脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响

目的观察脂多糖对RAW264.7细胞生长的影响。方法体外培养单核巨噬细胞RAW264.7细胞株,分别用0.5、1.0、2.0、5.0、10g/mL脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h,采用MTT比色法检测细胞活力。结果脂多糖刺激RAW264.7细胞24、48h后,细胞生长均受到抑制,并且与浓度和时间呈正相关。结论 LPS在0.5、1、2、5、10μg/mL时,浓度依赖性地抑制RAW264.7细胞的生长。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的 观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS（1 μg/mL）刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB（NF-κB）核转运的作用,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的变化。结果 当Tet浓度＜1 μmol/L时,单独或与1 μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度＞10 μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞（红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状）为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

黄芪甲苷对苯并芘诱导RAW264.7细胞MMPs表达的保护作用

目的 观察黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对苯并芘（benzopyrene,Bap）诱导RAW264.7巨噬细胞MMPs表达的保护作用,探讨腹主动脉瘤防治的可能新策略。方法 应用Western blot法观察Bap对RAW264.7巨噬细胞基质金属蛋白酶-9/12（MMP-9、MMP-12）、NF-κB、TNF-α等表达的变化及黄芪甲苷的作用,利用流式细胞仪观察黄芪甲苷对巨噬细胞ROS表达的影响。结果 Bap能够诱导RAW264.7巨噬细胞MMP-9、MMP-12等金属蛋白酶的表达升高和NF-κB、TNF-α等炎性指标的活化。黄芪甲苷具有降低RAW264.7巨噬细胞因Bap诱导而表达升高的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α,同时具有清除ROS的作用。结论 黄芪甲苷能够降低Bap刺激RAW264.7巨噬细胞引起的MMP-9、MMP-12、NF-κB、TNF-α的表达升高,并具有清除ROS的作用。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

p38蛋白激酶不同亚型在RAW264.7细胞中的定位

探讨ｐ３８的亚型在细胞中分布以外界刺激的反应,方法应用激光共聚焦显微镜对ＲＡＷ２６４．７单核细胞内的４种亚型进行定位观察。结果ｐ３８α、ｐ３８β未受刺激的静息细胞贩荧光强度呈弥散性分布,受脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,细胞核荧光强度明显增强,细胞浆提示ＬＰＳ诱Ｐ３８α     

穿山龙总皂苷通过Nrf2信号通路对阿霉素诱导MPC-5细胞氧化应激损伤保护作用研究

目的 探讨穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法 通过阿霉素诱导MPC-5细胞建立细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,考察阿霉素对MPC-5细胞的毒性及穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞凋亡的影响;采用探针DCFH-DA检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内活性氧（ROS）的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）试剂盒检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内氧化应激因子的影响;采用Western Blot法检测MPC-5细胞内相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达以及细胞质、细胞核和细胞整体内核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)蛋白的表达。结果 与空白组相比,阿霉素模型组中细胞活力显著降低（P<0.01）;细胞内MDA含量、ROS含量、细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,SOD活性、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）;细胞核和细胞总体中Nrf2蛋白表达显著升高（P<...     

不同代数RAW264.7细胞分化为破骨细胞样细胞的能力研究

目的:观察不同代数RAW264.7细胞形成破骨细胞样细胞的能力是否改变.方法:以细胞核因子κB受体激活物的配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)为诱导剂,选用第6、9、13、18、24代RAW264.7细胞在体外诱导6天,固定细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-...     

葛根素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨葛根素（puerarin, PUE）在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞中的抗炎作用,并揭示其分子机制。方法 采用CCK-8比色法分别设置不同浓度的LPS和PUE,观察对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出合适的LPS造模浓度及PUE的给药浓度。将细胞分为正常对照组、模型组（1μg/mL）、PUE给药组（12.5、25、50μmol/L）。Griess法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）释放量;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的含量;qRT-PCR法检测环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2) mRNA水平;Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, i NOS）、COX-2、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平。结果 与正常对照组比...     

In vitro evaluation of cytotoxicity and oxidative stress induced by multiwalled carbon nanotubes in murine RAW 264.7 macrophages and human A549 lung cells

Objective To investigate in vitro cytotoxicity and oxidative stress response induced by multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs).Methods Cultured macrophages (murine RAW264.7 cells) and alveolar epithelium cells type II (human A549 lung cells) were exposed to the blank control,DNA salt control,and the MWCNTs suspensions at 2.5,10,25,and 100 μg/mL for 24 h.Each treatment was evaluated by cell viability,cytotoxicity and oxidative stress.Results Overall,both cell lines had similar patterns in response to the cyto...     

AngiotensinⅡ通过氧化应激引起巨噬细胞AMPK/SIRT1能量信号紊乱

目的 探讨Angiotensin II诱导巨噬细胞氧化应激反应与 AMPK/SIRT1通路活化关系的机制。方法 RAW264.7细胞正常培养后给予不同浓度的Angiotensin II（0、0.5、1、3、10、20 μmol/L）处理24 h后,Western blot 检测AMPK,p-AMPK和SIRT1的表达水平变化,和用 DCFH 探针检测 ROS 水平的变化,试剂盒检测细胞上清液中 SOD 活性和 MDA 表达量;同时采用基因编辑技术将 Angiotensin II的受体 AT1R成功沉默后给予Angiotensin II刺激,检测对AMPK,p-AMPK 和SIRT1蛋白水平的影响以及使用ROS 的抑制剂来观察细胞AMPK和SIRT1的变化情况。结果 20 μmol/L的Angiotensin II的刺激能显著抑制蛋白AMPK的磷酸化（P<0.05）,抑制SIRT1 的表达;同时增加了细胞ROS的释放（P<0.05）。在检测SOD活性和MDA表达量时, 0.5~10 μmol/L的 Angiotensin II对细胞无明显改变（P>0.05）,20 μmol/L 的 Angiotensin II 明显抑制SOD 活性（P<0.05）,能显著增加 MDA 的产生。沉默了AT1R后,Angiotensin II不能抑制AMPK蛋白磷酸化以及对SIRT1的表达无明显下调作用;使用ROS 抑制剂后,Angiotensin II处理无法降低细胞磷酸化AMPK 和SIRT1的表达。结论 Angiotensin II通过诱导巨噬细胞发生氧化应激反应从而引起AMPK/SIRT1信号通路的紊乱。     

灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症介质分泌的影响

[目的] 研究灯盏乙素对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症的影响,初步探讨其抗炎作用机制。[方法] 用噻唑蓝（MTT）法检测灯盏乙素对RAW264.7细胞活力的影响;用Griess法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮（NO）生成的影响;用荧光素酶报告质粒法检测灯盏乙素对LPS诱导的核转录因子（NF-κB）转录活性的影响;用实时定量聚合酶链反应（PCR）法检测灯盏乙素对LPS诱导的RAW264.7细胞中NF-κB靶基因肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。[结果] 0.01～10 μmol/L的灯盏乙素处理24 h后对RAW264.7活力无显著影响;1、10 μmol/L的灯盏乙素可以显著抑制LPS诱导的NO的生成及NF-κB转录活性;灯盏乙素可以不同程度的抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB靶基因TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的上调作用。[结论] 灯盏乙素可能通过抑制NF-κB的活化及炎症因子的表达发挥一定的抗炎作用。     

SR-A受体参与抑制LPS刺激RAW264.7产生炎症因子

目的 探讨清道夫受体A能否抑制LPS刺激RAW264．7产生炎症因子。方法 LPS诱导小鼠巨噬细胞株RAW264．7SR-A受体上调后,用LPS再次刺激,观察SR-A受体的上调能否抑制RAW264．7对LPS的反应,最后采用遗传互补实验观察转染SR-A受体后能否抑制LPS活化NF-κB。结果 LPS刺激SR-A受体已上调的RAW264．7产生的炎症因子明显下降,而遗传互补实验证实SR-A受体确实能抑制LPS通过TLR4活化NF-κB。结论 SR-A受体参与负调控LPS对RAW264．7的活化,防止过强的炎症反应。     

过氧化氢诱导人巨核细胞系Dami氧化应激模型的建立及评价

目的探讨过氧化氢（H202）诱导Dami细胞氧化应激模型的条件,建立并评价模型。方法不同浓度过氧化氢处理Dami细胞后,Giemsa染色,显微镜观察细胞形态学的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度（IC50）;加载DCFH—DA探针后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基水平;Westernblot检测核因子NF—E2相关因子（N㈣、醌氧化还原酶（NQ01）、血红素加氧酶（HO-1）、1-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）表达量。结果随着H202浓度升高,Dami细胞核皱缩趋于明显,存活率下降,Ic50为（0．9132±0．144）mmol／L;0．1mmol／L、1mmol／L、10mmol／LH2O2处理Dami细胞2h,细胞氧化应激阳性率分别为12．11％、20．91％、52．53％;H2O2处理Dami细胞24h后,抗氧化蛋白Nrf2、GCLC水平升高,未检测到HO-1和NQ01的表达。结论1mmol／LH2O2是建立Dami细胞氧化应激模型的合适浓度。Dami细胞抗氧化应激反应与Nrf2／ARE通路有关。     

Protective Effect of Brassica napus L. Hydrosols against Inflammation Response in RAW 264.7 Cells

Objective:To demonstrate the anti-inflammatory activity of Brassica napus L.hydrosols(BNH)in lipopolysaccharide(LPS)-stimulated RAW 264.7 cells.Methods:Composition analysis of BNH was conducted via gas chromatography-mass spectrometry after BNH were extracted.The nitric oxide(NO)production was measured using the Griess assay.Prostaglandin E2(PGE2)production was evaluated with enzyme-linked immunosorbent assay.The effects of BNH on LPS-induced pro-inflammatory enzymes including inducible nitric oxide synthase(iNOS)and cyclooxygenase-2(COX-2)were evaluated using Western blot analysis.Furthermore,phosphorylation of nuclear factor-kappa B(N F-k B)and nuclear translocation of N F-k B p65 were evaluated with Western blot analysis and immunofluorescence staining,respectively.Results:Compared with LPS-stimulated cells,BNH markedly decreased the generation of NO and PGE₂in LPS-stimulated RAW 264.7 cells(P<0.01 or P<0.05).Moreover,BNH inhibited protein levels of iNOS and COX-2(P<0.01).Phosphorylation of NF-k B and nuclear translocation of NF-k B p65 was significantly inhibited by BNH(P<0.01 or P<0.05).Conclusion:The anti-inflammatory activities of BNH were mediated via blockage of the N F-k B signaling pathways in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.     

黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法黄杞苷(5、10、20、40、80和160μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20μmol·L^-1)预处理细胞12 h, H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf...     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。