鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(kg.d)、中剂量组14.2 g/(kg.d)、低剂量组7.1 g/(kg.d)灌胃治疗并且以复方鳖甲软肝片灌胃0.6 g/(kg.d)作阳性对照组治疗6周。以复制模型同样方式与用量于右后腿皮下注射橄榄油及生理盐水灌胃(10 ml/kg.d)作空白对照组。苏木精-伊红(HE)染色观察各组8周后肝纤维化变化程度,RT-PCR检测其转化生长因子β1(transforming growth factor beta one,TGF-β1)、Smad3及Smad7变化,免疫组化(S-P法)观测TGF-β1、smad3、smad7表达情况。结果 8周后,与模型组比较,鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组肝小叶结构破坏明显减轻,部分肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润与少量胶原纤维形成;肝组织TGF-β1与Smad3的mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.01),smad7 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)且鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组疗效并无显著差异。结论鳖甲煎改良方能显著改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β/smad信号通路有关。     

鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导大鼠肝星状细胞增殖及迁移的影响

[目的]研究鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)增殖和迁移的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。[方法]通过大鼠整体给药,制备浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清,分别处理大鼠肝星状细胞HSC-T6和由PDGF-BB干预的HSC-T6,MTT法观察细胞体外增殖情况,采用Transwell小室检测细胞迁移。[结果]MTT检测结果显示,浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清在不同血清百分比(5%、10%、20%)对HSC细胞体外增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01),在不同血清百分比(10%、15%、20%)对10 ng·m L-1PDGF干预24 h的HSC细胞增殖有显著的抑制作用(P0.05,P0.01),未呈现浓度依赖关系;Transwell小室实验结果显示,10%各剂量药物血清对10 ng·m L-1 PDGF诱导的HSC细胞迁移有显著的抑制作用(P0.05)。[结论]鳖甲煎丸药物血清对HSC-T6细胞体外增殖及PDGF诱导的HSC增殖、迁移均有显著的抑制作用,推测鳖甲煎丸可能通过抑制肝星状细胞增殖和迁移发挥抗肝纤维化作用。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化大鼠细胞增殖的影响

目的 观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏细胞增殖的影响,探讨其拮抗肾间质纤维化的作用机理.方法 采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为鳖甲煎丸组、缬沙坦组、模型组,并设假手术组.观察梗阻侧肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白及基因的表达,同时检测肾间质细胞和肾小管细胞的增殖、凋亡以及细胞周期的变化.结果 模型组及各治疗组大鼠肾脏中PCNA的蛋白及mRNA的表达和肾间质、肾小管细胞PCNA阳性细胞率、细胞凋亡率较假手术组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),鳖甲煎丸组、缬沙坦组的表达均低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),但是细胞凋亡与增殖的比值模型组较假手术组显著降低(P＜0.05),2治疗组较模型组显著升高(P＜0.05).与假手术组相比,模型组处于S期的细胞比例显著增多(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例显著减少(P＜0.01),与模型组比较,2治疗组S期的细胞比例明显降低(P＜0.05),G0/G1期的细胞比例明显增加(P＜0.01),G2/M期变化不明显.结论 鳖甲煎丸能够下调肾间质纤维化大鼠肾间质细胞PCNA的蛋白及mRNA表达,促进肾间质细胞凋亡,抑制其增殖,阻止其由G0/G1期进入S期,对肾脏起到保护作用.     

芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响

目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P0.01),28.52%(P0.01)和51.25%(P0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。     

三甲益肝颗粒含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的影响

目的观察三甲益肝颗粒(San Jia Yi Gan granula,SJG)含药血清对HSC-T6细胞形态、增殖和凋亡的作用,探讨SJG抗肝纤维化的细胞学基础。方法雄性SD大鼠30只按随机数字表法分为5组,每组6只,分别为生理盐水对照组(Control)、水飞蓟宾组(Sily)、低剂量SJG组(SJG-L)、中剂量SJG组(SJG-M)和高剂量SJG组(SJG-H)。SJG按低、中、高(1.7、3.4、6.8g/kg)3个剂量灌胃大鼠制备含药血清,并用不同体积分数(5%、10%、20%、40%)SJG含药血清干预HSC-T6细胞株,用倒置相差显微镜观察HSC-T6细胞形态学的变化,MTT法检测SJG药物血清对HSC-T6细胞增殖的影响,流式细胞仪检测SJG药物血清诱导HSC-T6细胞早期凋亡。结果含药血清干预后,细胞形态发生明显改变:药物组细胞较对照组细胞明显减少,细胞间隙较宽,细胞皱缩,核染色质浓集呈球形。MTT实验结果显示各组药物血清均可抑制HSC-T6细胞的增殖,SJG-M、SJG-H组对HSC-T6细胞增殖的抑制均显著高于Sily组(P<0.05),SJG-L组与Sily组对HSC-T6细胞增殖的抑制...     

藤梨根含药血清对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 研究藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将9只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为藤梨根含药血清高、低剂量组和对照组,每组3只,含药血清组分别以12.5、6.25 g/(kg·d)的藤梨根灌胃,对照组予生理盐水灌胃,3 d后取腹主动脉血制备含药血清及对照组血清,3 组血清分别干预体外培养的人肺癌A549细胞24 h,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂测定藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用,应用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹法检测藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)、B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响.结果 CCK-8法检测结果示,藤梨根含药血清对人肺癌A549 细胞有增殖抑制作用.与对照组比较,含药血清组增殖抑制率明显增高(P<0.01).藤梨根含药血清对A549细胞有诱导细胞凋亡的作用,与对照组比较,低、高剂量组凋亡率增高(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,藤梨根含药血清作用人肺癌A549细胞24 h后,肺癌细胞EGFR和Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 藤梨根含药血清可抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调EGFR和Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达相关.     

鳖甲煎丸对AngⅡ-ROS诱导下HSC-LX2细胞中PKC-Pyk2/SRC通路的影响

[目的]探讨鳖甲煎丸含药血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱生的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)作用下HSC-LX2细胞中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)/SRC通路的影响。[方法]以人源肝星状细胞HSC-LX2为研究对象,以AngⅡ诱导产生ROS,再以鳖甲煎丸含药血清进行干预,以MTT法检测HSC-LX2细胞的增殖情况,荧光探针DCFH-DA检测细胞内ROS含量,Western blot检测PKC、Pyk2、SRC蛋白表达情况。[结果] MTT结果显示,与AngⅡ组比较,5%鳖甲煎丸含药血清培养24h后,鳖甲煎丸高、中剂量组显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.01);培养48h后,鳖甲煎丸高、中、低剂量组均能显著抑制HSC-LX2细胞增殖(P0.05,P0.05,P0.01);培养72h后,中剂量组有显著抑制效果(P0.01)。此外,除了15%中剂量鳖甲煎丸含药血清培养48h后有显著抑制效果(P0.05),其余各组、各时间段均无明显抑制作用,差异无统计学意义(P0.05)。荧光探针DCFH-DA结果显示,与空白对照组比较,AngⅡ组ROS产生明显增多,经鳖甲煎丸含药血清高、中剂量组干预后,ROS均不同程度减少。Western blot显示,鳖甲煎丸含药血清干预后,PKC(P0.001,P0.001,P0.001)、Pyk2(P0.05,P0.001,P0.001)、SRC(P0.001,P0.001,P0.01)蛋白表达均受到显著抑制。[结论] HSC-LX2细胞经AngⅡ刺激后可以产生ROS,且细胞增殖明显,此过程与PKC、Pyk2、SRC蛋白的激活有关。鳖甲煎丸可通过减少ROS的产生来阻止HSC-LX2细胞的增殖,其机制与抑制PKC、Pyk2、SRC蛋白的表达有关。     

扶正利湿抗癌方对LNCaP细胞中PSMA表达及p38 MAPK通路的影响

目的 探讨扶正利湿抗癌方对人前列腺癌细胞(LNCaP)中前列腺特异性膜抗原(PSMA)及p38 MAPK通路的影响。方法 将SD大鼠随机分为4组：对照组、低剂量组[12.5 g/(kg·d)]、中剂量组[25 g/(kg·d)]和高剂量组[50 g/(kg·d)],抽取各组含药血清，将其与培养的LNCaP细胞反应。利用¹⁸F-PSMA1007探针检测LNCaP细胞中PSMA表达。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测LNCaP细胞中p38 MAPK通路相关蛋白p38 MAPK、p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3、P53及Bcl-2的表达。应用CCK-8法观察LNCaP细胞的增殖抑制情况。采用流式细胞仪分析LNCaP细胞凋亡情况。结果 与对照组比较，低剂量组PSMA表达水平降低，p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及P53蛋白表达增高，Bcl-2蛋白表达降低，LNCaP细胞的增殖抑制率及细胞凋亡率升高(均P<0.05),而p38 MAPK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与低剂量组比较，中剂量组PSMA表达水平...     

鳖甲煎丸化裁方对肝癌HCCLM3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨鳖甲煎丸化裁方对肝癌HCCLM3细胞增殖和凋亡的影响。方法采用SD大鼠每天灌胃鳖甲煎丸化裁方(21 g/kg),7 d后腹主动脉取血离心获得含药血清。96孔板加入不同浓度鳖甲煎丸化裁方含药血清,分别干预24、48、72 h后,每孔加入10μL MTT溶液,继续培养4 h,检测各含药血清对HCCLM3增殖的影响;培养HCCLM3细胞后,向各孔内分别加入5%、10%、20%的鳖甲煎丸化裁方含药血清及葫芦素I培养24、48 h后,Annexin V-FITC/PI法检测含药血清对HCCLM3凋亡的影响。结果鳖甲煎丸化裁方各浓度含药血清在干预24 h后5%、10%含药血清对细胞增殖的影响不大,与对照组相比较,差异无统计学意义(P0.05)。在各给药组干预48 h后,10%、20%含药血清组的增殖率分别为87.86%和84.60%,与对照组相比较,对细胞的增值率影响具有统计学差异(P0.05)。各给药组在干预24 h后,5%含药血清组对细胞造成的凋亡与对照组相比较,无统计学差异(P0.05),而10%、20%含药血清及葫芦素I(0.5μmol/L)的凋亡率分别为7.90%,12.22%和15.36%,具有统计学差异(P0.05)。各给药组在干预48 h后,鳖甲煎丸代裁方含药血清5%、10%、20%组及葫芦素I(0.5μmol/L)的凋亡率分别为8.08%,11.95%,13.89%和19.02%,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论鳖甲煎丸化裁方含药血清具有明显抑制HCCLM3增殖并促进其凋亡的作用,作用效果随剂量增加而增强。     

丹防胶囊对肝星状细胞PDGF-B和ERK1/2表达的影响

目的:探讨大鼠丹防胶囊含药血清对肝星状细胞合成血小板源性生长因子-B(PDGF-B)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的影响.方法:将大鼠分为3组,分别经丹防胶囊、复方鳖甲软肝片及生理盐水灌胃后股动脉取血制备大鼠丹防胶囊含药血清、鳖甲含药血清及生理盐水血清,3组血清分别干预肝星状细胞(HSC-T6),免疫细胞化学法、蛋白印迹法检测PDGF-B及ERK1/2表达的水平.结果:丹防胶囊血清组HSC-T6中PDGF-B及ERK1/2蛋白表达强度均较生理盐水血清组明显降低(P＜0.01),与鳖甲血清组相当(P＞0.05).结论:丹防胶囊大鼠含药血清对肝星状细胞合成PDGF-B及ERK1/2有明显的抑制作用,提示丹防胶囊可能对大鼠肝星状细胞的增殖具有抑制效应.     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

汉族人肾透明细胞癌细胞系的建立

目的:取汉族人临床标本,建立肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系,初步研究该细胞系的生物学特性.方法:2005～2007年间共采集43例ccRCC新鲜手术标本(包括肾原位肿瘤、骨转移、淋巴结转移肿瘤及癌栓),于手术后30～60 min内用植块法进行体外培养,记录传代超过50代的细胞株的生长曲线,测定集落形成率,对细胞进行染色体分析,病理学检查,流式细胞术检测及NOD-SCID鼠荷瘤实验.结果:绝大部分原代细胞传代次数在5代内,其中5例可连续传代5代以上,4例传代超过10代.仅1例来源于骨转移组织的原代细胞(命名为RCC05-TXJ)及1例来源于原位ccRCC的原代细胞(命名为RCC05-ZYJ)可稳定连续传代.RCC05-TXJ经历21个月传110代,群体倍增时间19.2 h,染色体众数为75,集落形成率为41%;RCC05-ZYJ经历18个月传160代,群体倍增时间为16.5 h,染色体众数为55,集落形成率为37%.免疫组化显示CA9及CD133阳性,流式细胞术分析发现随细胞传代增多CA9及CD133表达明显增高(P＜0.05).两株细胞在NOD-SCID鼠体内均有良好的致瘤及转移性,但是转移倾向明显不同.结论:应用汉族人肾透明细胞癌组织成功建立了2个转移潜能不同的细胞系,随着传代次数增加,肿瘤干细胞比例增加.     

人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404的建立和生物学特性

目的:研究骨巨细胞瘤细胞体外培养的生物学特性,并建立人骨巨细胞瘤细胞系. 方法: 采用原代组织块培养法培养骨巨细胞瘤手术标本,对存活细胞进行形态学观察、免疫组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、裸鼠移植. 结果: 建立人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404,其形态学表现、免疫组织化学染色均符合骨巨细胞瘤纤维母细胞样基质细胞的特征. 经过近1 a的体外培养,现已传代100次,细胞倍增时间39.7 h,细胞周期测定G1期为67.5%,G2期为8.9%,S期为23.6%. 染色体具有三倍体核型. 裸鼠移植成瘤率100%,无支原体污染. 结论: 人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404可以用于对骨巨细胞瘤的研究.     

细胞黏附对干扰素、5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡的影响

目的探讨细胞黏附作用对干扰素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导细胞凋亡的影响。方法采用HepG2、HEK293细胞株,常规96孔板培养细胞,分为空白不加药(A组)、多聚赖氨酸包被预处理+贴壁后加药(B组)、贴壁后加药(C组)、未贴壁就加药(D组)、未贴壁就加药和Fn抗体(E组)。选用干扰素、5-Fu分别作用各组细胞,MTT法测定各组增殖抑制率和DNA Fragmentation ELISA测定凋亡率,Western blot检测干扰素诱导各组PKR蛋白水平的表达。结果经多聚赖氨酸包被预处理后,细胞对药物的敏感性减弱,MTT法显示抑制率:干扰素作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(27.24±31.77)%、(39.04±14.88)%(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(30.61±11.26)%、(32.94±20.93)%(P<0.05);干扰素作用293细胞,B、C组抑制率分别为(32.02±23.48)%、(46.22±25.20)%(P<0.05);5-Fu作用293细胞,B、C组抑制率分别为(14.07±21.91)%、(31.61±31.49)%(P<0.05)。DNAFrag...     

高浓度腺苷通过抑制细胞增殖促进细胞存活

目的：研究危机环境下腺苷浓度增高对细胞的意义。方法：向细胞培养物中添加高浓度的腺苷来模拟危机环境,研究细胞对高浓度腺苷的生物学反应。结果：高浓度腺苷抑制细胞增殖,而不诱导细胞凋亡的发生;腺苷通过抑制细胞周期的进行而抑制细胞增殖;腺苷促进细胞在无糖环境下的存活。结论：腺苷通过抑制细胞增殖从而促进细胞在无糖环境下的存活。     

高胆血红素血症新生儿T细胞亚群、NK细胞表达水平的研究

目的 探讨高胆血红素血症新生儿T细胞亚群、NK细胞表达水平,为高胆血红素血症新生儿的早期诊疗、干预保健提供科学依据.方法 无菌采集健康足月自然分娩1分钟Apger评分≥8分,5分钟评分10分,体重在2.8～4Kg新生儿脐静脉肝素抗凝血2ml及不同高胆血红素血症新生儿股静脉肝素抗凝血2ml,采用美国RD有限公司提供的试剂,采用间接免疫荧光技术和S.P法,测定其T细胞亚群及NK细胞的水平.结果 （1）三个组CD3、CD4、CD8、NKCD16、NKCD57与对照组比较,均P＜0.01差异显著,有统计学意义.（2）一组与二组、三组比较,除了二组CD8 P＞0.05差异无统计学意义外,其他均P＜0.01差异显著,有统计学意义.结论 证实了高胆血红素血症新生儿胆红素毒性对其T细胞亚群及NK细胞有免疫抑制作用,可致患儿细胞免疫功能低下.这也是高胆血红素血症新生儿易并发感染的理论基础.为高胆血红素血症新生儿早期诊疗、干预及保健提供了基础免疫学依据.     

人胚腺垂体细胞库的初步建立

目的：初步探讨建立人胚腺垂体细胞库的方法及冷冻移植物复温后的形态和功能。方法：将人胚腺垂体细胞培养至第5天冷冻，15天后复温再培养，与单纯培养组相对照，相差显微镜下观察细胞形态，苔盼蓝测拒染率及检测激素分泌功能。结果：冷冻复温后垂体细胞存活率平均达78．2％；光镜下生物学状态无改变；GH分泌细胞复温后第5－7天状态最佳；PRL、TSH分泌水平差。结论：本方法适于建立人胚腺垂体细胞库用于治疗垂体性侏儒症，移植时机为复温后5－7天，该冷冻方法不适于PRL分泌细胞，培养条件不适用于TSH分泌细胞。     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.