发为同一型肠炎沙门菌引起,可能有共同的传染来源。     

宝鸡市一起肠炎沙门氏菌食物中毒事件调查及溯源分析

目的 对宝鸡市一起由聚餐引起的食物中毒事件进行现场流行病学调查分析,并且通过对相关病原菌的分离鉴定和溯源分析,有效控制事件的发展。方法 采用描述性流行病学方法描述疾病分布,建立病因假设。采用分析性流行病学方法(病例对照研究),分析相关因素对疾病产生的影响,找出危险因素。对病例、留样食物、水源开展相关的病原菌分离培养,使用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)对可疑致病菌进行溯源分析。结果 此次事件共搜索到病例68人,罹患率28.33%(68/240),主要症状为发热、腹泻、腹痛、呕吐。期间无重症及死亡病例出现。流行病学调查分析发现鸡腿为引起此次事件的可疑食物。通过实验室检测,在留样食物、患者粪便中均分离出了肠炎沙门氏菌。并通过PFGE分子溯源分析得到鸡腿、患者均为同一株沙门氏菌感染。结论 这是一起由沙门氏菌污染而引起的食物中毒,应加强对食物储存、运输、销售的管理工作,防止类似食源性疾病的发生。     

脉冲场凝胶电泳对一起肠炎沙门菌食物中毒的分型研究

目的通过实验室检测分析,查明一起疑似群体食物中毒原因。方法采集样品19份(食物7份、病人肛拭子12份),按国家有关标准进行病原分离鉴定,用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对分离的菌株进行同源性分析。结果 19份样本均检出肠炎沙门菌,其生化、血清学试验结果均一致。结论根据病人临床症状、现场流行病学和卫生学调查及实验室检测结果,证实是一起由肠炎沙门菌污染食物引起的中毒。     

沙门菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的为研究河北省食品中污染的主要沙门菌菌株间的同源关系,特建立了脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法,通过PFGE分型研究在我省建立沙门菌DNA指纹图谱基因库,以便将来对不同来源的沙门菌DNA图谱进行即时比较,确定同源性,进而确定食源性疾病的传染源、传播途径、流行范围等,为从根本上防止食源性疾病的发生提供技术基础.方法对2005～2007年间我省食源性致病菌监测网从各类食品样品中分离出的7种主要沙门菌(山夫登堡沙门菌、鸭沙门菌、阿贡纳沙门菌、猪霍乱沙门菌、德比沙门菌、伊鲁木沙门菌、肠炎沙门菌),用蛋白酶K和TE缓冲液提取菌体DNA后,用Xba I限制性内切酶消化胶块,然后在CHEF-DRⅢ型仪器上进行脉冲场凝胶电泳,电泳条件为0.5 ×TBE电泳缓冲液、冷却温度14℃、initial switch 2.16 8,final switch 63.8 8,time17hours,angle=120,6volt/cm.应用H9812作为脉冲场凝胶分子量标准.结果我省7种主要沙门菌存在的PFGE型别较多,各菌株间亲缘关系较远,在同种沙门菌间相似性系数最小值为4.4%,但也有同源菌株存在.结论7种主要沙门菌均未显示流行趋势,同时也表明PFGE是一种灵敏、可靠的研究沙门菌分子流行病学的基因分型方法.     

沙门菌血清及脉冲场凝胶电泳分型

目的 分析吉林省食品中分离的沙门菌血清型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别,探讨吉林省食品中沙门菌污染的同源性。方法 于2011年3月-2012年4月,对从市售生鸡肉和中式凉拌菜中分离出的28株沙门菌进行血清学和PFGE分子分型,采用BioNumerics version 6.0软件分析比较同源性。结果 28株沙门菌血清型分别为15株肠炎沙门菌、4株印弟安纳沙门菌、2株猪伤寒沙门菌、2株亚利桑那菌和5株血清未定型沙门菌;PFGE结果主要分为4个大群,其中1群包括14株,相似度为87.3%~100%;2群包括7株,分为2个亚群,2A亚群包括6株,相似度为91.9%~100%,2B亚群1株,相似度为73.6%; 3群包括3株,相似度为88.9%~100%;4群包括4株,分为2个亚群,4A亚群包括3株,相似度为84.6%~94.7%,4B亚群1株,相似度为72.7%。结论 吉林省食品中沙门菌血清型以肠炎沙门菌为主;PFGE结果显示相同血清型别菌株具有高度同源性。     

水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。     

多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌分子分型的比较

目的 比较多位点序列分型技术和脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术在肠炎沙门菌菌株间分型的分辨率。方法 分别建立肠炎沙门菌的6个管家基因thrA、pure、sucA、aroC、hemD、dnaN和一个特异性的DNA标记Sdf Ⅰ的多位点序列分型技术，及以寡切点的XbaⅠ、SpeⅠ作为限制性内切酶的PFGE方法，并应用上述方法对食品中的分离株进行分型，比较两种方法的分辨率。结果 PFGE可以将50株肠炎沙门菌分为11个型。并且通过双酶系统的双重PFGE分型，还可以将PFGE型别再精细划分为亚型；MLST则揭示了在同一血清型内部，各菌株之间的管家基因碱基序列高度保守，而在沙门菌不同血清型的核苷酸序列之间，则分别存在不同数量的碱基差异。即MLST方法只能用于血清型之间，不能在血清型内部进行分型研究。结论 与MLST比较，PFGE方法在肠炎沙门菌的分型方面显示了比较高的分辨率。     

伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的：运用脉冲场凝胶电泳研究宁波市伤寒沙门菌的分子流行病学。方法：选择XbaⅠ酶对伤寒沙门菌染色体DNA进行酶切，采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱，了解其流行状况。结果：14株伤寒沙门菌，根据电泳图谱分析，可分为3个带型。结论：PFGE具有分辨力高，重复性好的特点，是研究伤寒沙门菌分子流行病学较好的基因分型方法。     

沙门菌脉冲场凝胶电泳分型与血清型的对应关系

目的分析沙门菌脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)与血清分型之间的对应关系.方法选择中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulseNet China沙门菌监测数据中鼠伤寒(Typhimurium)、肠炎(Enteritidis)、德尔卑(Derby)、阿贡纳(Agona)及山夫登堡(Senftenberg)前五位常见血清型菌株共1230株,进行PFGE聚类分析,以血清分型作为参照进行比对.确定这5种血清型PFGE优势带型的共有条带.结果1230株菌株中,1149株经PFGE预测的血清型与实际血清型一致,PFGE预测血清型的准确率为93.4%.5种血清型经PFGE预测的血清型阳性预测值多在90.0%以上、阴性预测值均在95.0%以上.结论PFGE聚类对5种常见血清型沙门菌血清分型具有较好的提示及验证作用.     

肠炎沙门菌PFGE分子分型及耐药性研究

目的：对本地区及相邻地区2004～2007年分离的肠炎沙门菌菌株的分子分型及耐药性进行分析。方法：采用PFGE进行分子分型,利用药敏卡通过仪器对分离菌株进行药敏检测。结果：5起肠炎沙门菌食物中毒分离的菌株分成3型,其中2型之间存在3条带的差异,菌株间有相近关系。结论：PFGE是一种非常有效的分子分型方法,建立细菌PFGE指纹图谱数据库及PulseNet,对于控制食源性疾病非常重要。     

布鲁菌脉冲场凝胶电泳图谱分型方法建立

目的 建立我国95株布鲁菌的染色体DNA脉冲场凝胶电泳图谱,进行布鲁菌的分子遗传学分类鉴定。方法 选择我国不同地区、不同时限分离的布鲁菌100株(包括19株标准布鲁菌株),应用SeaKem Gold琼脂糖胶块纯化布鲁菌完整的染色体DNA,限制性内切酶XbaI消化后,进行脉冲场凝胶电泳分离(PFGE)。结果 XbaI酶切布鲁菌基因组DNA后,可产生20~500kbp范围的15~25条酶切片段,并可以在PFGE凝胶上被很好的区分开。PFGE可在种的水平上区分布菌各种标准株,76株中国分离株可被分为39种PFGE类型,并聚为4大类。PFGE与传统分型方法比较,2者的一致性达63%。结论 脉冲场凝胶电泳图谱可对布鲁菌进行遗传学分类鉴定,在布鲁菌的分子流行病学研究中具有重要意义。     

不同来源肠炎沙门菌的溯源研究

目的:应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对不同来源的肠炎沙门菌进行分子分型,为政府部门修订相关的卫生法规提供了重要科学依据。方法:采用限制性内切酶Xba I,对广州地区2009-2011年间从业人员健康体检和食物中毒中检出的36株肠炎沙门菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version 4.0软件(复选Dice相关系数和UPGMA方法)进行聚类分析。结果:36株肠炎沙门菌PFGE图谱显示菌株之间密切相关,相似度在88.8%～100%。结论:从业人员健康体检和食物中毒分离的肠炎沙门菌菌株之间存在较高分子水平的同源性,提示健康带菌从业人员是沙门菌食物中毒不可忽视的污染源。     

脉冲场凝胶电泳检测一起汤卜逊沙门菌食物中毒

目的:用脉冲场凝胶电泳对一起食物中毒所分离的汤卜逊沙门菌进行同源性分析。方法:对分离的沙门菌进行生化鉴定、血清学分型、药敏试验后,进行PFGE检测并用Bio Numerics软件对PFGE分型图谱进行分析并绘出聚类分析图。结果:此次食物中毒分离到8株沙门菌,其中5株是从病人大便或肛拭分离,1株是从厨房抹布分离,2株是从剩余食物分离。经PFGE分析,病人的5株和剩余羊肉的1株完全相同,牛肉和抹布中的2株有1～2条电泳条带的差异。结论:此次食物中毒是由羊肉携带的汤卜逊沙门菌引起。     

Molecular analysis of Salmonella enteritidis isolates from the Caribbean by pulsed-field gel electrophoresis.

Using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), between 1987 and 1996 we analyzed Salmonella enteritidis isolates from gastroenteritis cases in four Caribbean countries: Barbados, Saint Kitts and Nevis, Saint Lucia, and Trinidad and Tobago. We also determined the resistance of the isolates to 12 antimicrobial agents. Of the 129 isolates of S. enteritidis available for testing, DNA digested by XbaI revealed 13 distinctive PFGE patterns. The most prevalent XbaI PFGE patterns were group 1 (88 of 129 isolates, 68.2%) and group 2 (26 of 129, 20.2%). The patterns found among S. enteritidis isolates correlated with the geographical origin of the isolates. Of the 28 isolates from Barbados, 20 of them (71.4%) belonged to XbaI PFGE group 2, and of the 93 isolates from Trinidad and Tobago, 78 of them (83.9%) belonged to group 1. SpeI digestion of S. enteritidis genome was not as discriminatory as XbaI. Overall, of the 129 isolates, 67 of them (51.9%) exhibited resistance to one or more of the 12 antimicrobial agents that we tested. The prevalence of resistance was 53.8% for the S. enteritidis isolates tested from Trinidad and Tobago, 50.0% for those from Barbados, 28.6% for those from Saint Lucia, and 100.0% for one isolate from the island of Saint Kitts. Resistance was highest to triple sulfur (59 of 129 isolates, 45.7%), followed by furadantoin (10 of 129, 7.8%), ampicillin (7 of 129, 5.4%), and carbamycin (5 of 129, 3.9%).     

脉冲场凝胶电泳分子分型方法用于霍乱弧菌相关性分析

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型方法,分析辽宁丹东和广东珠海两地区从水体和水产品中分离的霍乱弧菌之间的相关性。方法对39株霍乱弧菌用内切酶Not I酶切DNA后进行PFGE分子分型,并在0.5×TBE电泳缓冲液中加入终浓度为3.8 mg/L的硫脲溶液电泳。结果所有39株霍乱弧菌的基因组DNA显示出良好的分型结果,从朝鲜排污口、丹东鸭绿江水体中的鲫鱼、河蟹以及丹东排污口分离出的霍乱弧菌之间的相似度达到100%,说明这些产品之间应为同一个污染源;珠海的大头鱼和鳙鱼之间的相似度达到100%,说明这两者之间应为同一个污染源;珠海鲫鱼中检出的霍乱弧菌和鸭绿江水体中检出的霍乱弧菌之间的相似度达到88.4%,说明这两者之间可能为同一个污染源。结论PFGE技术适用于霍乱弧菌环境样品分离菌株的相关性分析和传染源的追踪。